אַרטיקל

מעסטן די מיטאָכאָנדריאַלע ווירקונגען פֿון מעטילען־בלוי: זויערשטאָף, ATP און מעמבראַן־פּאָטענציאַל

מעסטן די מיטאָכאָנדריאַלע ווירקונגען פֿון מעטילען־בלוי: זויערשטאָף, ATP און מעמבראַן־פּאָטענציאַל

שטעלט אײַך פֿאָר, אַז אַ לאַבאָראַטאָריע לייגט צו מעטילען־בלוי צו מיטאָכאָנדריעס מיט געשטערטער רעספּיראַציע און זעט ווי דער זויערשטאָף־פֿאַרנוץ שטײַגט. דער נאַטירלעכער זאַץ וואָלט געווען, אַז דער פֿאַרבשטאָף האָט צוריקגעשטעלט די מיטאָכאָנדריאַלע פֿונקציע. דער זאַץ קען זײַן פֿאַלש. זויערשטאָף־פֿלוקס, ATP־סינטעז און מעמבראַן־פּאָטענציאַל זענען דרײַ באַזונדערע באַגריפֿן. זיי טיילן די זעלבע אָרגאַנעל אַזוי ווי אַ רעזערוו־קאָפּיע, סינכראָניזאַציע און טיילן מיט אַנדערע טיילן די זעלבע וואָלקן־טעקע: זיי זענען פֿאַרבונדן, אָבער פֿאָלגן פֿאַרשידענע כּללים. אויב מע פֿאַרמישט איינעם מיטן אַנדערן, פֿאַלט די אויסטײַטשונג דורך, אַפֿילו ווען יעדע מעסטונג איז טעכניש ריכטיק.

מעטילען־בלוי מאַכט אַזאַ פֿאַרמישונג מסתּמא, ווײַל ער נעמט אָנטייל אין דעם סיסטעם וואָס ער מעסט. ער גייט דורך רעדאָקס־ציקלען, נעמט אָן עלעקטראָנען פֿריִער אינעם וועג און גיט זיי אָפּ שפּעטער; ער איז אַ ליפּאָפֿילער קאַטיאָן וואָס זאַמלט זיך אָן אין ענערגיזירטע מיטאָכאָנדריעס; און ער איז אַ שטאַרק בלויע פֿאַרבינדונג וואָס אַבזאָרבירט און עמיטירט ליכט אין די זעלבע ספּעקטראַלע בענד ווי געוויינטלעכע זאָנדן. איין מעסט־רעזולטאַט קען נישט טראָגן דעם גאַנצן לאַסט. דער פֿאַרלאָזלעכער מוסטער, געוויזן אין די בודאַפּעשטער מיטאָכאָנדריאַלע שטודיעס, איז צו מעסטן זויערשטאָף־פֿלוקס צוזאַמען מיטן קורס פֿון ATP־סינטעז, מעמבראַן־פּאָטענציאַל און וואַסערשטאָף־פּעראָקסיד־באַפֿרײַונג, מיט פֿאַרבשטאָף־ספּעציפֿישע קאָנטראָלן בײַ יעדן שריט.

רעספּיראָמעטריע מעסט זויערשטאָף־פֿלוקס, נישט ענערגיע־פּראָדוקציע

הויך־רעזאָלוציע רעספּיראָמעטריע, סײַ מיטן Oroboros Oxygraph, סײַ מיטן Seahorse־אַנאַליזאַטאָר פֿון עקסטראַסעלולערן פֿלוקס, מעלדט איין זאַך: ווי גיך זויערשטאָף ווערט רעדוצירט. זי זאָגט נישט וויפֿל פּראָטאָנען זענען געפּאָמפּט געוואָרן אויף יעדן עלעקטראָן, וויפֿל גראַדיענט איז אויפֿגעהיט געוואָרן, אָדער צי ATP־סינטאַזע האָט אים גענוצט.

דער טערמינאָלאָגיע איז וויכטיק. אין איזאָלירטע מיטאָכאָנדריעס גיט סובסטראַט אָן ADP רעספּיראַציע פֿון פּראָטאָן־אויסרינען; סובסטראַט מיט אַ זעטיקנדיקער מאָס ADP גיט די קאַפּאַציטעט פֿון אָקסידאַטיווער פֿאָספֿאָרילאַציע; און טיטראַציע מיט אַן אָפּקאָפּלער גיט די מאַקסימאַלע קאַפּאַציטעט פֿון עלעקטראָן־טראַנספֿער. אין גאַנצע צעלן זענען די Seahorse־עקוויוואַלענטן באַזאַלע רעספּיראַציע, אָליגאָמיצין־סענסיטיווע ATP־פֿאַרבונדענע רעספּיראַציע, פּראָטאָן־אויסרינען, מאַקסימאַלע רעספּיראַציע באַשטימט דורך FCCP, און נישט־מיטאָכאָנדריאַלער זויערשטאָף־פֿאַרנוץ וואָס איז קעגנשטעליק צו ראָטענאָן צוזאַמען מיט אַנטימיצין. אָנרופֿן Seahorse־רעזולטאַטן שטאַט 3 און שטאַט 4 לײַט זיך אַ פּינקטלעכקייט וואָס די פּרעפּאַראַציע שטיצט נישט, ווי דער Agilent Mito Stress Test־ראַם מאַכט קלאָר.

מעטילען־בלוי צעברעכט דעם אינטויִטיוון פֿאַרבינד צווישן מער זויערשטאָף און מער ענערגיע. אין איזאָלירטע מיטאָכאָנדריעס פֿון מאַרמאָטקע־מוח האָט 100 nM ביז 1 uM פֿאַרבשטאָף פֿאַרגרעסערט דעם זויערשטאָף־פֿאַרנוץ אין רו מיט גלוטאַמאַט צוזאַמען מיט מאַלאַט, סוקצינאַט און אַלפֿאַ־גליצעראָפֿאָספֿאַט ווי סובסטראַטן, מיט אַן אויפֿשטײַג פֿון בערך 64 פּראָצענט בײַ אַלפֿאַ־גליצעראָפֿאָספֿאַט. אָבער ADP־סטימולירטע רעספּיראַציע אין געזונטע מיטאָכאָנדריעס איז געבליבן כּמעט אומגעביטן, לויט דער שטודיע פֿון איזאָלירטע מוח־מיטאָכאָנדריעס. ווײַל די רעספּיראַציע פֿון אויסרינען איז געשטיגן בעת דער ADP־סטימולירטער פֿלוקס איז געבליבן גלײַך, פֿאַלט דאָס אויסגערעכנטע רעספּיראַטאָרישע קאָנטראָל־פֿאַרהעלטעניש. דער פֿאַל מיינט נישט, אַז דער פֿאַרבשטאָף האָט געשעדיקט די מיטאָכאָנדריעס. ער מיינט, אַז דער פֿאַרבשטאָף האָט צוגעגעבן אַ זויערשטאָף־פֿאַרנוצנדיקן רעדאָקס־ציקל איבער דער נאָרמאַלער רעספּיראַציע. אַן אַסיי פֿון זויערשטאָף־פֿאַרנוץ מיט מעטילען־בלוי וואָס מעלדט נאָר דעם אויפֿשטײַג האָט געמאָסטן אמתע כעמיע און גאָרנישט געזאָגט וועגן ענערגיע־אויפֿהיטונג.

די עקספּערימענטן פֿון פֿונקציע־צוריקשטעלונג ווײַזן דעם זעלבן ריס אויף אַ גרעסערער סקאַלע. ווען קאָמפּלעקס I איז געווען בלאָקירט, איז זויערשטאָף־פֿלוקס צוריקגעקומען בערך דרײַפֿאַכיק, בעת ATP־סינטעז איז צוריקגעקומען בלויז בערך 1.5־פֿאַכיק. מער זויערשטאָף האָט דערגרייכט די עלעקטראָדע. ווייניקער דערפֿון האָט צוגעשטעלט ענערגיע פֿאַר ATP. יעדע טענה פֿון פֿאַרבעסערטער אָקסידאַטיווער פֿאָספֿאָרילאַציע דאַרף אויך די ATP־זײַט פֿון דער רעכענונג, אידעאַל אויסגעדריקט ווי אַ פֿאַרהעלטעניש פֿון ATP צו זויערשטאָף, מיט אַ בפֿירושדיקער דעפֿיניציע פֿונעם מחנה.

ATP־אַסייען מעסטן דעם סינטעז־קורס, וואָס די ATP־מאָס קען נישט פֿאַרבײַטן

אַן ATP־אַסיי ענטפֿערט אויף אַן אַנדער פֿראַגע: וויפֿל ATP ווערט געשאַפֿן אין אַ צײַט־איינהייט. אַ קינעטישער מעסט־רעזולטאַט — סײַ לומינעסצענץ פֿון לײַכטקאַפֿער־לוציפֿעראַזע נאָכגעפֿאָלגט איבער מינוטן, סײַ אַ געקאָפּלטער אַסיי מיט העקסאָקינאַזע און גלוקאָז־6־פֿאָספֿאַט־דעהידראָגענאַזע, געמאָסטן בײַ 340 nm — גיט אַ קורס. איין מעסטונג פֿון גאַנץ ATP בײַם ענדפּונקט גיט די פֿאַראַנענע מאָס, וואָס שפּיגלט אָפּ סינטעז מינוס פֿאַרנוץ און זאָגט אַליין ווייניק וועגן אָקסידאַטיווער פֿאָספֿאָרילאַציע.

די בודאַפּעשטער גרופּע האָט גענוצט דעם געקאָפּלטן ענזימאַטישן אופֿן מיט אונטערדריקטער אַדענילאַט־קינאַזע, און געפֿונען אַז מעטילען־בלוי בײַ 1 ביז 2 uM האָט באַשיידן, אָבער באַטײַטיק, פֿאַרגרעסערט ATP־פּראָדוקציע אין מיטאָכאָנדריעס באַהאַנדלט מיט ראָטענאָן און אין מיטאָכאָנדריעס באַהאַנדלט מיט אַנטימיצין. דאָס איז אַן אמתע פֿונקציע־צוריקשטעלונג, און זי איז טיילווײַז. די שטודיע פֿון TEGDMA־טאָקסיסיטעט האָט דערגרייכט דעם זעלבן טיפּ ענטפֿער אין אַן אַנדער מאָדעל: 5 mM פֿונעם דענטאַלן מאָנאָמער TEGDMA האָט אַראָפּגעבראַכט רעספּיראַציע פֿאַרבונדן מיט קאָמפּלעקס I פֿון בערך 286 צו 28 פֿלוקס־איינהייטן, און 2 uM פֿאַרבשטאָף האָט זי צוריקגעשטעלט צו בערך 86.

צוויי קאָנטראָלן זענען אומפֿאַרהאַנדללעך בײַ אַ פֿאַרביקן רעדאָקס־אַקטיוון פֿאַרבינדונג. ערשטנס, פֿירט דורכ אַ פּרוּוו מיט אָליגאָמיצין כּדי צו באַשטימען וויפֿל פֿון דער געמאָסטענער ATP־סינטעז איז אָפּהענגיק פֿון ATP־סינטאַזע. צווייטנס, פֿירט דורכ אַ צעל־פֿרײַען פּרוּוו פֿון צוריקגעפֿינען אַ צוגעגעבן קוואַנטיטעט, מיט אַ באַקאַנטער מאָס ATP, דעם גאַנצן רעאַגענט און די פּינקטלעכע פֿאַרבשטאָף־קאָנצענטראַציעס וואָס מע ניצט, לכל־הפּחות 0, 100 nM, 300 nM, 1 uM און 2 uM. דער פֿאַרבשטאָף קען אַבזאָרבירן עמיטירט ליכט, אינהיבירן דעם סיגנאַל־געבנדיקן ענזים אָדער ענדערן די רעדאָקס־כעמיע פֿונעם רעאַגענט, און אַלגעמיינע אנווײַזונגען פֿאַר לוציפֿעראַזע־אַסייען רעקאָמענדירן ביאָכעמישע קעגנפּרוּוון דווקא פֿאַר דעם טיפּ שטערונג. נעמט נישט אָן, אַז 1 uM איז פֿרײַ פֿון מעסט־אַרטיפֿאַקטן נאָר ווײַל פֿלואָרעסצענץ־אויסלעשונג איז געוויינטלעך שטאַרקער בײַ העכערע קאָנצענטראַציעס.

מעמבראַן־פּאָטענציאַל־זאָנדן מעסטן פֿאַרבשטאָף־פֿאַרשפּרייטונג, נישט פֿלוקס

סאַפֿראַנין O, TMRM און TMRE, ראָדאַמין 123 און JC-1 זענען אַלע קאַטיאָנען וואָס קענען דורכגיין מעמבראַנען. זיי זאַמלען זיך אָן אין דער נעגאַטיוו געלאָדענער מאַטריקס לויטן עלעקטראָכעמישן גלײַכגעוויכט, אַזוי אַז די פֿלואָרעסצענץ פֿון דער גאַנצער פּראָבע ווײַזט דעם פּאָטענציאַל אומדירעקט דורך דעם אָרט וווּ דער זאָנד געפֿינט זיך. קיינער פֿון זיי מעסט נישט ATP אָדער עלעקטראָן־פֿלוקס.

יעדער זאָנד האָט אַ פּרעפּאַראַציע וואָס פּאַסט אים בעסער. סאַפֿראַנין O פּאַסט צו איזאָלירטע מיטאָכאָנדריעס און פּערמעאַביליזירטע צעלן, געוויינטלעך אַרום 2 uM מיט עקסציטאַציע לעבן 495 nm און עמיסיע לעבן 585 nm. ער אַרבעט אין אַן אויסלעשונג־רעזשים, וווּ די אויפֿנאַמע ענדערט די פֿלואָרעסצענץ פֿון דער גאַנצער פּראָבע. TMRM און TMRE פּאַסן צו גאַנצע צעלן מיט נידעריקער נאַנאָמאָלאַרער לאָודינג אין אַ נישט־אויסלעשנדיקן רעזשים, וווּ דעפּאָלאַריזאַציע באַפֿרײַט דעם פֿאַרבשטאָף און די מיטאָכאָנדריאַלע פֿלואָרעסצענץ פֿאַלט; בײַ הויכער לאָודינג קען די ריכטונג פֿונעם סיגנאַל זיך איבערקערן דורך זעלבסט־אויסלעשונג. JC-1 גיט אַ באַקוועם פֿאַרהעלטעניש פֿון גרין צו רויט, אָבער איז אָפּהענגיק פֿון לאָודינג און מיטאָכאָנדריאַלער מאַסע, וואָס מאַכט אים שוואַכער פֿאַר קוואַנטיטאַטיווער אַרבעט ווי קערפֿאַל קאָנטראָלירטער TMRM. די אָפּוועגונגען ווערן צוזאַמענגעפֿאַסט אין אַן אָפֿט גענוצטער איבערבליק פֿון זאָנדן פֿאַרן מיטאָכאָנדריאַלן מעמבראַן־פּאָטענציאַל.

מעטילען־בלוי שטערט אָפּטיש דווקא בײַ די אַרבעט־קאָנצענטראַציעס. זײַנע אַבזאָרפּציע־בענד לעבן 600 ביז 665 nm דעקן זיך מיט דער רויטער עמיסיע פֿון זאָנדן, אַזוי אַז אינערלעכער־פֿילטער־עפֿעקטן, אויסלעשונג און אַבזאָרפּציע פֿון עקסציטאַציע־ליכט זענען אַלע מעגלעך. דער פֿאַרבשטאָף איז אויך אַ צווייטער ליפּאָפֿילער קאַטיאָן, וועמענס אייגענע פֿאַרשפּרייטונג ענדערט זיך מיטן פּאָטענציאַל וואָס מע מעסט. די פֿאַרטיידיקונג איז מער ווי איין אומאָפּהענגיקע מעסטונג צוזאַמען מיט בלאַנק־פּראָבן: דער זאָנד אַליין, דער פֿאַרבשטאָף אַליין, דער זאָנד מיט יעדער פֿאַרבשטאָף־קאָנצענטראַציע, גאַנצע דעפּאָלאַריזאַציע מיט FCCP ווי דער נול־רעפֿערענץ, און אידעאַל אַ צווייטער אָפּטיש אַנדערשאַרטיקער זאָנד. די שטודיע פֿון אומגיין קאָמפּלעקס III האָט געשאַפֿן דעם פּרעצעדענט דורך איבערחזרן די צוריקשטעלונג פֿונעם מעמבראַן־פּאָטענציאַל סײַ מיט סאַפֿראַנין O, סײַ מיט TMRM נאָך אינהיביציע מיט אַנטימיצין און מיקסאָטיאַזאָל, און באַקומען די זעלבע קוואַליטאַטיווע צוריקשטעלונג. איין אָפּטישער סיגנאַל־געבער איז אַן אָנווײַז. צוויי אומאָפּהענגיקע סיגנאַל־געבער זענען באַווײַזן.

דרײַ פּרעפּאַראַציעס, דרײַ פֿאַרשידענע פֿראַגעס

איזאָלירטע מיטאָכאָנדריעס, פּערמעאַביליזירטע צעלן און גאַנצע צעלן זענען נישט אויסטוישבאַרע סענסיטיוויטעט־אײַנשטעלונגען פֿון איין אַסיי. זיי זענען פֿאַרשידענע באַגריפֿן מיט פֿאַרשידענע אַרבעט־פּרינציפּן.

איזאָלירטע מיטאָכאָנדריעס היטן אויף די עלעקטראָן־טראַנספּאָרט־קייט, די אינערלעכע מעמבראַן און דעם אַפּאַראַט פֿון דער מאַטריקס, בעת מע נעמט אַוועק די פּלאַזמע־מעמבראַן, דעם ציטאָזאָל און די נעץ־אַרכיטעקטור. דאָס אַוועקנעמען איז דווקא דער ציל: סובסטראַטן, ADP, אינהיביטאָרן און פֿאַרבשטאָף־קאָנצענטראַציעס זענען פּינקטלעך באַשטימט, אַזוי אַז מע קען אידענטיפֿיצירן אַ באַשטימטן וועג. דער פּרײַז איז דער פֿאַרלוסט פֿון דער נאַטירלעכער סובסטראַט־צושטעלונג, סיגנאַליזאַציע און ענערגיע־פֿאָדערונג.

פּערמעאַביליזירטע צעלן האַלטן מיטאָכאָנדריעס אין אַ גרויסן טייל פֿון זייער צעל־אַרכיטעקטור, בעת זיי לאָזן פֿון דרויסן צוגעגעבענע סובסטראַטן און ADP דורכן געעפֿנטן פּלאַזמע־מעמבראַן. זיי זענען דאָס ריכטיקע מיטל צו אידענטיפֿיצירן אַ דעפֿעקט אין אַ סובסטראַט־וועג אינעם צעלישן קאָנטעקסט. איבעריקע פּערמעאַביליזאַציע שעדיקט די אויסערלעכע מעמבראַן, און ציטאָזאָלישע רעגולאַציע ווערט אויסגעוואַשן.

גאַנצע צעלן היטן אַלץ אויף: דעם פּלאַזמע־מעמבראַן־באַריער, ציטאָזאָלישע רעדוצירנדיקע שטאָפֿן, ענדאָגענעם סובסטראַט־טראַנספּאָרט, די מיטאָכאָנדריאַלע נעץ און די ATP־פֿאָדערונג. זיי זענען די נאָענטסטע צו פֿיזיאָלאָגיע און די ווײַטסטע פֿונעם מעכאַניזם, ווײַל די אויפֿנאַמע, רעדוקציע און אָפּגעזונדערטע אײַנזאַמלונג פֿונעם פֿאַרבשטאָף באַשטימען אַלע די עפֿעקטיווע מיטאָכאָנדריאַלע אויסשטעלונג.

די TEGDMA־שטודיע האָט בכּיוון גענוצט אַלע דרײַ ניוואָען: איזאָלירטע מוח־מיטאָכאָנדריעס פֿאַר צוריקשטעלן אָקסידאַציע און פּאָטענציאַל מיטן פֿאַרבשטאָף; פּערמעאַביליזירטע דענטאַלע פּולפּ־שטאַם־צעלן דער עיקר כּדי צו לאָקאַליזירן די שטערונג אין דער סובסטראַט־אָקסידאַציע פֿאַרבונדן מיט קאָמפּלעקס I; און גאַנצע שטאַם־צעלן פֿאַר דער פֿיזיאָלאָגישער נעץ־ווירקונג פֿון 2 uM פֿאַרבשטאָף אויף אונטערדריקטן זויערשטאָף־פֿאַרנוץ. פֿאַר לייענער וואָס פֿאַרגלײַכן מיטאָכאָנדריאַלע מעסט־רעזולטאַטן צווישן פּרעפּאַראַציעס, גיט דער באַגלייטנדיקער דערקלערונג־אַרטיקל וועגן דעם ווי מעטילען־בלוי באַוועגט עלעקטראָנען דורך דער רעספּיראַציע־קייט דעם הינטערגרונט פֿון די וועגן, און דער וועגווײַזער צום לייענען שטודיעס פֿון רעספּיראַציע מיט מעטילען־בלוי באַהאַנדלט די לאָגיק פֿון קאָנצענטראַציעס און אינהיביטאָרן.

קאָנטראָלן וואָס אַ רעדאָקס־אַקטיווער פֿאַרבשטאָף פֿאָדערט

אַ שטאָף וואָס גייט דורך רעדאָקס־ציקלען דאַרף אַ לענגערע קאָנטראָל־רשימה ווי אַ געוויינטלעכער אינהיביטאָר, ווײַל כעמיע פֿונעם פֿאַרבשטאָף אַליין קען נאָכמאַכן ביאָלאָגיע.

פֿאַר רעספּיראָמעטריע, פֿירט דורכ אַ קאַמער מיט בלויז פּופֿער צו מעסטן סיגנאַל־דריפֿט, אַ קאַמער מיט פּופֿער און פֿאַרבשטאָף אָן ביאָלאָגישן מאַטעריאַל, פֿאַרבשטאָף מיט יעדן עקסטראַסעלולערן רעדוצירנדיקן שטאָף וואָס איז פֿאַראַן אינעם אַסיי, און צום סוף ראָטענאָן צוזאַמען מיט אַנטימיצין כּדי צו באַשטימען נישט־מיטאָכאָנדריאַלן זויערשטאָף־פֿאַרנוץ אין גאַנצע צעלן. באַמערקט, אַז דער רעדוצירטער פֿאַרבשטאָף ווערט ווידער אָקסידירט דורך איבערגעבן עלעקטראָנען צו זויערשטאָף און שאַפֿן וואַסערשטאָף־פּעראָקסיד. דערפֿאַר שאַצט אַ בלאַנק־פּראָבע מיט בלויז פֿאַרבשטאָף אָן אַן עלעקטראָן־דאָנאָר צו נידעריק אָפּ דעם צעל־פֿרײַען זויערשטאָף־פֿאַרנוץ וואָס קומט פֿאָר ווען NADH אָדער NADPH ווערט פֿאַראַן.

פֿאַר וואַסערשטאָף־פּעראָקסיד, גיט דעם פֿאַרzug צו קאַליברירטן Amplex UltraRed צוזאַמען מיט כריין־פּעראָקסידאַזע אַנשטאָט נישט־סעלעקטיווע DCFDA־פֿאַרבשטאָפֿן, באַשטעטיקט מיט קאַטאַלאַזע, און פּרוּווט די אָפּהענגיקייט פֿון באַלײַכטונג, ווײַל דער פֿאַרבשטאָף איז אַ פֿאָטאָסענסיטיזאַטאָר. די שטודיע פֿון מוח־מיטאָכאָנדריעס האָט געפֿונען, אַז די פּעראָקסיד־באַלאַסטונג איז געשטיגן מער ווי פֿירפֿאַכיק שוין בײַ בלויז 100 nM פֿאַרבשטאָף, בעת די באַזײַטיקונג איז פּאַמעלעכער געוואָרן. פּעראָקסיד איז געשאַפֿן געוואָרן דירעקט דורכן רעדוצירטן פֿאַרבשטאָף אָן אַ סופּעראָקסיד־צווישןפּראָדוקט. פּרטים וועגן זאָנד־אויסקלײַב און ליכט־קאָנטראָלן געהערן צום באַגלייטנדיקן אַרטיקל וועגן מעסטן רעאַקטיווע זויערשטאָף־פֿאָרמען אין עקספּערימענטן מיט פֿאַרבשטאָפֿן, און די ברייטערע פֿראַגע ווען פּעראָקסיד דינט ווי אַ סיגנאַל און ווען ווי אַ באַלאַסטונג ווערט באַהאַנדלט צוזאַמען מיט צעלישן רעדאָקס־גלײַכגעוויכט און אַנטיאָקסידאַנט־טענות.

פֿאַר טענות וועגן אַ וועג, פּרוּווט ביידע אינהיביטאָר־ערטער פֿון קאָמפּלעקס III: אַנטימיצין A בײַם Qi־אָרט און מיקסאָטיאַזאָל בײַם Qo־אָרט, צוזאַמען מיט אַ קאָמפּלעקס IV־ענדפּונקט מיט ציאַניד. אַן עלטערע שטודיע פֿון מויזן־מוח האָט געמאָלדן, אַז דער פֿאַרבשטאָף האָט צוריקגעשטעלט רעספּיראַציע בלאָקירט מיט ראָטענאָן, אָבער נישט רעספּיראַציע בלאָקירט מיט אַנטימיצין. די שפּעטערדיקע שטודיע פֿון דרײַ מינים האָט אָבער געפֿונען טיילווײַזע צוריקשטעלונג מיט ביידע אינהיביטאָרן און באַווײַזן פֿון דירעקטער רעדוקציע פֿון ציטאָכראָם c. באַטראַכט דאָס אומגיין ווי קאָמפּאַטיבל מיט די נײַערע דאַטן, נישט ווי אַ פֿאַרענדיקטע פֿראַגע, ווײַל פֿאַרבשטאָף־קאָנצענטראַציע, אינהיביטאָר־אָרט, סובסטראַט־צושטאַנד און פֿאַרבשטאָף־פֿאַרשפּרייטונג ענדערן אַלע דעם באַאָבאַכטטן וועג.

מאַטריץ פֿאַר אַסיי־אויסקלײַב

ניצט די טאַבעלע צו קלײַבן די מעסטונג לויט דער פֿראַגע, נישט פֿאַרקערט.

ביאָלאָגישע פֿראַגעבעסטער אַסייפּרעפּאַראַציעהויפּט־קאָנטראָלגעוויינטלעכער פֿאַרמישנדיקער פֿאַקטאָר
שטעלט דער פֿאַרבשטאָף צוריק עלעקטראָן־פֿלוקס?זויערשטאָף־פֿאַרנוץ מיט Oroboros אָדער Seahorse, מיט אַ באַשטימטן סובסטראַט־ און אינהיביטאָר־פּראָטאָקאָלאיזאָלירטע מיטאָכאָנדריעס פֿאַר וועג־מאַפּירן; גאַנצע צעלן פֿאַר דער נעץ־ווירקונגזויערשטאָף־בלאַנק מיט בלויז פֿאַרבשטאָף; צום סוף ראָטענאָן צוזאַמען מיט אַנטימיציןרעדאָקס־ציקלען פֿאַרנוצן זויערשטאָף אָן צו שאַפֿן ATP
שטעלט דער פֿאַרבשטאָף צוריק ATP־סינטעז?קינעטישער קורס פֿון ATP־סינטעז, לוציפֿעראַזע אָדער אַ געקאָפּלטער ענזימאַטישער אַסייאיזאָלירטע מיטאָכאָנדריעס אָדער קאָנטראָלירטע פּערמעאַביליזירטע צעלןאָליגאָמיצין; צוריקגעפֿינען אַ צוגעגעבן באַקאַנטע מאָס ATP אין דער אנוועזנהייט פֿונעם פֿאַרבשטאָףאינהיביציע פֿונעם סיגנאַל־געבער און אָפּטישע אָפּשוואַכונג; פֿאַרמישן די ATP־מאָס מיטן קורס
איז די צוריקשטעלונג ענערגעטיש עפֿיציענט?פּאַראַלעלער זויערשטאָף־פֿלוקס און ATP־קורס; מעלדן ATP פּער זויערשטאָףאיזאָלירטע מיטאָכאָנדריעס אָדער פּערמעאַביליזירטע צעלןדי זעלבע סובסטראַטן און ADP בײַ ביידע מעסטונגעןפֿלוקס פֿון פֿאַרבשטאָף צו זויערשטאָף צו פּעראָקסיד פֿאַרגרעסערט דעם מחנה
שטעלט דער פֿאַרבשטאָף צוריק דעם מעמבראַן־פּאָטענציאַל?סאַפֿראַנין O אין איזאָלירטע מיטאָכאָנדריעס; TMRM מיט נידעריקער לאָודינג אין צעלן; אַ צווייטער זאָנד ווען מעגלעךצופּאַסן דעם זאָנד צו דער פּרעפּאַראַציעגאַנצע דעפּאָלאַריזאַציע מיט FCCP; ספּעקטראַלער סקאַן פֿון פֿאַרבשטאָף אַלייןאַבזאָרפּציע און אויסלעשונג לעבן 600 ביז 665 nm; פֿאַרענדערטע פֿאַרבשטאָף־פֿאַרשפּרייטונג
איז דער דעפֿעקט בײַ קאָמפּלעקס I?רעספּיראָמעטריע מיט גלוטאַמאַט צוזאַמען מיט מאַלאַט אָדער פּירווואַט צוזאַמען מיט מאַלאַט, אין פֿאַרגלײַך מיט סוקצינאַטאיזאָלירט אָדער פּערמעאַביליזירטראָטענאָן־רעפֿערענץ; פֿאַרגלײַך מיט סוקצינאַטדער פֿאַרבשטאָף גיט אַן אַלטערנאַטיוון וועג, אַזוי אַז קאָמפּלעקס I־אַקטיוויטעט קען אויסזען צוריקגעשטעלט ווען מע האָט אים טאַקע אומגעגאַנגען
איז דער דעפֿעקט בײַ קאָמפּלעקס III?רעספּיראָמעטריע מיט אַנטימיצין A און מיקסאָטיאַזאָל באַזונדער, צוזאַמען מיט פּאַראַלעלער פּאָטענציאַל־מעסטונגאיזאָלירטע מיטאָכאָנדריעסאינהיביטאָרן פֿון ביידע Qi־ און Qo־ערטער; קאָמפּלעקס IV־ענדפּונקטדער רעדאָקס־צושטאַנד פֿונעם פֿאַרבשטאָף און זײַן פֿאַרשפּרייטונג צווישן קאָמפּאַרטמענטן באַשטימען דעם וועג
פֿאַרגרעסערט דער פֿאַרבשטאָף די פּעראָקסיד־באַלאַסטונג?Amplex UltraRed צוזאַמען מיט פּעראָקסידאַזע, קאַליברירט; אַן אומאָפּהענגיקער סענסאָר אין צעלןצופּאַסן צו דער געשטעלטער פֿראַגעקאַטאַלאַזע; אָן פּעראָקסידאַזע; קאָנטראָל אין פֿינצטערניש קעגן ליכטדער פֿאַרבשטאָף אַליין גייט דורך רעדאָקס־ציקלען און פֿאָטאָסענסיטיזירט פּעראָקסיד־שאַפֿונג

די מינימאַלע איבערצײַגנדיקע טענה נוצט די זעלבע פֿאַרבשטאָף־קאָנצענטראַציעס, 100 nM, 300 nM, 1 uM און 2 uM, פֿאַר זויערשטאָף־פֿלוקס אונטער באַדינגונגען פֿון אויסרינען, ADP, אָליגאָמיצין און אָפּקאָפּלער; דעם קורס פֿון ATP־סינטעז; מעמבראַן־פּאָטענציאַל בעסער מיט צוויי זאָנדן; און קאַליברירטע פּעראָקסיד־באַפֿרײַונג מיט קאַטאַלאַזע און צעל־פֿרײַע קאָנטראָלן. מעלדט דעם פֿאַרבונדן גאַנצן זאַץ: זויערשטאָף־פֿלוקס צוזאַמען מיט ATP־קורס, ATP פּער זויערשטאָף, פּאָטענציאַל און פּעראָקסיד. יעדע איינע פֿון די צאָלן אַליין איז אַ מעסטונג וואָס זוכט נאָך אַ באַדײַט.