אַרטיקל
נײַ מעטילען־בלוי און רעטיקולאָציט־פֿאַרבן: אַ באַזונדערער פֿאַרבשטאָף און אַ מעטאָד פֿאַר לעבעדיקע צעלן
אַ סטודענט גרייט זיך צו ציילן רעטיקולאָציטן, באַשטעלט מעטילען־בלוי, מישט עס מיט בלוט און זעט כּמעט גאָרנישט. אַ מיטסטודענט ניצט אַ פֿלעשל מיטן אָנשריפֿט נײַ מעטילען־בלוי און באַקומט שאַרפֿע בלויע פֿילאַמענטן אין אַ טייל פֿון די רויטע בלוטצעלן. דער ערשטער סטודענט נעמט אָן אַז דאָס צווייטע פֿלעשל איז פֿרישער אָדער מער קאָנצענטרירט. עס איז ניט דאָס און ניט יענץ. עס אַנטהאַלט אַן אַנדער מאָלעקול.
דאָס איז דער באַגריפֿלעכער טעות וואָס שטייט הינטער ס׳רובֿ צעמישענישן אין דעם געביט. דער נאָמען לאָזט מיינען אַז נײַ מעטילען־בלוי איז אַ פֿאַרבעסערטע פּאַרטיע מעטילען־בלוי. די כעמיע זאָגט אָבער אַנדערש. נײַ מעטילען־בלוי N איז אַ באַזונדערער פֿענאָטיאַזין־פֿאַרבשטאָף מיט אַן אייגענעם Colour Index־נומער, אַן אייגענעם סובסטיטוציע־מוסטער און אַן אייגענער סטאַנדאַרדיזירטער ראָלע אין העמאַטאָלאָגיע. ווען דער אונטערשייד איז קלאָר, ווערט דער רעשט פֿונעם מעטאָד גרינג צו פֿאַרשטיין: פֿאַר וואָס די צעלן מוזן זײַן לעבעדיק בשעתן פֿאַרבן, וואָס ווערט גערעכנט ווי אַ רעטיקולאָציט, וווּ הײַנץ־קערפּערלעך פּאַסן אַרײַן און ווען בריליאַנט קרעזיל־בלוי קומט אין באַטראַכט.
דער קורצער ענטפֿער
נײַ מעטילען־בלוי N, דער העמאַטאָלאָגישער רעאַגענט, ווערט בדרך־כּלל אידענטיפֿיצירט ווי Basic Blue 24 אינעם PubChem־רעקאָרד פֿאַר נײַ מעטילען־בלוי, C.I. 52030, CAS 1934-16-3, מיט דער פֿאָרמולע C18H22ClN3S. געוויינטלעכער מעטילען־בלוי איז מעטילטיאָניניום־כלאָריד, Basic Blue 9, אין זײַן PubChem־רעקאָרד, C.I. 52015, CAS 61-73-4, מיט דער פֿאָרמולע C16H18ClN3S. אין זײַן סטרוקטור האָט נײַ מעטילען־בלוי צוויי מעטיל־גרופּעס אויפֿן רינג און עטילאַמינאָ־זײַטקייטן אויף די ערטער וווּ מעטילען־בלוי האָט דימעטילאַמינאָ־גרופּעס. דער אונטערשייד ענדערט דאָס פֿאַרב־אויפֿפֿירן. העמאַטאָלאָגישע טעקסטן באַשרײַבן געוויינטלעכן מעטילען־בלוי ווי אַ רעלאַטיוו שוואַכן רעטיקולאָציט־פֿאַרבשטאָף, און נײַ מעטילען־בלוי ווי טיפֿער און מער איינהייטלעך פֿאַרבנדיק; דער פֿאַרגלײַך ווערט צונויפֿגעפֿאַסט אין דער ScienceDirect־טעמע וועגן נײַ מעטילען־בלוי.
יאָ, נײַ מעטילען־בלוי איז אַ סופּראַוויטאַלער פֿאַרבשטאָף. סופּראַוויטאַל פֿאַרבן מיינט פֿאַרבן לעבעדיקע צעלן נאָכן אַרויסנעמען זיי פֿונעם קערפּער און פֿאַר דער פֿיקסאַציע, לויט דער דעפֿיניציע אין דער NCBI־איבערבליק פֿון די פּרינציפּן פֿון סופּראַוויטאַלן פֿאַרבן. סײַ נײַ מעטילען־בלוי סײַ בריליאַנט קרעזיל־בלוי געהערן צו דער קאַטעגאָריע, און דער CLSI־רעטיקולאָציט־סטאַנדאַרט באַהאַנדלט בפֿירוש נײַ מעטילען־בלוי ווי אַ סופּראַוויטאַלן פֿאַרבשטאָף. סטודענטן שטעלן דאָס טייל מאָל אין דער זעלבער קאַטעגאָריע ווי ראָמאַנאָווסקי־פֿאַרבן פֿון פֿיקסירטע אויסשמירונגען. דער געדאַנק־מאָדעל אַרבעט דאָ נישט. פֿיקסירט מען ערשט, הערט דער מעטאָד אויף צו אַרבעטן.
פֿאַר לייענער וואָס פֿאַרגלײַכן ענלעכע פֿאַרבשטאָף־נעמען, באַהאַנדלט מעטיל־בלוי קעגן מעטילען־בלוי אַן אַנדערע און גרעסערע צעמישעניש צווישן אַן אַניאָנישן טריאַרילמעטאַן־פֿאַרבשטאָף און דער קאַטיאָנישער פֿענאָטיאַזין־משפּחה. דער איבערבליק פֿון לאַבאָראַטאָרישן פֿאַרבן שטעלט סופּראַוויטאַלע אַרבעט אין קאָנטעקסט פֿון מעטאָדן מיט פֿיקסירטע אויסשמירונגען, און דער וועגווײַזער צו דער מאָרפֿאָלאָגיע פֿון בלוטצעלן ווײַזט וווּ די אָפּשאַצונג פֿון רעטיקולאָציטן פּאַסט אַרײַן אינעם ברייטערן דיפֿערענציאַלן בלוטציילן.
| רעאַגענט | אידענטיטעט | C.I. / CAS | ראָלע אין דער אַרבעט מיט רעטיקולאָציטן |
|---|---|---|---|
| נײַ מעטילען־בלוי N | עטילאַמינאָ־פֿענאָטיאַזין מיט צוויי מעטיל־גרופּעס אויפֿן רינג | C.I. 52030 (Basic Blue 24); CAS 1934-16-3 פֿאַרן כלאָריד | סטאַנדאַרדיזירטער מאַניועלער סופּראַוויטאַלער פֿאַרבשטאָף, דער בילכער פֿאַרגלײַכס־רעאַגענט |
| געוויינטלעכער מעטילען־בלוי | ביס(דימעטילאַמינאָ)־פֿענאָטיאַזין (מעטילטיאָניניום־כלאָריד) | C.I. 52015 (Basic Blue 9); CAS 61-73-4 | שוואַכער רעטיקולאָציט־פֿאַרבשטאָף, נישט קיין פֿאַרבײַט |
| בריליאַנט קרעזיל־בלוי | אָקסאַזין־פֿאַרבשטאָף, די פֿאָרמולאַציע בײַט זיך לויטן צושטעלער | C.I. 51010; CAS 81029-05-2 אָדער 10127-36-3 לויט דער זאַלץ־פֿאָרעם | פּאַסיקער סופּראַוויטאַלער פֿאַרבשטאָף, ווייניקער איינהייטלעך, נישט דער האַרמאָניזירטער פֿאַרגלײַכס־רעאַגענט |
איין וואָרענונג וועגן קאַטאַלאָגן: עס עקזיסטירט אַ באַזונדערע צינק־כלאָריד־טאָפּלזאַלץ־פֿאָרעם פֿון נײַ מעטילען־בלוי אונטער CAS 6586-05-6. דער מעטאָדן־אָפּטייל זאָל דערפֿאַר אָנגעבן די זאַלץ־פֿאָרעם און דעם צושטעלער, נישט נאָר דעם געוויינטלעכן נאָמען.
וואָס סופּראַוויטאַל פֿאַרבן טוט אין דער אמתן
אַ רעטיקולאָציט איז אַ יונגע רויטע בלוטצעל וואָס האָט פֿאַרלוירן איר קערן, אָבער האַלט נאָך איבער רעשטלעך פֿון ריבאָסאָמאַלער RNA. אין אַן אומגעפֿאַרבטן נאַסן פּרעפּאַראַט איז די RNA נישט קענטיק. דער סופּראַוויטאַלער פֿאַרבשטאָף דרינגט אַרײַן אין דער לעבעדיקער צעל און שלאָגט אַרויס אָדער פֿאַרזאַמלט די RNA אין בלויע גראַנולן און פֿילאַמענטן — דאָס נעץ־ און פֿאָדעם־פֿאָרמיקע מאַטעריאַל וואָס מע זעט אונטער בוימל־אימערסיע. די נעץ איז דערפֿאַר אַ פּראָדוקט פֿונעם פֿאַרבן, נישט קיין פֿריִער געשאַפֿענער סקעלעט וואָס וואַרט אויף קאָליר. דערפֿאַר זענען די פּראָטאָקאָל־וואַריאַבלען — פֿאַרבשטאָף־קאָנצענטראַציע, פּופֿער, פֿאַרהעלטעניש פֿון בלוט צו פֿאַרבשטאָף, טעמפּעראַטור און צײַט — אַזוי וויכטיק ווי דער נאָמען פֿונעם פֿאַרבשטאָף.
די פּראַקטישע מסקנא איז אַ שטרענגער סדר פֿון אָפּעראַציעס: ערשט מישן אַנטיקאָאַגולירט בלוט מיט פֿאַרבשטאָף, דערנאָך אינקובירן, און ערשט דאַן מאַכן אויסשמירונגען און זיי באַטראַכטן אָן פֿיקסאַציע און אָן קעגנפֿאַרבן. פֿיקסאַציע פֿאַרן פֿאַרבן, אָדער קעגנפֿאַרבן וואָס פֿאַרדעקט שוואַכע פֿילאַמענטן, צעשטערט די אינפֿאָרמאַציע אויף וועלכער דאָס ציילן באַזירט זיך.
אַ פּראַקטישער רעטיקולאָציט־פּראָטאָקאָל מיט נײַ מעטילען־בלוי
עס איז נישטאָ קיין איינציקע אוניווערסאַלע פֿאָרמולאַציע, אַזוי אַז מע דאַרף אָנגעבן די געניצטע. דרײַ דאָקומענטירטע וואַריאַנטן ווײַזן די ברייט פֿון די מעגלעכקייטן.
די קלאַסישע ברעכער־פּראָצעדור ניצט בערך 0.5 פּראָצענט נײַ מעטילען־בלוי מיט קאַליום־אָקסאַלאַט, געמישט אין גלײַכע באַנדן מיט גוט געמישטן EDTA־בלוט און אינקובירט בערך 10 ביז 15 מינוט בײַ צימער־טעמפּעראַטור. נאָך אַ מילדן איבערמישן גרייט מען דינע קייל־פֿאָרמיקע אויסשמירונגען, טריקנט זיי אין דער לופֿט און באַטראַכט זיי אָן פֿיקסאַציע אונטערן 100x בוימל־אָביעקטיוו. די NCBI־פּראָצעדור פֿאַר רעטיקולאָציט־ציילן באַשרײַבט דעם אַרבעטסגאַנג און דעם צייל־ראַם וואָס מע ניצט דערבײַ.
די דייסי־און־לויִס־וואַריאַנט ניצט 1.0 פּראָצענט נײַ מעטילען־בלוי אין אַ ציטראַט־זאַלצלייזונג, געמישט מיט 2 ביז 4 באַנדן בלוט און געהאַלטן בײַ 37 C במשך 15 ביז 20 מינוט איידער מע מאַכט אויסשמירונגען. אַ לעצטיקע האַרמאָניזירונג־אימפּלעמענטאַציע פֿון דער CLSI H44־פּראָצעדור האָט געניצט אַ ווייניקער קאָנצענטרירטע לייזונג פֿון 0.1 פּראָצענט אין פֿאָספֿאַט־געפּופֿערטער זאַלצלייזונג בײַ pH 7.4, מיט אינקובאַציע בײַ 20 C במשך 10 מינוט און אָן פֿיקסאַציע, ווי געמאלדן אין דער 2026 NMB־האַרמאָניזירונג־שטודיע.
די צייל־כּללים זענען די זעלבע אין אַלע וואַריאַנטן. רעכנט אַ צעל ווי אַ רעטיקולאָציט ווען זי אַנטהאַלט כאָטש צוויי באַזונדערע בלוי־געפֿאַרבטע גראַנולן אָדער פֿילאַמענט־סעגמענטן; דאָס שליסט אויס אַן איזאָלירטן פֿאַרבשטאָף־אָפּזאַץ. ציילט כאָטש 1,000 רויטע בלוטצעלן בײַ רוטינער אַרבעט און גיט אָן רעטיקולאָציטן ווי אַ פּראָצענט. בײַ נידעריקע פּראָצענטן פֿאָדערט די סטאַטיסטיק מער צעלן. אַן איבערבליק פֿון דער CLSI H44־מעטאָדאָלאָגיע באַמערקט אַז בײַ בערך 1 פּראָצענט רעטיקולאָציטן דאַרף מען אַרום 4,400 צעלן כּדי אַראָפּצוברענגען די צייל־וואַריאַציע צו 5 פּראָצענט, אין דער CLSI H44־איבערבליק בײַ De Gruyter. אַ מילער־אָקולאַרדיסק מאַכט גרויסע ציילונגען פּראַקטיש דורכפֿירלעך. פֿילטרירט דעם פֿאַרבשטאָף אָדער גרייט אים פֿריש צו, ווײַל אָפּזאַץ קען נאָכמאַכן גראַנולערע אײַנשליסונגען.
הײַנץ־קערפּערלעך אינעם זעלבן פּרעפּאַראַט
די זעלבע סופּראַוויטאַלע אויסשמירונג קען אויך ווײַזן הײַנץ־קערפּערלעך, וואָס זענען אַגרעגאַטן פֿון אָקסידירטן און דענאַטורירטן העמאָגלאָבין, נישט רעשטלעך פֿון RNA. אין פּרעפּאַראַטן מיט נײַ מעטילען־בלוי דערשײַנען זיי ווי רונדע קערפּערלעך, אָפֿט איינצלנע און נאָענט צו דער מעמבראַן, פֿאַרבנדיק זיך אַ לײַכטערן בלוי ווי דאָס נעץ־ און פֿאָדעם־פֿאָרמיקע מאַטעריאַל. זיי בלײַבן שלעכט אָפּגעהיט בײַ פֿיקסאַציע און קעגנפֿאַרבן, אַזוי אַז מע זאָל באַטראַכטן די אומפֿיקסירטע אויסשמירונג. אַ לעצטיקער פּראָטאָקאָל מיט 20 מיקראָליטער EDTA־בלוט און 20 מיקראָליטער 1 פּראָצענט נײַ מעטילען־בלוי, מיט 15 מינוט אינקובאַציע, האָט קוואַנטיפֿיצירט צעלן מיט הײַנץ־קערפּערלעך צווישן 250 עריטראָציטן, אין דער PMC־שטודיע וואָס באַשרײַבט די פּראָצעדור.
צוויי אונטערשיידן פֿאַרמײַדן פֿאַלשע אויסטײַטשונגען. ערשטנס, מעטיל־וויאָלעט און קריסטאַל־וויאָלעט פֿאַרבן הײַנץ־קערפּערלעך שטאַרקער ווי נײַ מעטילען־בלוי, ווי באַמערקט אין דער ScienceDirect־טעמע וועגן הײַנץ־קערפּערלעך. נײַ מעטילען־בלוי איז די באַקוועמע ברירה ווען מע שאַצט אָפּ רעטיקולאָציטן און הײַנץ־קערפּערלעך צוזאַמען, נישט דער שטאַרקסטער ספּעציאַליזירטער פֿאַרבשטאָף פֿאַר הײַנץ־קערפּערלעך. צווייטנס, HbH־אײַנשליסונגען בײַם אַלפֿאַ־טאַלאַסעמיע־טרייט שאַפֿן נאָכן סופּראַוויטאַלן פֿאַרבן אַ סך פֿײַנע פּינטלעך איבער דער צעל, בעת קלאַסישע הײַנץ־קערפּערלעך זענען ווייניקער, גרעסער און אָפֿט פֿאַרבונדן מיט דער מעמבראַן. פֿאַרבשטאָף־אָפּזאַץ איז דער דריטער נאָכמאַכער: ער ליגט מחוץ דעם פֿאָקאַלן פּלאַן פֿון די צעלן און בײַט זיך פֿון איין זעפֿעלד צום אַנדערן.
בריליאַנט קרעזיל־בלוי קעגן נײַ מעטילען־בלוי
ביידע פֿאַרבשטאָפֿן זענען סופּראַוויטאַלע פֿאַרבשטאָפֿן פֿאַר רעטיקולאָציטן, אָבער סטאַנדאַרדיזירונג גיט איינעם פֿון זיי דעם פֿאָרצוג. דער CLSI H44-A2־רעטיקולאָציט־מעטאָד, אַנטוויקלט צוזאַמען מיטן אינטערנאַציאָנאַלן ראַט פֿאַר סטאַנדאַרדיזירונג אין העמאַטאָלאָגיע און אויסגערעכנט אויף דער CLSI H44־סטאַנדאַרט־זײַט, באַשטימט פֿאַרבן פֿון EDTA־בלוט מיט נײַ מעטילען־בלוי ווי דעם מאַניועלן פֿאַרגלײַכס־מעטאָד. די קלאַסישע העמאַטאָלאָגישע לערע שטימט צו וועגן דעם אויסזען: נײַ מעטילען־בלוי גיט אַ טיפֿערע און מער איינהייטלעכע פֿילאַמענט־פֿאַרבונג, בעת בריליאַנט קרעזיל־בלוי בײַט זיך מער צווישן פּאַרטיעס און מוסטערן.
דער סטאַטוס דאַרף אָבער אַ באַגרענעצונג. די ICSH־ריכטליניע פֿאַר אָפּשאַצן אַנאַליזאַטאָרן נעמט אָן מאַניועלע מיקראָסקאָפּיע מיט נײַ מעטילען־בלוי ווי אַן אופֿן פֿאַר אַ רעפֿערענץ־פֿאַרגלײַך, אָבער באַשרײַבט זי ווי סוביעקטיוו און רעלאַטיוו אומפּינקטלעך; וווּ עס איז מעגלעך, גיט זי דעם פֿאָרצוג צו פֿלוס־ציטאָמעטרישע רעפֿערענץ־פּראָצעדורן. אַ פֿאַרגלײַך פֿון 100 מוסטערן אין 2022 האָט געפֿונען אַ קלענערע סיסטעמאַטישע אָפּווייכונג קעגן דעם געניצטן אַנאַליזאַטאָר מיט בריליאַנט קרעזיל־בלוי ווי מיט נײַ מעטילען־בלוי, ווי געמאלדן אין דעם PMC־פֿאַרגלײַך פֿון פֿאַרב־מעטאָדן. דער באַגרינדעטער סך־הכּל פֿאַר סטודענטן: ניצט נײַ מעטילען־בלוי ווי דעם סטאַנדאַרדיזירטן מאַניועלן פֿאַרגלײַכס־רעאַגענט, קאָנטראָלירט יעדן לאָקאַלן מעטאָד מיט בריליאַנט קרעזיל־בלוי קעגן אים אָדער קעגן אויטאָמאַטיזירטע מעטאָדן, און דערוואַרט אין ביידע פֿאַלן אַ ברייטערע שפּרייטונג פֿון רעזולטאַטן בײַ מאַניועלער מיקראָסקאָפּיע. עלטערע סטאַנדאַרדיזירונג־ליטעראַטור האָט אויך רעקאָמענדירט גערייניקטן Azure B ווי אַ כעמיש ריינערע אַלטערנאַטיוו, ווײַל געשעפֿטלעכע פֿאַרבשטאָף־פּאַרטיעס האָבן זיך אונטערגעשיידט, אין דער מאַרשאַל־שטודיע וועגן Azure B. דאָס דערקלערט פֿאַר וואָס די רעאַגענט־ריינקייט ווערט נאָך אַלץ דערמאָנט אין דיסקוסיעס וועגן מעטאָדן.
פֿאַרמײַדן די געוויינטלעכע טעותים
פֿיר טעותים זענען פֿאַראַנטוואָרטלעך פֿאַר ס׳רובֿ דורכגעפֿאַלענע פּרעפּאַראַטן. באַשטעלן געוויינטלעכן מעטילען־בלוי אַנשטאָט נײַ מעטילען־בלוי N ברענגט צו שוואַכער פֿאַרבונג צוליב דער כעמיע, נישט צוליב דער טעכניק. פֿיקסירן אָדער קעגנפֿאַרבן פֿאַרן אָפּשאַצן נעמט אַוועק דעם סופּראַוויטאַלן סיגנאַל. ציילן פֿאַרבשטאָף־אָפּזאַץ ווי גראַנולן פֿאַרגרעסערט דעם רעזולטאַט — אַ טעות וואָס דער צוויי־גראַנולן־כּלל און פֿילטרירטער פֿאַרבשטאָף פֿאַרמײַדן. ציילן צו ווייניק צעלן בײַ נידעריקע רעטיקולאָציט־פּראָצענטן גיט אַ צאָל וואָס זעט אויס פּינקטלעך, אָבער האָט ברייטע צוטרוי־גרענעצן. יעדער טעות האָט דעם זעלבן סימן: דער מיקראָסקאָפּיסט באַשולדיקט דעם מיקראָסקאָפּ פֿאַר עפּעס וואָס איז שוין באַשטימט געוואָרן אינעם רעאַגענט־שריט.