Loefflerning ishqoriy va polixrom metilen ko‘ki bo‘yoqlari haqida

Bo‘yash stolida yonma-yon uchta idish turishi mumkin, ularning har birida metilen ko‘kining biror turi yozilgan. Birida 1% suvli metilen ko‘ki deb yozilgan. Ikkinchisida Loefflerning ishqoriy metilen ko‘ki. Uchinchisida polixrom metilen ko‘ki. Ishga ko‘milgan xodim eng yaqin turganini oladi. Natijada surtma yo juda xira, yo haddan tashqari bir xil ko‘k, yo kutilmagan binafsha tuslarda bo‘yaladi va buning aybi namunaga yuklanadi.

Bu namuna muammosi emas, tarkib muammosi. Uchala eritmada o‘zaro yaqin bo‘yoqlar bor, ammo ular turli bo‘yash tamoyillariga asoslangan. Biri deyarli neytral pH dagi oddiy kationli bo‘yoq. Ikkinchisi ishqor yordamida bo‘yash ta’siri kuchaytirilgan o‘sha bo‘yoq. Uchinchisi esa endi bitta bo‘yoq emas, balki ataylab oksidlangan aralashma. Noto‘g‘risini ishlatsangiz, qo‘lingizdagi bo‘yash tamoyili o‘zgarib ketadi.

Qisqa javob

Oddiy suvli metilen ko‘ki asosiy mezondir: suvda taxminan 1% bo‘yoq bo‘lib, bakteriyalar morfologiyasi va umumiy mikroskopiya uchun oddiy kationli bo‘yoq sifatida ishlatiladi. Loefflerning ishqoriy metilen ko‘kida suv bilan suyultirilgan spirtli asosiy eritmaga oz miqdorda, aniq o‘lchangan suyultirilgan ishqor qo‘shiladi. Bu pH ni oshiradi va kationli bo‘yoqning bakteriyalardagi kislotali tuzilmalarga bog‘lanishini kuchaytiradi. Polixrom metilen ko‘ki esa ishqoriy muhitda oksidlash orqali ataylab yetiltirilgan metilen ko‘kidir. Shuning uchun idishda qoldiq metilen ko‘ki bilan birga demetillangan gomologlar (azure A, azure B, azure C), tionin va metilen binafshasi aralashmasi mavjud bo‘ladi; bu aralashma turli tuzilmalarni turli tuslarda bo‘yaydi.

Faqat bitta jumlani eslab qolsangiz: ishqoriylashtirish bo‘yash jadalligini, polixromlash esa bo‘yash ranglarini o‘zgartiradi.

Oddiy suvli metilen ko‘ki: taqqoslash mezoni

Eng sodda tarkib — suvda eritilgan metilen ko‘ki, odatda 1% w/v konsentratsiyada, ishqorsiz va oksidlashsiz. Rang beruvchi zarracha xlorid qarshi ioni bilan birga bo‘lgan metiltioniniy kationidir. Bu kichik, yassi fenotiazin bo‘yog‘i PubChem’ning metilen ko‘ki haqidagi qaydida metiltioniniy xlorid sifatida tavsiflangan. Kation bo‘lgani uchun u nuklein kislotalarning fosfat skeletlariga va bakteriya hujayra devorlaridagi kislotali guruhlarga bog‘lanib, och fon ustida hujayralarni ko‘k rangga bo‘yaydi.

Uning afzalligi — natijaning oldindan ma’lum bo‘lishi. Yadrolar va bakteriyalar ko‘k ko‘rinadi. Kontrast uncha kuchli emas. Xira ko‘rinadigan mikroorganizmlar sust bo‘yalishi mumkin; Loeffler aynan shu cheklovni bartaraf etishga intilgan. Ushbu eritma mansub bo‘lgan bakteriyalarni oddiy bo‘yash usullarining kengroq guruhi haqida bakteriyalarni oddiy bo‘yashga oid umumiy sharhga qarang. Bu yerda ham moddaning aynan qaysi ekanini tekshirish muhim: metil ko‘ki butunlay boshqa molekuladir, buni metil ko‘ki va metilen ko‘ki o‘rtasidagi farqlar tushuntiradi. Shuning uchun katalogdan faqat rang nomi bo‘yicha qidirish noto‘g‘ri bo‘yoq sinfini tanlashga olib kelishi mumkin.

Loefflerning ishqoriy metilen ko‘ki: o‘sha bo‘yoq, kuchliroq bo‘yash

Loefflerning klassik retseptida metilen ko‘kining spirtli asosiy eritmasi suvdagi suyultirilgan ishqor bilan aralashtiriladi. Darsliklardagi variantlarda 30 mL 95% etanolda 0.3 g bo‘yoq va 100 mL 0.01% suvli kaliy gidroksid eritmasi ko‘rsatiladi. Bunga teng muqobil variant — 30 mL to‘yingan spirtli metilen ko‘ki eritmasi, 100 mL distillangan suv va 1 mL 1% KOH. Natijada aniq ishqoriy pH ga ega, bo‘yoq miqdori taxminan 0.3% bo‘lgan ishchi eritma olinadi. Tijoriy variantlar ham shu tamoyilga asoslanadi; Thermo Fisher’ning mikrobiologik bo‘yoqlar katalogida Loefflerning ishqoriy metilen ko‘ki polixrom va suvli variantlar bilan bir qatorda, alohida qo‘llanish maqsadlariga ega alohida katalog mahsulotlari sifatida keltirilgan.

Asosiy ta’sir ishqorga bog‘liq. pH ning oshishi namunadagi karboksil va fosfat guruhlarini deprotonlaydi va manfiy zaryadli joylar zichligini oshiradi. Spirtli asosiy eritma esa bo‘yoqni to‘liq erigan holda saqlaydi, shuning uchun u bu joylarga monomer shaklida yetib boradi. Natijada bakteriyalar neytral suvli bo‘yoqqa qaraganda tezroq va jadalroq bo‘yaladi; odatiy bakteriologik surtmada tanish to‘q ko‘k tayoqchalar va kokklar ko‘rinadi. Bo‘yash odatda bir daqiqadan uch daqiqagacha davom etadi, so‘ng suv bilan chayiladi.

Klassik qo‘llanish holati — Loefflerning zardobli muhitida o‘stirilgan Corynebacterium diphtheriae: ular ingichka, ko‘pincha to‘qmoqsimon tayoqchalar bo‘lib, to‘plangan polifosfatdan iborat metaxromatik Babes-Ernst granulalari kuchli bo‘yaladi. Muhit va bo‘yoqning birga qo‘llanishi tarixiy asosga ega: ikkalasi ham bir bakteriolog nomi bilan bog‘liq, granulalarning kontrasti esa diagnostik jihatdan muhim natijadir. Difteriya bo‘yicha ishlardan tashqari, bu bo‘yoq kulturalardan tayyorlangan surtmalar uchun umumiy bakteriologik bo‘yoq sifatida, klinik surtmalarda Neisseria morfologiyasini ko‘rishda hamda Gram bo‘yash talab etilmagan, ammo oddiy suvli ko‘k bo‘yoq juda xira natija bergan holatlarda ishlatiladi. Bu monoxrom bo‘yoqdir. Barcha kislotali tuzilmalar ko‘kning biror tusiga kiradi. Protokol rang orqali farqlashni talab qilsa, faqat ishqorning o‘zi buni ta’minlay olmaydi.

Bitta amaliy ogohlantirish: ishqoriy bo‘yoq eritmalari saqlash davomida va karbonat angidridni yutganda buziladi hamda cho‘kma hosil qiladi. Laboratoriyalar har bir predmet oynasiga cho‘kma tushiradigan eski idishni ishlataverish o‘rniga, kichik hajmlarda eritma tayyorlaydi yoki katalogdagi tayyor eritmani sotib olib, uning yaroqlilik muddatiga rioya qiladi.

Polixrom metilen ko‘ki: bitta nom, bir nechta bo‘yoq

Polixrom metilen ko‘ki ham o‘sha bo‘yoqdan boshlanadi, ammo u ishqoriy muhitda nazoratli oksidlanishga duchor qilinadi. Tarixan bu jarayon yetiltirish yoki polixromlash deb atalgan. Ishqoriy muhitda saqlash, karbonat bilan qizdirish yoki dixromat kabi moddalar yordamida oksidlash dimetilamino o‘rinbosarlardan metil guruhlarini bosqichma-bosqich ajratadi. Natija aralashmadir: qoldiq metilen ko‘ki, azure B (bitta metil guruhi yo‘qolgan), azure A va azure C (yanada demetillangan), tionin (to‘liq demetillangan) hamda metilen binafshasi oilasiga mansub oksidlanishning yon mahsulotlari. Har bir tarkibiy qism o‘z tusiga va to‘qimalarga bog‘lanish moyilligiga ega, shuning uchun aralashma metaxromatik bo‘yaydi: yadrolar, granulalar, mutsinlar va tog‘ayning har biri ko‘kdan qizg‘ish-binafshagacha bo‘lgan o‘ziga xos tuslarni oladi.

Bu kimyo mashhur qon bo‘yoqlarining asosida yotgan kimyo bilan bir xil. Dastlabki tadqiqotchilar ishqoriylashtirilgan metilen ko‘ki bezgak parazitlari yadrolarini binafsha tuslarda bo‘yashini aniqlagan, ammo ularning suvli yetiltirilgan eritmalari beqaror bo‘lib, bir necha kun ichida cho‘kma hosil qilgan. Binafsha qon bo‘yog‘i qanday ixtiro qilingani haqidagi sharh Malachowski va Romanowsky 1891-yilda bu ta’sirdan bir-biridan mustaqil ravishda qanday foydalanganini, bo‘yoq cho‘kmasini barqarorlashtirish va surtmalarni qizdirmasdan fiksatsiya qilish uchun metanol qanday joriy etilganini hamda keyinchalik Giemsa aniq o‘lchangan azure B va eozin asosidagi aralashmani glitserol bilan barqarorlashtirib, qanday standartlashtirganini bayon qiladi. Zamonaviy Giemsa turidagi bo‘yoqlar bevosita polixrom metilen ko‘ki va eozin birikmasidan kelib chiqqan; aynan shu birikma Romanowsky effektini hosil qiladi. Eozin bilan birikishi va azure B tarkibiy qismi haqida batafsil ma’lumot uchun Romanowsky turidagi bo‘yoqlar va azure B bilan eozinning o‘zaro ta’siri maqolasiga qarang.

Aralashma bo‘lgani sababli, polixrom metilen ko‘ki tabiatan uchala variant ichida eng kam standartlashtirilganidir. Uning aniq tuslar muvozanati oksidlash usuli va darajasiga bog‘liq. Shu bois gistologiya mahsulotlari yetkazib beruvchilari uni saqlab qo‘yilgan Loeffler eritmasi sifatida emas, balki o‘ziga xos ishlash sinovlaridan o‘tkaziladigan alohida mahsulot sifatida sotadi. Odatdagi qo‘llanishlar qatoriga mast hujayralar granulalari, mutsinlar va tog‘ayni metaxromatik ko‘rsatish, plazmatik hujayralar tafsilotlarini ko‘rish hamda Goodpasture turidagi polixrom usullar orqali to‘qima kesmalarida Helicobacter pylori ni ko‘rsatish kiradi. Maqsad rang orqali farqlash bo‘lsa, bu to‘g‘ri tanlov; protokol bakteriyalarning aniq monoxrom konturini talab qilsa, noto‘g‘ri tanlovdir.

Tarkib va qo‘llanish maqsadlarini taqqoslash

Jadvalni tanlash yo‘riqnomasi sifatida o‘qing. Namuna juda xira bo‘yalsa, pH yondashuvini o‘zgartiring va Loeffler bo‘yog‘ini tanlang. Hamma narsa bo‘yalsa-yu, hech narsa ajralib turmasa, bo‘yoq yondashuvini o‘zgartiring va polixrom variantni tanlang. Loeffler bilan bo‘yalgan surtmada granulalar juda yaxshi ko‘rinsa, ammo rahbar nima uchun yadrolar va sitoplazma bir xil ko‘k rangda ekanini so‘rasa, javob shuki: hech qanday ishqoriy monoxrom bo‘yoq ularni turli ranglarga ajrata olmaydi. Bu vazifa polixrom bo‘yoqlar oilasi va uning qonni bo‘yash uchun hosilalariga tegishlidir.

Odatdagi chalkashliklarning oldini olish

Chalkashliklarning ko‘pi ikki xatodan kelib chiqadi. Birinchisi — Loeffler bo‘yog‘i va oddiy metilen ko‘kini idishda ikkalasi ham ko‘k ko‘ringani uchun o‘zaro almashtiriladigan deb hisoblash. Ular pH va bo‘yash jadalligi bo‘yicha farqlanadi. Loeffler bo‘yog‘i belgilangan joyda neytral bo‘yoqni qo‘llash protokol aynan ko‘zda tutgan granulalar kontrastini yo‘qqa chiqaradi. Ikkinchisi — har qanday eski yoki tasodifan uzoq saqlangan ishqoriy ko‘k eritmani polixrom deb hisoblash. Nazoratsiz saqlash tarkibi va bo‘yash kuchi noma’lum aralashmani hosil qiladi, haqiqiy polixrom eritmalar esa belgilangan oksidlash usullari bilan tayyorlanadi va qon bo‘yoqlari oilasida aniq o‘lchangan eozin bilan birlashtiriladi. Bu borada tarix saboq beradi: 1890-yillardagi beqaror suvli yetiltirilgan eritmalar o‘rnini metanolli barqarorlashtirilgan tarkiblar egallagan, aynan chunki nazoratsiz aralashmalarni bir xil natija bilan qayta tayyorlab bo‘lmagan. Qancha vaqt saqlangani noma’lum idishdagi eritma bilan diagnostik preparatni bo‘yashdan oldin bu saboqni eslash arziydi.

Nomlarni aniq ajratish masalani yakunlaydi. Rangiga qarab taxmin qilish o‘rniga, yorliqdan katalog mahsulotini (suvli, Loeffler yoki polixrom), bo‘yoq miqdorini va mo‘ljallangan qo‘llanishni tekshiring. Uchala tarkibning xromofor asosi umumiy. Ammo maqsadi bir xil emas.