G6PD পৰীক্ষাগাৰ পৰীক্ষাত মিথিলিন ব্লু: ৰঞ্জকটোৱে প্ৰকৃততে কি কৰে

ইনকিউবেচনৰ পাছত এজন শিক্ষাৰ্থীয়ে দুটা পৰীক্ষানল লক্ষ্য কৰে। এটাৰ ৰং প্ৰত্যাশিত ধৰণে সলনি হৈছে। আনটোৰ হোৱা নাই। শিক্ষাৰ্থীজনে সিদ্ধান্ত লয় যে দ্বিতীয় ৰোগীজনৰ গ্লুক'জ-6-ফছফেট ডিহাইড্ৰ'জিনেজৰ অভাৱ আছে। সেই সিদ্ধান্ত সঠিক হ'ব পাৰে, কিন্তু এই যুক্তিত পৰীক্ষাটো কাৰ্যকৰী কৰা মূল ধাৰণাটো বাদ পৰিছে। পৰীক্ষানলৰ কোনো বস্তুৱেই এনজাইমটো পোনপটীয়াকৈ জোখা নাই। মিথিলিন ব্লুক মধ্যস্থতাকাৰী হিচাপে ব্যৱহাৰ কৰি পৰীক্ষানলটোৱে এনজাইমে উৎপন্ন কৰা পদাৰ্থ জোখে।

এই পৰোক্ষ প্ৰক্ৰিয়াটো স্পষ্ট হ'লেই পদ্ধতি, নিয়ন্ত্ৰণ নমুনা আৰু ভুল ফলাফলৰ দীঘলীয়া তালিকাখন আৰু খেয়ালখুচিমতে নিৰ্ধাৰিত যেন নালাগে।

চমু উত্তৰ

G6PD পৰীক্ষাত মিথিলিন ব্লু এটা ৰেডক্স সূচক। G6PD এনজাইমে NADPH উৎপন্ন কৰে, আৰু NADPH-নিৰ্ভৰ প্ৰণালীয়ে নীলা মিথিলিন ব্লুক বিজাৰিত কৰি ইয়াৰ বৰণহীন লিউকো ৰূপলৈ সলনি কৰে (বা ইয়াক ইলেক্ট্ৰন বহন কৰিবলৈ ব্যৱহাৰ কৰে)। স্বাভাৱিক এনজাইম সক্ৰিয়তাই দক্ষ বিজাৰণ ঘটায়। সক্ৰিয়তাৰ অভাৱে ধীৰ বা অসম্পূৰ্ণ বিজাৰণ ঘটায়। পৰীক্ষাৰ সমগ্ৰ সংকেত এয়াই।

দুটা ঐতিহাসিক পদ্ধতিত একেটা ৰঞ্জক ব্যৱহাৰ কৰা হয়, কিন্তু সিহঁতৰ অন্তিম সূচক পৃথক। দুয়োটাক পৃথককৈ বুজিলে অধিকাংশ বিভ্ৰান্তি আঁতৰে।

দুটা পৰীক্ষা, এটা ৰঞ্জক, পৃথক অন্তিম সূচক

প্ৰথমটো হ'ল প্ৰত্যক্ষ মিথিলিন ব্লু বিজাৰণ পৰীক্ষা, যিটো Sass আৰু তেওঁৰ সহকৰ্মীসকলে বৰ্ণনা কৰিছিল আৰু পাছত Gibbs-এ মূল্যায়ন কৰিছিল। ইয়াত অন্তিম সূচক হ'ল ৰঞ্জকটো নিজেই: জাৰিত নীলা মিথিলিন ব্লু বিজাৰিত হৈ বৰণহীন লিউকোমিথিলিন ব্লুলৈ সলনি হয়, আৰু এই পৰিৱৰ্তনৰ হাৰে NADPH উৎপন্ন কৰাৰ ক্ষমতা প্ৰতিফলিত কৰে। মূল স্ক্ৰীনিং গৱেষণাপত্ৰখন PubMed-ত Sass আৰু অন্যান্য (1966) নামেৰে সূচীভুক্ত আছে।

দ্বিতীয়টো হ'ল Brewer মেটহিম'গ্লবিন বিজাৰণ পৰীক্ষা। ছ'ডিয়াম নাইট্ৰাইটে প্ৰথমে হিম'গ্লবিনক জাৰিত কৰি বাদামী মেটহিম'গ্লবিনলৈ সলনি কৰে। তাৰ পাছত মিথিলিন ব্লুৱে ইলেক্ট্ৰন স্থানান্তৰৰ মধ্যস্থতাকাৰী হিচাপে কাম কৰে: বিজাৰিত মিথিলিন ব্লুৱে বিজাৰক সমতুল্য মেটহিম'গ্লবিনলৈ স্থানান্তৰ কৰি ইয়াক পুনৰ ৰঙা হিম'গ্লবিনলৈ সলনি কৰে। সেয়েহে দৃশ্যমান অন্তিম সূচক হ'ল বাদামী বনাম ৰঙা, নীলা বনাম বৰণহীন নহয়। মূল পদ্ধতিটো বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থাৰ বুলেটিনত (Brewer আৰু অন্যান্য, 1960) প্ৰকাশ পাইছিল।

Brewer পৰীক্ষাক ৰঞ্জকৰ বৰ্ণলোপ পৰীক্ষা বুলি কোৱাটো ৰাসায়নিকভাৱে নিৰ্ভুল নহয়। ৰঞ্জকটো চক্ৰাকাৰে সলনি হয়; ৰং সলনি হয় হিম'গ্লবিনৰ। তলৰ চিত্ৰত দুয়োটা পথ দেখুওৱা হৈছে।

অন্তৰ্নিহিত বিক্ৰিয়া

G6PD-এ পেণ্ট'জ ফছফেট পথৰ প্ৰথম জাৰণ ধাপটো অনুঘটিত কৰে:

Glucose-6-phosphate + NADP+ becomes 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

পৰিপক্ব লোহিত ৰক্তকণিকাই NADPH-ৰ বাবে এই পথৰ ওপৰত বহুলাংশে নিৰ্ভৰ কৰে, যিটো Blood-ত Luzzatto আৰু তেওঁৰ সহকৰ্মীসকলৰ পৰ্যালোচনাত (2020) আলোচনা কৰা হৈছে। NADPH-এ গ্লুটাথায়নক বিজাৰিত অৱস্থাত ৰাখে আৰু কোষক জাৰণজনিত ক্ষতিৰ পৰা সুৰক্ষা দিয়ে। মিথিলিন ব্লুৱে ইলেক্ট্ৰন গ্ৰহণকাৰী হিচাপে এই প্ৰণালীত অংশ লয়। পৰ্যাপ্ত G6PD-এ পৰ্যাপ্ত NADPH উৎপন্ন কৰে, যাৰ ফলত দক্ষ বিজাৰণ ঘটে। কম G6PD-এ এই শৃংখলাৰ প্ৰথম সংযোগটোতে বাধা দিয়ে।

ৰঞ্জকটোক ইঞ্জিন বুলি নহয়, ইন্ধনৰ পৰিমাণ দেখুওৱা সূচক বুলি ভাবক। ই NADPH-ৰ যোগানৰ বিষয়ে জনায়। এই যোগান বা ফলাফল পঢ়াৰ প্ৰক্ৰিয়াত প্ৰভাৱ পেলোৱা আন যিকোনো কাৰকে জিনৰ কোনো পৰিৱৰ্তন নোহোৱাকৈও সূচকটো সলনি কৰিব পাৰে।

Brewer-ধৰণৰ পদ্ধতি কেনেকৈ সম্পন্ন হয়

দশকজুৰি বিকাৰকৰ সংমিশ্ৰণ সলনি হৈ আহিছে, সেয়ে শিক্ষামূলক বৰ্ণনাক ক্লিনিকেল প্ৰট'কল বুলি ধৰি ল'ব নালাগে। প্ৰতিটো পৰীক্ষাগাৰে নিজৰ বৈধতা-নিৰূপিত মানক কাৰ্যপদ্ধতি অনুসৰণ কৰে। এই সতৰ্কতা মনত ৰাখি, পৰম্পৰাগত পৰীক্ষানল-ভিত্তিক ব্যৱস্থাটো তলত দিয়াৰ দৰে চলে; এই প্ৰকাশিত প্ৰয়োগত তিনিটা পৰীক্ষানল আৰু 3 ঘণ্টাৰ ইনকিউবেচনসহ এই ৰূপটো নথিভুক্ত কৰা হৈছে:

1. ৰোগীৰ পৰীক্ষানল: সম্পূৰ্ণ তেজৰ সৈতে গ্লুক'জ, ছ'ডিয়াম নাইট্ৰাইট আৰু মিথিলিন ব্লু। নাইট্ৰাইটে মেটহিম'গ্লবিন সৃষ্টি কৰে, গ্লুক'জে লোহিত ৰক্তকণিকাৰ বিপাকক যোগান ধৰে, আৰু ৰঞ্জকে NADPH-নিৰ্ভৰ ইলেক্ট্ৰন পৰিবহণৰ মাধ্যম যোগায়।
2. জাৰিত নিয়ন্ত্ৰণ নমুনা: তেজৰ সৈতে নাইট্ৰাইট আৰু গ্লুক'জ, কিন্তু মিথিলিন ব্লু নহয়। ইয়াত বাদামী মেটহিম'গ্লবিনৰ অন্তিম ৰূপ দেখা যায়, যিটো অভাৱযুক্ত নমুনাৰ আৰ্হি।
3. হিম'গ্লবিন নিয়ন্ত্ৰণ নমুনা: তেজৰ সৈতে পানী। ইয়াত ৰঙা হিম'গ্লবিনৰ অন্তিম ৰূপ দেখা যায়, যিটো স্বাভাৱিক নমুনাৰ আৰ্হি।
4. সকলো পৰীক্ষানল প্ৰায় 37 C-ত, সাধাৰণতে 3 ঘণ্টাৰ বাবে, লাহে লাহে মিহলাই ইনকিউবেট কৰক।
5. কোষবোৰ ভাঙিবলৈ আৰু ৰঙৰ তুলনা সহজে কৰিব পৰাকৈ প্ৰতিটো পৰীক্ষানলৰ এটা সৰু মাপিত অংশ পাতিত পানীত পাতল কৰক।
6. ৰোগীৰ পৰীক্ষানলটো দুয়োটা নিয়ন্ত্ৰণ নমুনাৰ সৈতে তুলনা কৰক। পুনৰ ৰঙা হোৱাৰ দিশে পৰিৱৰ্তনে যথেষ্ট বিজাৰণ ক্ষমতা সূচায়। বাদামী হৈ থাকিলে উল্লেখযোগ্য অভাৱৰ ইংগিত দিয়ে।

এটা ঐতিহাসিক সংমিশ্ৰণত প্ৰায় 1 mL তেজৰ সৈতে প্ৰায় 180 mM ছ'ডিয়াম নাইট্ৰাইট, 280 mM ডেক্সট্ৰ'জ আৰু 0.4 mM মিথিলিন ব্লুৰ বিকাৰক ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল। এই সংখ্যাবোৰক প্ৰকাশিত সাহিত্যৰ উদাহৰণ হিচাপে লওক, সাৰ্বজনীন নিৰ্দিষ্ট মান হিচাপে নহয়।

ফলাফল পঢ়া

গুণগত স্ক্ৰীনিঙে স্বাভাৱিক সক্ৰিয়তাৰ প্ৰায় 30 ৰ পৰা 40 শতাংশৰ আশে-পাশে আটাইতকৈ ভালকৈ পাৰ্থক্য নিৰ্ণয় কৰে, যিটো G6PD চিনাক্তকৰণৰ ঘাটতি সম্পৰ্কে Malaria Journal-ৰ এই পৰ্যালোচনাত আলোচনা কৰা হৈছে। সেয়েহে স্বাভাৱিক স্ক্ৰীনিং ফলাফলৰ অৰ্থ হ'ল পৰীক্ষাটোৱে গুৰুতৰ অভাৱ ধৰা পেলোৱা নাই। ই সক্ৰিয়তা সম্পূৰ্ণ স্বাভাৱিক বুলি প্ৰমাণ নকৰে।

স্ক্ৰীনিঙে কিয় বিভ্ৰান্ত কৰে

হিম'লাইছিছৰ পাছৰ ৰেটিকুল'চাইট'ছিছ ভুলকৈ স্বাভাৱিক ফলাফল পোৱাৰ চিৰাচৰিত কাৰণ। নতুন লোহিত ৰক্তকণিকা আৰু ৰেটিকুল'চাইটত পুৰণি কোষতকৈ বেছি G6PD থাকে। তীব্ৰ হিম'লাইছিছৰ সময়ত আটাইতকৈ পুৰণি আৰু সৰ্বাধিক অভাৱযুক্ত কোষবোৰ ইতিমধ্যে ধ্বংস হৈ যাব পাৰে; ফলত নতুন কোষৰ এটা সমষ্টি ৰৈ যায়, যাৰ সক্ৰিয়তা পৰীক্ষাত স্বাভাৱিক দেখা যায়। এই একে জৈৱিক প্ৰক্ৰিয়াই কেৱল ৰঞ্জক-ভিত্তিক স্ক্ৰীনিং নহয়, পৰিমাণগত পৰীক্ষাতো ভুল ফল দিব পাৰে।

শেহতীয়া ৰক্ত সঞ্চাৰণে অভাৱ আৱৰি ৰাখে, কাৰণ দাতাৰ লোহিত ৰক্তকণিকাই নমুনাত নিজৰ এনজাইম যোগ কৰে। Mayo Clinic Laboratories-এ ৰক্ত সঞ্চাৰণক এনজাইম পৰীক্ষাৰ অবিশ্বাসযোগ্য ফলাফলৰ কাৰণসমূহৰ মাজত তালিকাভুক্ত কৰিছে, ৰেটিকুল'চাইট'ছিছ আৰু শ্বেত ৰক্তকণিকাৰ হস্তক্ষেপৰ লগতে।

হেটেৰ'জাইগাছ মহিলাৰ ক্ষেত্ৰত নিৰ্ণয় কৰাটো আটাইতকৈ কঠিন। যাদৃচ্ছিক X-ক্ৰম'জম নিষ্ক্ৰিয়কৰণে স্বাভাৱিক আৰু অভাৱযুক্ত লোহিত ৰক্তকণিকাৰ মিশ্ৰণ সৃষ্টি কৰে, আৰু সামগ্ৰিক সক্ৰিয়তা গুৰুতৰ অভাৱৰ পৰা আপাতদৃষ্টিত স্বাভাৱিকলৈকে যিকোনো স্তৰত থাকিব পাৰে। গুণগত স্ক্ৰীনিঙে প্ৰায়েই মধ্যৱৰ্তী ফেন'টাইপ ধৰা পেলাব নোৱাৰে। G6PD পৰীক্ষা সম্পৰ্কীয় WHO-ৰ নথিত এই সীমাবদ্ধতা বিশদভাৱে আলোচনা কৰা হৈছে।

নমুনাৰ বয়স, সংৰক্ষণৰ তাপমাত্ৰা, দৃশ্যমান অন্তিম সূচক নিৰ্ণয়ত ব্যক্তিনিৰ্ভৰতা, হিমেট'ক্ৰিট আৰু বিকাৰকৰ মানে এই জৈৱিক প্ৰভাৱসমূহৰ ওপৰিও বিশ্লেষণগত অনিশ্চয়তা যোগ কৰে।

স্ক্ৰীনিং ৰোগনিৰ্ণয় নহয়

অভাৱযুক্ত, মধ্যৱৰ্তী বা ক্লিনিকেল তথ্যৰ সৈতে অসংগত স্ক্ৰীনিং ফলাফল পালে পৰিমাণগত G6PD এনজাইম পৰীক্ষা কৰিব লাগে। WHO-এ তাপমাত্ৰা-নিয়ন্ত্ৰিত পৰিমাণগত স্পেক্ট্ৰ'ফট'মেট্ৰীক প্ৰামাণ্য পদ্ধতি হিচাপে গণ্য কৰে। সেই পৰীক্ষাত লোহিত ৰক্তকণিকা ভাঙি প্ৰস্তুত কৰা হিম'লাইছেটত গ্লুক'জ-6-ফছফেট আৰু NADP+ যোগ কৰা হয়, আৰু উৎপন্ন হোৱা NADPH-ৰ পৰিমাণ 340 nm-ত বৃদ্ধি পোৱা শোষণৰ জৰিয়তে অনুসৰণ কৰা হয়। পৰিৱৰ্তনৰ হাৰ এনজাইমৰ সক্ৰিয়তাৰ সমানুপাতিক; সাধাৰণতে হিম'গ্লবিনৰ পৰিমাণ অনুসৰি প্ৰতি গ্ৰামত ইউনিট হিচাপে মানকৃত কৰা হয়। বৰ্তমানৰ ক্লিনিকেল-পৰীক্ষাগাৰ পদ্ধতিৰ সাৰাংশ G6PD সক্ৰিয়তাৰ বাবে Mayo পৰীক্ষা তালিকাৰ প্ৰৱিষ্টিত দিয়া আছে।

ফলাফলৰ ব্যাখ্যাত পৰীক্ষাগাৰৰ বৈধতা-নিৰূপিত প্ৰসংগ পৰিসৰ ব্যৱহাৰ কৰা হয়, যিটো প্ৰায়েই জনসমষ্টিৰ স্বাভাৱিক সক্ৰিয়তাৰ তুলনাত নিৰ্ধাৰিত হয়। অভাৱ সাধাৰণতে 30 শতাংশ সীমামানৰ ওচৰত আৰু মধ্যৱৰ্তী সক্ৰিয়তা তাৰ ওপৰত বুলি আলোচনা কৰা হয়। G6PD পৰীক্ষাৰ বাবে WHO-ৰ লক্ষ্য পণ্যৰ প্ৰ'ফাইলসমূহে (2022) এই ৰোগনিৰ্ণয়ৰ কাঠামো দাঙি ধৰে। শেহতীয়া হিম'লাইছিছ বা ৰক্ত সঞ্চাৰণে ফেন'টাইপ নিৰ্ণয় অবিশ্বাসযোগ্য কৰিলে, লোহিত ৰক্তকণিকাৰ সমষ্টি পুনৰ সাম্য অৱস্থালৈ অহাৰ পাছত পৰীক্ষা পুনৰ কৰক; আণৱিক পৰীক্ষাই এনজাইম জোখাৰ বিকল্প নহৈও অতিৰিক্ত তথ্য যোগ কৰিব পাৰে।

বজাই ৰাখিবলগীয়া এটা সীমাৰেখা

এই পৰীক্ষাবোৰত মিথিলিন ব্লু হৈছে শৰীৰৰ বাহিৰত ব্যৱহৃত পৰীক্ষাগাৰৰ বিকাৰক। এই তথ্য ৰোগীক মিথিলিন ব্লু দিয়াৰ সুৰক্ষা সম্পৰ্কীয় আলোচনাৰ পৰা পৃথক; সেই বিষয়টো মিথিলিন ব্লু ব্যৱহাৰ নকৰিবলগীয়া অৱস্থা সম্পৰ্কীয় নিৰ্দেশনাত আলোচনা কৰা হৈছে। জৈৱৰসায়নে দুয়োটাক সংযোগ কৰে, কাৰণ ঔষধটোও NADPH-নিৰ্ভৰ বিজাৰণৰ ওপৰত নিৰ্ভৰশীল; কিন্তু পৰীক্ষানলত থকা ৰঞ্জক আৰু ৰক্তপ্ৰবাহত দিয়া ঔষধৰ মাত্ৰা একে নহয়। ভিন্ন পৰিস্থিতিত ৰঞ্জকটোৱে ৰঞ্জনৰ পদাৰ্থ হিচাপে কেনেকৈ আচৰণ কৰে, তাৰ প্ৰসংগৰ বাবে মিথিলিন ব্লুৰে ৰঞ্জনৰ মূলনীতি চাওক; আৰু ই যি ৰাসায়নিক পৰিয়ালৰ অন্তৰ্গত, সেই বিষয়ে জানিবলৈ পৰীক্ষাগাৰৰ ৰেডক্স ৰঞ্জকসমূহ চাওক।

স্ক্ৰীনিঙে সোধে বিজাৰণ ক্ষমতা অক্ষুণ্ণ যেন দেখা গৈছে নে নাই। নিশ্চিতকৰণে সোধে প্ৰকৃততে কিমান এনজাইম আছে। দ্বিতীয় প্ৰশ্নৰ উত্তৰ দিবলৈ ৰঞ্জকটোক ব্যৱহাৰ নকৰিলে, ই প্ৰথম প্ৰশ্নৰ উত্তৰ দিয়াত ভালকৈ কাম কৰে।