মিথিলিন ব্লুৰ মাইট'কণ্ড্ৰিয়াগত প্ৰভাৱৰ জোখ: অক্সিজেন, ATP আৰু ঝিল্লীৰ বিভৱ

ধৰি লওক, এটা পৰীক্ষাগাৰে শ্বসনত ব্যাঘাত থকা মাইট'কণ্ড্ৰিয়াত মিথিলিন ব্লু যোগ কৰি অক্সিজেনৰ খৰচ বৃদ্ধি হোৱা দেখিলে। স্বাভাৱিকতে লিখিব খোজা বাক্যটো হ'ল—ৰঞ্জকটোৱে মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ কাৰ্যক্ষমতা পুনৰুদ্ধাৰ কৰিলে। সেই বাক্যটো ভুল হ'ব পাৰে। অক্সিজেনৰ প্ৰবাহ, ATP সংশ্লেষণ আৰু ঝিল্লীৰ বিভৱ তিনিটা পৃথক ধাৰণা। বেকআপ, ছিংক আৰু শ্বেয়াৰিঙে যেনেকৈ একেটা ক্লাউড ফ'ল্ডাৰ ব্যৱহাৰ কৰে, তেনেকৈ এই তিনিওটাই একেটা কোষাংগৰ সৈতে জড়িত: পৰস্পৰ সম্পৰ্কিত, কিন্তু ভিন্ন নিয়মৰ অধীন। এটাক আনটো বুলি ধৰিলে ব্যাখ্যা ভুল হয়, আনকি প্ৰতিটো জোখ কাৰিকৰীভাৱে শুদ্ধ হ'লেও।

মিথিলিন ব্লুৰ ক্ষেত্ৰত এই বিভ্ৰান্তিৰ সম্ভাৱনা বেছি, কাৰণ ই যি ব্যৱস্থাৰ জোখ লোৱাত ব্যৱহৃত হয়, সেই ব্যৱস্থাত নিজেও অংশগ্ৰহণ কৰে। ই এটা ৰেডক্স চক্ৰকাৰী পদাৰ্থ, যিয়ে প্ৰবাহপথৰ আগৰ অংশত ইলেক্ট্ৰন গ্ৰহণ কৰি পিছৰ অংশত দান কৰে; ই এটা লিপিড-আকৰ্ষী ধনায়ন, যি শক্তিসম্পন্ন মাইট'কণ্ড্ৰিয়াত জমা হয়; আৰু ই এটা গাঢ় নীলা যৌগ, যিয়ে সাধাৰণ প্ৰ'বৰ সৈতে একে তৰংগদৈৰ্ঘ্যৰ বেণ্ডত পোহৰ শোষণ আৰু নিৰ্গমন কৰে। এটা মাত্ৰ জোখে এই সকলো দিশ সামৰিব নোৱাৰে। বুদাপেষ্টৰ মাইট'কণ্ড্ৰিয়া অধ্যয়নসমূহত দেখা নিৰ্ভৰযোগ্য পদ্ধতিটো হ'ল—অক্সিজেনৰ প্ৰবাহৰ লগতে ATP সংশ্লেষণৰ হাৰ, ঝিল্লীৰ বিভৱ আৰু হাইড্ৰ'জেন পেৰক্সাইড নিৰ্গমন জোখা, আৰু প্ৰতিটো স্তৰত ৰঞ্জক-নিৰ্দিষ্ট নিয়ন্ত্ৰণ ব্যৱহাৰ কৰা।

ৰেস্পিৰোমেট্ৰিয়ে অক্সিজেনৰ প্ৰবাহ জোখে, শক্তিৰ উৎপাদন নহয়

Oroboros Oxygraph বা Seahorse বহিঃকোষীয় প্ৰবাহ বিশ্লেষক—যিটোৰেই কৰা নহওক, উচ্চ-বিভেদন ৰেস্পিৰোমেট্ৰিয়ে এটা কথাই জনায়: অক্সিজেন কিমান দ্ৰুতগতিত বিজাৰিত হৈছে। ই প্ৰতিটো ইলেক্ট্ৰনৰ বিপৰীতে কিমান প্ৰ'টন পাম্প কৰা হ'ল, কিমান প্ৰৱণতা সংৰক্ষিত থাকিল বা ATP ছিন্থেজে সেই প্ৰৱণতা ব্যৱহাৰ কৰিলে নে নাই, সেয়া নজনায়।

পৰিভাষাৰ গুৰুত্ব আছে। পৃথক কৰা মাইট'কণ্ড্ৰিয়াত ADP নথকা ছাবষ্ট্ৰেটে লিক শ্বসন দিয়ে, সংপৃক্তিকৰ পৰিমাণৰ ADP-সহ ছাবষ্ট্ৰেটে অক্সিডেটিভ ফছফৰাইলেচনৰ ক্ষমতা দিয়ে, আৰু আনকাপলাৰৰ টাইট্ৰেচনে সৰ্বাধিক ইলেক্ট্ৰন স্থানান্তৰ ক্ষমতা দিয়ে। অক্ষত কোষত Seahorse-ৰ সমতুল্য জোখবোৰ হ'ল মৌলিক শ্বসন, অলিগ'মাইচিন-সংবেদনশীল ATP-সংযুক্ত শ্বসন, প্ৰ'টন লিক, FCCP-নিৰ্ধাৰিত সৰ্বাধিক শ্বসন আৰু ৰ'টেন'ন তথা এণ্টিমাইচিন-প্ৰতিৰোধী অ-মাইট'কণ্ড্ৰিয়াগত অক্সিজেন খৰচ। Seahorse-ৰ ফলাফলক State 3 আৰু State 4 বুলি ক'লে এনে এক নিৰ্দিষ্টতাৰ দাবী কৰা হয়, যিটো নমুনা প্ৰস্তুতিয়ে সমৰ্থন নকৰে; Agilent Mito Stress Test-ৰ কাঠামো-ত এই কথা স্পষ্ট কৰা হৈছে।

মিথিলিন ব্লুৱে অধিক অক্সিজেন মানেই অধিক শক্তি বুলি থকা সহজ ধাৰণাটোৰ সংযোগ ভাঙি দিয়ে। পৃথক কৰা গিনিপিগৰ মগজুৰ মাইট'কণ্ড্ৰিয়াত 100 nM ৰ পৰা 1 uM ৰঞ্জকে গ্লুটামেটৰ সৈতে মালেট, ছাক্সিনেট আৰু আলফা-গ্লিচেৰ'ফছফেট ছাবষ্ট্ৰেটৰ উপস্থিতিত বিশ্ৰামকালীন অক্সিজেন খৰচ বঢ়াইছিল। আলফা-গ্লিচেৰ'ফছফেটৰ ক্ষেত্ৰত বৃদ্ধি প্ৰায় 64 শতাংশ আছিল, অথচ সুস্থ মাইট'কণ্ড্ৰিয়াত ADP-উদ্দীপিত শ্বসন মূলতঃ অপৰিৱৰ্তিত আছিল, পৃথক কৰা মগজুৰ মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ অধ্যয়ন-অনুসৰি। লিক বৃদ্ধি পোৱাৰ বিপৰীতে ADP-উদ্দীপিত প্ৰবাহ একে থকাৰ বাবে গণনা কৰা শ্বসন নিয়ন্ত্ৰণ অনুপাত কমে। এই হ্ৰাসে ৰঞ্জকটোৱে মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ ক্ষতি কৰিলে বুলি নুবুজায়। ইয়াৰ অৰ্থ হ'ল, ৰঞ্জকটোৱে স্বাভাৱিক শ্বসনৰ ওপৰত অক্সিজেন খৰচ কৰা এটা ৰেডক্স চক্ৰ যোগ কৰিলে। কেৱল এই বৃদ্ধিৰ তথ্য দিয়া মিথিলিন ব্লুৰ অক্সিজেন খৰচৰ পৰীক্ষাই প্ৰকৃত ৰাসায়নিক প্ৰক্ৰিয়া জুখিছে, কিন্তু শক্তি সংৰক্ষণৰ বিষয়ে একো কোৱা নাই।

পুনৰুদ্ধাৰৰ পৰীক্ষাবোৰতো অধিক পৰিসৰত একেই ব্যৱধান দেখা যায়। কমপ্লেক্স I বাধাপ্ৰাপ্ত অৱস্থাত অক্সিজেনৰ প্ৰবাহ প্ৰায় তিনিগুণলৈ পুনৰুদ্ধাৰ হৈছিল, অথচ ATP সংশ্লেষণ প্ৰায় 1.5-গুণলৈহে পুনৰুদ্ধাৰ হৈছিল। অধিক অক্সিজেন ইলেক্ট্ৰ'ডলৈ গৈছিল। তাৰ তুলনাত কম অংশই ATP উৎপাদনত অৱদান দিছিল। অক্সিডেটিভ ফছফৰাইলেচন উন্নত হোৱা বুলি যিকোনো দাবীৰ বাবে হিচাপৰ ATP-পক্ষৰ তথ্যও প্ৰয়োজন; আদৰ্শভাৱে ইয়াক প্ৰতি অক্সিজেনত ATP অনুপাত হিচাপে প্ৰকাশ কৰিব লাগে আৰু হৰ গণনাৰ ৰীতি উল্লেখ কৰিব লাগে।

ATP পৰীক্ষাই সংশ্লেষণৰ হাৰ জোখে; মুঠ পৰিমাণে তাৰ বিকল্প হ'ব নোৱাৰে

ATP পৰীক্ষাই এটা পৃথক প্ৰশ্নৰ উত্তৰ দিয়ে: প্ৰতি একক সময়ত কিমান ATP উৎপন্ন হয়। গতিজ জোখে—সেয়া কেইবামিনিট ধৰি অনুসৰণ কৰা জোনাকী পৰুৱাৰ লুচিফাৰেজৰ পোহৰ নিৰ্গমনেই হওক বা 340 nm-ত পঢ়া সংযুক্ত হেক্স'কাইনেজ আৰু গ্লুক'জ-6-ফছফেট ডিহাইড্ৰ'জেনেজ পৰীক্ষাই হওক—এটা হাৰ দিয়ে। এটা মাত্ৰ অন্তিম বিন্দুত মুঠ ATP জুখিলে পৰিমাণ পোৱা যায়; ই সংশ্লেষণৰ পৰা খৰচ বাদ দিয়াৰ ফল প্ৰতিফলিত কৰে আৰু নিজে অক্সিডেটিভ ফছফৰাইলেচনৰ বিষয়ে বিশেষ একো নজনায়।

বুদাপেষ্টৰ গোটটোৱে এডেনাইলেট কাইনেজ দমন কৰি সংযুক্ত এনজাইমীয় পদ্ধতি ব্যৱহাৰ কৰিছিল। তেওঁলোকে পাইছিল যে 1 ৰ পৰা 2 uM মিথিলিন ব্লুৱে ৰ'টেন'ন-প্ৰয়োগ কৰা আৰু এণ্টিমাইচিন-প্ৰয়োগ কৰা মাইট'কণ্ড্ৰিয়াত ATP উৎপাদন সামান্য পৰিমাণে, কিন্তু তাৎপৰ্যপূৰ্ণভাৱে বঢ়াইছিল। এয়া প্ৰকৃত পুনৰুদ্ধাৰ, আৰু ই আংশিক। TEGDMA-ৰ বিষাক্ততাৰ অধ্যয়ন-এ এটা ভিন্ন আৰ্হিত একে ধৰণৰ ফল পাইছিল: 5 mM দন্তচিকিৎসাত ব্যৱহৃত ম'ন'মাৰ TEGDMA-ই কমপ্লেক্স I-সংযুক্ত শ্বসন প্ৰায় 286 ৰ পৰা 28 প্ৰবাহ এককলৈ নামাইছিল, আৰু 2 uM ৰঞ্জকে ইয়াক প্ৰায় 86 লৈ পুনৰুদ্ধাৰ কৰিছিল।

ৰঙীন ৰেডক্স যৌগৰ ক্ষেত্ৰত দুটা নিয়ন্ত্ৰণ বাদ দিব নোৱাৰি। প্ৰথমতে, জোখা ATP সংশ্লেষণৰ কিমান অংশ ATP ছিন্থেজৰ ওপৰত নিৰ্ভৰ কৰে, সেয়া নিৰ্ধাৰণ কৰিবলৈ অলিগ'মাইচিন ব্যৱহাৰ কৰক। দ্বিতীয়তে, জনা পৰিমাণৰ ATP, সম্পূৰ্ণ বিকাৰক মিশ্ৰণ আৰু ব্যৱহাৰ কৰা ৰঞ্জকৰ ঠিক একে ঘনত্বেৰে কোষবিহীন স্পাইক-পুনৰুদ্ধাৰ পৰীক্ষা কৰক; ন্যূনতম ঘনত্বসমূহ হ'ব 0, 100 nM, 300 nM, 1 uM আৰু 2 uM। ৰঞ্জকটোৱে নিৰ্গত পোহৰ শোষণ কৰিব পাৰে, সংকেতদায়ী এনজাইমক বাধা দিব পাৰে বা বিকাৰকৰ ৰেডক্স ৰসায়ন সলনি কৰিব পাৰে। সাধাৰণ লুচিফাৰেজ পৰীক্ষাৰ নিৰ্দেশনা-ত এই শ্ৰেণীৰ হস্তক্ষেপৰ বাবেই জৈৱৰাসায়নিক প্ৰতিপৰীক্ষাৰ পৰামৰ্শ দিয়া হৈছে। অধিক ঘনত্বত সাধাৰণতে ফ্লুৰেচেন্স দমন বেছি হয় বুলিয়েই 1 uM-ত কৃত্ৰিম প্ৰভাৱ নাথাকে বুলি নধৰিব।

ঝিল্লীৰ বিভৱ নিৰ্ণায়ক প্ৰ'বে ৰঞ্জকৰ বিতৰণ জোখে, প্ৰবাহ নহয়

ছাফ্ৰানিন O, TMRM আৰু TMRE, ৰ'ডামিন 123 আৰু JC-1—সকলোবোৰেই ঝিল্লী পাৰ হ'ব পৰা ধনায়ন। বৈদ্যুতিক-ৰাসায়নিক সাম্য অনুসৰি ইহঁত ঋণাত্মক আধানযুক্ত মেট্ৰিক্সত জমা হয়। সেয়ে সামগ্ৰিক ফ্লুৰেচেন্সে প্ৰ'বটো ক'ত আছে তাৰ জৰিয়তে পৰোক্ষভাৱে বিভৱৰ তথ্য দিয়ে। এইবোৰৰ এটায়ো ATP বা ইলেক্ট্ৰনৰ প্ৰবাহ নোজোখে।

প্ৰতিটো প্ৰ'বৰ বাবে অধিক উপযুক্ত নমুনা প্ৰস্তুতি আছে। ছাফ্ৰানিন O পৃথক কৰা মাইট'কণ্ড্ৰিয়া আৰু ঝিল্লী পাৰগম্য কৰা কোষৰ বাবে উপযোগী। সাধাৰণতে ইয়াক প্ৰায় 2 uM-ত, উত্তেজন প্ৰায় 495 nm আৰু নিৰ্গমন প্ৰায় 585 nm-ত ব্যৱহাৰ কৰা হয়। ই ফ্লুৰেচেন্স দমন হোৱা অৱস্থাত কাম কৰে, য'ত ভিতৰলৈ গ্ৰহণৰ ফলত সামগ্ৰিক ফ্লুৰেচেন্স সলনি হয়। TMRM আৰু TMRE অক্ষত কোষত কম নেন'ম'লাৰ পৰিমাণত ভৰ্তি কৰি, ফ্লুৰেচেন্স দমন নোহোৱা অৱস্থাত ব্যৱহাৰৰ বাবে উপযোগী। তাত বিভৱ হ্ৰাস পালে ৰঞ্জক ওলাই আহে আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ ফ্লুৰেচেন্স কমে; বেছি পৰিমাণত ভৰ্তি কৰিলে স্ব-দমনৰ ফলত সংকেতৰ দিশ ওলোটা হ'ব পাৰে। JC-1-এ সুবিধাজনক সেউজীয়াৰ পৰা ৰঙালৈ অনুপাত দিয়ে, কিন্তু ই ভৰ্তি কৰা পৰিমাণ আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ ভৰৰ ওপৰত নিৰ্ভৰ কৰে। সেয়ে পৰিমাণগত কামত ই সযতনে নিয়ন্ত্ৰিত TMRM-তকৈ কম নিৰ্ভৰযোগ্য। এই সুবিধা-অসুবিধাবোৰ বহুলভাৱে ব্যৱহৃত মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ ঝিল্লীৰ বিভৱ নিৰ্ণায়ক প্ৰ'বৰ পৰ্যালোচনা-ত সংক্ষেপে দিয়া হৈছে।

মিথিলিন ব্লুৱে পৰীক্ষাত ব্যৱহাৰ কৰা ঘনত্বতে আলোকীয় হস্তক্ষেপ কৰে। প্ৰায় 600 ৰ পৰা 665 nm-ত ইয়াৰ শোষণ বেণ্ড ৰঙা প্ৰ'বৰ নিৰ্গমনৰ সৈতে মিলি যায়। সেয়ে অভ্যন্তৰীণ-ফিল্টাৰ প্ৰভাৱ, ফ্লুৰেচেন্স দমন আৰু উত্তেজন পোহৰৰ শোষণ—সকলোবোৰৰ সম্ভাৱনা আছে। ৰঞ্জকটো নিজেও দ্বিতীয় এটা লিপিড-আকৰ্ষী ধনায়ন, যাৰ বিতৰণ জোখা বিভৱৰ সৈতে সলনি হয়। প্ৰতিৰক্ষাৰ উপায় হ'ল একাধিক স্বাধীন জোখ আৰু ব্লেংক: কেৱল প্ৰ'ব, কেৱল ৰঞ্জক, প্ৰ'বৰ সৈতে ৰঞ্জকৰ প্ৰতিটো ঘনত্ব, শূন্য মানৰ নিৰ্দেশক হিচাপে FCCP-ৰে সম্পূৰ্ণ বিভৱ হ্ৰাস, আৰু সম্ভৱ হ'লে আলোকীয়ভাৱে পৃথক দ্বিতীয় এটা প্ৰ'ব। কমপ্লেক্স III পাশ কাটাই যোৱা পথৰ অধ্যয়ন-এ এণ্টিমাইচিন আৰু মিক্স'থিয়াজ'লৰ বাধাৰ পিছত ছাফ্ৰানিন O আৰু TMRM দুয়োটাৰে ঝিল্লীৰ বিভৱ পুনৰুদ্ধাৰ পুনৰ পৰীক্ষা কৰি একে গুণগত পুনৰুদ্ধাৰ পাই এই দৃষ্টান্ত স্থাপন কৰিছিল। এটা আলোকীয় সংকেতদায়ক এটা ইংগিত। দুটা স্বাধীন সংকেতদায়ক প্ৰমাণ।

তিনিটা নমুনা প্ৰস্তুতি, তিনিটা পৃথক প্ৰশ্ন

পৃথক কৰা মাইট'কণ্ড্ৰিয়া, ঝিল্লী পাৰগম্য কৰা কোষ আৰু অক্ষত কোষ—একে পৰীক্ষাৰ পৰস্পৰ সলনি কৰিব পৰা সংবেদনশীলতাৰ বিন্যাস নহয়। ইহঁত ভিন্ন কাৰ্যনীতিসম্পন্ন পৃথক ধাৰণা।

পৃথক কৰা মাইট'কণ্ড্ৰিয়াই ইলেক্ট্ৰন পৰিবহণ শৃংখল, ভিতৰৰ ঝিল্লী আৰু মেট্ৰিক্সৰ কাৰ্যতন্ত্ৰ অক্ষুণ্ণ ৰাখে, কিন্তু প্লাজমা ঝিল্লী, চাইট'ছল আৰু নেটৱৰ্কৰ গঠন আঁতৰাই দিয়ে। এই আঁতৰোৱাটোৱেই উদ্দেশ্য: ছাবষ্ট্ৰেট, ADP, বাধাদায়ক পদাৰ্থ আৰু ৰঞ্জকৰ ঘনত্ব সঠিকভাৱে নিৰ্ধাৰণ কৰা থাকে, সেয়ে এটা পথ চিহ্নিত কৰিব পাৰি। ইয়াৰ বিনিময়ত স্বাভাৱিক ছাবষ্ট্ৰেট যোগান, সংকেত প্ৰক্ৰিয়া আৰু চাহিদা হেৰাই যায়।

ঝিল্লী পাৰগম্য কৰা কোষত মাইট'কণ্ড্ৰিয়া কোষীয় গঠনৰ বহুখিনিৰ ভিতৰতেই থাকে, কিন্তু খোলা প্লাজমা ঝিল্লীৰ মাজেৰে বাহিৰৰ ছাবষ্ট্ৰেট আৰু ADP সোমাব পাৰে। কোষীয় পৰিৱেশৰ ভিতৰত ছাবষ্ট্ৰেট-পথৰ ত্ৰুটি নিৰ্ণয় কৰিবলৈ এইবোৰ উপযুক্ত। অত্যধিক পাৰগম্যকৰণে বাহিৰৰ ঝিল্লীৰ ক্ষতি কৰে, আৰু চাইট'ছলীয় নিয়ন্ত্ৰণ ধুই ওলাই যায়।

অক্ষত কোষে সকলো বজাই ৰাখে: প্লাজমা ঝিল্লীৰ বাধা, চাইট'ছলীয় বিজাৰক পদাৰ্থ, অন্তৰ্জাত ছাবষ্ট্ৰেট পৰিবহণ, মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ নেটৱৰ্ক আৰু ATP-ৰ চাহিদা। এইবোৰ শাৰীৰবৃত্তীয় অৱস্থাৰ আটাইতকৈ ওচৰত আৰু প্ৰক্ৰিয়াগত ব্যাখ্যাৰ পৰা আটাইতকৈ দূৰত থাকে, কাৰণ ৰঞ্জকৰ গ্ৰহণ, বিজাৰণ আৰু পৃথককৈ আবদ্ধ হৈ থকাই মাইট'কণ্ড্ৰিয়াত ৰঞ্জকৰ প্ৰকৃত সংস্পৰ্শ নিৰ্ধাৰণ কৰে।

TEGDMA অধ্যয়নত উদ্দেশ্যপ্ৰণোদিতভাৱে তিনিওটা স্তৰ ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল: ৰঞ্জকৰ দ্বাৰা জাৰণ আৰু বিভৱ পুনৰুদ্ধাৰ পৰীক্ষাৰ বাবে পৃথক কৰা মগজুৰ মাইট'কণ্ড্ৰিয়া; মূলতঃ ত্ৰুটিটো কমপ্লেক্স I-সংযুক্ত ছাবষ্ট্ৰেট জাৰণত আছে বুলি নিৰ্ণয় কৰিবলৈ ঝিল্লী পাৰগম্য কৰা দন্তমজ্জাৰ ষ্টেম কোষ; আৰু দমিত অক্সিজেন খৰচৰ ওপৰত 2 uM ৰঞ্জকৰ সামগ্ৰিক শাৰীৰবৃত্তীয় প্ৰভাৱ জুখিবলৈ অক্ষত ষ্টেম কোষ। বিভিন্ন নমুনা প্ৰস্তুতিৰ মাইট'কণ্ড্ৰিয়াগত জোখ তুলনা কৰা পাঠকৰ বাবে, মিথিলিন ব্লুৱে শ্বসন শৃংখলৰ মাজেৰে ইলেক্ট্ৰন কেনেকৈ সঞ্চালন কৰে সেই বিষয়ে সহযোগী ব্যাখ্যামূলক লেখাই পথটোৰ পটভূমি দিয়ে; আৰু মিথিলিন ব্লুৰ শ্বসন অধ্যয়ন পঢ়াৰ নিৰ্দেশিকাই প্ৰয়োগ কৰা পৰিমাণ আৰু বাধাদায়ক পদাৰ্থৰ যুক্তি সামৰে।

ৰেডক্স-সক্ৰিয় ৰঞ্জকৰ বাবে প্ৰয়োজনীয় নিয়ন্ত্ৰণ

ৰেডক্স চক্ৰকাৰী পদাৰ্থৰ বাবে সাধাৰণ বাধাদায়ক পদাৰ্থতকৈ দীঘল নিয়ন্ত্ৰণ তালিকা লাগে, কাৰণ কেৱল ৰঞ্জকৰ ৰসায়নেও জৈৱিক প্ৰক্ৰিয়াৰ দৰে ফল দেখুৱাব পাৰে।

ৰেস্পিৰোমেট্ৰিৰ বাবে, জোখৰ ধীৰ সৰণ নিৰ্ণয় কৰিবলৈ কেৱল বাফাৰ থকা এটা কক্ষ, জৈৱিক পদাৰ্থ নথকা বাফাৰ আৰু ৰঞ্জকৰ এটা কক্ষ, পৰীক্ষাত থকা যিকোনো বহিঃকোষীয় বিজাৰকৰ সৈতে ৰঞ্জক, আৰু অক্ষত কোষত অ-মাইট'কণ্ড্ৰিয়াগত অক্সিজেন খৰচ নিৰ্ধাৰণ কৰিবলৈ শেষত ৰ'টেন'ন আৰু এণ্টিমাইচিন ব্যৱহাৰ কৰক। মনত ৰাখিব যে বিজাৰিত ৰঞ্জকে অক্সিজেনলৈ ইলেক্ট্ৰন স্থানান্তৰ কৰি হাইড্ৰ'জেন পেৰক্সাইড গঠন কৰাৰ মাধ্যমেৰে পুনৰ জাৰিত হয়। সেয়ে ইলেক্ট্ৰন দাতা নথকা কেৱল ৰঞ্জকৰ ব্লেংকে NADH বা NADPH উপলব্ধ হোৱাৰ পিছত দেখা দিয়া কোষবিহীন অক্সিজেন খৰচক প্ৰকৃততকৈ কম দেখুৱায়।

হাইড্ৰ'জেন পেৰক্সাইডৰ বাবে অবাছনিমূলক DCFDA ৰঞ্জকৰ সলনি মানাংকিত Amplex UltraRed আৰু হৰ্ছৰেডিছ পেৰক্সিডেজক অগ্ৰাধিকাৰ দিয়ক, কেটালেজেৰে নিশ্চিত কৰক আৰু আলোকসজ্জাৰ ওপৰত নিৰ্ভৰতা পৰীক্ষা কৰক, কাৰণ ৰঞ্জকটো এটা আলোকসংবেদক। মগজুৰ মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ অধ্যয়নে পাইছিল যে মাত্ৰ 100 nM ৰঞ্জকতে পেৰক্সাইডৰ বোজা চাৰিগুণতকৈও বেছি হৈছিল, অথচ অপসাৰণ লেহেম হৈছিল; ছুপাৰঅক্সাইড মধ্যৱৰ্তী নোহোৱাকৈ বিজাৰিত ৰঞ্জকৰ পৰা পোনপটীয়াকৈ পেৰক্সাইড গঠন হৈছিল। প্ৰ'ব বাছনি আৰু পোহৰৰ নিয়ন্ত্ৰণৰ বিশদ বিবৰণ ৰঞ্জকৰ পৰীক্ষাত সক্ৰিয় অক্সিজেন প্ৰজাতিৰ জোখ সম্পৰ্কীয় সহযোগী লেখাত আছে। পেৰক্সাইডে কেতিয়া সংকেত হিচাপে আৰু কেতিয়া বোজা হিচাপে কাম কৰে, সেই বহল প্ৰশ্নটো কোষীয় ৰেডক্স ভাৰসাম্য আৰু এণ্টিঅক্সিডেণ্ট সম্পৰ্কীয় দাবী-ৰ সৈতে আলোচনা কৰা হৈছে।

পথ সম্পৰ্কীয় দাবীৰ বাবে কমপ্লেক্স III-ৰ বাধাদায়ক পদাৰ্থৰ দুয়োটা স্থান পৰীক্ষা কৰক: Qi স্থানত এণ্টিমাইচিন A আৰু Qo স্থানত মিক্স'থিয়াজ'ল, লগতে চায়ানাইডেৰে কমপ্লেক্স IV-ৰ অন্তিম পৰীক্ষা। আগৰ এটা নিগনিৰ মগজুৰ অধ্যয়নত ৰঞ্জকে ৰ'টেন'নে বাধা দিয়া শ্বসন পুনৰুদ্ধাৰ কৰিছিল, কিন্তু এণ্টিমাইচিনে বাধা দিয়া শ্বসন কৰা নাছিল। পৰৱৰ্তী তিনিটা প্ৰজাতিৰ অধ্যয়নত দুয়োটা বাধাদায়ক পদাৰ্থৰ ক্ষেত্ৰতে আংশিক পুনৰুদ্ধাৰ আৰু চাইট'ক্ৰ'ম c-ৰ পোনপটীয়া বিজাৰণৰ প্ৰমাণ পোৱা গৈছিল। এই পাশ কাটাই যোৱা পথটোক নিশ্চিতভাৱে স্থিৰ হোৱা বুলি নধৰি নতুন তথ্যৰ সৈতে সংগতিপূৰ্ণ বুলি ধৰক, কাৰণ ৰঞ্জকৰ ঘনত্ব, বাধাদায়ক পদাৰ্থৰ কাৰ্যস্থান, ছাবষ্ট্ৰেটৰ অৱস্থা আৰু ৰঞ্জকৰ বিতৰণ—সকলোবোৰে পৰ্যবেক্ষণ কৰা পথ সলনি কৰে।

পৰীক্ষা বাছনিৰ তালিকা

প্ৰশ্নৰ পৰা জোখ বাছিবলৈ এই তালিকা ব্যৱহাৰ কৰক, জোখৰ পৰা প্ৰশ্ন বাছিবলৈ নহয়।

ন্যূনতম বিশ্বাসযোগ্য দাবীৰ বাবে একে ৰঞ্জক ঘনত্ব—100 nM, 300 nM, 1 uM আৰু 2 uM—ব্যৱহাৰ কৰি লিক, ADP, অলিগ'মাইচিন আৰু আনকাপলাৰ অৱস্থাত অক্সিজেনৰ প্ৰবাহ, ATP সংশ্লেষণৰ হাৰ, সম্ভৱ হ'লে দুটা প্ৰ'বেৰে ঝিল্লীৰ বিভৱ, আৰু কেটালেজ তথা কোষবিহীন নিয়ন্ত্ৰণসহ মানাংকিত পেৰক্সাইড নিৰ্গমন জুখিব লাগে। সংযুক্ত ফলসমূহ প্ৰকাশ কৰক: অক্সিজেনৰ প্ৰবাহ, ATP-ৰ হাৰ, প্ৰতি অক্সিজেনত ATP, বিভৱ আৰু পেৰক্সাইড। এই সংখ্যাবোৰৰ যিকোনো এটা অকলেই থাকিলে সেয়া অৰ্থৰ সন্ধানত থকা এটা জোখ মাত্ৰ।