የሎፍለር አልካላይን እና ባለብዙ ቀለም ሜቲሊን ሰማያዊ ማቅለሚያዎች ማብራሪያ

በማቅለሚያ የሥራ ጠረጴዛ ላይ ሦስት ጠርሙሶች ጎን ለጎን ሊቀመጡ ይችላሉ፤ በእያንዳንዳቸው ላይ የሜቲሊን ሰማያዊ አንድ ዓይነት ስም ተጽፎባቸዋል። አንዱ 1% የውሃ ሜቲሊን ሰማያዊ ይላል። ሌላው የሎፍለር አልካላይን ሜቲሊን ሰማያዊ ይላል። ሦስተኛው ደግሞ ባለብዙ ቀለም ሜቲሊን ሰማያዊ ይላል። ሥራ የበዛበት ሠራተኛ በቅርቡ ያለውን ያነሳል። ከዚያም በስላይድ ላይ የተዘረጋው ናሙና በጣም ደብዝዞ፣ ወይም በሙሉ ተመሳሳይ ሰማያዊ ቀለም ኖሮት፣ ወይም ባልተጠበቁ ወይንጠጃማ ድምቀቶች ይቀለማል፤ የውጤቱም ችግር በናሙናው ላይ ይጣላል።

ይህ የዝግጅት ይዘት ችግር እንጂ የናሙና ችግር አይደለም። ሦስቱ መፍትሔዎች ተዛማጅ ማቅለሚያዎችን ቢይዙም፣ የማቅለም ጽንሰ ሐሳባቸው የተለየ ነው። አንዱ ወደ ገለልተኛነት በቀረበ pH ውስጥ ያለ ተራ ካቲዮናዊ ማቅለሚያ ነው። ሌላው ያው ማቅለሚያ ሲሆን፣ በአልካሊ የማቅለም ኃይሉ ተጠናክሯል። ሦስተኛው ደግሞ ከእንግዲህ አንድ ማቅለሚያ ብቻ ሳይሆን፣ ሆን ተብሎ በኦክሲዴሽን የተዘጋጀ ድብልቅ ነው። የተሳሳተውን ከተጠቀሙ፣ የማቅለም መርሁ በእጅዎ ሥራ ውስጥ ይቀየራል።

አጭሩ መልስ

ተራ የውሃ ሜቲሊን ሰማያዊ መነሻ ማነጻጸሪያው ነው፦ በውሃ ውስጥ ወደ 1% የሚሆን ማቅለሚያ የያዘ፣ የባክቴሪያን ቅርጽ ለማየት እና ለአጠቃላይ ማይክሮስኮፕ ምርመራ የሚያገለግል ቀላል ካቲዮናዊ ማቅለሚያ ነው። የሎፍለር አልካላይን ሜቲሊን ሰማያዊ በውሃ የተከለሰ አልኮል-ተኮር መነሻ መፍትሔ ውስጥ በመለኪያ የተወሰነ ትንሽ መጠን ያለው የተከለሰ አልካሊ ይጨምራል። ይህ pHን ያሳድጋል፣ ካቲዮናዊውም ማቅለሚያ በአሲዳዊ የባክቴሪያ መዋቅሮች ላይ ይበልጥ በጥንካሬ እንዲያያዝ ያደርጋል። ባለብዙ ቀለም ሜቲሊን ሰማያዊ ደግሞ በአልካሊ ውስጥ በኦክሲዴሽን ሆን ተብሎ የበሰለ ሜቲሊን ሰማያዊ ነው። ስለዚህ ጠርሙሱ ከቀሪው ሜቲሊን ሰማያዊ ጋር፣ ሜቲል ቡድኖቻቸው የተወገዱ ሆሞሎጎችን (azure A፣ azure B፣ azure C)፣ ቲዮኒንን እና ሜቲሊን ቫዮሌትን የያዘ ድብልቅ ይሆናል፤ ይህም ድብልቅ የተለያዩ መዋቅሮችን በተለያዩ ቀለሞች ያቀልማል።

አንድ ዓረፍተ ነገር ብቻ የሚያስታውሱ ከሆነ፦ አልካላይን ማድረግ የማቅለሙን ጥንካሬ ይቀይራል፤ ባለብዙ ቀለም ማድረግ ግን የማቅለሙን ቀለሞች ይቀይራል።

መደበኛ የውሃ ሜቲሊን ሰማያዊ፦ የማነጻጸሪያ መነሻ

በጣም ቀላሉ ዝግጅት ሜቲሊን ሰማያዊን በውሃ መሟሟት ነው፤ ብዙውን ጊዜ በ1% w/v፣ አልካሊ ሳይጨመርበት እና ኦክሲዴሽን ሳይደረግበት ይዘጋጃል። ቀለም የሚሰጠው ኬሚካላዊ አካል፣ ተቃራኒ አዮኑ ክሎራይድ የሆነ ሜቲልቲዮኒኒየም ካቲዮን ነው። ይህ ትንሽ፣ ጠፍጣፋ የፊኖቲያዚን ማቅለሚያ በPubChem የሜቲሊን ሰማያዊ መዝገብ ውስጥ ሜቲልቲዮኒኒየም ክሎራይድ ተብሎ ተገልጿል። ካቲዮን በመሆኑ፣ በኑክሊክ አሲዶች ዋና ሰንሰለት ውስጥ ካሉ ፎስፌቶች እና በባክቴሪያ ሕዋስ ግድግዳዎች ላይ ካሉ አሲዳዊ ቡድኖች ጋር ይያያዛል፤ ሕዋሳትንም በፈካ ዳራ ላይ ሰማያዊ ያደርጋቸዋል።

ዋና ጥቅሙ ውጤቱ አስቀድሞ ሊገመት የሚችል መሆኑ ነው። የሕዋስ አስኳሎች እና ባክቴሪያዎች ሰማያዊ ሆነው ይታያሉ። የንጽጽሩ ጥንካሬ መጠነኛ ነው። በደብዛዛ የሚታዩ ሕዋሳዊ ፍጥረታት ደካማ ቀለም ሊይዙ ይችላሉ፤ ሎፍለር ለማስተካከል የተነሳውም ይህንኑ ውስንነት ነበር። ይህ መፍትሔ የሚካተትበትን ሰፊ የቀላል ባክቴሪያ ማቅለሚያዎች ቤተሰብ ለመረዳት፣ የባክቴሪያ ቀላል ማቅለም አጠቃላይ ማብራሪያን ይመልከቱ። እዚህም የንጥረ ነገሩን ማንነት በትክክል ማረጋገጥ አስፈላጊ ነው፦ ሜቲል ሰማያዊ እና ሜቲሊን ሰማያዊ ልዩነት እንደሚያብራራው፣ ሜቲል ሰማያዊ ሙሉ በሙሉ የተለየ ሞለኪውል ነው። ስለዚህ በካታሎግ ውስጥ በቀለም ስም ብቻ መፈለግ የተሳሳተ የማቅለሚያ ክፍል እንዲያገኙ ሊያደርግ ይችላል።

የሎፍለር አልካላይን ሜቲሊን ሰማያዊ፦ ያው ማቅለሚያ፣ የበለጠ ኃይል ያለው

ባህላዊው የሎፍለር አዘገጃጀት አልኮል-ተኮር የሜቲሊን ሰማያዊ መነሻ መፍትሔን በውሃ ውስጥ ካለ የተከለሰ አልካሊ ጋር ያዋህዳል። በመማሪያ መጻሕፍት የሚገኙት አዘገጃጀቶች 0.3 g ማቅለሚያን በ30 mL የ95% ኤታኖል ውስጥ፣ ከ100 mL የ0.01% የውሃ ፖታሲየም ሃይድሮክሳይድ መፍትሔ ጋር እንዲቀላቀል ይጠይቃሉ። ወይም በአቻው አዘገጃጀት፣ 30 mL የጠገበ አልኮል-ተኮር ሜቲሊን ሰማያዊ፣ 100 mL የተጣራ ውሃ እና 1 mL የ1% KOH ይቀላቀላሉ። ይህ በግልጽ አልካላይን pH፣ ወደ 0.3% ማቅለሚያ የያዘ ለሥራ ዝግጁ መፍትሔ ይሰጣል። የንግድ ዝግጅቶችም ይህንኑ መርህ ይከተላሉ። የThermo Fisher የማይክሮባዮሎጂ ማቅለሚያዎች ካታሎግ የሎፍለር አልካላይን ሜቲሊን ሰማያዊን ከባለብዙ ቀለም እና ከውሃ ዝግጅቶች ጋር፣ የተለያዩ የታሰቡ አጠቃቀሞች ያሏቸው የተለያዩ የካታሎግ ምርቶች አድርጎ ይዘረዝራል።

ዋናው የሚሠራው ሐሳብ አልካሊው ነው። pHን ማሳደግ በናሙናው ላይ ካሉ ካርቦክሲል እና ፎስፌት ቡድኖች ፕሮቶኖችን ያስወግዳል፣ አሉታዊ ክፍያ ያላቸውንም ቦታዎች ጥግግት ያሳድጋል። የኤታኖል መነሻ መፍትሔው በበኩሉ ማቅለሚያው ሙሉ በሙሉ ተሟምቶ እንዲቆይ ያደርጋል፤ በዚህም ወደ እነዚያ ቦታዎች በሞኖመር ቅርጽ ይደርሳል። ውጤቱ ገለልተኛ የውሃ ማቅለሚያ ከሚሰጠው ይልቅ ፈጣን እና ጠንካራ የባክቴሪያ ማቅለም ነው። በመደበኛ የባክቴሪያ ምርመራ ስላይድ ላይ የሚታወቁት ጥልቅ ሰማያዊ ቀለም ያላቸው ዘንግ-ቅርጽ እና ክብ ባክቴሪያዎች ይታያሉ። የማቅለሚያ ጊዜው በተለምዶ ከአንድ እስከ ሦስት ደቂቃ ነው፤ ከዚያም በውሃ ይታጠባል።

ባህላዊው አጠቃቀም በሎፍለር የሴረም ማሳደጊያ ላይ የበቀለ Corynebacterium diphtheriae ማቅለም ነው፦ ቀጭን፣ ብዙውን ጊዜ ጫፋቸው ወፍራም የሆኑ ዘንግ-ቅርጽ ባክቴሪያዎች፣ የተከማቸ ፖሊፎስፌት የያዙ በጥንካሬ የተቀለሙ ሜታክሮማቲክ የባቤስ–ኤርንስት ቅንጣቶች ይኖሯቸዋል። የማሳደጊያው እና የማቅለሚያው ጥምረት ታሪካዊ ነው፤ ሁለቱም ለአንድ ባክቴሪያ ተመራማሪ ይመሰገናሉ። የቅንጣቶቹ ግልጽ ልዩነትም ለምርመራ የሚያስገኘው ጥቅም ነው። ከዲፍቴሪያ ሥራ ውጭ፣ ይህ ማቅለሚያ ከባክቴሪያ እርባታ ለተዘረጉ ናሙናዎች፣ በክሊኒካዊ የተዘረጉ ናሙናዎች ውስጥ የNeisseriaን ቅርጽ ለማየት፣ እንዲሁም የግራም ማቅለም በማያስፈልግበት ነገር ግን ተራ የውሃ ሰማያዊ ማቅለሚያ በጣም ደብዛዛ በሆነበት ሁኔታ እንደ አጠቃላይ የባክቴሪያ ማቅለሚያ ያገለግላል። ይህ አንድ ቀለም ብቻ የሚሰጥ ማቅለሚያ ነው። አሲዳዊ የሆነ እያንዳንዱ አካል የሆነ የሰማያዊ ቀለም ድምቀት ይይዛል። የሥራ መመሪያው በቀለም የሚደረግ ልዩነት ሲጠይቅ፣ አልካሊ ብቻውን ይህን ሊሰጥ አይችልም።

አንድ ተግባራዊ ጥንቃቄ፦ አልካላይን የማቅለሚያ መፍትሔዎች በማከማቻ ጊዜ እና ካርቦን ዳይኦክሳይድን በመውሰድ ጥራታቸው ይቀንሳል፣ ደለልም ይፈጥራሉ። ላቦራቶሪዎች በእያንዳንዱ ስላይድ ላይ ደለል የሚጥል አሮጌ ጠርሙስ እያቆዩ ከመጠቀም ይልቅ፣ መጠነኛ መጠን ያዘጋጃሉ፤ ወይም የካታሎጉን መፍትሔ ገዝተው የመጠቀሚያ ጊዜ ገደቡን ያከብራሉ።

ባለብዙ ቀለም ሜቲሊን ሰማያዊ፦ አንድ ስም፣ ብዙ ማቅለሚያዎች

ባለብዙ ቀለም ሜቲሊን ሰማያዊ ከዚያው ማቅለሚያ ይጀምራል፣ ነገር ግን በአልካሊ ውስጥ ቁጥጥር የተደረገበት ኦክሲዴሽን ይደረግበታል። ይህ በታሪክ ማብሰል ወይም ባለብዙ ቀለም ማድረግ ተብሎ ይጠራ ነበር። በአልካላይን ሁኔታ ማቆየት፣ ከካርቦኔት ጋር ማሞቅ፣ ወይም እንደ ዳይክሮሜት ባሉ ንጥረ ነገሮች ኦክሲዴሽን ማድረግ፣ ከዳይሜቲልአሚኖ ተተኪ ቡድኖች ሜቲል ቡድኖችን በደረጃ ያስወግዳል። ውጤቱ ድብልቅ ነው፦ ቀሪ ሜቲሊን ሰማያዊ፣ azure B (አንድ ሜቲል የተወገደበት)፣ azure A እና azure C (ተጨማሪ ሜቲል ቡድኖች የተወገዱባቸው)፣ ቲዮኒን (ሜቲል ቡድኖቹ ሙሉ በሙሉ የተወገዱበት)፣ እና በኦክሲዴሽን የሚፈጠሩ የሜቲሊን ቫዮሌት ቤተሰብ ተጓዳኝ ውጤቶች። እያንዳንዱ አካል የራሱ ቀለም እና ከሕብረ ሕዋስ ጋር የመያያዝ ዝንባሌ አለው። ስለዚህ ድብልቁ ሜታክሮማቲክ ማቅለም ያስከትላል፦ የሕዋስ አስኳሎች፣ ቅንጣቶች፣ ሙሲኖች እና የ cartilage ሕብረ ሕዋስ እያንዳንዳቸው ከሰማያዊ እስከ ቀይ-ወይንጠጃማ የሚደርሱ የተለያዩ የቀለም ድምቀቶችን ይይዛሉ።

ይህ ኬሚስትሪ ከታዋቂዎቹ የደም ማቅለሚያዎች ጀርባ ያለው ኬሚስትሪ ነው። ቀደምት ተመራማሪዎች አልካላይን የተደረገ ሜቲሊን ሰማያዊ የወባ ጥገኛ ፍጥረታትን አስኳሎች በወይንጠጃማ ድምቀቶች እንደሚያቀልም ደርሰውበታል። ሆኖም በውሃ ያዘጋጁት የበሰሉ መፍትሔዎች ያልተረጋጉ ነበሩ፣ በጥቂት ቀናትም ደለል ይፈጥሩ ነበር። ወይንጠጃማው የደም ማቅለሚያ እንዴት እንደተፈጠረ የሚያብራራው ግምገማ፣ ማላኮቭስኪ እና ሮማኖቭስኪ በ1891 እርስ በርሳቸው ሳይመካከሩ ይህን ክስተት እንዴት እንደተጠቀሙበት፣ ሜታኖል የማቅለሚያውን ደለል ለማረጋጋት እና የተዘረጉ ናሙናዎችን ያለ ሙቀት ለማስቀመጥ እንዴት ወደ ሥራ እንደገባ፣ እንዲሁም ጊምሳ በኋላ በመለኪያ የተወሰነ azure B እና ኢዮሲን፣ በግሊሰሮል ማረጋጊያ በመጠቀም ድብልቁን እንዴት በመደበኛ መስፈርት እንዳዘጋጀ ይከታተላል። ዘመናዊ የጊምሳ ዓይነት ማቅለሚያዎች በቀጥታ ከባለብዙ ቀለም ሜቲሊን ሰማያዊ እና ኢዮሲን ጥምረት የወጡ ናቸው፤ ይህም የሮማኖቭስኪ የማቅለም ክስተትን የሚፈጥረው ጥምረት ነው። ስለ ኢዮሲን ጥምረት እና ስለ azure B አካል በዝርዝር ለማወቅ፣ የሮማኖቭስኪ ዓይነት ማቅለሚያዎች እና የazure B እና ኢዮሲን መስተጋብር ይመልከቱ።

ድብልቅ በመሆኑ፣ ባለብዙ ቀለም ሜቲሊን ሰማያዊ ከሦስቱ መካከል በተፈጥሮው እጅግ ያነሰ የመስፈርት ወጥነት ያለው ነው። የቀለሞቹ ትክክለኛ ሚዛን በኦክሲዴሽን መንገዱ እና መጠኑ ላይ ይወሰናል። ለዚህም ነው የሕብረ ሕዋስ ጥናት አቅራቢዎች እንደ ቆየ የሎፍለር መፍትሔ ሳይሆን፣ የራሱ የአፈጻጸም ፈተና ያለው የተለየ ምርት አድርገው የሚሸጡት። የተለመዱ አጠቃቀሞቹ የማስት ሕዋሳት ቅንጣቶችን፣ ሙሲኖችን እና የካርቲሌጅ ሕብረ ሕዋስን በሜታክሮማቲክ ቀለም ማሳየት፣ የፕላዝማ ሕዋሳትን ዝርዝር ማሳየት፣ እና በጉድፓስቸር ዓይነት ባለብዙ ቀለም ዘዴዎች በሕብረ ሕዋስ ቁርጥራጮች ውስጥ Helicobacter pyloriን ማሳየት ናቸው። ዓላማው በቀለም መለየት ሲሆን ትክክለኛው ምርጫ ነው፤ የሥራ መመሪያው ግልጽ፣ አንድ ቀለም ብቻ ያለው የባክቴሪያ ቅርጽ ሲጠብቅ ግን የተሳሳተ ምርጫ ነው።

የዝግጅት ይዘት እና የዓላማ ንጽጽር

ሰንጠረዡን እንደ ውሳኔ አሰጣጥ ሂደት ያንብቡት። ናሙናው በጣም ደብዝዞ ከተቀለመ፣ የpH አቀራረቡን ቀይረው የሎፍለርን ይምረጡ። ሁሉም አካላት ቢቀለሙም እርስ በርሳቸው ካልተለዩ፣ የማቅለሚያውን አቀራረብ ቀይረው ባለብዙ ቀለሙን ይምረጡ። በሎፍለር የተቀለመ ናሙና ቅንጣቶችን በግልጽ ቢያሳይም፣ ኃላፊው አስኳሎች እና ሳይቶፕላዝማ ለምን አንድ ሰማያዊ ቀለም እንደያዙ ቢጠይቅ፣ መልሱ ማንኛውም አልካላይን የአንድ ቀለም ማቅለሚያ ያንን የመለየት ሥራ ማከናወን አይችልም የሚል ነው። ይህ ጥያቄ የባለብዙ ቀለም ቤተሰብ እና የደም ማቅለሚያ ተዋጽኦዎቹ ጉዳይ ነው።

የተለመዱትን መደባለቆች ማስወገድ

አብዛኛውን ግራ መጋባት የሚያስከትሉት ሁለት ስህተቶች ናቸው። የመጀመሪያው፣ ሁለቱም በጠርሙስ ውስጥ ሰማያዊ ስለሚመስሉ፣ የሎፍለርን ከተራ ሜቲሊን ሰማያዊ ጋር ተተካክተው ሊያገለግሉ እንደሚችሉ ማሰብ ነው። እነሱ በpH እና በጥንካሬ ይለያያሉ። የሎፍለር በተገለጸበት ቦታ ገለልተኛ ማቅለሚያ መተካት፣ የሥራ መመሪያው የተዘጋጀበትን የቅንጣቶች ግልጽ ልዩነት ያሳጣል። ሁለተኛው፣ ማንኛውንም አሮጌ ወይም በአጋጣሚ የቆየ አልካላይን ሰማያዊ መፍትሔ እንደ ባለብዙ ቀለም ማቅለሚያ መቁጠር ነው። ቁጥጥር የሌለው ማቆየት በማይታወቅ ጥንካሬ ያለ ያልታወቀ ድብልቅ ይፈጥራል። እውነተኛ ባለብዙ ቀለም መፍትሔዎች ግን በተወሰኑ የኦክሲዴሽን መንገዶች ይዘጋጃሉ፤ በደም ማቅለሚያዎች የዕድገት መስመር ውስጥም በመለኪያ ከተወሰነ ኢዮሲን ጋር ይዋሃዳሉ። ታሪክ እዚህ ትምህርት ይሰጣል፦ በ1890ዎቹ የነበሩት ያልተረጋጉ የበሰሉ የውሃ መፍትሔዎች በሜታኖል የተረጋጉ ዝግጅቶች ተተኩ። ምክንያቱም ቁጥጥር ያልተደረገባቸው ድብልቆችን በተመሳሳይ መልኩ ደግሞ ማዘጋጀት አይቻልም ነበር። ዕድሜው ከማይታወቅ ጠርሙስ የምርመራ ስላይድ ከማቅለም በፊት ይህን ትምህርት ማስታወስ ይገባል።

ስሞችን በትክክል መለየት ጉዳዩን ያሟላል። ከቀለሙ በመገመት ፋንታ፣ የካታሎጉን ምርት ዓይነት — የውሃ፣ የሎፍለር ወይም ባለብዙ ቀለም —፣ የማቅለሚያውን ይዘት እና የታሰበውን አጠቃቀም በመለያው ላይ ያረጋግጡ። ሦስቱ ዝግጅቶች ቀለም የሚሰጠው የሞለኪውል ክፍል መነሻቸውን ይጋራሉ። ዓላማቸውን ግን አይጋሩም።