Məqalə
İşkənbə mayesi üçün metilen mavisi reduksiya testi
Bir məzun əlində mavi rəngli sınaq şüşəsi ilə fermadan zəng edir. O, on dəqiqə əvvəl işkənbə mayesinə metilen mavisi əlavə edib və mavi rəng hələ də qalır. İnəyə daha çox boya verib-verməməli olduğunu soruşur.
Bu sual yanlış təsəvvürü üzə çıxarır. İşkənbə mayesi üçün metilen mavisi reduksiya testində boya sınaq şüşəsinə əlavə edilir, heç vaxt heyvana verilmir. Bütün analiz həmin sınaq şüşəsində aparılır. Mavi rəngin nə qədər tez yox olduğunu ölçmək heyvanın ehtiyac duyduğu müalicə haqqında deyil, həmin nümunədəki mikroblar haqqında məlumat verir.
Bu qarışıqlıq başadüşüləndir, çünki metilen mavisi baytarlıqda üç ayrı kontekstdə istifadə olunur. Bu məqalə onları bir-birindən ayırır və reduksiya müddətini pH, protozoalar, nümunənin keyfiyyəti və klinik əlamətlərlə birlikdə necə şərh etməyi göstərir.
Test əslində nəyi ölçür
Metilen mavisi oksidləşmiş halda mavi, reduksiya olunmuş halda isə demək olar ki, rəngsizdir. Sağlam heyvandan götürülmüş təzə işkənbə mayesi güclü reduksiyaedici xüsusiyyətə malikdir, çünki anaerob bakteriyalar yemi fəal şəkildə fermentasiya edir. Belə mayeyə az miqdarda boya qarışdırdıqda bakterial metabolizm bir neçə dəqiqə ərzində rəngi aradan qaldırır.
Beləliklə, iş prinsipi sadədir: fəal anaerob flora mavi rəngi tez, qeyri-fəal və ya zədələnmiş flora isə yavaş yox edir. Qısa müddət həmin nümunədə daha yüksək reduksiya qabiliyyətini göstərir. Nümunə düzgün götürülüb və saxlanılıbsa, uzanmış müddət mikrob fəallığının zəifləməsinə işarə edir.
Bu test işkənbənin oksidləşmə-reduksiya potensialını birbaşa ölçmür. İribuynuzlu heyvanlarda reduksiya testini birbaşa millivolt ölçmələri ilə müqayisə edən metodoloji tədqiqat reduksiya müddəti ilə ölçülmüş oksidləşmə-reduksiya potensialı arasında xətti korrelyasiya aşkar etməmiş və bunların eyni dəyişənin bir-birini əvəz edən göstəriciləri kimi qəbul edilməməli olduğu qənaətinə gəlmişdir. Tam müqayisənin xülasəsi PubMed saytında verilib. Reduksiya testini ucuz elektrod kimi deyil, mikrob populyasiyasının funksional analizi kimi düşünün.
Merck/MSD-nin gövşəyən heyvanlarda sadə həzm pozğunluğuna dair təsviri uzanmış reduksiya müddətini anormal işkənbə pH-ı və protozoaların sayının azalması ilə eyni mənzərənin tərkibində göstərir. Heç bir tək göstərici diaqnoz qoymağa kifayət etmir. Diaqnozu göstəricilərin ümumi mənzərəsi müəyyənləşdirir.
Heyvanın yanında tətbiq olunan standart prosedur
Protokollar tədris müəssisələri arasında bir qədər fərqlənir. Buna görə istifadə etdiyiniz dəqiq həcmləri və temperaturu qeyd edin və nəticələri yalnız həmin protokol çərçivəsində müqayisə edin. Geniş tədris olunan variantlardan biri belədir:
- Tüpürcək qarışmasını, hava ilə təması və soyumanı minimuma endirərək ən azı 10–20 mL təzə işkənbə mayesi götürün. Testi gecikdirmədən aparın.
- 0.03 faizli metilen mavisi hazırlayın; bu, hər mL üçün 0.3 mg deməkdir.
- Mayenin həcminin 5 faizi qədər boya əlavə edin. Bu, 20 mL mayeyə 1.0 mL boya və ya 10 mL mayeyə 0.5 mL boya deməkdir. Hər iki halda mayenin boyaya nisbəti eynidir: 20-nin 1-ə.
- Rəng üzrə nəzarət kimi eyni nümunədən boya əlavə edilməmiş mayeni ikinci sınaq şüşəsində saxlayın.
- Yavaşca qarışdırın, vaxtölçəni dərhal başladın və sınaq şüşəsini yerli protokoldan asılı olaraq bədən temperaturuna yaxın, təxminən 37–39 dərəcə Selsi temperaturunda saxlayın.
- Sınaq şüşəsindəki rəngin nəzarət nümunəsinə uyğunlaşmasına qədər keçən vaxtı qeyd edin. Hava ilə təmas səthində nazik mavi halqa qala bilər, çünki oksigen orada boyanı yenidən oksidləşdirir. Həmin halqanın yox olmasını gözləməyin.
Metilen mavisinin oksidləşmə-reduksiya kimyası burada oksigenin niyə əhəmiyyətli olduğunu izah edir. Güclü çalxalama, ağzı geniş açıq sınaq şüşəsi və ya uzun gecikmə oksigenin daxil olmasına şərait yaradır və boyanın işkənbənin özündə olduğundan daha uzun müddət mavi qalmasına səbəb olur. Çirklənmədən işkənbə mayesinin götürülməsi texnikasının detalları da eyni səbəbdən vacibdir. Tüpürcək nümunəni duruldur və pH-ı yüksəldir. Buna görə mədə zondu ilə nümunə götürərkən həcm imkan verirsə, bir çox klinisist ilk hissəni atır.
Müxtəlif müşahidələr nəyi ölçür
Reduksiya müddəti yalnız bir suala cavab verir. Aşağıdakı işkənbə qiymətləndirməsi heyvanın yanında aparılan hər bir müşahidənin hansı məlumatı verdiyini göstərir. Tək bir xanadan deyil, bütün sətirdən istifadə edin.
| Müşahidə | Nəyi ölçür | Heyvanın yanında tipik müşahidə | Nəticəyə təsir edən ümumi amillər |
|---|---|---|---|
| Metilen mavisinin reduksiya müddəti | Nümunədəki anaerob bakteriyaların funksional reduksiyaedici fəallığı | İribuynuzlu heyvanlarda çox vaxt 2–6 dəqiqə; qoyun və keçilərdə çox vaxt daha sürətli; 6 dəqiqə yetərli fəallıq üçün praktik hədd kimi qəbul edilir, 10 dəqiqədən uzun müddətlər isə aydın şəkildə anormaldır | Soyuq, gecikdirilmiş, hava ilə təmas etmiş və ya tüpürcəklə durulmuş nümunə; uzunmüddətli iştahasızlıqdan sonra substratın azlığı; ağızdan verilən antimikrob preparatlar; fərqli boya nisbətləri və ya temperaturlar arasında müqayisə |
| İşkənbə pH-ı | Kimyəvi mühit, turşu və ya qələvi yükü | Qaba yemlə qidalanan iribuynuzlu heyvanlarda çox vaxt 6.0–7.2-yə yaxın; xırdabuynuzlu heyvanlara dair mənbələrdə çox vaxt təxminən 6.5–7.5 göstərilir; rasion və yemləmədən sonra keçən vaxt göstəricini dəyişir | Mədə zondu ilə götürülmüş nümunələrdə tüpürcək qarışması pH-ı yüksəldir; nümunə götürüldükdən sonra karbon qazının itirilməsi; dənli yemlə qidalanma pH-ı aşağı salır |
| Protozoaların sayı və hərəkətliliyi | Kirpikli protozoa populyasiyasının, xüsusilə pozuntulara həssas iri formaların vəziyyəti | İsti, təzə damcıda müxtəlif ölçülü çoxlu orqanizmin fəal, istiqamətli hərəkəti | Soyuma hərəkəti ləngidir; ağır asidoz protozoaları məhv edə bilər; gecikmə normal nümunəni zəif fəal kimi göstərə bilər |
| Qoxu, rəng və konsistensiya | Fermentasiyanın xarakteri və çirklənmə | Yüngül aromatik qoxulu, yaşılımtıl-qəhvəyi, bir qədər özlü maye | Ağır disbioz zamanı çürük və ya turş qoxu; düzgün götürülməmiş nümunədə sulu və ya tüpürcək miqdarı yüksək olan maye |
| İşkənbə yığılmaları və iştaha | Heyvanda ön mədələrin ümumi funksiyası və yem qəbulu | Gümrah heyvanda müntəzəm yığılmalar və davamlı gövşəmə | Rasionun yaxın zamanda dəyişməsi, ağrı, susuzlaşma, sistem xəstəliyi |
Əsas məqam cədvəldədir. Uzanmış reduksiya müddəti, zəif hərəkətli protozoalar, anormal pH və zəif yığılmalar birlikdə mikrob fəallığının həqiqətən zəiflədiyini göstərir. Fəal protozoaları olan, gümrah və gövşəyən heyvanda yalnız reduksiya müddətinin uzanması isə problemin işkənbədə deyil, nümunədə olduğuna işarə edir. Tədbir görməzdən əvvəl nümunəni yenidən götürün.
Müddətin pH və anamnezlə birlikdə şərhi
Başlanğıc səviyyəni rasion müəyyənləşdirir. Konsentratlarla zəngin rasionlar sürətlə fermentasiya olunur və boyanın rəngini təxminən bir dəqiqədə yox edə bilər. Quru ot rasionlarında isə hətta sağlam heyvanlarda belə bir neçə dəqiqə tələb oluna bilər. Buna görə qısa müddət öz-özlüyündə daha yaxşı sağlamlığı sübut etmir. O, daha çox fermentasiya olunan substratın fəal mikroblarla təmasda olduğunu göstərir.
Həddindən artıq dənli yem qəbulu bu sadə qanunauyğunluğu pozur. Əvvəlcə karbohidrat fermentasiyası intensiv ola bilər, sonra turşunun zədələyici təsiri normal floranı və protozoaları zəiflədir, reduksiya müddəti isə uzanır. Buna görə tədrisdə istifadə olunan qaydalardan biri işkənbə pH-ı təxminən 5.5-dən aşağı olduqda testin etibarlı olmadığını bildirir. Bu mərhələdə yoxlanılan flora artıq dəyişmiş olur.
Ümumi mənzərəni şərh etmək üçün praktik bələdçi:
- Normal pH və təxminən 6 dəqiqə ərzində reduksiya funksional baxımdan fəal floraya işarə edir.
- Normal pH və nəzərəçarpacaq dərəcədə uzanmış reduksiya iştahasızlıq, antimikrob təsir və ya keyfiyyəti pozulmuş nümunə səbəbindən fəallığın azalmasına işarə edir.
- Yüksək pH və uzanmış reduksiya çox vaxt substratın az olduğu uzunmüddətli iştahasızlıqdan sonra müşahidə olunur, lakin zond vasitəsilə tüpürcək qarışmasını da nəzərə alın.
- Aşağı pH və protozoaların fəallığının azalması karbohidratlarla əlaqəli disbioz ehtimalını artırır. İşkənbə pH-ının şərhinə dair tövsiyələr burada kömək edir. Sistemik vəziyyətin zəifləməsi ilə birlikdə 5.5-dən aşağı göstəricilər sadə həzm pozğunluğundan çox, həddindən artıq dənli yem qəbuluna və ağır asidoza işarə edir.
Son vaxtlar ağızdan verilmiş tetrasiklinləri, yem ionoforlarını, uzunmüddətli sistemik antimikrob preparat istifadəsini, rasionun qəfil dəyişməsini, iştahasızlığın müddətini və su qəbulunu həmişə qeyd edin. MSD təlimatı ağızdan verilən tetrasiklinlərin işkənbə mikroflorasını əhəmiyyətli dərəcədə zəiflədə biləcəyi barədə xüsusi xəbərdarlıq edir. İonoforlar bakterial populyasiyaları məqsədli şəkildə dəyişdirir. Bu anamnez olmadan uzanmış müddəti şərh etmək mümkün deyil.
Nümunənin götürülmə keyfiyyətinə də eyni dərəcədə əhəmiyyət verilməlidir. Nəzarətli tədqiqatda eyni heyvanlardan mədə zondu ilə götürülmüş nümunələrin pH-ının kannula ilə götürülmüş nümunələrdən yüksək, uçucu yağ turşularının miqdarının isə aşağı olduğu müəyyən edilmişdir; bu, əsasən tüpürcəklə bağlı idi. Yoxlanılan bütün həcmlərdə nümunə götürüldükdən 60 dəqiqə sonra reduksiya müddəti əhəmiyyətli dərəcədə uzanmış, kiçik nümunələr isə ən çox təsirlənmişdir. Ən azı 10 mL götürün, 30 dəqiqə ərzində yoxlayın, reduksiya testini ilkin mərhələdə aparın, nümunəni isti saxlayın və hava ilə təması minimuma endirin.
Qarışdırılmamalı olan üç istifadə sahəsi
Eyni boya, üç fərqli sistem.
Birincisi, burada təsvir olunan işkənbə mayesi analizidir. Nümunə götürülmüş işkənbə mayesidir. Boya in vitro şəraitdə 0.03 faizli konsentrasiyada əlavə olunur. Son göstərici rəngsizləşməyə qədər keçən müddətdir. Məqsəd mikrobların reduksiyaedici fəallığını qiymətləndirməkdir.
İkincisi, canlı gövşəyən heyvana metilen mavisinin verilməsidir. Qəbul edilmiş nümunə methemoqlobinemiya ilə müşayiət olunan nitrat və ya nitrit toksikozunda venadaxili müalicədir; burada preparat hemoqlobinin funksional vəziyyətini bərpa edir. Doza, preparatın forması, qalıqlar və gözləmə müddəti ilə bağlı qaydalar tətbiq olunur. Bu qərarın sınaq şüşəsində vaxtın ölçülməsi ilə heç bir əlaqəsi yoxdur. Boya müəyyən prosedurda in vivo izləyici kimi istifadə olunursa, əsas prinsip işkənbə mikroblarının onu nə qədər sürətlə reduksiya etməsi deyil, boyanın hara getməsidir.
Üçüncüsü, südün reduksiya testidir. Nümunə süddür. Boya süd nümunəsinə əlavə olunur. Mavi rəngin sürətlə itməsi ümumiyyətlə daha yüksək mikrob fəallığını və daha zəif saxlanma keyfiyyətini, yavaş reduksiya isə daha yaxşı keyfiyyəti göstərir. Bu test işkənbə təbabətinə deyil, qida mikrobiologiyasına və süd keyfiyyətinin yoxlanmasına aiddir və bakteriyaların sayını ölçmür.
Adların dəqiq işlədilməsi səhvlərin qarşısını alır: işkənbə mayesinin reduksiya müddəti, sistemik metilen mavisi müalicəsi və ya izləyici kimi istifadəsi, südün reduksiya testi. Təhlükəsizlik qaydası bir cümləyə sığır. İşkənbə analizi üçün boya laboratoriya sınaq şüşəsində qalır və həmin şüşə atılır. Testi aparmaq üçün boya heç vaxt heyvana verilmir.
Fermadan gələn zəng üçün qısa qayda
Boyanı 0.03 faizli konsentrasiyada və 20 hissə mayeyə 1 hissə boya nisbətində standartlaşdırın, təzə mayeni bədən temperaturuna yaxın temperaturda boya əlavə edilməmiş nəzarət nümunəsi ilə müqayisə edərək yoxlayın və dəqiqələrlə ölçülən nəticəni pH, protozoaların hərəkətliliyi, nümunənin götürülmə keyfiyyəti, rasion, dərmanlar, yığılmalar, iştaha, nəcis və hidratasiya vəziyyəti ilə birlikdə şərh edin. Ayrılıqda götürülmüş rəqəm heç vaxt həzm pozğunluğunun diaqnozunu müəyyənləşdirmir. Bir-birinə uyğun gələn göstəricilərin ümumi mənzərəsi bunu edir.