Wíwọ̀n àwọn ipa methylene blue lórí mitochondria: atẹ́gùn, ATP, àti ìyàtọ̀ agbára iná kọjá awọ

Ká sọ pé ilé ìwádìí kan fi methylene blue kún mitochondria tí mímí wọn ti ní ìdènà, tí ó sì rí i pé lílo atẹ́gùn ń pọ̀ sí i. Gbólóhùn tó lè kọ́kọ́ wá sí ọkàn ni pé àwọ̀ náà ti mú iṣẹ́ mitochondria padà bọ̀ sípò. Gbólóhùn yẹn lè jẹ́ àṣìṣe. Ìṣàn atẹ́gùn, ṣíṣẹ̀dá ATP, àti ìyàtọ̀ agbára iná kọjá awọ jẹ́ àwọn èrò mẹ́ta ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀. Ẹ̀yà inú sẹ́ẹ̀lì kan náà ni wọ́n ń lò, bí ṣíṣe ẹ̀dà àfẹ́yìntì, mímú àwọn ẹ̀dà bá ara wọn mu, àti pínpín fáìlì ṣe ń lo fódà kan náà nínú ìpamọ́ cloud: wọ́n ní ìbátan, ṣùgbọ́n àwọn òfin ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ ló ń darí wọn. Bí a bá fi ọ̀kan ṣàṣìṣe fún òmíràn, ìtumọ̀ àbájáde kò ní tọ́, kódà bí gbogbo ìwọ̀n bá péye ní ti ìmọ̀ ẹ̀rọ.

Methylene blue ń mú kí irú ìdàrúdàpọ̀ yìí rọrùn láti ṣẹlẹ̀ nítorí pé ó ń kópa nínú ètò tí ó ń wọ̀n. Ó jẹ́ ohun tó ń ṣe ìyípo redox, tó ń gba àwọn ẹlẹ́ktrọ́n ní apá ìbẹ̀rẹ̀ ọ̀nà, tó sì ń fún wọn ní apá tó tẹ̀ lé e; ó jẹ́ ion alágbára iná rere tó ní ìfẹ́ sí ọ̀rá, tó ń kójọ sínú mitochondria tó ní agbára; ó sì jẹ́ èròjà aláwọ̀ búlúù tó lágbára, tó ń fa ìmọ́lẹ̀ wọlé, tó sì ń tú u jáde ní àwọn àgbègbè ìgbì kan náà bí àwọn aṣàwárí tí a sábà máa ń lò. Ìwọ̀n kan ṣoṣo kò lè ṣe gbogbo iṣẹ́ yẹn. Ọ̀nà tó ṣeé gbára lé, tí àwọn ìwádìí mitochondria ti Budapest fi hàn, ni láti wọ̀n ìṣàn atẹ́gùn pẹ̀lú ìyára ṣíṣẹ̀dá ATP, ìyàtọ̀ agbára iná kọjá awọ, àti ìtújáde hydrogen peroxide, pẹ̀lú àwọn àyẹ̀wò ìṣàkóso tó bá àwọ̀ náà mu ní ìgbésẹ̀ kọ̀ọ̀kan.

Ìwọ̀n mímí ń wọ̀n ìṣàn atẹ́gùn, kì í ṣe agbára tí a mú jáde

Ìwọ̀n mímí tó ní ìpinnu gíga, yálà pẹ̀lú Oroboros Oxygraph tàbí Seahorse extracellular flux analyzer, ń sọ ohun kan ṣoṣo: bí ìyára ìdínkù atẹ́gùn ṣe rí. Kò sọ iye àwọn prótọ́n tí a fa kọjá fún ẹlẹ́ktrọ́n kọ̀ọ̀kan, iye ìyàtọ̀ agbára tí a pa mọ́, tàbí bóyá ATP synthase lò ó.

Àwọn ọ̀rọ̀ tí a lò ṣe pàtàkì. Nínú mitochondria tí a yà sọ́tọ̀, sobusitireti láìsí ADP ń fún wa ní mímí nítorí jijo, sobusitireti pẹ̀lú ADP tó tó láti kún àìní ń fi agbára oxidative phosphorylation hàn, fífi ohun tó ń tú ìsopọ̀ agbára sílẹ̀ kún un díẹ̀díẹ̀ sì ń fi agbára gbigbe ẹlẹ́ktrọ́n tó pọ̀ jù hàn. Nínú àwọn sẹ́ẹ̀lì tí kò bàjẹ́, àwọn ìwọ̀n Seahorse tó bá èyí mu ni mímí ìpìlẹ̀, mímí tó sopọ̀ mọ́ ATP tí oligomycin lè dín kù, jijo prótọ́n, mímí tó pọ̀ jù tí FCCP ń ṣàlàyé, àti lílo atẹ́gùn tí kò wá láti mitochondria tí rotenone àti antimycin kò lè dá dúró. Pípe àwọn àbájáde Seahorse ní State 3 àti State 4 ń fi ìpéye kan hàn tí irú àpẹẹrẹ tí a pèsè kò lè ṣe àtìlẹ́yìn fún, bí ìlànà Agilent Mito Stress Test ṣe ṣàlàyé.

Methylene blue ń ba ìrònú pé atẹ́gùn púpọ̀ sí i túmọ̀ sí agbára púpọ̀ sí i jẹ́. Nínú mitochondria ọpọlọ ẹlẹ́dẹ̀ Guinea tí a yà sọ́tọ̀, àwọ̀ ní 100 nM sí 1 uM mú lílo atẹ́gùn ní ipò ìsinmi pọ̀ sí i pẹ̀lú àwọn sobusitireti glutamate àti malate, succinate, àti alpha-glycerophosphate. Ìbísí tó fẹ́rẹ̀ẹ́ tó 64 percent wà pẹ̀lú alpha-glycerophosphate, síbẹ̀ mímí tí ADP ń ru sókè nínú mitochondria tí ó ń ṣiṣẹ́ dáadáa kò fi bẹ́ẹ̀ yí padà, gẹ́gẹ́ bí ìwádìí mitochondria ọpọlọ tí a yà sọ́tọ̀ ṣe fi hàn. Nítorí pé mímí jijo pọ̀ sí i nígbà tí ìṣàn tí ADP ń ru sókè dúró bí ó ṣe wà, ìpín ìṣàkóso mímí tí a ṣe ìṣirò rẹ̀ dín kù. Ìdínkù yẹn kò túmọ̀ sí pé àwọ̀ náà ba mitochondria jẹ́. Ó túmọ̀ sí pé àwọ̀ náà fi ìyípo redox tó ń lo atẹ́gùn kún mímí déédéé. Àyẹ̀wò lílo atẹ́gùn methylene blue tó ń ròyìn ìbísí náà nìkan ti wọ̀n ìfàsẹ́yìn kẹ́míkà gidi, ṣùgbọ́n kò sọ ohunkóhun nípa bí a ṣe pa agbára mọ́.

Àwọn ìdánwò mímú iṣẹ́ padà bọ̀ sípò fi àlàfo kan náà hàn ní ìwọ̀n tó tóbi jù. Nígbà tí a dí Complex I lọ́wọ́, ìṣàn atẹ́gùn padà pọ̀ sí i ní ìwọ̀n tó fẹ́rẹ̀ẹ́ jẹ́ ìlọ́po mẹ́ta, nígbà tí ṣíṣẹ̀dá ATP padà pọ̀ sí i ní ìwọ̀n tó jẹ́ ìlọ́po 1.5 nìkan. Atẹ́gùn púpọ̀ sí i dé ọ̀dọ̀ ẹlẹ́ktróòdù. Apá tó kéré sí i nínú rẹ̀ ló ṣiṣẹ́ fún ṣíṣẹ̀dá ATP. Ìkéde èyíkéyìí pé oxidative phosphorylation ti dára sí i nílò ìwọ̀n ATP náà, tí ó dára jù lọ kí a fi hàn gẹ́gẹ́ bí ìpín ATP fún atẹ́gùn, kí a sì sọ ìlànà tí a lò fún iye ìsàlẹ̀ ìpín náà.

Àwọn àyẹ̀wò ATP ń wọ̀n ìyára ṣíṣẹ̀dá rẹ̀; iye tó wà kò lè rọ́pò èyí

Àyẹ̀wò ATP ń dáhùn ìbéèrè ọ̀tọ̀: iye ATP wo ni a ń ṣe ní àkókò kọ̀ọ̀kan? Ìwọ̀n ìyípadà pẹ̀lú àkókò, yálà ìmọ́lẹ̀ tí luciferase kòkòrò mànàmáná ń mú jáde tí a ń tọ̀pinpin fún ìṣẹ́jú mélòó kan, tàbí àyẹ̀wò tó so hexokinase àti glucose-6-phosphate dehydrogenase pọ̀ tí a ń kà ní 340 nm, ń fún wa ní ìyára. Ìwọ̀n gbogbo ATP ní ojúami ìparí kan ṣoṣo ń fún wa ní iye tó wà. Iye yẹn ń fi ṣíṣẹ̀dá rẹ̀ yọ lílo rẹ̀ hàn, kò sì lè sọ púpọ̀ nípa oxidative phosphorylation fúnra rẹ̀.

Ẹgbẹ́ Budapest lo ọ̀nà àwọn ensáyímù tí a so pọ̀, pẹ̀lú dídín iṣẹ́ adenylate kinase kù, wọ́n sì rí i pé methylene blue ní 1 sí 2 uM mú ṣíṣẹ̀dá ATP pọ̀ sí i díẹ̀, ṣùgbọ́n ní ọ̀nà tó ní ìtumọ̀ nípa ìṣirò, nínú mitochondria tí a fi rotenone àti antimycin ṣe ìtọ́jú. Ìyẹn jẹ́ mímú iṣẹ́ padà bọ̀ sípò gidi, ṣùgbọ́n apá kan ṣoṣo ló padà. Ìwádìí lórí májèlé TEGDMA dé irú àbájáde kan náà nínú àwòṣe mìíràn: monomer ehín TEGDMA ní 5 mM mú mímí tó sopọ̀ mọ́ Complex I ṣubú láti nǹkan bí 286 sí 28 ẹyọ ìṣàn, àwọ̀ ní 2 uM sì mú un padà sí nǹkan bí 86.

Àyẹ̀wò ìṣàkóso méjì ṣe pàtàkì gan-an fún èròjà aláwọ̀ tó ń kópa nínú redox. Àkọ́kọ́, lo oligomycin láti mọ iye ṣíṣẹ̀dá ATP tí a wọ̀n tó gbára lé ATP synthase. Èkejì, ṣe àyẹ̀wò bí a ṣe lè rí ATP tí a fi kún àpẹẹrẹ padà nínú ètò tí kò ní sẹ́ẹ̀lì, pẹ̀lú ATP tí a mọ iye rẹ̀, gbogbo àwọn èròjà àyẹ̀wò, àti àwọn ìfojúsùn àwọ̀ gan-an tí a lò: ó kéré tán 0, 100 nM, 300 nM, 1 uM, àti 2 uM. Àwọ̀ náà lè fa ìmọ́lẹ̀ tí a tú jáde wọlé, dí ensáyímù tó ń fúnni ní àmì lọ́wọ́, tàbí yí ìfàsẹ́yìn redox àwọn èròjà àyẹ̀wò padà. Ìtọ́sọ́nà gbogbogbò fún àyẹ̀wò luciferase sì dámọ̀ràn àwọn àyẹ̀wò ìmúdájú bíókẹ́míkà fún irú ìdálọ́wọ́ yìí gan-an. Má ṣe rò pé kò sí àbájáde àṣìṣe ní 1 uM nítorí pé pípa ìmọ́lẹ̀ kù sábà máa ń burú sí i ní àwọn ìfojúsùn tó ga jù.

Àwọn aṣàwárí ìyàtọ̀ agbára iná kọjá awọ ń wọ̀n bí àwọ̀ ṣe pín ká, kì í ṣe ìṣàn

Safranine O, TMRM àti TMRE, rhodamine 123, àti JC-1 jẹ́ àwọn ion alágbára iná rere tí ó lè kọjá awọ. Wọ́n ń kójọ sínú matrix tó ní agbára iná òdì gẹ́gẹ́ bí ìwọ̀ntúnwọ̀nsì ẹlẹ́ktrókẹ́míkà, nítorí náà àpapọ̀ ìmọ́lẹ̀ fluorescence ń fi ìyàtọ̀ agbára náà hàn lọ́nà àìtààrà nípasẹ̀ ibi tí aṣàwárí náà wà. Kò sí èyíkéyìí nínú wọn tó ń wọ̀n ATP tàbí ìṣàn ẹlẹ́ktrọ́n.

Aṣàwárí kọ̀ọ̀kan ní irú àpẹẹrẹ tí ó bá a mu jù lọ. Safranine O bá mitochondria tí a yà sọ́tọ̀ àti àwọn sẹ́ẹ̀lì tí a mú kí awọ wọn ṣeé kọjá mu, tí a sábà máa ń lò ní nǹkan bí 2 uM, pẹ̀lú ìmọ́lẹ̀ ìmúrú ní nǹkan bí 495 nm àti ìmọ́lẹ̀ ìtújáde ní nǹkan bí 585 nm. Ó ń ṣiṣẹ́ ní ipò pípa ìmọ́lẹ̀ kù, níbi tí gbigba àwọ̀ wọlé ti ń yí àpapọ̀ fluorescence padà. TMRM àti TMRE bá àwọn sẹ́ẹ̀lì tí kò bàjẹ́ mu nígbà tí a fi iye nanomolar kékeré sínú wọn ní ipò tí kò ní pípa ìmọ́lẹ̀ kù. Ní ipò yẹn, ìparẹ́ ìyàtọ̀ agbára iná ń tú àwọ̀ sílẹ̀, fluorescence mitochondria sì ń dín kù; nígbà tí iye àwọ̀ bá pọ̀, àmì náà lè yí ìtọ́sọ́nà padà nítorí pé àwọ̀ ń pa ìmọ́lẹ̀ ara rẹ̀ kù. JC-1 ń fúnni ní ìpín àwọ̀ ewé sí pupa tó rọrùn láti lò, ṣùgbọ́n ó gbára lé iye àwọ̀ tí a fi sínú àpẹẹrẹ àti àpapọ̀ mitochondria. Èyí mú kí ó kéré sí TMRM tí a ṣàkóso dáadáa fún iṣẹ́ ìwọ̀n iye. A ṣàkótán àwọn àǹfààní àti àìlera wọ̀nyí nínú àtúnyẹ̀wò àwọn aṣàwárí ìyàtọ̀ agbára iná kọjá awọ mitochondria tí a ń lò káàkiri.

Methylene blue ń dá ìwọ̀n ìmọ́lẹ̀ rú ní àwọn ìfojúsùn tí a ń lò fún iṣẹ́ náà gan-an. Àwọn àgbègbè ìgbì tí ó ti ń fa ìmọ́lẹ̀ wọlé, ní nǹkan bí 600 sí 665 nm, bá ìtújáde ìmọ́lẹ̀ pupa àwọn aṣàwárí bọ́ sí ara wọn. Nítorí náà, ipa àsẹ̀ inú, pípa ìmọ́lẹ̀ kù, àti fífa ìmọ́lẹ̀ ìmúrú wọlé lè ṣẹlẹ̀. Àwọ̀ náà tún jẹ́ ion alágbára iná rere mìíràn tó ní ìfẹ́ sí ọ̀rá, tí bí ó ṣe pín ká fúnra rẹ̀ ń yí padà pẹ̀lú ìyàtọ̀ agbára tí a ń wọ̀n. Ọ̀nà ààbò ni lílo àwọn ìwọ̀n ìmúdájú púpọ̀ pẹ̀lú àwọn àpẹẹrẹ òfo: aṣàwárí nìkan, àwọ̀ nìkan, aṣàwárí pẹ̀lú ìfojúsùn àwọ̀ kọ̀ọ̀kan, ìparẹ́ ìyàtọ̀ agbára pátápátá pẹ̀lú FCCP gẹ́gẹ́ bí ìtọ́kasí òdo, àti, bí ó bá ṣeé ṣe, aṣàwárí kejì tí ìhùwàsí ìmọ́lẹ̀ rẹ̀ yàtọ̀. Ìwádìí yíyí Complex III kọjá fi àpẹẹrẹ ọ̀nà yẹn lélẹ̀ nípa títún àyẹ̀wò mímú ìyàtọ̀ agbára kọjá awọ padà ṣe pẹ̀lú safranine O àti TMRM lẹ́yìn ìdènà antimycin àti myxothiazol, tí wọ́n sì rí irú ìpadàbọ̀ kan náà. Ohun kan tó ń fúnni ní àmì ìmọ́lẹ̀ jẹ́ ìtọ́kasí lásán. Méjì tí kò gbára lé ara wọn jẹ́ ẹ̀rí.

Irú àpẹẹrẹ mẹ́ta, ìbéèrè ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ mẹ́ta

Mitochondria tí a yà sọ́tọ̀, àwọn sẹ́ẹ̀lì tí a mú kí awọ wọn ṣeé kọjá, àti àwọn sẹ́ẹ̀lì tí kò bàjẹ́ kì í ṣe àwọn ìṣètò ìfaramọ́ ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ tí a lè fi rọ́pò ara wọn nínú àyẹ̀wò kan. Wọ́n jẹ́ àwọn èrò ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ tí àwọn ìlànà iṣẹ́ wọn yàtọ̀.

Mitochondria tí a yà sọ́tọ̀ ń pa ẹ̀wọ̀n gbigbe ẹlẹ́ktrọ́n, awọ inú, àti àwọn ètò iṣẹ́ matrix mọ́, nígbà tí a yọ awọ sẹ́ẹ̀lì, cytosol, àti ìṣètò nẹ́tíwọ́ọ̀kì kúrò. Yíyọ wọ̀nyí kúrò ni ète rẹ̀: a mọ àwọn sobusitireti, ADP, àwọn ohun ìdènà, àti àwọn ìfojúsùn àwọ̀ ní pàtó, nítorí náà a lè tọ́ka sí ọ̀nà ìfàsẹ́yìn kan. Àìlera rẹ̀ ni pípàdánù ìpèsè sobusitireti àdánidá, fífi àmì ránṣẹ́, àti ìbéèrè fún agbára.

Àwọn sẹ́ẹ̀lì tí a mú kí awọ wọn ṣeé kọjá ń pa mitochondria mọ́ nínú ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìṣètò inú sẹ́ẹ̀lì wọn, nígbà tí wọ́n ń jẹ́ kí àwọn sobusitireti àti ADP láti òde wọlé láti inú awọ sẹ́ẹ̀lì tí a ṣí. Wọ́n jẹ́ irinṣẹ́ tó yẹ fún títọ́ka sí àbùkù ọ̀nà sobusitireti nínú àyíká sẹ́ẹ̀lì. Bí a bá mú kí awọ ṣeé kọjá ju bó ṣe yẹ lọ, awọ òde yóò bàjẹ́, ìṣàkóso cytosol sì máa ń fọ jáde.

Àwọn sẹ́ẹ̀lì tí kò bàjẹ́ ń pa ohun gbogbo mọ́: ìdènà awọ sẹ́ẹ̀lì, àwọn ohun tó ń mú ìdínkù kẹ́míkà ṣẹlẹ̀ nínú cytosol, gbigbe sobusitireti inú ara, nẹ́tíwọ́ọ̀kì mitochondria, àti ìbéèrè fún ATP. Wọ́n sún mọ́ iṣẹ́ ara àdánidá jù lọ, wọ́n sì jìnnà sí ṣíṣàlàyé ọ̀nà iṣẹ́ jù lọ, nítorí pé gbigba àwọ̀ wọlé, ìdínkù rẹ̀, àti dídì í mọ́ sí ibì kan ń pinnu iye àwọ̀ tí mitochondria ń bá pàdé ní tòótọ́.

Ìwádìí TEGDMA lo gbogbo ipele mẹ́tẹ̀ẹ̀ta pẹ̀lú ète pàtó: mitochondria ọpọlọ tí a yà sọ́tọ̀ fún mímú oxidation àti ìyàtọ̀ agbára padà bọ̀ sípò pẹ̀lú àwọ̀; àwọn sẹ́ẹ̀lì ìpilẹ̀ inú ehín tí a mú kí awọ wọn ṣeé kọjá, ní pàtàkì láti tọ́ka sí ibi àbùkù náà nínú oxidation sobusitireti tó sopọ̀ mọ́ Complex I; àti àwọn sẹ́ẹ̀lì ìpilẹ̀ tí kò bàjẹ́ fún ipa àpapọ̀ tí àwọ̀ ní 2 uM ní lórí lílo atẹ́gùn tí a ti dín kù nínú iṣẹ́ ara. Fún àwọn òǹkàwé tó ń fi àwọn ìwọ̀n mitochondria wé ara wọn láàárín àwọn irú àpẹẹrẹ, àlàyé ẹlẹgbẹ́ nípa bí methylene blue ṣe ń gbé àwọn ẹlẹ́ktrọ́n lọ nínú ẹ̀wọ̀n mímí ń pèsè ìpìlẹ̀ ọ̀nà ìfàsẹ́yìn, ìtọ́sọ́nà kíkà àwọn ìwádìí mímí methylene blue sì ṣàlàyé èrò tó wà lẹ́yìn iye tí a lò àti àwọn ohun ìdènà.

Àwọn àyẹ̀wò ìṣàkóso tí àwọ̀ tó ń kópa nínú redox nílò

Ohun tó ń ṣe ìyípo redox nílò àtòjọ àyẹ̀wò ìṣàkóso tó gùn ju ti ohun ìdènà lásán lọ, nítorí pé ìfàsẹ́yìn kẹ́míkà àwọ̀ nìkan lè dà bí iṣẹ́ ẹ̀dá alààyè.

Fún ìwọ̀n mímí, lo iyàrá ìwọ̀n tí buffer nìkan wà nínú rẹ̀ láti ṣàyẹ̀wò yíyí ìwọ̀n padà láìsí ìdí, iyàrá tí buffer àti àwọ̀ wà nínú rẹ̀ láìsí ohun èlò ẹ̀dá alààyè, àwọ̀ pẹ̀lú ohun tó ń mú ìdínkù kẹ́míkà ṣẹlẹ̀ ní òde sẹ́ẹ̀lì tí ó wà nínú àyẹ̀wò, àti rotenone pẹ̀lú antimycin ní ìparí láti mọ lílo atẹ́gùn tí kò wá láti mitochondria nínú àwọn sẹ́ẹ̀lì tí kò bàjẹ́. Kíyè sí i pé àwọ̀ tí a ti dín kù ń tún ṣe oxidation nípa gbigbe àwọn ẹlẹ́ktrọ́n sí atẹ́gùn láti dá hydrogen peroxide sílẹ̀. Nítorí náà, àpẹẹrẹ òfo tí àwọ̀ nìkan wà nínú rẹ̀ láìsí olùfúnni ní ẹlẹ́ktrọ́n máa ń fi lílo atẹ́gùn nínú ètò tí kò ní sẹ́ẹ̀lì hàn ní ìwọ̀n tó kéré ju bó ṣe rí lọ nígbà tí NADH tàbí NADPH bá wà.

Fún hydrogen peroxide, yan Amplex UltraRed tí a ti ṣe ìmúdájú ìwọ̀n rẹ̀ pẹ̀lú horseradish peroxidase dípò àwọn àwọ̀ DCFDA tí kò yan ohun kan ní pàtó. Fi catalase ṣe ìmúdájú, kí o sì ṣàyẹ̀wò bí àbájáde ṣe gbára lé ìmọ́lẹ̀, nítorí pé àwọ̀ náà ń mú àwọn ìfàsẹ́yìn tó dá lórí ìmọ́lẹ̀ ṣẹlẹ̀. Ìwádìí mitochondria ọpọlọ rí i pé ẹrù peroxide pọ̀ sí i ju ìlọ́po mẹ́rin lọ ní àwọ̀ 100 nM nìkan, nígbà tí yíyọ peroxide kúrò lọ́ra sí i. Àwọ̀ tí a ti dín kù ló dá peroxide náà sílẹ̀ ní tààrà, láìsí superoxide gẹ́gẹ́ bí ìgbésẹ̀ àárín. Àwọn kúlẹ̀kúlẹ̀ yíyan aṣàwárí àti àwọn àyẹ̀wò ìṣàkóso ìmọ́lẹ̀ wà nínú àpilẹ̀kọ ẹlẹgbẹ́ nípa wíwọ̀n àwọn ẹ̀yà atẹ́gùn tó ń ṣe ìfàsẹ́yìn nínú àwọn ìdánwò àwọ̀, ìbéèrè tó gbòòrò sí i nípa ìgbà tí peroxide ń ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí àmì dípò ẹrù sì wà lẹ́gbẹ̀ẹ́ ìwọ̀ntúnwọ̀nsì redox inú sẹ́ẹ̀lì àti àwọn ìkéde nípa antioxidant.

Fún àwọn ìkéde nípa ọ̀nà ìfàsẹ́yìn, ṣe àyẹ̀wò ibi ìdènà Complex III méjèèjì: antimycin A ní ibi Qi àti myxothiazol ní ibi Qo, pẹ̀lú ojúami ìparí Complex IV tí a fi cyanide ṣàyẹ̀wò. Ìwádìí ọpọlọ eku kan tó ṣáájú ròyìn pé àwọ̀ mú mímí tí rotenone dí lọ́wọ́ padà bọ̀ sípò, ṣùgbọ́n kò ṣe bẹ́ẹ̀ fún mímí tí antimycin dí lọ́wọ́. Ìwádìí tó wá lẹ́yìn náà lórí ẹ̀yà ẹranko mẹ́ta rí mímú iṣẹ́ padà ní apá kan pẹ̀lú àwọn ohun ìdènà méjèèjì, àti ẹ̀rí ìdínkù cytochrome c ní tààrà. Wo ọ̀nà yíyí ìdènà kọjá náà gẹ́gẹ́ bí ohun tó bá àwọn dátà tuntun mu, kì í ṣe ohun tí a ti fi ìdí rẹ̀ múlẹ̀ pátápátá, nítorí pé ìfojúsùn àwọ̀, ibi tí ohun ìdènà ń ṣiṣẹ́, ipò sobusitireti, àti bí àwọ̀ ṣe pín ká ń yí ọ̀nà tí a rí padà.

Tábìlì yíyan àyẹ̀wò

Lo tábìlì yìí láti yan ìwọ̀n tó bá ìbéèrè mu, kì í ṣe láti yan ìbéèrè tó bá ìwọ̀n mu.

Ìkéde tó kéré jù tó lè múni gbàgbọ́ gbọdọ̀ lo àwọn ìfojúsùn àwọ̀ kan náà, 100 nM, 300 nM, 1 uM, àti 2 uM, fún ìwọ̀n ìṣàn atẹ́gùn lábẹ́ àwọn ipò jijo, ADP, oligomycin, àti ohun tó ń tú ìsopọ̀ agbára sílẹ̀; ìyára ṣíṣẹ̀dá ATP; ìyàtọ̀ agbára iná kọjá awọ, tí ó dára kí a lo aṣàwárí méjì fún un; àti ìtújáde peroxide tí a ti ṣe ìmúdájú ìwọ̀n rẹ̀ pẹ̀lú catalase àti àwọn àyẹ̀wò ìṣàkóso tí kò ní sẹ́ẹ̀lì. Ròyìn gbogbo àwọn ìwọ̀n tó sopọ̀: ìṣàn atẹ́gùn pẹ̀lú ìyára ATP, ATP fún atẹ́gùn, ìyàtọ̀ agbára, àti peroxide. Èyíkéyìí nínú àwọn iye wọ̀nyẹn nìkan jẹ́ ìwọ̀n kan tí ó ṣì ń wá ìtumọ̀.