مېتىلېن كۆكى تەجرىبىلىرىدە رېئاكتىپ ئوكسىگېن تۈرلىرىنى ئۆلچەش

ئىككى تەجرىبىخانا ئۆزلىرى «مېتىلېن كۆكىنىڭ ئوكسىدلىنىشقا قارشى تەسىر تەجرىبىسى» دەپ ئاتايدىغان تەجرىبىنى ئېلىپ بارىدۇ. بىرى بوياقنىڭ رېئاكتىپ ئوكسىگېن تۈرلىرىنى ئازايتىدىغانلىقىنى دوكلات قىلىدۇ. يەنە بىرى ئۇلارنى ھاسىل قىلىدىغانلىقىنى دوكلات قىلىدۇ. ھەر ئىككىسى ئېنىق دوزا–ئىنكاس ئەگرى سىزىقلىرىنى كۆرسىتىدۇ. ھەر ئىككىسى سەمىمىي. بۇ پەرق ساختىپەزلىك ياكى ئىقتىدارسىزلىقتىن ئەمەس. بەلكى بۇ ئىككى گۇرۇپپا ئوخشىمىغان يورۇقلۇق شارائىتىدا، ئوخشىمىغان سوئاللارغا جاۋاب بېرىدىغان تەكشۈرگۈچلەر بىلەن ئوخشىمىغان نەرسىلەرنى ئۆلچىگەن، ئاندىن ھەر ئىككى جاۋابنى ئوخشاش بىر سۆز — ROS — بىلەن تەسۋىرلىگەن.

مېتىلېن كۆكىنى توغرا ئۆلچەش قىيىن، چۈنكى ئۇ كۆزىتىشى كېرەك بولغان خىمىيەلىك جەريانغا ئۆزى قاتنىشىدۇ. قاراڭغۇلۇقتا ئۇ ئېلېكترونلارنى بەرگۈچىلەر بىلەن قوبۇل قىلغۇچىلار ئارىسىدا توشۇپ، باشلىنىش شەكلىگە قايتىدۇ ۋە يەنە بىر ئايلىنىشقا تەييار بولىدۇ. يورۇقلۇق ئاستىدا ئۇ فوتوسېنزىتىزاتورغا ئايلىنىپ، قوزغالغان تىرىپلېت ھالەتكە يېتىدۇ؛ بۇ ھالەتتە ئېنېرگىيەنى ئوكسىگېنغا يۆتكەپ سىنگلېت ئوكسىگېن ھاسىل قىلالايدۇ ياكى ئېلېكترون يۆتكەپ رادىكاللار ۋە ھىدروگېن پېروكسىدى ھاسىل قىلالايدۇ. بۇ سىستېمىغا كىرگۈزۈلگەن ھەر قانداق تەكشۈرگۈچ بوياقنىڭ ئۆزى تەرىپىدىن ئوكسىدلىنىشى، قايتۇرۇلۇشى، رەڭسىزلىنىشى ياكى ئوپتىكىلىق سىگنالى توسۇلۇشى مۇمكىن. شۇڭا ھەر قانداق ROS ئۆلچەش نەتىجىسى ھەققىدىكى بىرىنچى سوئال ھەرگىز ساننىڭ قانچە ئىكەنلىكى ئەمەس. بەلكى ئۆلچەش ئۇسۇلىنىڭ ئەمەلىيەتتە نېمىنى بايقايدىغانلىقى ۋە بوياقنىڭ بۇ ئۇسۇلغا قانداق تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقىدۇر.

Amplex Red: كالىبىرلانغان ھىدروگېن پېروكسىدى ئۆلچەش ئۇسۇلى

توغرا تەڭشەلگەندە، مېتىلېن كۆكى بىلەن Amplex Red بىرىكمىسى بۇ ساھەدىكى ئەدەبىياتتا ئەڭ پۇختا ئاساسقا ئىگە بولغان جۈپلىشىش ھېسابلىنىدۇ. خىمىيەلىك رېئاكسىيە ئېنىق نىشانغا ئىگە: خىرېن پېروكسىدازىسى ھىدروگېن پېروكسىدىدىن پايدىلىنىپ، Amplex سۇبستراتىنى فلۇئورېسسېنت مەھسۇلات رېزورۇفىنغا ئوكسىدلايدۇ؛ بۇ جەرياننىڭ ستوئىخىئومېتىرىيەلىك نىسبىتى تەخمىنەن بىرگە بىر. ئەۋرىشكىدىكى پېروكسىد تەكشۈرگۈچتە فلۇئورېسسېنسىيەگە ئايلىنىدۇ. ئەنئەنىۋى ROS گۇرۇپپىسىدىكى باشقا ھېچقانداق تۈر بۇ رېئاكسىيەنى بىۋاسىتە قوزغاتمايدۇ.

ھەل قىلغۇچ ئەۋزەللىك كالىبىرلاشتا. ئىنچىكە ئىشلەيدىغان تەتقىقاتچى ئوخشاش بۇففېر ئېرىتمىسى، ئوخشاش پېروكسىدازا ۋە سۇبسترات قويۇقلۇقى، ئوخشاش ئىنكۇباتسىيە ۋاقتى ۋە ئوخشاش ئوپتىكىلىق تەڭشەكلەر بىلەن مىقدارى مەلۇم پېروكسىد ئۆلچەم ئەۋرىشكىلىرىنى ئۆلچەيدۇ، ئاندىن ئەۋرىشكىلەرنىڭ نەتىجىسىنى شۇ ئەگرى سىزىققا سېلىشتۇرۇپ ئوقۇيدۇ. بۇ ئۇسۇلنىڭ ئاساسى بولغان، ئايرىۋېلىنغان مېڭە مىتوخوندرىيەلىرى توغرىسىدىكى تەتقىقاتتا، ئاپتورلار دەل شۇنداق قىلغان: ھەر بىر ئۆلچەش ئاخىرىدا مىقدارى مەلۇم پېروكسىد قوشقان، نەتىجىلەرنى ئىختىيارىي فلۇئورېسسېنسىيە بىرلىكى بىلەن ئەمەس، بەلكى ھەر مىللىگرام ئاقسىلغا ھەر مىنۇتتا پىكومول ھېسابىدىكى سۈرئەت بىلەن دوكلات قىلغان. پارقىراشنى ھەقىقىي ئۆلچەشكە ئايلاندۇرىدىغان نەرسە مانا مۇشۇ.

ئۇ تەتقىقاتتىكى ئۈچ تەپسىلاتنى ئۈلگە قىلىشقا ئەرزىيدۇ. بىرىنچىدىن، ئاپتورلار پېروكسىدنى پارچىلايدىغان كاتالازا بىلەن سىگنالنى دەلىللىگەن. كاتالازا قوشۇلغاندا مېتىلېن كۆكى كەلتۈرۈپ چىقارغان فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ ئۆرلىشى توختىغان؛ بۇ سىگنالنىڭ ئوپتىكىلىق ساختا تەسىر ئەمەس، پېروكسىد ئىكەنلىكىنى دەلىللىگەن. ئىككىنچىدىن، ئۇلار قوزغىتىش نۇرىنى توسۇش ئارقىلىق يورۇتۇشنىڭ تەسىرىنى بىۋاسىتە سىنىغان؛ شۇنىڭ بىلەن ئەۋرىشكىلەر نورمال يورۇقلۇق مىقدارىنىڭ سەككىزدىن بىرىنىلا ئالغان، ئەمما سىگنال پەقەت توققۇز پىرسەنت تۆۋەنلىگەن. ئۇلار دوكلات قىلغان پېروكسىدنىڭ توقسان پىرسەنتتىن كۆپرەكى ئۆلچەش يورۇقلۇقىغا باغلىق بولمىغان. ئۈچىنچىدىن، ئۇلار پېروكسىدنىڭ يوقىتىلىشىنى ئېلېكترود بىلەن ئايرىم ئۆلچەپ، بوياقنىڭ ھەم ھاسىل بولۇشنى ئاشۇرغانلىقىنى، ھەم يوقىتىلىشنى ئاستىلاتقانلىقىنى بايقىغان. پەقەت ساپ فلۇئورېسسېنسىيەنى دوكلات قىلىدىغان تەكشۈرگۈچ بۇ ئىككى تەسىرنى بىر-بىرىگە ئارىلاشتۇرۇۋەتكەن بولاتتى.

بۇ ئۆلچەش ئۇسۇلىدىمۇ خاتالىق كېلىپ چىقىدىغان ئەھۋاللار بار، مېتىلېن كۆكى ئۇلارنىڭ بىر نەچچىسىنى پەيدا قىلىدۇ. بوياق رېزورۇفىن نۇر چىقىرىدىغان ئوخشاش قىزىل رايوندا كەڭ دائىرىدە نۇر سۈمۈرىدۇ؛ شۇڭا بوياق قويۇقلۇقى يۇقىرى بولغاندا، ئەۋرىشكە ئىچكى سۈزگۈچ تەسىرى ئارقىلىق ئۆز سىگنالىنى ئۆزى توسۇشى مۇمكىن. شۇڭا ئۆلچەم ئەۋرىشكىلىرىدىكى بوياق قويۇقلۇقى تەكشۈرۈلىدىغان ئەۋرىشكىلەر بىلەن ئوخشاش بولۇشى كېرەك. Amplex Red ئۆزىمۇ يورۇقلۇق تەسىرىدە ئوكسىدلىنىشى مۇمكىن؛ ئۇنىڭ مەھسۇلاتى رېزورۇفىنمۇ دەرىجىدىن تاشقىرى ئوكسىد ۋە پېروكسىد ھاسىل قىلىدىغان فوتوئوكسىدلىنىش-قايتۇرۇلۇش ئايلىنىشىغا كىرەلەيدۇ. تەجرىبىدە فوتوسېنزىتىزاتورمۇ يورۇتۇلغاندا، بۇ ناھايىتى مۇھىم بولىدۇ. ئەمەلىي ھەل قىلىش چارىسى — بوياق بىلەن تەكشۈرگۈچنى بىرلىكتە يورۇتۇشنىڭ ئورنىغا، ئالدى بىلەن مېتىلېن كۆكى ئەۋرىشكىلىرىنى يورۇتۇپ، ئاندىن ئۇلاردىن ئېلىنغان بۆلەك ئەۋرىشكىلەرنى قاراڭغۇلۇقتا Amplex رېئاگېنتلىرى بىلەن ئۆلچەشتۇر. ئاخىرىدا، دەرىجىدىن تاشقىرى ئوكسىد دىسمۇتازىسى Amplex سىگنالىنى پەقەتلا باسمايدۇ: دەرىجىدىن تاشقىرى ئوكسىدنى پېروكسىدقا ئايلاندۇرۇش سىگنالنى ئاشۇرۇشى مۇمكىن. فلۇئورېسسېنسىيەنى ئاشۇرغان SOD كونترول تەجرىبىسى مەغلۇپ بولغان ئەمەس. ئۇ دەرىجىدىن تاشقىرى ئوكسىدنىڭ ئالدىنقى باسقۇچتىكى تۈر ئىكەنلىكىنى كۆرسەتكەن.

DCFDA: تاللاشچان بولمىغان ئوكسىدلىنىش كۆرسەتكۈچى

مېتىلېن كۆكى بىلەن DCFDA جۈپلىشىشى كۆپىنچە چۈشىنىش قالايمىقانچىلىقىنىڭ مەنبەسى. DCFH-DA ھۈجەيرىگە كىرگۈزۈلىدىغان ئالدىنقى ماددا. ھۈجەيرە ئىچىدىكى ئېستېرازىلار ئۇنىڭ ئاتسېتات گۇرۇپپىلىرىنى ئېلىۋېتىپ، فلۇئورېسسېنسىيە چىقارمايدىغان DCFH نى قالدۇرىدۇ؛ DCFH ئوكسىدلانغاندا فلۇئورېسسېنت DCF ھاسىل بولىدۇ. ئۇنى ئوكسىدلايدىغان ماددىلارنىڭ تىزىملىكى ئۇزۇن: ھىدروكسىل رادىكاللىرى، پېروكسىدازا ۋە ھېمنىڭ ئارىلىق مەھسۇلاتلىرى، ئازوت تۆت ئوكسىدى، گىپوخلور كىسلاتاسى ۋە پېروكسىنىترىتتىن كېلىپ چىققان رادىكاللار. ھىدروگېن پېروكسىدى يالغۇز ھالەتتە ئۇنى ئەمەلىي ئۆلچەشكە يارايدىغان سۈرئەتتە بىۋاسىتە ئوكسىدلىمايدۇ؛ پېروكسىدقا باغلىق فلۇئورېسسېنسىيە ئادەتتە جەرياندا تۆمۈر، ھېم ئاقسىللىرى ياكى پېروكسىدازا خىمىيەسىنىڭ بولۇشىنى تەلەپ قىلىدۇ.

ھەر بىر ئۇسۇللار بۆلىكىدە نەقىل كەلتۈرۈلۈشى كېرەك بولغان تەنقىد Kalyanaraman ۋە خىزمەتداشلىرىنىڭ DCFH نى تەكشۈرگۈچ سۈپىتىدە تەھلىل قىلىشىدىن كەلگەن. مۇشۇ سەۋەب بىلەن DCFDA نى رەت قىلغان مېڭە مىتوخوندرىيە تەتقىقاتىدا خۇلاسىلەنگىنىدەك، ئۇلار بۇ بوياقنىڭ ئاستا رېئاكسىيەلىشىدىغانلىقىنى، ستوئىخىئومېتىرىيەسىنىڭ ئېنىق بېكىتىلمىگەنلىكىنى، ئىناۋەتلىك كالىبىرلاشنىڭ يوقلۇقىنى ۋە ROS بولمىغان بىرىكمىلەر بىلەنمۇ رېئاكسىيەلىشىدىغانلىقىنى كۆرسەتكەن. تەكشۈرگۈچ يەنە ئۆزى ئۆلچەيدىغان جەرياننى كۈچەيتىدۇ: DCFH نىڭ بىر ئېلېكترونلۇق ئوكسىدلىنىشى DCF رادىكالىنى ھاسىل قىلىدۇ؛ بۇ رادىكال ئوكسىگېن بىلەن رېئاكسىيەلىشىپ دەرىجىدىن تاشقىرى ئوكسىد ھاسىل قىلىدۇ، ئۇ دىسمۇتاتسىيەلىنىپ قوشۇمچە پېروكسىد ھاسىل قىلىدۇ. ئۆلچەش نەتىجىسى ئۆزى دوكلات قىلىۋاتقان خىمىيەلىك جەرياننىڭ بىر قىسمىنى ئۆزى پەيدا قىلىدۇ.

بۇلارنىڭ ھېچبىرى DCFDA نى پايدىسىز قىلىپ قويمايدۇ. ئۇنى ئېنىق تونۇش قورالى ئەمەس، دەسلەپكى تەكشۈرۈش قورالى قىلىدۇ. DCF فلۇئورېسسېنسىيەسىنىڭ ئۆرلىشى ئوكسىدلىغۇچىغا باغلىق تەكشۈرگۈچ ئوكسىدلىنىشىنىڭ ئاشقانلىقىنى بىلدۈرىدۇ. بۇ پېروكسىد ئاشتى دېگەنلىك ئەمەس، ئەلۋەتتە ئومۇمىي ROS ئاشتى دېگەنلىكمۇ ئەمەس؛ چۈنكى ھېچبىر يەككە تەكشۈرگۈچ بۇ ئومۇمىي مىقدارنى ئۆلچىمەيدۇ. بىر مىكرومولاردىن يۇقىرى قويۇقلۇقتا DCF ئوكسىدلىنىشىغا تايانغان دەسلەپكى مېتىلېن كۆكى تەتقىقاتلىرى ئوكسىدلىنىشنى ئىلگىرى سۈرىدىغان تەسىرلەرنى دوكلات قىلغان، شۇ دەۋردىكى باشقا سىستېمىلاردا بولسا پېروكسىد كەلتۈرۈپ چىقارغان ھۈجەيرە ئۆلۈمىدىن قوغداش دوكلات قىلىنغان. ئوخشاش بوياقنىڭ ئوخشىمىغان ئوكسىدلىنىش-قايتۇرۇلۇش شارائىتىدىكى بۇ ئىككى كۆزىتىشىنىڭ ھەر ئىككىسى توغرا بولۇشى مۇمكىن؛ DCF نەتىجىسى يالغۇز ھالەتتە قايسى ئوكسىدلىغۇچىنىڭ سىگنالنى پەيدا قىلغانلىقىنى ئېيتىپ بېرەلمەيدۇ. ئىلگىرىكى مېڭە مىتوخوندرىيە تەتقىقاتىنىڭ مۇھىملىقى شۇكى، ئۇ بۇ دەسلەپكى تەكشۈرۈشنى كالىبىرلانغان پېروكسىد ئۆلچەش بىلەن ئالماشتۇرۇپ، پېروكسىد يۈكىنى بىۋاسىتە بايقىغان: ھەتتا يۈز نانومولار بوياقمۇ سىناق قىلىنغان بارلىق سۇبسترات ۋە نەپەسلىنىش ھالەتلىرىدە پېروكسىد قويۇپ بېرىشنى بىر نەچچە ھەسسە ئاشۇرغان.

DCFDA دا مېتىلېن كۆكىگە خاس يەنە بىر توزاق بار. بوياقنىڭ رەڭگى ناھايىتى كۈچلۈك، ئۇ ئوكسىدلىنىش-قايتۇرۇلۇش جەھەتتە ئاكتىپ؛ شۇڭا ئۇ فلۇئورېسسېنسىيەنى رەڭسىزلەندۈرۈشى، نۇر چىقىرىشنى ئۆچۈرۈشى ياكى ھۈجەيرىدىكى ROS دىن مۇستەقىل ھالدا تەكشۈرگۈچنى ئوكسىدلىشى مۇمكىن. بوياق ۋە تەكشۈرگۈچ بار، ئەمما ھۈجەيرە يوق كونترول تەجرىبىسى ئىختىيارىي بېزەك ئەمەس. ئۇ بوياقنىڭ تەكشۈرگۈچ بىلەن بىۋاسىتە ئۆزئارا تەسىرلىشىدىغان-تەسىرلەشمەيدىغانلىقىنى بىلدۈرىدىغان تەجرىبىدۇر.

سپىن تۇتۇش ۋە ئوكسىگېن سەرپىياتى: كىملىكى ۋە ئېقىم مىقدارى

فلۇئورېسسېنت تەكشۈرگۈچلەر ئوكسىدلىنالايدىغان بىر نەرسىنىڭ پەيدا بولغانلىقىنى كۆرسەتسە، سپىن تۇتقۇچلار بىلەن ئېلىپ بېرىلغان ئېلېكترون سپىن رېزونانسى ئۇ نەرسىنىڭ نېمە ئىكەنلىكىگە تېخىمۇ يېقىن جاۋاب بېرىدۇ. مېتىلېن كۆكى فوتوخىمىيەسىگە دائىر كلاسسىك تەتقىقات ESR ئارقىلىق بوياق، ئاسكوربات ۋە يورۇقلۇقتىن ھاسىل بولغان ئاسكوربات رادىكالىنى بايقىغان، ئاندىن ئوكسىگېن سەرپىياتى تەجرىبىلىرىدە پېروكسىدنىڭ ھاسىل بولۇشىنى، سپىن تۇتۇش تەجرىبىلىرىدە بولسا تۆمۈر كاتالىزلىغان ھىدروكسىل رادىكالىنىڭ ھاسىل بولۇشىنى كۆرسەتكەن. ھەر بىر تېخنىكا باشقىلىرى جاۋاب بېرەلمىگەن سوئالغا جاۋاب بەرگەن: ESR رادىكالنىڭ كىملىكىنى كۆرسەتكەن، ئوكسىگېن سەرپىياتى ھەر قانداق فلۇئورېسسېنت تەكشۈرگۈچتىن مۇستەقىل ھالدا رېئاكسىيە ئېقىم مىقدارىنى كۆرسەتكەن، بۇلارنىڭ بىرلەشمىسى بولسا ئوخشاش يورۇتۇلغان سىستېمىدا ھەم سىنگلېت ئوكسىگېن، ھەم رادىكال يوللىرىنىڭ ئىشلىگەنلىكىنى كۆرسەتكەن.

1984 يىلىدىكى بۇ نەتىجە ھازىرمۇ ئاگاھلاندۇرۇش بەلگىسىدەك ئوقۇلىدۇ. يورۇتۇش ۋە قايتۇرغۇچى ماددا بار بولغاندا، بوياق پېروكسىد ھاسىل قىلغان؛ تۆمۈر بار بولغاندا بولسا سىستېما بۇ گۇرۇپپىدىكى ئەڭ رېئاكتىپ تۈر بولغان ھىدروكسىل رادىكالىنى ھاسىل قىلغان. ئاپتورلار بۇنى كۆزدىكى ئاسكوربات بىلەن باغلاپ، كۆز ساھەسىدە ئۇنى ئويلاشماي ئىشلىتىشكە گۇمان بىلدۈرگەن. بۈگۈنكى ئوقۇرمەنلەر شارائىتلارغا دىققەت قىلىشى كېرەك: يورۇقلۇق بىلەن قايتۇرغۇچى ماددا ۋە تۆمۈر بىرلىكتە بار. بۇلارنىڭ ھەرقانداق بىرى ئېلىۋېتىلسە، بۇ يول ئاجىزلايدۇ ياكى يوقىلىدۇ.

ئوكسىگېن ئېلېكترودلىرى ئۆز ئورنىنى باشقىچە ئۇسۇل بىلەن ئىسپاتلايدۇ. Clark تىپىدىكى ئېلېكترود ساپ ئوكسىگېن سەرپىياتىنى ئۆلچەيدۇ؛ بۇ بوياق قوزغاتقان ئوكسىدلىنىش-قايتۇرۇلۇش خىمىيەسىنىڭ مولېكۇلالىق ئوكسىگېننى سەرپ قىلىۋاتقانلىقىنى دەلىللەپ، ھېچقانداق فلۇئورېسسېنسىيە ساختا تەسىرى تەقلىد قىلالمايدىغان كىنېتىكىلىق ئۇچۇر بېرىدۇ. ئەمما ئۇ مەھسۇلاتنىڭ كىملىكىنى ئېنىقلىمايدۇ. پېروكسىد، دەرىجىدىن تاشقىرى ئوكسىد ۋە سۇ ھاسىل بولۇشى، شۇنداقلا سىنگلېت ئوكسىگېننىڭ سۇسلىشىشىنىڭ ھەممىسى ئوكسىگېن سەرپىياتىغا چېتىلىدۇ. كىملىكى ئېنىق بولمىغان ئېقىم مىقدارى، ئېقىم مىقدارى ئېنىق بولمىغان كىملىككە ئوخشاشلا تولۇق ئەمەس؛ شۇڭا پۇختا ماقالىلەر ئېلېكترودنى كالىبىرلانغان پېروكسىد ئۆلچەش ئۇسۇلى ياكى تۇتقۇچ بىلەن بىرلەشتۈرىدۇ.

ئوكسىدلىنىشقا قارشى تەسىر نەتىجىلىرى نېمە ئۈچۈن زىددىيەتلىك بولىدۇ

بۇ ئۈچ خىل ئۆلچەش نەتىجىسىنى يانمۇيان قويغاندا، مېتىلېن كۆكى ئەدەبىياتىدىكى كۆرۈنۈشتىكى زىددىيەتلەرنىڭ ئۆلچەش ئۇسۇلىدىكى پەرقلەر ۋە ئۈچ بىئولوگىيەلىك پاكىتتىن كېلىپ چىققانلىقى ئايدىڭلىشىدۇ.

بىرىنچىدىن، بوياق ھەم ئېلېكترون توشۇغۇچى، ھەم پېروكسىد مەنبەسى. ئۇ ئېلېكترونلارنى، ئەكسىچە بولغاندا ئوكسىگېن دەرىجىدىن تاشقىرى ئوكسىدقا ئايلىنىدىغان نەپەسلىنىش ئورۇنلىرىدىن باشقا يەرگە يۆتكەش ئارقىلىق، بىر ROS تۈرىنى ئازايتالايدۇ؛ شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا ئۇنىڭ قايتۇرۇلغان شەكلى ئوكسىگېننى بىۋاسىتە پېروكسىدقا قايتۇرۇپ، باشقا بىر تۈرنى ئاشۇرىدۇ. شۇڭا مىتوخوندرىيەنىڭ ئوكسىدلىنىش-قايتۇرۇلۇش خىمىيەسى ۋە مېتىلېن كۆكىنىڭ ئايلىنىپ ئۆتۈش يولىدىكى رولى بىلەن شۇغۇللىنىدىغان تەجرىبىخانا تەكشۈرگۈچكە باغلىق جاۋابلارنى كۈتۈشى كېرەك: ئوخشاش بىر كىيۇۋېتتا دەرىجىدىن تاشقىرى ئوكسىدقا سەزگۈر ئۆلچەش نەتىجىسى تۆۋەنلەيدۇ، پېروكسىد ئۆلچەش نەتىجىسى بولسا ئۆرلەيدۇ.

ئىككىنچىدىن، تۆۋەن مىقداردىكى پېروكسىد پەقەت زىيان ئەمەس، بەلكى بىر سىگنال. ئىلگىرىكى تەتقىقاتتىن كېيىن ئېلىپ بېرىلغان چاشقان مېڭە مىتوخوندرىيە تەتقىقاتى ھەتتا ئەللىك نانومولار بوياقتىنمۇ پېروكسىد ھاسىل بولىدىغانلىقىنى، ئەمما داۋالاش سەۋىيەسىدىكى قويۇقلۇقلاردا مىتوخوندرىيە DNA سىدا زەخىم بولمىغانلىقىنى بايقىغان؛ ئالدىن بىر تەرەپ قىلىشتىن كېيىن روتېنون كەلتۈرۈپ چىقارغان زەخىملەردىن قوغداشمۇ كۆرۈلگەن. پەقەت داۋالاش دائىرىسىدىن خېلىلا يۇقىرى بولغان يۈز مىكرومولاردا بوياق تاللانغان DNA پارچىلىرىغا زىيان سالغان؛ قىزىل نۇر بىلەن يىگىرمە مىكرومولار بوياق بىرلەشكەندە بولسا، سىناق قىلىنغان بارلىق پارچىلارغا زىيان سالغان سىنگلېت ئوكسىگېن ھاسىل بولغان. ئوتتۇرىغا قويۇلغان مېخانىزم ھورمېتىك ئىنكاسقا ئاساسلىنىدۇ: يېنىك پېروكسىد ھاسىل بولۇش Nrf2 بىلەن باغلىق ئوكسىدلىنىشقا قارشى مۇداپىئە ۋە مىتوخوندرىيەنىڭ يېڭىدىن ھاسىل بولۇشىنى قوزغىتىدۇ؛ شۇڭا قىسقا مۇددەتلىك ئوكسىدلىنىشنى ئىلگىرى سۈرىدىغان نەتىجە، ئۇزۇنراق مۇددەتلىك ئوكسىدلىنىشقا قارشى نەتىجىدىن بۇرۇن كۆرۈلىدۇ. بىر سائەتتە ئوقۇلغان ئۆلچەش بىلەن بىر كۈندە ئوقۇلغان ئۆلچەشنىڭ نەتىجىسى ئوخشىماسلىقى مۇمكىن، چۈنكى ئۇلارنىڭ ئارىلىقىدا بىئولوگىيەلىك ئەھۋال ئۆزگەرگەن.

ئۈچىنچىدىن، يورۇقلۇق ھەتتا قايسى مولېكۇلانىڭ مەۋجۇت ئىكەنلىكىنىمۇ بەلگىلەيدۇ. يورۇتۇش بوياقنىڭ مېتىل گۇرۇپپىلىرىنى چىقىرىۋېتىپ، ئۇنى Azure B ۋە مۇناسىۋەتلىك مەھسۇلاتلارغا ئايلاندۇرىدۇ؛ تەجرىبە قاچىسى ئۈستىدىكى مىكروسكوپ چىرىغىمۇ ئۇنىڭ فوتوسېنزىتىزاتورلۇق تەسىرىنى قوزغىتىشقا يېتىدۇ. قاراڭغۇلۇقتىكى ۋە يورۇتۇلغان تەجرىبىلەر ئوخشىمىغان تەجرىبىلەردۇر؛ ھەر قانداق تەجرىبە تەرتىپىدىكى يورۇتۇش ۋە بوياقنى بىر تەرەپ قىلىش كونتروللىرى بۆلىكى ئۇلارغا شۇنداق مۇئامىلە قىلىشى كېرەك.

ئەڭ ئاز زۆرۈر كونتروللار ۋە ھەر قانداق دەۋانى قانداق ئوقۇش كېرەك

تۆۋەندىكى سېلىشتۇرۇش بۇ ماقالە ئۈچۈن تۈزۈلگەن ئەسلى پايدىلىنىش ماتېرىيالىدۇر. مېتىلېن كۆكىگە دائىر ھەر قانداق ROS نەتىجىسىنى قوبۇل قىلىشتىن بۇرۇن، ئاپتورلارنىڭ قايسى قۇردىكى كونترولنى ئورۇندىغانلىقى ۋە قايسىسىنى ئاتلاپ ئۆتكەنلىكىنى تەكشۈرۈڭ.

بۇنىڭدىن بىر ئەمەلىي ئوقۇش قائىدىسى كېلىپ چىقىدۇ. پېروكسىدازا بىلەن ئىشلىتىلگەن، كالىبىرلانغان ۋە كاتالازا بىلەن تەكشۈرۈلگەن Amplex پېروكسىد ھەققىدىكى دەلىلدۇر. DCFDA تاللاشچان بولمىغان تەكشۈرگۈچ ئوكسىدلىنىشى ھەققىدىكى دەلىل بولۇپ، بۇنىڭدىن ئارتۇق نەرسە ئەمەس. رادىكال تازىلىغۇچى كونتروللار بىلەن ئېلىپ بېرىلغان سپىن تۇتۇش رادىكالنىڭ كىملىكى ھەققىدىكى دەلىلدۇر. ئوكسىگېن سەرپىياتى ئېقىم مىقدارى ھەققىدىكى دەلىلدۇر. ئۆلچەش ئۇسۇلى قوللايدىغان دائىرىدىن ئاشۇرۇپ دەۋا قىلىدىغان بىر جۈملە، قانچىلىك ئىشەنچ بىلەن يېزىلغان بولۇشىدىن قەتئىينەزەر، بوياق ھەققىدىكى ئەمەس، تەكشۈرگۈچ ھەققىدىكى جۈملىدۇر. مىقدارغا باغلىقلىق ۋە ھورمېتىك دائىرە، مىتوخوندرىيەدىكى ئېلېكترون ئېقىمى، بويالغان ئەۋرىشكىلەردىكى ئۆلچەشكە ئارىلىشىش ۋە مىكروسكوپ يورۇتۇشىنىڭ ساختا تەسىرلىرى توغرىسىدىكى مۇناسىۋەتلىك مۇلاھىزىلەر بۇ نۇقتىلارنىڭ ھەر بىرىنى تېخىمۇ كېڭەيتىدۇ؛ ئورۇن تۇتقۇچى پايدىلىنىش ئۇلانمىسى ئالماشتۇرۇلغاندىن كېيىنمۇ، ھەر بىر نۇقتا ئۆز ئىناۋىتىنى ساقلايدۇ.