ጽሑፍ

ሜቲሊን ብሉ አሲድን በሚቋቋሙ ባክቴሪያዎች ማቅለሚያ ዘዴ ውስጥ እንደ ንፅፅር ቀለም ለምን ይጠቀማል?

ሜቲሊን ብሉ አሲድን በሚቋቋሙ ባክቴሪያዎች ማቅለሚያ ዘዴ ውስጥ እንደ ንፅፅር ቀለም ለምን ይጠቀማል?

አንድ ቴክኒሻን የማቅለም ሂደቱ ሙሉ በሙሉ ከተጠናቀቀ በኋላ በስላይድ ላይ የተቀባ የአክታ ናሙና ይመረምራል። ቀይ ዘንግ-ቅርጽ ያላቸው ባክቴሪያዎች በሰማያዊ የእይታ መስክ ላይ ጎልተው ይታያሉ፤ ሪፖርቱም አሲድን የሚቋቋሙ ባሲሊዎች ታይተዋል ተብሎ ይላካል። በማግስቱ ሌላ ስላይድ ምንም ቀይ ዘንግ-ቅርጽ ያላቸው ባክቴሪያዎች የሌሉበት ወጥ ሰማያዊ የእይታ መስክ ያሳያል፤ ሪፖርቱም የሳንባ ነቀርሳ አልተገኘም ተብሎ ይወጣል። ከእነዚህ ሁለት ሪፖርቶች አንዱ ስላይዱ ከሚደግፈው በላይ ድምዳሜ ይሰጣል፤ እሱም የመጀመሪያው አይደለም።

ግራ መጋባቱ በፅንሰ-ሐሳቡ ላይ ነው። ቴክኒሻኑ ሰማያዊውን ቀለም የባክቴሪያዎችን መኖር ከሚያሳየው የኬሚስትሪ ሂደት አካል አድርጎ ወሰደው፤ ሜቲሊን ብሉ ማይኮባክቴሪያዎችን ለማግኘት የሚረዳ ይመስል። ግን አልረዳም። ሜቲሊን ብሉ ስላይዱን በሚነካበት ጊዜ ፈተናው አስቀድሞ ተጠናቋል። ቀለሙ ውጤቱ በግልጽ እንዲነበብ የጀርባውን ክፍል ብቻ ያቀልማል። ይህ ጽሑፍ አሲድን በሚቋቋሙ ባክቴሪያዎች ማቅለሚያ ዘዴ ውስጥ የሜቲሊን ብሉን ዓላማ፣ ከሌላ ማንኛውም ቀለም ይልቅ ለምን ሰማያዊ እንደተመረጠ፣ እና በሰማያዊ ላይ የሚታየው ቀይ ቀለም ምን ድምዳሜ ለመስጠት እንደሚፈቅድ ያብራራል።

በሰማያዊ የንፅፅር ቀለም በተቀባ የሕዋስ ጀርባ ላይ የተበተኑ ቀይ ዘንግ-ቅርጽ ያላቸው ባሲሊዎች። አሲድን የሚቋቋሙ ባክቴሪያዎችን የማቅለም ንፅፅር የሚያሳይ ሥዕላዊ መግለጫ እንጂ በማይክሮስኮፕ የተነሳ ምስል አይደለም።

አጭሩ መልስ

አሲድን የሚቋቋሙ ባክቴሪያዎችን ማቅለም በሦስት ሐሳቦች ላይ የተመሠረተ ለይቶ የሚያሳይ ፈተና ነው። ዋናው ቀለም የሆነው ካርቦል ፉክሲን፣ ሰም የመሰለ ሽፋን ያላቸውን ማይኮባክቴሪያዎች ጨምሮ ወደ እያንዳንዱ ሕዋስ በግድ እንዲገባ ይደረጋል። ቀለም አስወጋጁ አሲድ-አልኮል ቀዩን ቀለም ከተራ ሕዋሶች ያስወግዳል፤ አሲድን ከሚቋቋሙት ግን ማውጣት አይችልም። ከዚያ የንፅፅር ቀለሙ ሜቲሊን ብሉ፣ ቀለም አስወጋጁ ቀለም ያስወገደባቸውን ሁሉ ያቀልማል። ስለዚህ አሲድን የማይቋቋሙ ሕዋሶች፣ የአስተናጋጁ ሕዋሶች እና ቅሪቶች ሰማያዊ ሆነው ይታያሉ፤ አሲድን የሚቋቋሙ ባሲሊዎች ግን ቀይ ሆነው ይቀራሉ። የንፅፅር ቀለሙ የቀለም ልዩነትን ያሳያል። ሕዋስ አሲድን እንዲቋቋም በሚያደርገው ኬሚስትሪ ውስጥ ምንም ሚና የለውም።

እያንዳንዱ ደረጃ ምን ያደርጋል?

ከታች ያለው ሥዕላዊ መግለጫ የሥራ ክፍፍሉን ያሳያል። ሂደቱን ከግራ ወደ ቀኝ ያንብቡ፤ ከታች ያለውን አግድም ክፍል ደግሞ እያንዳንዱ የማቅለሚያ ዘዴ ቡድን የተለየ ጥያቄ እንደሚመልስ ለማስታወስ ይጠቀሙበት።

በስላይድ ላይ የተቀባ ናሙና፣ ካርቦል ፉክሲን ሁሉንም ሕዋሶች ቀይ ሲያቀልም፣ አሲድ-አልኮል አሲድን የሚቋቋሙ ሕዋሶችን ብቻ ቀይ እንዲቀሩ ሲያደርግ፣ እና ሜቲሊን ብሉ የንፅፅር ቀለም የጀርባውን ክፍል ሰማያዊ ሲያደርግ የሚያሳዩ አራት ክፍሎች፤ እንዲሁም የቀላል፣ የግራም እና አሲድን የሚቋቋሙ ባክቴሪያዎች ማቅለሚያ ውጤቶችን አተረጓጎም የሚያነፃፅር አግድም ክፍል። ሥዕላዊ ንድፍ እንጂ ለምርመራ የሚያገለግል በማይክሮስኮፕ የተነሳ ምስል አይደለም።

በመጀመሪያ ቀለሙ ወደ ውስጥ መግባት አለበት። ማይኮባክቴሪያዎች ከተለመደው በላይ ውሃን የሚገፋ ሽፋን ስላላቸው፣ በውሃ የተዘጋጁ ተራ ቀለሞችን ይቋቋማሉ፤ ስለዚህ ፕሮቶኮሉ ቀለሙ በግድ እንዲገባ ያደርጋል። በዚል-ኒልሰን ዘዴ፣ በማሞቅ የሚፈጠረው እንፋሎት ፊኖል ያለበትን ካርቦል ፉክሲን ሰም በመሰለው ግድግዳ ውስጥ እንዲያልፍ ያደርጋል። በኪንዮን ቀዝቃዛ ዘዴ፣ ሙቀትን በጣም የበለጠ ጠንካራ የዋና ቀለም ዝግጅት ይተካል፤ አንዳንድ የተሻሻሉ ሙቀት አልባ ዘዴዎችም የገጽታ ውጥረትን የሚቀንሱ ንጥረ ነገሮችን ይጨምራሉ። የአሜሪካ ማይክሮባዮሎጂ ማኅበር አሲድን የሚቋቋሙ ባክቴሪያዎች ማቅለሚያ ፕሮቶኮሎች ሁለቱንም ዝግጅቶች ጎን ለጎን ያቀርባሉ። የክምችት ልዩነቱም ትልቅ ነው፤ በማሞቅ ለሚከናወነው ዘዴ በ100 mL ውስጥ በግምት 0.3 g ቤዚክ ፉክሲን ሲሆን፣ ለቀዝቃዛው ዘዴ ደግሞ በግምት 4 g ነው።

በሁለተኛ ደረጃ ልዩነት መፍጠር ይመጣል። ብዙውን ጊዜ በ97 mL የ95 በመቶ ኤታኖል ውስጥ 3 mL የተከማቸ ሃይድሮክሎሪክ አሲድ በመጨመር የሚዘጋጀው አሲድ-አልኮል፣ ግድግዳው ልዩ መቋቋም ከሌለው እያንዳንዱ ሕዋስ ቀዩን ቀለም አጥቦ ያስወግዳል። ያልተበላሸ የማይኮባክቴሪያ ሊፒድ ሽፋን ያላቸው ሕዋሶች ቀለሙን ይይዛሉ። ዘዴው በሙሉ የሚመሠረተው በዚህ ደረጃ ላይ ነው፤ ከታች እንደተብራራውም፣ ይህ በአፈጻጸም ቴክኒክ በጣም የሚነካው ደረጃ ነው።

በመጨረሻ ንፅፅር ይፈጠራል። አሁን ስላይዱ ቀለማቸው በተወገደ ሕዋሶች በተፈጠረ፣ ቀለም የሌለው ማለት የሚቻል ጀርባ ላይ ቀይ አሲድን የሚቋቋሙ ሕዋሶችን ይዟል። በ0.3 በመቶ w/v የተዘጋጀ ሜቲሊን ብሉ፣ ከቀይ ቀለም በእጅጉ በሚለይ ቀለም ያንን ጀርባ እንደገና የሚታይ ያደርገዋል። የንፅፅር ቀለም መቀባት አጭር ጊዜ ይወስዳል፤ በማሞቅ በሚከናወነው ዘዴ ብዙውን ጊዜ ከ20 እስከ 30 ሰከንዶች፣ በአንዳንድ የቀዝቃዛ ዘዴ ልዩ አቀራረቦች ደግሞ እስከ ጥቂት ደቂቃዎች ይደርሳል። የጊዜ ርዝመቱ በፕሮቶኮሉ ይወሰናል እንጂ የቀለሙ ራሱ ባህሪ አይደለም።

ለምን ይህ ቀለም፣ ለምንስ ሰማያዊ?

ሜቲሊን ብሉ ካቲዮኒክ ቤዚክ ቀለም ነው። ይህም ቀለም ያለው አዮኑ አዎንታዊ ኤሌክትሪክ ክፍያ እንዳለውና ቀለማቸው የተወገደ ባክቴሪያዎች፣ የአስተናጋጁ ሕዋሶች እና ቅሪቶች አሉታዊ ክፍያ ካላቸው ገጽታዎች ጋር እንደሚጣበቅ ማለት ነው። የኦፕንስታክስ ማይክሮባዮሎጂ ይህን የክፍያ ግንኙነት የቤዚክ ቀለሞች አጠቃላይ መሠረታዊ መርህ አድርጎ ይገልጸዋል። ሆኖም ሜቲሊን ብሉ በዚህ አጠቃቀም በኬሚስትሪው ልዩ አይደለም። ክሪስታል ቫዮሌት እና ሳፍራኒንም ቤዚክ ቀለሞች ናቸው። ምርጫው በእይታ ላይ የተመሠረተ እንጂ ኬሚካላዊ አይደለም።

ቀይ ዘንግ-ቅርጽ ያላቸው ባክቴሪያዎች ተቃራኒ የቀለም ዓይነት ያለው ጀርባ ያስፈልጋቸዋል፤ ሰማያዊም በብሩህ-መስክ ማይክሮስኮፕ ምርመራ ለቀይ ከሁሉ ጠቃሚ የሆነ ንፅፅር ይሰጣል። ሳፍራኒን የሚሰጠው የመጨረሻ ሮዝ-ቀይ ቀለም ከተያዘው ካርቦል ፉክሲን ጋር በጣም ስለሚቀራረብ፣ ሂደቱ የፈጠረውን ልዩነት ያጠፋል፤ ስለዚህ ጥሩ የንፅፅር ቀለም አይሆንም። ክሪስታል ቫዮሌት ደግሞ ከቀጭን ቀይ ባሲሊዎች ጋር ለትኩረት የሚወዳደር ጥቁር ወይን ጠጅ የሚመስል ጀርባ ይፈጥራል። ሚናው ኬሚስትሪ ሳይሆን ንፅፅር መፍጠር መሆኑን የሚያሳየው ከሁሉ ጠንካራ ማስረጃ በሌላ ቀለም መተካቱ ነው። እንደ ማላካይት ግሪን እና ብሪሊያንት ግሪን ያሉ አረንጓዴ የንፅፅር ቀለሞች በአንዳንድ የእንስሳት ሕክምና እና የተሻሻሉ ፕሮቶኮሎች ውስጥ ይጠቀማሉ፤ ፈተናውም አሁንም ይሠራል። ምክንያቱም በግልጽ የሚለይ ማንኛውም የቀለም ዓይነት ተመሳሳይ ሥራ ይሠራል።

ከዚህ ሁለት ተግባራዊ ነጥቦች ይከተላሉ። በመጀመሪያ፣ መደበኛው የዝግጅት መመሪያ የpH ማስተካከያ አይጠይቅም። ይህን በውሃ የተዘጋጀ ቀላል የ0.3 በመቶ ሟሟት፣ እንደ የሎፍለር ሜቲሊን ብሉ ካሉ በተለየ የማቅለም ፅንሰ-ሐሳብ የሚጠቀሙ አልካላይን ዝግጅቶች ጋር አታምታቱት። በሁለተኛ ደረጃ፣ ከመጠን በላይ መቀባት ይጎዳል። የሂስቶሎጂ ጽሑፎች በተለይ ከመጠን በላይ የጠቆረ ሰማያዊ ጀርባ በጥቂት ቁጥር ያሉ ባሲሊዎችን ሊሸፍን እንደሚችል ያስጠነቅቃሉ። ስለዚህ ፕሮቶኮሉ ከሚፈቅደው ጊዜ በላይ ስላይዱን በቀለም መሸፈን፣ ምንም ጥቅም ሳያመጣ ውጤቱን ለማንበብ ያለውን ቀላልነት ያሳጣል።

ፈተናውን የሚያስችለው የግድግዳ ኬሚስትሪ

አሲድ-አልኮል ልዩነት እንዲፈጥር የሚያደርገው ምክንያት በማይኮባክቴሪያው ሽፋን ውስጥ ይገኛል። የመዋቅሩ ዋና ክፍል የማይኮሊል-አራቢኖጋላክታን-ፔፕቲዶግላይካን ውህድ ነው። ፔፕቲዶግላይካን ከአራቢኖጋላክታን ጋር የተገናኘ ሲሆን፣ የአራቢኖጋላክታን ውጫዊ ጫፎች እጅግ ረጅም ሰንሰለት ያላቸውን ማይኮሊክ አሲዶች ይይዛሉ። ይህም በሊፒድ የበለጸገ፣ ከተለመደው በላይ እጅግ ዝቅተኛ የማሳለፍ ችሎታ ያለው ውጫዊ ማይኮሜምብሬን ይፈጥራል። የማይኮባክቴሪያ ውጫዊ ሽፋን ግምገማ ይህን አወቃቀር በዝርዝር ያብራራል። እንቅፋቱ በሁለቱም አቅጣጫዎች ይሠራል። ቀለም ወደ ውስጥ እንዳይገባ ይቋቋማል፤ ስለዚህ ቀለሙ እንዲገባ ሙቀት ወይም የተጠናከረ ዋና ቀለም ያስፈልጋል። ቀለም ከውስጥ እንዳይወጣም ይቋቋማል፤ ስለዚህ ካርቦል ፉክሲን አንዴ ወደ ውስጥ ከገባ በኋላ አሲድ-አልኮል ሊያስወግደው አይችልም። ተራ ባክቴሪያዎች ይህ ሽፋን ስለሌላቸው ቀለሙን ያጣሉ። ስለዚህ አሲድን መቋቋምን፣ ፉክሲን ከማይኮሊክ አሲድ ጋር በኬሚካላዊ መንገድ መተሳሰር ሳይሆን፣ በሊፒድ እንቅፋት የሚፈጠር ክስተት አድርጎ መረዳት የተሻለ ነው።

ይህ ኬሚስትሪ ለተለመደ እንቆቅልሽም ማብራሪያ ይሰጣል፤ ማይኮባክቴሪያዎች በግራም ዘዴ በደካማና ሊገመት በማይችል ሁኔታ ይቀለማሉ፣ አንዳንድ ጊዜም ፈዛዛ ዶቃ የመሰሉ ቅርጾች ወይም ቀለም ያልያዙ የጥላ ቅርጾች መስለው ይታያሉ። ውሃን የሚገፋው ግድግዳቸው ክሪስታል ቫዮሌት ወደ ውስጥ እንዳይገባ ይገድባል። አሲድን የሚቋቋሙ ባክቴሪያዎችን ማቅለም የተሻሻለ የግራም ማቅለሚያ ዘዴ አይደለም። የቀላል ማቅለሚያ እና የግራም ማቅለሚያ ንፅፅር ስለ ሌሎቹ ሁለት ዘዴዎች እንደሚያሳየው፣ ይህ በተለየ የግድግዳ ባህሪ ላይ የተመሠረተ የተለየ የልዩነት መርህ ነው።

ሦስት ዘዴዎች፣ ሦስት ጥያቄዎች

ዘዴየሚከናወነው ፈተናአዎንታዊ የመጨረሻ ውጤትውጤቱ የሚያረጋግጠው
ቀላል ማቅለም (ለምሳሌ፣ ሜቲሊን ብሉ ብቻ)የለም፤ አንድ ቀለም ሁሉንም ሕዋሶች ያቀልማልየተወሰነ ቅርጽ ያላቸው ሰማያዊ ሕዋሶችውጫዊ ቅርጽ ብቻ፦ ቅርጽና አደራደር፣ ምደባ የለም
የግራም ማቅለምየክሪስታል ቫዮሌት-አዮዲን ውህድን በአልኮል ወይም አሴቶን መፈተንሐምራዊ (አዎንታዊ) ከሮዝ (አሉታዊ) ጋር ሲነፃፀርበሟሟ ቀለም በሚወጣበት ጊዜ የሽፋኑ ባህሪ፤ በሁለት የግድግዳ ዓይነቶች መመደብ
አሲድን የሚቋቋሙ ባክቴሪያዎችን ማቅለምሰም ወደሚመስሉ ግድግዳዎች በግድ የገባውን ካርቦል ፉክሲን በአሲድ-አልኮል መፈተንቀይ (አሲድን የሚቋቋም) ከሰማያዊ (አሲድን የማይቋቋም) ጋር ሲነፃፀርበአሲድ-አልኮል ፊት ቀለሙን መያዝ፤ አሲድን መቋቋም፣ ይህም ከማይኮባክቴሪያዎች ጋር የሚስማማ ቢሆንም ዝርያ መለየት አይደለም

አንድ ቀለም ብቻ ስለሚጠቀሙ ሰፋ ያለ የባክቴሪያ ማቅለሚያ ዘዴዎች ቡድን ለማወቅ፣ የማይክሮስኮፕ ማቅለሚያ ምስል መመሪያን ይመልከቱ።

በሰማያዊ ላይ የሚታየው ቀይ ምን ማረጋገጥ አይችልም?

ቀይ ዘንግ-ቅርጽ ያላቸው ባክቴሪያዎች መታየታቸው፣ ሕያዋኑ አሲድ-አልኮል ቢያልፍባቸውም ካርቦል ፉክሲንን መያዛቸውን ያመለክታል። ይህ ግኝት ከማይኮባክቴሪየም ቱበርኩሎሲስ ጋር ይስማማል፤ ሆኖም የCDC የሳንባ ነቀርሳ ምርመራ መመሪያ ሌሎች ማይኮባክቴሪያዎችም አሲድን እንደሚቋቋሙ በግልጽ ይገልጻል። ስለዚህ ዝርያን ለመለየት ቀለም ሳይሆን የባክቴሪያ ማሳደግ ምርመራ እና የኑክሊክ አሲድ ፈተናዎች ያስፈልጋሉ።

የቴክኒክ ስህተቶች በሁለቱ የማጠብ ደረጃዎች ዙሪያ ይሰበሰባሉ። ቀለምን በቂ አለማስወገድ የጀርባ ንጥረ ነገሮችን ቀይ እንዲቀሩ ያደርጋል፣ በስህተትም አዎንታዊ ውጤት እንዲነበብ ያመቻቻል። ቀለምን ከመጠን በላይ ማስወገድ በደካማ ሁኔታ የተያዘውን ዋና ቀለም ያወጣል፣ ለሐሰተኛ አሉታዊ ውጤቶችም አስተዋጽኦ ያደርጋል። ከመጠን በላይ የተቀባ የንፅፅር ቀለም በጥቂት ቁጥር ያሉ ባሲሊዎችን በሰማያዊ ውስጥ ይሸፍናል። ወፍራም የናሙና ቅባቶች፣ ዝቃጭ የፈጠሩ ሪኤጀንቶች እና የተበከለ የማጠቢያ ውሃም የራሳቸውን አሳሳች ቅርጾች ይጨምራሉ።

ቴክኒኩ ምንም ያህል እንከን የሌለው ቢሆን፣ የምርመራው ትብነት በሕያዋኑ ብዛት ይገደባል። የተለመደው በስላይድ ላይ የተቀባ ናሙና የማይክሮስኮፕ ምርመራ፣ በአንድ ሚሊሊትር አክታ ውስጥ በግምት ከ5,000 እስከ 10,000 ባሲሊዎች ይፈልጋል። የቀድሞ የCDC የማስረጃ ግምገማዎችም፣ በባክቴሪያ ማሳደግ ምርመራ በተረጋገጡ የሳንባ ነቀርሳ ክስተቶች መካከል የዚህ ምርመራ ትብነት በግምት ከ45 እስከ 80 በመቶ እንደሆነ ገልጸዋል። ስለዚህ አሉታዊ የስላይድ ውጤት የሳንባ ነቀርሳን ፈጽሞ አያስቀርም። የአሁኑ የCDC መመሪያ ከእያንዳንዱ የስላይድ ምርመራ ጋር የባክቴሪያ ማሳደግ ምርመራ እንዲደረግ ይጠብቃል። የሳንባ ነቀርሳ በሚጠረጠርበትና ውጤቱ የክትትልና አያያዝ ውሳኔን ሊቀይር በሚችልበት ጊዜም፣ ቢያንስ በአንድ የመተንፈሻ ናሙና ላይ የኑክሊክ አሲድ ማባዣ ፈተና እንዲካሄድ ይመክራል።

ተግባራዊ ሥራ በተፈቀዱ ፕሮቶኮሎች መመራት አለበት

ይህን ጽሑፍ ጨምሮ ለማስተማር የተዘጋጁ ማብራሪያዎች ክሊኒካዊ ሥራ ለመሥራት ፈቃድ አይሰጡም። በላቦራቶሪ ውስጥ ለሚደረግ ተግባራዊ ሥራ፣ ከወቅታዊ የCDC፣ APHL ወይም CLSI ሰነዶች ጋር የሚጣጣም፣ ትክክለኛነቱ የተረጋገጠ የላቦራቶሪውን መደበኛ የሥራ አፈጻጸም መመሪያ ይከተሉ። በCDC የስታክስ ማህደር ውስጥ ያለው አሲድን የሚቋቋሙ ባክቴሪያዎች ማቅለሚያ ማጣቀሻ እንዲህ ያሉ መመሪያዎች ሪኤጀንቶችንና ውጤት አነባበብን እንዴት እንደሚወስኑ ያሳያል። በሳንባ ነቀርሳ ናሙናዎች ላይ የሚደረግ ሥራ ብክለትን የሚገድብ አሠራር ይፈልጋል። የስላይድ ቅባቶች የሚዘጋጁት በባዮሎጂያዊ ደኅንነት ካቢኔ ውስጥ ነው፣ ምክንያቱም ዝግጅቱ በአየር የሚንሳፈፉ ጥቃቅን ጠብታዎችንና ርጭትን ይፈጥራል። የCDC የላቦራቶሪ ደኅንነት መመሪያም በሙቀት የተቀመጡ የናሙና ቅባቶች እንኳን ሕያው የሳንባ ነቀርሳ ባሲሊዎችን ሊይዙ እንደሚችሉና አሁንም እንደተበከሉ መያዝ እንዳለባቸው ይገልጻል። በካርቦል-ፉክሲን እና ሜቲሊን ብሉ ተቀልሞ ለኤም. ሌፕሬ የተመረመረ የስላይድ ቅባት የሚያሳየው የCDC የሕዝብ ጤና ምስል ቤተ-መጻሕፍት መዝገብ ዘዴው ከሳንባ ነቀርሳ ባሻገር ያለውን አጠቃቀም የሚያስታውስ ጠቃሚ ምሳሌ ነው። አሲድን የሚቋቋሙ ሕያዋን በሚፈለጉበት ሁሉ ተመሳሳይ የቀይ በሰማያዊ ላይ ንፅፅር ያገለግላል፤ በጥንቃቄ የተነበበ አሉታዊ ውጤትም በራሱ ሊመዘገብ የሚገባ ውጤት ነው።

የተጠናቀቀውን ስላይድ ማንበብ

የንፅፅር ቀለሙ ጠቀሜታ በመጀመሪያው ቅኝት ጊዜ ይታያል። የማይክሮስኮፕ መርማሪው በዝቅተኛ የማጉያ ኃይል እየቃኘ፣ በመጀመሪያ ሰማያዊውን ጀርባ በመጠቀም የናሙና ቅባቱን ጥራት ይገመግማል፤ የሕዋሶች ወጥ ስርጭት፣ ትኩረትን ለማስተካከል የሚረዱ ያልተበላሹ የአስተናጋጁ ሕዋሶች፣ እና ብዙ ዝቃጭ አለመኖር ይመለከታል። ከዚያ ቀይ ተጠርጣሪ ቅርጾች ዓይንን ይስባሉ፤ ምክንያቱም በስላይዱ ላይ ሌላ ምንም ቀይ ነገር የለም። ማረጋገጡ የሚከናወነው በዘይት ጠልቆ በሚሠራ የማጉያ ሌንስ ነው። በዚህ ደረጃ እውነተኛ ባሲሊዎች እንደ ወጥ የቀለም ቅሪቶች ሳይሆን፣ የሚጠበቀውን ቀጭን፣ አንዳንድ ጊዜ ትንሽ የተጠማዘዘ ወይም ዶቃ የመሰለ ዘንግ ቅርጽ ያሳያሉ።

የጀርባ ማቅለም የሪፖርቱን የቃላት አጠቃቀምም ይወስናል። ቀይ ባሲሊዎች ያሉበት ስላይድ፣ አሲድን የሚቋቋሙ ባሲሊዎች ታይተዋል ተብሎ ይመዘገባል፤ ብዙውን ጊዜም በላቦራቶሪው መለኪያ መሠረት ከፊል መጠናዊ ደረጃ ይሰጠዋል። ምንም ቀይ ሕያዋን የሌሉበት ስላይድ ደግሞ፣ አሲድን የሚቋቋሙ ባሲሊዎች አልታዩም ተብሎ ይመዘገባል እንጂ፣ የሳንባ ነቀርሳ አልተገኘም ተብሎ ፈጽሞ አይመዘገብም። ልዩነቱ ጠቃሚ ነው፤ ምክንያቱም ሰማያዊው የእይታ መስክ ማቅለሙ እንደሠራ፣ ሕዋሶቹ የንፅፅር ቀለም እንደያዙ እና የእይታ ሥርዓቱ በቂ እንደነበር ያረጋግጣል፣ ነገር ግን ከመለየት ገደቡ በታች ስላሉ ሕያዋን ምንም አይናገርም። ምንም ቀይ የሌለበት ሰማያዊ የእይታ መስክ ስለ ስላይዱ ትክክለኛ ውጤት ነው እንጂ ስለ ታካሚው የመጨረሻ ውሳኔ አይደለም።

የሥራ ክፍፍሉን ካስታወሱ፣ ሪፖርቶቹን መጻፍ ቀላል ይሆናል። ካርቦል ፉክሲን ተጠርጣሪዎችን ያሳያል። አሲድ-አልኮል ፈተናውን ያከናውናል። ሜቲሊን ብሉ መልሱን ለማንበብ ብቻ ያመቻቻል፤ ቀይ ቀለም አሲድ ቢያልፍበትም ቀለሙን የያዘ ሲሆን፣ ሰማያዊ ደግሞ ቀለሙን ያጣ ነው። ሌላው ሁሉ፣ ዝርያ፣ ብዛት እና ክሊኒካዊ ትርጉም፣ ከስላይዱ ባሻገር በሚከናወን ሥራ ይገኛል።