Kíka E. coli àti ìrísí àwọn ìṣùpọ̀ mìíràn lórí agar EMB

Akẹ́kọ̀ọ́ kan fa àpẹẹrẹ ohun alààyè kéékèèké tí a kò tíì mọ̀ sí orí agar eosin methylene blue, ó fi í sí ipò ìdàgbàsókè ní gbogbo òru, ó sì padà bá àwo kan tí àwọn ìṣùpọ̀ dúdú tí ń tàn yòò ní àwọ̀ ewé wà lórí rẹ̀. Ohun tí ó kọ sínú ìwé àkọsílẹ̀ ni "E. coli, a ti fìdí rẹ̀ múlẹ̀." Àkọsílẹ̀ yẹn sọ ohun tí ó ju ẹ̀rí tí àwo náà lè pèsè lọ. Àwo náà ń fi àbùdá ìdàgbàsókè àti fámẹ́ńtéṣọ̀n hàn lábẹ́ àwọn ipò kan pàtó. Dídá irú ẹ̀yà mọ̀ jẹ́ ìpinnu mìíràn tí ó nílò ẹ̀rí mìíràn.

Ìtọ́sọ́nà yìí ka àwọn àbájáde agar EMB sí iṣẹ́ ìtumọ̀. Ó ṣàlàyé èrò tí ó wà lẹ́yìn rẹ̀, ó ṣàgbékalẹ̀ àkójọpọ̀ àwòrán àwo fún àpèjúwe pẹ̀lú àwọn àpẹẹrẹ ìṣàkóso, ó sì sọ àwọn ipò tí àwòrán inú ìwé ẹ̀kọ́ lè mú kí a ṣìnà.

Èrò tí ó wà lẹ́yìn àwo náà

Agar EMB jẹ́ ohun èlò ìdàgbàsókè tí ó ń yan àwọn ohun alààyè kéékèèké kan, tí ó sì ń fi ìyàtọ̀ láàárín wọn hàn. Àwọn àwọ̀ eosin Y àti methylene blue ń dín ìdàgbàsókè ọ̀pọ̀ ohun alààyè kéékèèké Gram positive kù, nítorí náà ohun èlò náà ń ṣojú rere sí ìdàgbàsókè Gram negative. Àwọn àwọ̀ kan náà tún ń ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí àmì: nígbà tí ohun alààyè kéékèèké kan bá ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n suga tí ó wà, tí ó sì mú ásíìdì tó jáde ní àyíká rẹ̀, ìṣùpọ̀ náà ń gba àwọ̀ púpọ̀, ó sì ń di aláwọ̀ pópọ̀ dúdú sí búlúù-dúdú. Nígbà tí ìmújáde ásíìdì bá lágbára, ojú ìṣùpọ̀ náà lè dán bí irin ní àwọ̀ ewé tí ń yí padà bí a ṣe ń wò ó. Ìlànà ASM fún àwọn àwo agar eosin methylene blue ṣàlàyé bí yíyan àti fífi ìyàtọ̀ hàn ṣe ń ṣiṣẹ́ papọ̀, ó sì pèsè àwọn fọ́tò ìtọ́kasí fún kíkọ́ni.

Ohun kan ṣe pàtàkì kí a tó ka àbájáde èyíkéyìí: ṣàyẹ̀wò àdàlù tí a ń lò. Àdàlù Holt Harris Teague àtijọ́ ní lactose àti sucrose nínú, nígbà tí Levine EMB ní lactose nìkan. Ohun alààyè kéékèèké tí ó ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n sucrose ṣùgbọ́n tí kì í ṣe ti lactose, bí ọ̀pọ̀ àpẹẹrẹ Serratia marcescens tí a ti yà sọ́tọ̀, lè ní ìrísí tó yàtọ̀ lórí àwọn àdàlù méjèèjì. Ìwé àlàyé olùpèsè fún àwọn ohun èlò ìdàgbàsókè EMB sọ ìyàtọ̀ àdàlù yìí ní kedere. Kọ orúkọ olùpèsè àti àdàlù sínú ìwé àkọsílẹ̀ pẹ̀lú àbájáde náà.

Agar EMB tí a ti pèsè ṣùgbọ́n tí a kò tíì fi ohun alààyè kéékèèké sí máa ń jẹ́ aláwọ̀ pupa-búráùn sí pópọ̀ tí ó ní pupa nínú, nígbà mìíràn pẹ̀lú àwọ̀ ewé díẹ̀ tàbí àwọn patikulu kéékèèké tí ó yà kúrò nínú ojútùú. Àwọ̀ abẹ́lẹ̀ yẹn kì í ṣe ìdàgbàsókè. Fi gbogbo àbájáde wé àwo tí a kò fi ohun alààyè kéékèèké sí tàbí ìrísí ìbẹ̀rẹ̀ tí a ti kọ sílẹ̀, kí o sì ka àwo àkọ́kọ́ lẹ́yìn nǹkan bí 18 sí 24 wákàtí ìdàgbàsókè níbi tí afẹ́fẹ́ wà ní 35 sí 37 C, àyàfi tí ìlànà ẹ̀kọ́ bá sọ ohun mìíràn. Fífi sí ipò ìdàgbàsókè fún àkókò gígùn lè yí ìrísí fámẹ́ńtéṣọ̀n padà.

Bí a ṣe ń wo àwo náà

Lo irú ìmọ́lẹ̀ méjì. Kọ́kọ́ wo àwo náà lábẹ́ ìmọ́lẹ̀ tí ń padà láti ojú rẹ̀ tàbí tí ó wọ̀ láti ẹ̀gbẹ́, kí o sì tẹ àwo náà sí ẹ̀gbẹ́: dídán bí irin náà ń yí padà pẹ̀lú igun tí a fi ń wò ó, ó sì lè hàn tàbí pòórá. Lẹ́yìn náà, ṣàyẹ̀wò rẹ̀ pẹ̀lú ìmọ́lẹ̀ tí ń kọjá nínú rẹ̀ láti ṣàyẹ̀wò àwọ̀ ìṣùpọ̀ àti àwọn àárín dúdú. Lo àwọn ìṣùpọ̀ tí ó yà sọ́tọ̀ dáadáa, nítorí pé bí wọ́n ṣe kún pọ̀ àti àwọn ìṣùpọ̀ tí ó wà lẹ́gbẹ̀ẹ́ wọn ń yí bí ásíìdì ṣe ń kójọ ní àyíká wọn padà, èyí sì lè dín àwọ̀ kù tàbí mú kí ó lágbára ju bó ṣe yẹ lọ. Àkójọpọ̀ àwòrán ASM fi èyí hàn ní tààrà: E. coli tí a dàgbà pọ̀ mọ́ àwọn ohun alààyè kéékèèké mìíràn lè pàdánù dídán tí a ń retí nítorí pé àwọn tí ó yí i ká ń yí ipò ásíìdì àyíká rẹ̀ padà.

Fi àwọn àpẹẹrẹ ìṣàkóso kún un nígbàkigbà tí iṣẹ́ ẹ̀kọ́ bá gba èyí láàyè. Àkójọpọ̀ tí a sábà máa ń lò fún kíkọ́ni ni E. coli ATCC 25922 fún àbùdá búlúù-dúdú àti dídán bí irin, ohun alààyè kéékèèké tí kò ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n bí Salmonella Typhimurium ATCC 14028 tàbí Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 fún àbùdá àìní àwọ̀, àti Gram positive bí Enterococcus faecalis tàbí Staphylococcus aureus gẹ́gẹ́ bí àpẹẹrẹ ìṣàkóso ìdènà ìdàgbàsókè, gẹ́gẹ́ bí a ti tò wọ́n nínú àwọn tábìlì QC àfọwọ́sí fún àwọn ohun èlò ìdàgbàsókè EMB. Bí àpẹẹrẹ ìṣàkóso tí ó yẹ kí ó fi dídán hàn kò bá dán, kọ́kọ́ fura sí ipò ìdàgbàsókè, bí àwọn ìṣùpọ̀ ṣe kún pọ̀, tàbí àdàlù kí o tó fura sí àpẹẹrẹ tí a kò tíì mọ̀.

Àkójọpọ̀ àwòrán àwo fún àpèjúwe

Àwọn àwo tí ó wà nísàlẹ̀ jẹ́ àwòrán àpèjúwe tí a dá, kì í ṣe fọ́tò àwọn ohun alààyè kéékèèké tí a dàgbà gan-an. Wọ́n fi àpẹẹrẹ ìrísí tí a yẹ kí a wá hàn, kì í ṣe àwọ̀ pàtó ti ìran kan ṣoṣo. Fi wọ́n wé àwọn fọ́tò ìtọ́kasí ASM àti àwọn àwo gidi láti yàrá ẹ̀kọ́.

Àwo 1: Escherichia coli lórí agar EMB, tí ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n lactose lọ́pọ̀lọpọ̀

E. coli lórí agar EMB máa ń jẹ́ aláwọ̀ pópọ̀ dúdú sí búlúù-dúdú, ó sì sábà máa ń ní àárín dúdú àti dídán bí irin ní àwọ̀ ewé nítorí ìmújáde ásíìdì tí ó lágbára. Dídán náà ni àmì olókìkí tí àwọn akẹ́kọ̀ọ́ ń wá, ṣùgbọ́n kà á sí ẹ̀rí àfikún dípò ìtumọ̀ ohun tí E. coli jẹ́. Bí dídán ṣe lágbára ń yàtọ̀ pẹ̀lú ìran, àkókò ìdàgbàsókè, bí àwọn ìṣùpọ̀ ṣe pọ̀ tó, àti igun tí a fi ń wò ó. Àìsí dídán kò túmọ̀ sí pé E. coli kò sí, ìṣùpọ̀ dúdú tí kò sì dán lè tọ́ka sí ọ̀pọ̀ ohun alààyè kéékèèké mìíràn tí ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n. Yan ìṣùpọ̀ tí ó yà sọ́tọ̀ dáadáa fún iṣẹ́ àtẹ̀lé èyíkéyìí dípò kí o ka àbájáde láti agbègbè tí àwọn ìṣùpọ̀ kún pọ̀ sí.

Àwo 2: Klebsiella pneumoniae lórí agar EMB, tí ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n tí ó sì dà bí imú

Klebsiella pneumoniae lórí agar EMB máa ń dá àwọn ìṣùpọ̀ ńlá tí ó ń tàn, tí ó dà bí imú, tí àwọ̀ wọn sì jẹ́ pupa fẹ́ẹ́rẹ́-pópò sí búráùn-pópò. Wọ́n sábà máa ń ní àárín dúdú ṣùgbọ́n wọn kì í sábà ní dídán bí irin tí ó lágbára. Àwọn tí ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n tí ó ní ìbátan pẹ̀lú wọn, bí Enterobacter, tún lè ní ìrísí kan náà. Bí ìṣùpọ̀ ṣe dà bí imú àti bí ó ṣe tó jẹ́ apá kan ti àbájáde: ìṣùpọ̀ aláwọ̀ pupa fẹ́ẹ́rẹ́ tí ó kéré tí ó sì tẹ́jú kò ní ìtumọ̀ kan náà pẹ̀lú èyí tí ó tóbi, tí àárín rẹ̀ ga, tí ó sì dà bí imú. Gẹ́gẹ́ bí ó ṣe rí fún E. coli, àwo náà ń tọ́ka sí àbùdá fámẹ́ńtéṣọ̀n, dídárúkọ ẹ̀yà pàtó sì nílò ìmúdájú nípa ìdánwò ìṣesí kẹ́míkà ohun alààyè gẹ́gẹ́ bí a ṣe ṣàlàyé rẹ̀ nísàlẹ̀.

Àwo 3: Salmonella lórí agar EMB àti àwọn mìíràn tí kò ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n, àwọn ìṣùpọ̀ tí kò ní àwọ̀

Salmonella lórí agar EMB àti àwọn tí kò ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n lactose tí ó ní ìbátan pẹ̀lú rẹ̀, títí kan Shigella àti ọ̀pọ̀ àpẹẹrẹ Pseudomonas tí a ti yà sọ́tọ̀, máa ń dàgbà gẹ́gẹ́ bí àwọn ìṣùpọ̀ tí kò ní àwọ̀, tí ìmọ́lẹ̀ lè kọjá nínú wọn, tàbí tí ó ní àwọ̀ amber fẹ́ẹ́rẹ́. Àwọn àdàlù àti ipò kan lè fún wọn ní àwọ̀ pupa fẹ́ẹ́rẹ́ díẹ̀, nítorí náà ìṣùpọ̀ aláwọ̀ pupa fẹ́ẹ́rẹ́ kò túmọ̀ sí láìsí àní-àní pé ó ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n. EMB kò fi ìyàtọ̀ hàn láàárín Salmonella àti Shigella tàbí àwọn mìíràn tí kò ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n; àwọn ìdánwò tí ó tẹ̀ lé ni yóò fi ìyàtọ̀ yẹn hàn. Tún ṣàkíyèsí pé a ti kọ sílẹ̀ pé àwọn ìran Salmonella tí ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n lactose lè ní àwọn ìṣùpọ̀ tí ń dán bí irin bí ti E. coli; èyí jẹ́ ìdí mìíràn tí àwo kan ṣoṣo kò fi lè parí ìwádìí náà.

Àwo 4: Serratia marcescens àti ewu ṣíṣe àṣìṣe nítorí àdàlù

Serratia marcescens ní abala tirẹ̀ nítorí pé àwọn akẹ́kọ̀ọ́ sábà máa ń retí àwọn ìṣùpọ̀ pupa, èyí sì ń mú wọn ka àwo náà ní àṣìṣe. Ọ̀pọ̀ àwọn àpẹẹrẹ tí a yà sọ́tọ̀ fún iṣẹ́ ìṣègùn kì í ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n lactose, nítorí náà wọ́n sábà máa ń jẹ́ aláwọ̀ fẹ́ẹ́rẹ́ tàbí kí àwọ̀ wọn má lágbára lórí Levine EMB. Nítorí pé ọ̀pọ̀ àwọn àpẹẹrẹ tí a yà sọ́tọ̀ ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n sucrose, àdàlù tí ó ní sucrose lè mú àbájáde tí ó dúdú sí i tàbí tí ó ní ìbáṣepọ̀ pẹ̀lú ásíìdì púpọ̀ sí i jáde. Má ṣe retí àwọ̀ prodigiosin pupa tí a mọ̀ sí i ní 35 sí 37 C pẹ̀lú; ìmújáde àwọ̀ náà kò ṣeé gbẹ́kẹ̀ lé ní ìwọ̀n otútù ẹ̀rọ ìdàgbàsókè. Nígbà tí ìlànà bá mẹ́nuba Serratia marcescens lórí agar EMB, ṣàyẹ̀wò àdàlù tí gbólóhùn náà dá lé. Àtúnyẹ̀wò ìṣesí kẹ́míkà inú Serratia ṣàkótán bí àìṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n lactose àti bí ṣíṣe ti sucrose ṣe ń yàtọ̀ ṣe fa ewu àṣìṣe yìí.

Àwo 5: àwọn àpẹẹrẹ ìṣàkóso àti àwọn ohun alààyè kéékèèké tí a dènà ìdàgbàsókè wọn

A máa ń dènà ìdàgbàsókè tàbí dín ìdàgbàsókè àwọn ohun alààyè kéékèèké Gram positive bí Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, àti Bacillus kù gidigidi lórí agar EMB, bí ó tilẹ̀ jẹ́ pé ìdènà náà kì í pé fún gbogbo ìran. Àkójọpọ̀ àwọn àpẹẹrẹ ìṣàkóso ń mú kí ìtumọ̀ àbájáde dúró lórí ẹ̀rí: àpẹẹrẹ ìṣàkóso E. coli yẹ kí ó dàgbà dáadáa pẹ̀lú àwọ̀ búlúù-dúdú àti dídán, àpẹẹrẹ ìṣàkóso tí kò ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n yẹ kí ó dàgbà láìní àwọ̀, àpẹẹrẹ ìṣàkóso ìdènà sì yẹ kí ó fi ìdàgbàsókè díẹ̀ hàn tàbí kí ó má dàgbà rárá. Bí àpẹẹrẹ ìṣàkóso ìdènà bá dàgbà dáadáa, ìgbésẹ̀ yíyan ti kùnà, gbogbo àbájáde mìíràn láti inú ìpele ìpèsè yẹn sì jẹ́ èyí tí a gbọ́dọ̀ tún yẹ̀ wò. Àwọn ọ̀nà fífi àwọ̀ sí àpẹẹrẹ ń dáhùn ìbéèrè mìíràn ju àwọn ohun èlò ìdàgbàsókè lọ; fún apá yàrá tí ó kan fífi àwọ̀ sí àpẹẹrẹ lórí gíláàsì, wo àkójọpọ̀ àwòrán fífi àwọ̀ methylene blue sí àpẹẹrẹ.

Ìfiwéra tí ó ní ààlà

Gbólóhùn mẹ́ta ṣàkótán àwọn ìrísí tí ó lè mú kí a ṣìnà. Àwọ̀ dúdú kò túmọ̀ sí E. coli, nítorí pé Klebsiella, Enterobacter, àti àwọn mìíràn tí ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n lè ní àárín dúdú láìsí dídán. Àwọ̀ pupa fẹ́ẹ́rẹ́ kò túmọ̀ sí Klebsiella, nítorí pé àwọn tí ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n ní ìwọ̀ntúnwọ̀nsì tàbí díẹ̀díẹ̀ àti àwọn kan tí a sábà ń pè ní àwọn tí kò ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n lè jẹ́ aláwọ̀ pupa fẹ́ẹ́rẹ́ tàbí pópọ̀ fẹ́ẹ́rẹ́. Dídán kò fi ìdí E. coli múlẹ̀ ní pàtó, nítorí pé àwọn mìíràn tí ń ṣe fámẹ́ńtéṣọ̀n lọ́pọ̀lọpọ̀ lè mú un jáde. Ìlànà ẹ̀kọ́ àti àwọn àwòrán rẹ̀ ti ìdàgbàsókè àdàpọ̀ fi ọ̀kọ̀ọ̀kan àwọn àṣìṣe wọ̀nyí hàn.

Ààlà ìmúdájú

Agar EMB ń sọ àbùdá tí a lè rí, kì í ṣe ẹ̀yà. Àwọn ohun alààyè kéékèèké tí ó yàtọ̀ lè ní ìrísí ìṣùpọ̀ kan náà, ohun alààyè kéékèèké kan náà sì lè yàtọ̀ sí àwòrán rẹ̀ nínú ìwé ẹ̀kọ́ nítorí ìran, ọjọ́ orí, bí àwọn ìṣùpọ̀ ṣe kún pọ̀, àdàlù, àti ipò ìdàgbàsókè. Ìdí nìyẹn tí àwọn ìlànà iṣẹ́ ẹ̀kọ́ àti ìṣègùn fi ń ka ìrísí EMB sí àmì àkọ́kọ́ tí kò tíì jẹ́ ìmúdájú.

Ìlànà iṣẹ́ akẹ́kọ̀ọ́ tí ó dúró lórí ẹ̀rí ni: ṣàpèjúwe ìṣùpọ̀ tí a yà sọ́tọ̀ (bí ó ṣe tó, àwọ̀, àárín, dídán lábẹ́ ìmọ́lẹ̀ tí ó wọ̀ láti ẹ̀gbẹ́, àbùdá bí imú), kọ àdàlù, àkókò àti ìwọ̀n otútù ìdàgbàsókè, àti àwọn àpẹẹrẹ ìṣàkóso sílẹ̀; lẹ́yìn náà, tún ìṣùpọ̀ tí ó yà sọ́tọ̀ dáadáa dàgbà sínú ohun èlò tuntun kí ó má ní àdàpọ̀ mọ́ kí o tó ṣe ìdánwò ìmúdájú èyíkéyìí. Àwọn ìgbésẹ̀ àtẹ̀lé tí ó wọ́pọ̀ ní fífi àwọ̀ Gram sí àpẹẹrẹ pẹ̀lú àwọn ìṣesí IMViC fún ìdánimọ̀ àkọ́kọ́ ti E. coli àti coliform, TSI tàbí KIA àti àkójọpọ̀ ìdánwò ìṣesí kẹ́míkà ohun alààyè tí ó bá ohun alààyè kéékèèké pàtó mu fún àwọn ohun alààyè kéékèèké inú ìfun, pẹ̀lú ìdánimọ̀ nípa ìṣesí inú ẹ̀jẹ̀, MALDI TOF, tàbí àwọn ọ̀nà ìdánimọ̀ mìíràn tí a ti fọwọ́ sí níbi tí iṣẹ́ náà bá nílò rẹ̀. Fún àlàyé ìpìlẹ̀ nípa ipò EMB láàárín àwọn ohun èlò ìdàgbàsókè fún ohun alààyè kéékèèké inú ìfun tí ń yan tí ó sì ń fi ìyàtọ̀ hàn, wo àwọn ìfáárà sí ohun èlò ìdàgbàsókè fún ohun alààyè kéékèèké inú ìfun àti ìgbésẹ̀ àtẹ̀lé fífi àwọ̀ Gram sí àpẹẹrẹ. Fún ìbéèrè tí ó jọ èyí nípa ohun tí àwọ̀ búlúù lórí àpẹẹrẹ gíláàsì lè fi ìdí rẹ̀ múlẹ̀ àti ohun tí kò lè fi ìdí rẹ̀ múlẹ̀, àkójọpọ̀ àwòrán fífi àwọ̀ methylene blue sí àpẹẹrẹ ya ohun tí a rí sọ́tọ̀ kúrò ní ìpinnu lọ́nà kan náà.

Kọ ohun tí a rí sílẹ̀ kí o tó kọ ìpinnu. "Àwọn ìṣùpọ̀ búlúù-dúdú pẹ̀lú dídán aláwọ̀ ewé tí ó sinmi lórí igun tí a fi ń wò ó lórí Levine EMB ní 24 wákàtí, tí ó bá fámẹ́ńtéṣọ̀n lactose tí ó lágbára mu" jẹ́ gbólóhùn tí ó dúró lórí ẹ̀rí. "E. coli, a ti fìdí rẹ̀ múlẹ̀" nílò ìgbésẹ̀ ìmúdájú tí àwo nìkan kò lè pèsè.