G6PD تەجرىبىخانا سىناقلىرىدىكى مېتىلېن كۆكى: بوياق ئەمەلىيەتتە نېمە قىلىدۇ؟

بىر ئوقۇغۇچى ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىن ئىككى سىناق نەيچىسىنى كۆزىتىدۇ. بىرى مۆلچەرلەنگەن رەڭگە كىرگەن، يەنە بىرى كىرمىگەن. ئوقۇغۇچى ئىككىنچى بىماردا گلۇكوزا-6-فوسفات دېھىدروگېنازا كەمچىل، دەپ يەكۈن چىقىرىدۇ. بۇ يەكۈن توغرا بولۇشى مۇمكىن، ئەمما بۇ خىل پىكىر يۈرگۈزۈش سىناقنىڭ ئىشلەش ئاساسى بولغان ئۇقۇمنى نەزەردىن ساقىت قىلىدۇ. نەيچىدىكى ھېچقانداق نەرسە ئېنزىمنى بىۋاسىتە ئۆلچىمەيدۇ. نەيچە مېتىلېن كۆكىنى ۋاسىتىچى قىلىپ، ئېنزىم ھاسىل قىلغان ماددىنى ئۆلچەيدۇ.

بۇ ۋاسىتىلىك ئۆلچەش ئۇسۇلى ئايدىڭلاشقاندىن كېيىن، سىناق تەرتىپى، كونترول ئەۋرىشكىلىرى ۋە خاتا نەتىجىلەرنىڭ ئۇزۇن تىزىملىكىنىڭ ھەممىسىنىڭ سەۋەبى بارلىقى چۈشىنىلىدۇ.

قىسقا جاۋاب

G6PD سىنىقىدا مېتىلېن كۆكى ئوكسىدلىنىش-قايتۇرۇلۇش كۆرسەتكۈچىدۇر. G6PD ئېنزىمى NADPH ھاسىل قىلىدۇ، NADPH قا تايىنىدىغان سىستېمىلار كۆك رەڭلىك مېتىلېن كۆكىنى ئۇنىڭ رەڭسىز لېيكو شەكلىگە قايتۇرىدۇ ياكى ئۇنى ئېلېكترون توشۇشقا ئىشلىتىدۇ. ئېنزىم ئاكتىپلىقى نورمال بولسا، قايتۇرۇلۇش ئۈنۈملۈك بولىدۇ. ئاكتىپلىق كەمچىل بولسا، قايتۇرۇلۇش ئاستا ياكى تولۇق بولمايدۇ. سىناقنىڭ پۈتكۈل سىگنالى مۇشۇ.

ئىككى تارىخىي ئۇسۇلدا ئوخشاش بوياق ئىشلىتىلىدۇ، ئەمما ئاخىرقى كۆزىتىش نۇقتىسى ئوخشىمايدۇ. بۇ ئىككىسىنى پەرقلەندۈرگەندە، كۆپ قىسىم قالايمىقانچىلىق يوقىلىدۇ.

ئىككى سىناق، بىر بوياق، ئوخشىمىغان ئاخىرقى كۆزىتىش نۇقتىلىرى

بىرىنچىسى مېتىلېن كۆكىنى بىۋاسىتە قايتۇرۇش سىنىقى بولۇپ، ئۇنى Sass ۋە خىزمەتداشلىرى تەسۋىرلىگەن، كېيىن Gibbs باھالىغان. بۇ يەردە ئاخىرقى كۆزىتىش نۇقتىسى بوياقنىڭ ئۆزىدۇر: ئوكسىدلانغان كۆك رەڭلىك مېتىلېن كۆكى رەڭسىز لېيكومېتىلېن كۆكىگە قاراپ قايتۇرۇلىدۇ، بۇ ئۆزگىرىشنىڭ سۈرئىتى NADPH ھاسىل قىلىش ئىقتىدارىنى ئەكس ئەتتۈرىدۇ. دەسلەپكى تەكشۈرۈشكە ئائىت ئاساسىي ماقالە PubMed دا Sass ۋە خىزمەتداشلىرى (1966) نامىدا تىزىمغا ئېلىنغان.

ئىككىنچىسى Brewer مېتگېموگلوبىن قايتۇرۇش سىنىقىدۇر. ئالدى بىلەن ناترىي نىترىت گېموگلوبىننى قوڭۇر رەڭلىك مېتگېموگلوبىنغا ئوكسىدلايدۇ. ئاندىن مېتىلېن كۆكى ئېلېكترون يۆتكەش ۋاسىتىچىسى سۈپىتىدە رول ئوينايدۇ: قايتۇرۇلغان مېتىلېن كۆكى قايتۇرغۇچى ئېكۋىۋالېنتلارنى مېتگېموگلوبىنغا يەتكۈزۈپ، ئۇنى قايتىدىن قىزىل رەڭلىك گېموگلوبىنغا ئايلاندۇرىدۇ. شۇڭا كۆز بىلەن كۆرۈلىدىغان ئاخىرقى پەرق كۆك بىلەن رەڭسىز ئوتتۇرىسىدا ئەمەس، بەلكى قوڭۇر بىلەن قىزىل ئوتتۇرىسىدا بولىدۇ. ئەسلى ئۇسۇل دۇنيا سەھىيە تەشكىلاتىنىڭ خەۋەرنامىسىدە (Brewer ۋە خىزمەتداشلىرى، 1960) ئېلان قىلىنغان.

Brewer سىنىقىنى بوياقنىڭ رەڭسىزلىنىش سىنىقى دېيىش خىمىيە جەھەتتىن ئېنىق ئەمەس. بوياق دەۋرىي ئۆزگىرىدۇ؛ رەڭ ئۆزگەرتىدىغىنى گېموگلوبىندۇر. تۆۋەندىكى دىئاگراممىدا ھەر ئىككى يول كۆرسىتىلگەن.

ئاساسىي رېئاكسىيە

G6PD پېنتوزا فوسفات يولىنىڭ بىرىنچى ئوكسىدلىنىش قەدىمىنى كاتالىزلايدۇ:

Glucose-6-phosphate + NADP+ becomes 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

Luzzatto ۋە خىزمەتداشلىرىنىڭ Blood ژۇرنىلىدىكى ئوبزورىدا (2020) بايان قىلىنغاندەك، يېتىلگەن قىزىل قان ھۈجەيرىلىرى NADPH ئۈچۈن بۇ يولغا كۈچلۈك تايىنىدۇ. NADPH گلۇتاتىيوننى قايتۇرۇلغان ھالەتتە ساقلاپ، ھۈجەيرىنى ئوكسىدلىنىش زىيىنىدىن قوغدايدۇ. مېتىلېن كۆكى بۇ سىستېمىغا ئېلېكترون قوبۇل قىلغۇچى سۈپىتىدە قاتنىشىدۇ. G6PD يېتەرلىك بولسا NADPH يېتەرلىك بولىدۇ، بۇ بولسا قايتۇرۇلۇشنىڭ ئۈنۈملۈك بولۇشىنى تەمىنلەيدۇ. G6PD تۆۋەن بولسا، زەنجىرنىڭ تۇنجى ھالقىسى ئۈزۈلىدۇ.

بوياقنى ماتور ئەمەس، يېقىلغۇ كۆرسەتكۈچى دەپ تەسەۋۋۇر قىلىڭ. ئۇ NADPH تەمىناتىنى كۆرسىتىدۇ. بۇ تەمىناتنى ياكى كۆرسىتىلگەن نەتىجىنى ئۆزگەرتىدىغان باشقا ھەر قانداق ئامىل گېندا ھېچقانداق ئۆزگىرىش بولمىسىمۇ كۆرسەتكۈچنى يۆتكىيەلەيدۇ.

Brewer تىپىدىكى سىناق قانداق ئېلىپ بېرىلىدۇ؟

رېئاكتىپ تەركىبلىرى نەچچە ئون يىل جەريانىدا ئۆزگىرىپ كەلگەن، شۇڭا ئوقۇتۇش ئۈچۈن بېرىلگەن تەسۋىرنى كىلىنىكىلىق سىناق تەرتىپى دەپ قاراشقا بولمايدۇ. ھەر بىر تەجرىبىخانا ئۆزىنىڭ دەلىللەنگەن ئۆلچەملىك مەشغۇلات تەرتىپىگە ئەمەل قىلىدۇ. مۇشۇ ئاگاھلاندۇرۇشنى كۆزدە تۇتقاندا، كلاسسىك نەيچە سىنىقى تۆۋەندىكىدەك ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ بۇ ئېلان قىلىنغان قوللىنىش مىسالىدا ئۇنىڭ ئۈچ نەيچە ۋە 3 سائەتلىك ئىنكۇباتسىيە شەكلى خاتىرىلەنگەن:

1. بىمار ئەۋرىشكىسى نەيچىسى: پۈتۈن قانغا گلۇكوزا، ناترىي نىترىت ۋە مېتىلېن كۆكى قوشۇلىدۇ. نىترىت مېتگېموگلوبىن ھاسىل قىلىدۇ، گلۇكوزا قىزىل قان ھۈجەيرىلىرىنىڭ مېتابولىزمىنى ئېنېرگىيە بىلەن تەمىنلەيدۇ، بوياق بولسا NADPH قا تايىنىدىغان ئېلېكترون توشۇش ۋاسىتىسىنى تەمىنلەيدۇ.
2. ئوكسىدلانغان كونترول ئەۋرىشكىسى: قانغا نىترىت ۋە گلۇكوزا قوشۇلىدۇ، ئەمما مېتىلېن كۆكى قوشۇلمايدۇ. ئۇ كەمچىللىك ئەندىزىسى بولغان قوڭۇر رەڭلىك مېتگېموگلوبىن ھالىتىنى كۆرسىتىدۇ.
3. گېموگلوبىن كونترول ئەۋرىشكىسى: قانغا سۇ قوشۇلىدۇ. ئۇ نورمال ئەندىزە بولغان قىزىل رەڭلىك گېموگلوبىن ھالىتىنى كۆرسىتىدۇ.
4. بارلىق نەيچىلەرنى 37 C ئەتراپىدا، ئادەتتە 3 سائەت، ئاستا ئارىلاشتۇرۇپ ئىنكۇباتسىيە قىلىڭ.
5. ھۈجەيرىلەرنى پارچىلاش ۋە رەڭنى سېلىشتۇرغىلى بولىدىغان قىلىش ئۈچۈن، ھەر بىر نەيچىدىن ئاز مىقداردا ئېلىپ دىستىللانغان سۇدا سۇيۇلدۇرۇڭ.
6. بىمار ئەۋرىشكىسى نەيچىسىنى ئىككى كونترول ئەۋرىشكىسى بىلەن سېلىشتۇرۇڭ. قىزىلغا قاراپ قايتىش كۆرۈنەرلىك قايتۇرۇش ئىقتىدارىنى بىلدۈرىدۇ. قوڭۇر ھالەتنىڭ ساقلىنىشى ئېغىر كەمچىللىكنى كۆرسىتىدۇ.

بىر تارىخىي تەركىبتە تەخمىنەن 1 mL قان بىلەن ناترىي نىترىت 180 mM، دېكستروزا 280 mM ۋە مېتىلېن كۆكى 0.4 mM ئەتراپىدىكى رېئاكتىپلار ئىشلىتىلگەن. بۇ سانلارنى ھەممە يەردە قوللىنىلىدىغان ئۆلچەم ئەمەس، بەلكى ئىلمىي ئەدەبىياتتىكى بىر مىسال دەپ قاراڭ.

نەتىجىنى چۈشەندۈرۈش

G6PD نى بايقاشتىكى بوشلۇقلار توغرىسىدىكى بۇ Malaria Journal ئوبزورىدا مۇھاكىمە قىلىنغاندەك، سۈپەتلىك دەسلەپكى تەكشۈرۈش نورمال ئاكتىپلىقنىڭ 30 دىن 40 پىرسەنتى ئەتراپىدا ئەڭ ياخشى پەرقلەندۈرىدۇ. شۇڭا دەسلەپكى تەكشۈرۈش نەتىجىسىنىڭ نورمال بولۇشى، سىناقنىڭ ئېغىر كەمچىللىكنى بايقىمىغانلىقىنى بىلدۈرىدۇ. ئۇ ئاكتىپلىقنىڭ تولۇق نورماللىقىنى ئىسپاتلىمايدۇ.

دەسلەپكى تەكشۈرۈش نېمە ئۈچۈن خاتا يەكۈنگە باشلايدۇ؟

گېمولىزدىن كېيىن رېتىكۇلوسىتلارنىڭ كۆپىيىشى نورمال دەپ خاتا چىقىشنىڭ تىپىك سەۋەبىدۇر. ياش قىزىل قان ھۈجەيرىلىرى ۋە رېتىكۇلوسىتلاردا كونا ھۈجەيرىلەرگە قارىغاندا G6PD كۆپرەك بولىدۇ. ئۆتكۈر گېمولىز مەزگىلىدە، ئەڭ كونا ۋە ئېنزىم ئەڭ كەمچىل ھۈجەيرىلەر ئاللىقاچان يوقىتىلغان بولۇشى مۇمكىن؛ قالغان ياش ھۈجەيرىلەر توپىنىڭ ئاكتىپلىقى سىناقتا نورمال چىقىدۇ. ئوخشاش بىئولوگىيەلىك ھادىسە پەقەت بوياقلىق دەسلەپكى تەكشۈرۈشلەرنىلا ئەمەس، مىقدارلىق سىناقلارنىمۇ خاتا نەتىجىگە ئېلىپ بارىدۇ.

يېقىندا قان قۇيۇلغان بولۇشى كەمچىللىكنى يوشۇرىدۇ، چۈنكى قان بەرگۈچىنىڭ قىزىل قان ھۈجەيرىلىرى ئەۋرىشكىگە ئۆزىنىڭ ئېنزىمىنى قوشىدۇ. Mayo Clinic تەجرىبىخانىلىرى قان قۇيۇشنى رېتىكۇلوسىتلارنىڭ كۆپىيىشى ۋە ئاق قان ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئارىلىشىشى بىلەن بىرگە، ئېنزىم نەتىجىلىرىنىڭ ئىشەنچسىز بولۇشىدىكى سەۋەبلەر قاتارىغا كىرگۈزىدۇ.

گېتېروزىگوت ئاياللار ئەڭ قىيىن ئەھۋالدۇر. X خروموسومىنىڭ تاسادىپىي ئاكتىپسىزلىنىشى نورمال ۋە ئېنزىم كەمچىل قىزىل قان ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئارىلاشمىسىنى ھاسىل قىلىدۇ، ئومۇمىي ئاكتىپلىق ئېغىر كەمچىللىكتىن كۆرۈنۈشتە نورمالغىچە بولغان ھەرقانداق دائىرىدە بولۇشى مۇمكىن. سۈپەتلىك دەسلەپكى تەكشۈرۈشلەر ئارىلىق فېنوتىپلارنى دائىم بايقىيالمايدۇ. دۇنيا سەھىيە تەشكىلاتىنىڭ G6PD سىنىقى توغرىسىدىكى ھۆججىتىدە بۇ چەكلىمە تەپسىلىي مۇھاكىمە قىلىنغان.

ئەۋرىشكىنىڭ ئېلىنغىنىغا قانچىلىك ۋاقىت بولغانلىقى، ساقلاش تېمپېراتۇرىسى، ئاخىرقى رەڭنى كۆز بىلەن باھالاشنىڭ سۇبيېكتىپلىقى، گېماتوكرىت ۋە رېئاكتىپ سۈپىتى بۇ بىئولوگىيەلىك تەسىرلەرنىڭ ئۈستىگە تەھلىلدىكى قوشۇمچە قالايمىقانچىلىقنى قوشىدۇ.

دەسلەپكى تەكشۈرۈش دىئاگنوز ئەمەس

كەمچىل، ئارىلىق ياكى كىلىنىكىلىق ئەھۋالغا ماس كەلمەيدىغان دەسلەپكى تەكشۈرۈش نەتىجىسى مىقدارلىق G6PD ئېنزىم سىنىقى ئېلىپ بېرىشنى تەلەپ قىلىدۇ. دۇنيا سەھىيە تەشكىلاتى تېمپېراتۇرىسى كونترول قىلىنىدىغان مىقدارلىق سپېكتروفوتومېتىرىيەنى پايدىلىنىش ئۇسۇلى دەپ قارايدۇ. بۇ سىناقتا قىزىل قان ھۈجەيرىلىرىنىڭ گېمولىزاتىغا گلۇكوزا-6-فوسفات ۋە NADP+ قوشۇلىدۇ، ھاسىل بولغان NADPH بولسا 340 nm دىكى نۇر سۈمۈرۈلۈشنىڭ ئېشىشى ئارقىلىق كۆزىتىلىدۇ. ئۆزگىرىش سۈرئىتى ئېنزىم ئاكتىپلىقىغا بىۋاسىتە نىسبەتلىك بولۇپ، ئادەتتە گېموگلوبىننىڭ ھەر گرامىغا توغرا كېلىدىغان بىرلىك سۈپىتىدە ئۆلچەملەشتۈرۈلىدۇ. ھازىرقى كىلىنىكىلىق تەجرىبىخانا ئەمەلىيىتى Mayo نىڭ سىناق مۇندەرىجىسىدىكى G6PD ئاكتىپلىقى بۆلىكىدە خۇلاسىلەنگەن.

نەتىجىنى چۈشەندۈرۈشتە تەجرىبىخانا دەلىللىگەن پايدىلىنىش دائىرىسى ئىشلىتىلىدۇ؛ بۇ دائىرە كۆپىنچە نوپۇسنىڭ نورمال ئاكتىپلىقىغا نىسبەتەن بەلگىلىنىدۇ. كەمچىللىك ئادەتتە 30 پىرسەنتلىك چەك ئەتراپىدا، ئارىلىق ئاكتىپلىق بولسا بۇ چەكتىن يۇقىرى دائىرىدە مۇھاكىمە قىلىنىدۇ. دۇنيا سەھىيە تەشكىلاتىنىڭ G6PD سىناقلىرى ئۈچۈن نىشانلىق مەھسۇلات ئارخىپلىرى (2022) بۇ دىئاگنوز رامكىسىنى بايان قىلىدۇ. يېقىندا يۈز بەرگەن گېمولىز ياكى قان قۇيۇش فېنوتىپ بەلگىلەشنى ئىشەنچسىز قىلغان بولسا، قىزىل قان ھۈجەيرىلىرى توپى قايتا تەڭپۇڭلاشقاندىن كېيىن سىناقنى تەكرارلاش كېرەك؛ مولېكۇلالىق سىناق ئېنزىم ئۆلچەشنىڭ ئورنىنى باسماستىن قوشۇمچە ئۇچۇر بېرەلەيدۇ.

ساقلاشقا تېگىشلىك بىر چېگرا

بۇ سىناقلاردىكى مېتىلېن كۆكى بەدەن سىرتىدا ئىشلىتىلىدىغان تەجرىبىخانا رېئاكتىپىدۇر. بۇ پاكىت مېتىلېن كۆكىنى بىمارغا بېرىشنىڭ بىخەتەرلىكى توغرىسىدىكى مۇھاكىمىدىن پەرقلىق بولۇپ، بىمارغا بېرىشنىڭ بىخەتەرلىكى مېتىلېن كۆكىنى ئىشلىتىشكە بولمايدىغان ئەھۋاللار توغرىسىدىكى كۆرسەتمىدە بايان قىلىنغان. دورىمۇ NADPH قا تايىنىدىغان قايتۇرۇلۇشقا ئېھتىياجلىق بولغاچقا، بىئوكىمىيە بۇ ئىككىسىنى باغلايدۇ؛ ئەمما سىناق نەيچىسىدىكى بوياق قان ئايلىنىشىغا كىرگۈزۈلگەن دورا مىقدارى ئەمەس. بوياقنىڭ باشقا مۇھىتتا بوياش ماددىسى سۈپىتىدە قانداق ھەرىكەت قىلىدىغانلىقى توغرىسىدا مېتىلېن كۆكى بىلەن بوياش پىرىنسىپلىرىغا، ئۇ تەۋە بولغان خىمىيەلىك ئائىلە توغرىسىدا بولسا تەجرىبىخانىدىكى ئوكسىدلىنىش-قايتۇرۇلۇش بوياقلىرىغا قاراڭ.

دەسلەپكى تەكشۈرۈش قايتۇرۇش ئىقتىدارى ساقلانغاندەك كۆرۈنەمدۇ، دېگەن سوئالنى سورايدۇ. جەزملەشتۈرۈش بولسا ئەمەلىيەتتە قانچىلىك ئېنزىم بارلىقىنى سورايدۇ. ھېچكىم بوياقتىن ئىككىنچى سوئالغا جاۋاب بېرىشنى تەلەپ قىلمىسىلا، ئۇ بىرىنچى سوئالغا ياخشى جاۋاب بېرىدۇ.