མའི་ཀྲོ་སི་ཀོ་པིའི་ཆེད་དུ methylene blue ཡི་ཚབ་བྱེད། ལས་འགན་ལ་གཞིགས་ནས་འདེམས།

ནད་འབུའི་སྲིན་ཕྲའི་བྱུགས་དཔེ་སྟབས་བདེ་ཞིག་ལ། དམིགས་ཡུལ་ནི་ཕྲ་ཕུང་གི་དབྱིབས་མཐོང་རྒྱུ་ཡིན་ན crystal violet གྱིས methylene blue ཡི་ཚབ་བྱེད་ཐུབ། གསོན་པོའི་ཕྲ་ཕུང་ལ་ཚོས་གཏན་ནས་མ་བཏང་བའི phase contrast ནི་ཚབ་བྱེད་ལེགས་པ་ཞིག་ཡིན་སྲིད། གདམ་ག་དེ་ཁྱེད་ཀྱིས་བྱེད་དགོས་པའི་ལྟ་ཞིབ་ལ་རག་ལས།

མི་གཉིས་ཀྱིས་སྲིན་ཕྲའི་གསོ་སྐྱོང་གཅིག་པ་ཞིག་ལ་བརྟག་དཔྱད་བྱེད་ཀྱི་ཡོད་པར་ཆ་བཞག གཅིག་གིས་དབྱུག་དབྱིབས་ཀྱི་ཕྲ་ཕུང་དང་སྒོར་དབྱིབས་ཀྱི་ཕྲ་ཕུང་ཁྱད་པར་ཕྱེ་འདོད་ཡོད། གཞན་དེས་གསོ་བཅོས་ཤིག་གིས་སྲིན་ཕྲ་བསད་ཡོད་མེད་ཤེས་འདོད་ཡོད། མི་དང་པོར་བརྙན་གསལ་པོ་སྟོན་པའི་ཚོས་ཤིག་གིས་མི་གཉིས་པར་སྤྱོད་རུང་བའི་ལན་གང་ཡང་མི་སྟེར་སྲིད།

ཚབ་བྱེད་ཅིག་འདེམས་པའི་སྔོན་དུ་ཚིག་གྲུབ་འདི་ཆ་ཚང་བཟོས། “ངས་ ___ ནང་ ___ ལྟ་ཞིབ་བྱེད་དགོས། ཕྲ་ཕུང་རྣམས་གསོན་པོར་གནས་དགོས / གནས་མི་དགོས།” ཚིག་གྲུབ་འདིས་ཚོས་ཀྱིས་སྒྲུབ་དགོས་པའི་ལས་འགན་གཏན་འབེབས་བྱེད།

དཔེ་རྫས་དང་དྲི་བ་ནས་འགོ་ཚུགས

ཐོག་མར་ཕྲ་ཕུང་རྣམས་གསོན་པོར་གནས་དགོས་མིན་ཐག་གཅོད་བྱས་ནས། དེ་རྗེས་ཁྱེད་ཀྱིས་ལྟ་ཞིབ་བྱེད་དགོས་པའི་ཁྱད་ཆོས་ངོས་འཛིན་བྱོས།

• ཕྲ་ཕུང་རྣམས་གསོན་པོར་གནས་དགོས།: འགུལ་སྐྱོད་དམ་དབྱིབས་ལ། ཚོས་མ་བཏང་བའི phase contrast ཡང་ན DIC བསམ་གཞིག་བྱོས། ལྟེ་ཉིང་ DNA ལ fluorescence དང་མཉམ་དུ Hoechst 33342 བསམ་གཞིག་བྱོས། ཕྲ་ཕུང་སྐྱི་མོའི་ཆ་ཚང་རང་བཞིན་ལ། SYTO 9 དང propidium iodide ལྟ་བུའི་ར་སྤྲོད་བྱས་པའི་ཚོད་ལྟ་ཐབས་འདེམས།
• ཕྲ་ཕུང་རྣམས་གསོན་པོར་གནས་མི་དགོས།: སྲིན་ཕྲའི་དབྱིབས་རིག་པར crystal-violet simple stain ཡང་ན nigrosin negative stain བསམ་གཞིག་བྱོས། Gram reaction ལ Gram-stain ཐབས་ལམ་ཆ་ཚང་སྤྱོད། གཏན་འཇགས་བྱས་པའི་ཕྲ་ཕུང་ནང་གི་ལྟེ་ཉིང་ DNA ལ DAPI fluorescence བསམ་གཞིག་བྱོས། ཡན་ལག་རེ་རེའི་ཚད་བཀག་བསྡུར་བར་རེའུ་མིག་འདི་སྤྱོད། འདི་དག་ནི་ཐབས་ལམ་འདེམས་ཀ་ཡིན་པ་ལས། ད་ཡོད་ཀྱི་གོ་རིམ་ཞིག་ནང་དམ་བི་བརྗེ་སྤོར་བྱེད་པའི་བཀོད་པ་མིན།

བྱུགས་དཔེ་སྟབས་བདེ་ཞིག་ལ། ཐབས་ལམ་ཚབ་བརྗེ་ཞིབ་ཚགས་བྱོས

ལས་འགན་ནི་སྲིན་ཕྲའི་དབྱིབས་རིག་པ་ཚོས་གཅིག་གི་མཐོང་སྣང་ནས་ལྟ་རྒྱུ་ཡིན་ན crystal violet ནི་ལག་ལེན་རུང་བའི་འོས་མི་ཞིག་ཡིན། FDA ཡི Bacteriological Analytical Manual ནང་ simple staining ལ་འཚམ་པའི crystal-violet སྦྱོར་སྡེབ་གཉིས བཀོད་ཡོད། ཡིག་ཆས་གསལ་བར་བཀོད་པའི་སྦྱོར་སྡེབ་དང་དེའི་སྒྲིག་སྟངས་སྤྱོད། ཚོས་ཀྱི་མིང་ཙམ་གྱིས་ལས་ཀར་སྤྱོད་པའི reagent གཏན་འབེབས་མི་བྱེད།

Crystal violet ནི Gram staining ནང་ཡང་ཡོད། འོན་ཀྱང་དེས crystal-violet simple stain ཞིག་ Gram stain ཏུ་མི་བསྒྱུར། ASM Gram-stain protocol ནང་། ཁྱད་པར་ཅན་གྱི་གྲུབ་འབྲས་ནི crystal violet, iodine, decolorization དང counterstaining གོ་རིམ་བཞིན་མཉམ་ལས་བྱེད་པར་རག་ལས། གོ་རིམ་དེ་དག་བསྐྱུར་ན་བརྙན་གྱིས་གང་ར་སྤྲོད་ཐུབ་པ་འགྱུར། ཁྱད་པར་འདིའི་ཆེད་དུ simple staining དང Gram staining གི་བསྡུར་བ ལ་གཟིགས།

Nigrosin གྱིས་མཐའ་ཐིག་མངོན་པར་བྱེད་པའི་ཐབས་གཞན་ཞིག་སྤྲོད། དེས་རྒྱབ་ལྗོངས་མུན་པར་བྱེད་ཅིང་། སྲིན་ཕྲའི་ཕྲ་ཕུང་རྣམས་བསྡུར་ན་གསལ་པོར་གནས། Merck ཡི nigrosin བཀོལ་སྤྱོད་བཀོད་པ ནང་ཚབ་བྱེད་སྤྱིར་བཏང་གི་ཐོ་ཞིག་གིས་ཆད་སྲིད་པའི་གནད་དོན་གལ་ཆེན་ཞིག་ཡོད། དེའི་གཏན་འབེབས་བྱས་པའི་ལས་སྤྱོད་སྦྱོར་སྡེབ་ནང formaldehyde ཚུད་ཡོད། དེའི་ཕྱིར “negative stain” ཞེས་པའི་ཚིག་ཙམ་ལ་གཞིགས་ནས་གསོན་པོའི་ཕྲ་ཕུང་དང་མཐུན་འཕྲོད་ཡོད་པར་རྗེས་དཔག་བྱེད་མི་རུང་། ཕྲ་ཕུང་རང་ཉིད་ལ་ཚོས་མ་བཏང་བ་ལྟར་མཐོང་ཡང་དེ་ལྟར་ཡིན། སྦྱོར་སྡེབ་ཆ་ཚང་དང་དཔེ་རྫས་སྒྲིག་སྟངས་ཞིབ་བཤེར་བྱོས།

གསོན་པོའི་དཔེ་རྫས་ལ། optics བསྒྱུར་བར་བསམ་གཞིག་བྱོས

ཁྱེད་ཀྱིས་ཕྲ་ཕུང་འགུལ་བའམ་བགོ་བ་ལྟ་འདོད་ན། ཚོས་གཞན་ཞིག་འཇུག་པས་ལྟ་ཞིབ་ཉོག་དྲ་ཅན་དུ་འགྱུར་སྲིད། Nikon གྱི དྭངས་གསལ་དཔེ་རྫས་ནང་གི contrast ལམ་སྟོན་ནང་གསལ་བཤད་བྱས་པ་ལྟར། phase contrast དང differential interference contrast, ཡང་ན DIC, གྱིས་དཔེ་རྫས་ཀྱི་འོད་རིག་ཁྱད་ཆོས་ཀྱི་ཁྱད་པར་བརྒྱུད་ནས་མཐོང་ཐུབ་པར་བྱེད། མའི་ཀྲོ་སི་ཀོ་པིར་དགོས་ངེས་ཀྱི་ཆ་ཤས་ཡོད་ན། དེ་དག་གིས་ཚོས་མ་བཏང་བའི་གསོན་པོའི་ཕྲ་ཕུང་མངོན་པར་བྱེད་ཐུབ།

གདམ་ག་འདིས་ཚོས་མ་བཏང་བའི་དཔེ་སྒྲིག་རང་འཇགས་འཇོག་ཐུབ། འོན་ཀྱང་ཐོབ་ཐུབ་པའི་ཆ་འཕྲིན་བསྒྱུར། ཁྱེད་ཀྱིས་མཐའ་ཐིག་ཅིག་གམ་འགུལ་སྐྱོད་ཅིག་རྗེས་འདེད་བྱེད་ཐུབ་ཀྱང་། མོ་ལེ་ཀུལ་གང་གིས contrast བཟོས་པ་མི་ཤེས། གལ་ཏེ་དྲི་བ་ནི་མོ་ལེ་ཀུལ་གྱི་གནས་ས་ཡིན་ན། དེའི་ཚབ་ཏུ་འོས་འཚམ་གྱི labeling ཐབས་ལམ་འདེམས།

ལྟེ་ཉིང་ DNA ཆེད་དུ Invitrogen གྱི DAPI དང Hoechst stains གི་བསྡུར་བ ཡིས DAPI གཏན་འཇགས་བྱས་པའི་ཕྲ་ཕུང་ལ་རྒྱུན་དུ་སྤྱོད་པ་དང་། ཕྲ་ཕུང་བརྒྱུད་ནུས་ཆེ་བའི Hoechst 33342 གསོན་པོའི་ཕྲ་ཕུང་ལ labeling བྱེད་པར་སྔོན་འདེམས་བྱེད་པའི་ཁྱད་པར་ཕྱེ། གཉིས་ཀར fluorescence སྒྲིག་ཆས་དགོས། གཉིས་ཀ་ཚོས་ཅན་གྱི brightfield stain གྱི་ཐད་ཀར་ཚབ་བྱེད་མིན།

ཚོས་ལ་རེག་པ་དང་འོད་འཕྲོ་བ་ཚོད་ལྟའི་ཆ་རྐྱེན་ལྟར་བརྩིས། ཕྲ་ཕུང་གི་སྤྱོད་ཚུལ་ནི་ཁྱེད་ཀྱི་ཚད་འཇལ་ཡིན་ན། ཚོས་བཏང་བ་དང་མ་བཏང་བའི་དཔེ་སྒྲིག་ཕན་ཚུན་བསྡུར།

ཕྲ་ཕུང་དམར་པོ་ཞིག་རང་ཤུགས་ཀྱིས་ཤི་བའི་ཕྲ་ཕུང་མིན

SYTO 9 དང propidium iodide རྒྱུན་དུ་སྲིན་ཕྲའི་སྐྱི་མོའི་ཆ་ཚང་རང་བཞིན་ཚད་འཇལ་བྱེད་པར་མཉམ་སྦྱོར་བྱེད། BacLight manual ནང་ཆ་ཚང་བའི་སྐྱི་མོ་དང་ཚོས་ལྗང་ཁུ། གཏོར་སྐྱོན་ཕོག་པའི་སྐྱི་མོ་དང་ཚོས་དམར་པོ་འབྲེལ་བར་བཀོད་ཡོད། འགྲེལ་བཤད་དེ་དཔེ་རྫས་ལ་ར་སྤྲོད་དགོས།

Rosenberg དང་ལས་རོགས་ཚོའི 2019 ལོའི་ཞིབ་འཇུག་ཞིག གིས་དཀའ་ངལ་འདི་མཚོན། phosphate-buffered saline ནང་ཤེལ་སྟེང་གི 24-hour E. coli biofilms ནང་། ཕྲ་ཕུང་གི 96% ཙམ in situ ནང propidium-iodide-positive ལྟར་མངོན། འོན་ཀྱང་རྩོམ་པ་པོ་ཚོས་བསྡུ་ལེན་བྱས་རྗེས 82% གསོ་སྐྱོང་བྱེད་ཐུབ་པར་ཚོད་རྩིས་བྱས། Confocal བརྙན་ནང་ཚོས་དམར་པོ་འཇུག་པའི་རྒྱུ་ཆའི་འོག་ཏུ་ནང་ཁོག་ལྗང་ཁུ་ཡིན་པའི་ཕྲ་ཕུང་མཐོང་བས། extracellular nucleic acids ཀྱིས་གོ་ནོར་སླ་བའི་བརྡ་རྟགས་ནང་ཞུགས་པ་མཚོན།

བརྒྱ་ཆ་དེ་དག་གིས་ཞིབ་འཇུག་གི་དཔེ་སྒྲིག་ཐོག་གི་ཚད་འཇལ་མི་འདྲ་བ་བརྗོད་པ་ལས། སྤྱི་ཁྱབ་ཀྱི་བཅོས་ཐབས་བརྒྱ་ཆ་ཞིག་མིན། སྤྱོད་ཕན་ཆེ་བའི་བསླབ་བྱ་ནི་བརྡ་རྟགས་གང་གིས་བཟོས་པ་ཞིབ་བཤེར་བྱེད་པ་ཡིན། biofilm ནང nucleic-acid dye ཞིག་གིས་གཏོར་སྐྱོན་ཕོག་པའི་ཕྲ་ཕུང་ནང་གི་རྒྱུ་ཆ་ཙམ་མ་ཟད། ཕྲ་ཕུང་ཕྱི་རོལ་གྱི་རྒྱུ་ཆ་ཡང་རྩད་གཅོད་བྱེད་ཐུབ། གསོན་གནས་ཀྱི་མཇུག་སྡོམ་ཞིག་ལ། ཞིབ་འཇུག་པ་ཚོས་གསོ་སྐྱོང་ཡང་ན metabolic activity ལྟ་བུའི་ཁ་གསབ་ཚད་འཇལ་སྤྱོད་པར་འོས་སྦྱོར་བྱེད། དུས་མཚུངས་སུ་རེ་རེར་ཚད་བཀག་ཡོད་པའང་ཁས་ལེན་བྱེད།

ཚབ་བྱེད་དེའི་ནང་དོན་ངོ་མ་གང་ཡིན་ཞིབ་བཤེར་བྱོས

ཚབ་བྱེད་ཚོས་འཇུག་ཐབས་ལམ་ཞིག་གི་ནང་ད་དུང methylene blue ཡོད་སྲིད། Giemsa ནི་དཔེ་ཞིག་ཡིན། Merck གིས་དེའི་ཐོན་རྫས་ནི azure-eosin-methylene-blue solution ཞིག་ཡིན་པ་དང་། ཁྲག་དང་རུས་རྐང་གི་བྱུགས་དཔེ་ཚུད་པའི་སྤྱོད་ཡུལ་ལ་དམིགས་པར་བཀོད་ཡོད། དེ་ནི་དཔེ་རྫས་མི་འདྲ་བར་ཐབས་ལམ་མི་འདྲ་བ་ཞིག་ཡིན་ཐུབ་ཀྱང་། methylene blue ཕུད་དགོས་པའི་ཆ་རྐྱེན་མི་སྐོང་།

རྫས་ཤིག་ཕུད་པ་ཚོད་ལྟའི་ཆ་ཤས་ཡིན་ན། བརྙན་བསྡུར་བའི་སྔོན་དུ reagent གི་ངོ་བོ་དང་སྦྱོར་སྡེབ་ཞིབ་བཤེར་བྱོས། methyl blue, methylene blue དང་མིང་འདྲ་བའི་ཚོས་རྫས ཀྱི་ལམ་སྟོན་ནང་མིང་འདོགས་ཀྱི་ཁྱད་པར་བཤད་ཡོད།

གྲུབ་འབྲས་སྤྱོད་པའི་སྔོན་དུ་ཚབ་བརྗེ་ར་སྤྲོད་བྱོས

ཐབས་ལམ་གསར་པ་ཞིག་ལ། མཚོན་ཚབ་ཀྱི་དཔེ་རྫས་དང་འོས་འཚམ་གྱི་ཚོད་འཛིན་སྤྱད་ནས་བསྡུར་བ་ཆུང་ངུ་ཞིག་བྱོས། གང་ཐུབ་ཀྱིས་མའི་ཀྲོ་སི་ཀོ་པིའི settings བསྡུར་རུང་བར་ཉར། reagent གི་སྦྱོར་སྡེབ། དཔེ་རྫས་སྒྲིག་སྟངས། exposure དང imaging conditions ཐོ་འགོད་བྱོས། དེས་བརྙན་མཛེས་པ་ཙམ་སྔོན་འདེམས་བྱེད་པའི་ཚབ་ཏུ་རྒྱུ་མཚན་ཞིབ་འཇུག་བྱེད་ཐུབ།

ཐོག་མའི་དྲི་བ་ལ་གཞིགས་ནས་ལེགས་གྲུབ་ཚད་འཇལ་བྱོས། དབྱིབས་རིག་པར། ཕྲ་ཕུང་གི་མཐའ་ཐིག་དང་བཀོད་པ་ད་དུང་གོ་རྟོགས་ཐུབ་མིན་ཚད་འཇལ་བྱོས། ལྟེ་ཉིང་ labeling ལ། བརྡ་རྟགས་ཀྱི་གནས་ས་དང་རྒྱབ་ལྗོངས་ཚད་འཇལ་བྱོས། གསོན་གནས་ལ། ཚོས་ཁ་བྲལ་མཛེས་པོ་ཞིག་ལས་བརྒལ་བའི་དཔང་རྟགས་དགོས། methylene blue staining དང་ཚོད་ལྟ་ཁང་གི་སྤྱོད་ཡུལ གྱི་རྒྱས་པའི་ལམ་སྟོན་ནང་ལྟ་ཞིབ་དང་དཔེ་སྒྲིག་ཕན་ཚུན་ཇི་ལྟར་མཐུན་པ་བཤད་ཡོད།

ཁྱེད་ལ་དགོས་པའི་ཚད་འཇལ་རང་འཇགས་ཉར་ཐུབ་པའི་ཚབ་བྱེད་འདེམས། ཚོས་ནི་ཐོབ་པའི་བརྙན་གྱི་ཁྱད་ཆོས་གཅིག་ཙམ་ཡིན།