መቲሊን ብሉ ንምቕላም DNAን RNAን፦ ኣብ ጄላትን መምብሬናትን ዘለዎ ኣጠቓቕማ

ሓደ ተማሃራይ ኣጋሮዝ ጄል የካይድ፣ ብመቲሊን ብሉ ይቐልሞ፣ ኣብቲ ብሩህ ባንድ ክርአ ዝተጸበዮ ቦታ ግን ዋላ ሓንቲ ኣይርእን። ኣብ ጎኑ ዘሎ ናይ ስራሕ ቦታ፣ ሓደ ድሕሪ ዶክትሬት መጽናዕቲ ዝገብር ተመራማሪ በታ ሓንቲ ሰማያዊት ጥርሙዝ ንNorthern መምብሬን ይቐልም፣ ኣብ ሰለስተ ደቓይቕ ድማ ብንጹር ዝርኣዩ ሪቦዞማዊ ባንድታት ይረክብ። እቲ ተማሃራይ እቲ ጄል ከም ዝፈሸለ ይድምድም። እቲ ጄል ኣይፈሸለን። እቶም ክልተ ዕማማት ዝተፈላለዩ እዮም ነይሮም፤ እቲ ሓደ ቀለም ድማ ብዝተፈላለየ ተነቃፍነት፣ ድሕረ ባይታን ንቀጻሊ ስራሕ ዝምልከቱ ሕግታትን መልሲ ይህቦም።

ብመቲሊን ብሉ ምቕላም DNAን ምቕላም RNAን ተመሳሳሊ ኬሚስትሪ ኣለዎም፣ ዕላማኦም ግን ሓደ ኣይኮነን። ኣብ ጄል፣ እቲ ቀለም ኣብ ውሽጢ ሓደ ቀዳዳት ዘለዎ ማትሪክስ ክንደይ ኑክሊክ ኣሲድ ከም ዘሎ የርኢ። ኣብ መምብሬን ድማ፣ ምትሕልላፍ ብግቡእ ከም ዝተኻየደን ኣብ ነፍሲ ወከፍ መስመር ተመሳሳሊ መጠን ናሙና ከም ዝተጻዕነን የርኢ። እዚ ፍልልይ ምስ በርሀ፣ እቶም ፕሮቶኮላት፣ ደረታት ምልላይን ደረታት ተሰማምዖን ትርጉም ይህልዎም።

እቲ ሓጺር መልሲ

መቲሊን ብሉ ጸፍሒ ቅርጺ ዘለዎ ካትዮናዊ ቀለም እዩ። ብምውህሃድ ናብ ፎስፌት ዝግበር ኤሌክትሮስታቲካዊ ስሕበት፣ ኣብ መንጎ ጽምዲ መሰረታት ምእታውን ምስ ጸቢብ ጎድጓድ ምትእስሳርን፣ ንኑክሊክ ኣሲዳት ብዘይ ኮቫለንታዊ ማእሰር እሞ ክምለስ ብዝኽእል መንገዲ ይኣስሮም። እዚ ክምለስ ምኽኣሉ እዩ ቀንዲ ረብሓኡ። ባንድታት ክቕለሙን ብዝርአ ብርሃን ክርኣዩን፣ ምስሎም ክምዝገብን፣ ድሕሪኡ ንክሎኒንግ፣ ሃይብሪዳይዜሽን ወይ ዳግማይ ብፕሮብ ምምርማር ቀለሞም ክወግድ ወይ ክጸርዩን ይኽእሉ።

ንድርብ ሰንሰለት ዘለዎ DNA ኣብ ኣጋሮዝ ጄል ብመቲሊን ብሉ ንምቕላም፣ እቲ መደበኛ ፈጣን ኣዘገጃጅባ ኣብ ማይ 0.02 percent w/v (200 micrograms per mL) እዩ። ንኣስታት 15 minutes ምቕላም፣ ተወሳኺ ኣስታት 15 minutes ድማ ብማይ ቀለም ምውጋድ የድሊ፤ እቲ ጄል ኣብ ጻዕዳ ብርሃን ዘለዎ ሳጹን ይርአ። ንመምብሬናት፣ እቲ ክላሲካዊ ናይ Northern blot ኣዘገጃጅባ ኣብ ሶድየም ኣሴቴት፣ ኣብ ከባቢ pH 5.2፣ 0.02 ክሳብ 0.04 percent ቀለም እዩ። ድሕሪ ምትሕልላፍን ኣብ ቦታኡ ምጽናዕን ንገለ ደቓይቕ ይቕለም፣ ድሕሪኡ ብማይ ይሕጸብ፣ ቅድሚ ሃይብሪዳይዜሽን ድማ ቀለሙ ምሉእ ብምሉእ ይወግድ። ተነቃፍነቱ ውሱን እዩ፦ ኣብ ጽቡቕ ኩነታት፣ ኣብ ነፍሲ ወከፍ ናይ ጄል ባንድ ካብ ዓሰርተታት ክሳብ ኣማኢት nanograms ይደሊ፤ ጥንቃቐ ዝገብሩ መምርሒታት ድማ 0.5 ክሳብ 1 microgram ይጠቕሱ። እዚ ካብ ናይ ኤቲድየም ብሮማይድን SYBRን ቀለማት ደረት ምልላይ ብብዙሕ ደረጃታት ዓሰርተ ዝዛይድ እዩ። ኣብ መምብሬናት፣ እቲ ቀለም ብቐንዱ ብብዝሒ ዘሎ ሪቦዞማዊ RNAን ጠቕላላ ዝተጻዕነ ንጥረ ነገርን ስለ ዘርኢ፣ ንሓደ ትራንስክሪፕት ዝምልከት ጠቓሚ ሓደ ደረት ምልላይ የለን። ኣብ ክልቲኦም ኣዘገጃጅባታት፣ ከም ተወሳኺ ምግቢ ኣብ ችርቻሮ ዝሽየጥ ፈሳሲ ኣይትተክኡ። ዝተረጋገጹ ሜላታት፣ ናይ ትንተና ደረጃ ዘለዎ ቀለም፣ ዝተወሰኑ ባፈራትን፣ RNA ኣብ ዝሳተፈሉ ካብ RNase ናጻ ዝኾነ ኣተሓሕዛን ከም ዝጥቀሙ ይግምቱ።

ምእሳር ከመይ ይሰርሕ፣ ኣበይከ የጋጊ

እቲ ጠቓሚ መግለጺ ሰለስተ ክፍልታት ኣለዎ። ቀዳማይ፣ እቲ ኣወንታዊ ክፍያ ዘለዎ ስርዓት ቀለቤታት፣ በቲ ኣሉታዊ ክፍያ ዘለዎ ናይ ፎስፌት ዓንዲ ሰንሰለት ይስሓብ። ከምቲ ኣብ ስፔክትሮስኮፒያዊ መጽናዕቲ ናይ መቲሊን ብሉ ምስ DNA ምእሳር ዝተጠቓለለ፣ ስፔክትሮስኮፒያዊ ስራሕ ኣብ ትሑት መጠን ጨው እዚ ኤሌክትሮስታቲካዊ ስሕበት ዓብላሊ ምዃኑ ይረክብ። ሞዴሊንግን ሞለኪዩላዊ ዳይናሚክስን ድማ፣ ኣብ መንጎ ጽምዲ መሰረታት ምእታውን ኣብ ጸቢብ ጎድጓድ ምእሳርን ንድርብ ሰንሰለት ዘለዎ DNA ርጉኣት ሜላታት ምዃኖም የርእዩ። ካልኣይ፣ ንGC ዝያዳ ዝመርጽ ባህሪ ኣሎ። ኣብ ምርጫታት መቲሊን ብሉ ኣብ መንጎ ጽምዲ መሰረታት ንምእታው ዝተገብረ ስራሕ፣ ሞዴሊንግ ንCpGን GpCን ዝስዕቡ መሰረታት ይመርጽ፣ ፈተነታት ድማ ምስ GC ዝበዝሖም ድርብ ሰንሰለታት ዝያዳ ምትእስሳር ከም ዘሎ ይሕብሩ፤ AT ድርብ ሰንሰለታት እውን ይኣስሩ እዮም። መደበኛ ምቕላም ንሓደ ዝተወሰነ ቅደም ተኸተል መሰረታት ዝተፈልየ ኣይኮነን። ሳልሳይ፣ ንጽል ሰንሰለት ዘለዎ DNAን RNAን ብቐንዱ ብኤሌክትሮስታቲካዊ ስሕበትን፣ ምስ ተበጻሕቲ መሰረታትን ድርብ ሰንሰለት ዘለዎም ክፍልታትን ብምድርራብን ይኣስሩ። ስለዚ ድማ ሓይሊ ምቕላም ብርዝመት፣ ቅደም ተኸተል መሰረታትን ካልኣዊ ኣቃውማን ይፈላለ።

ካብዚ ክልተ ውጽኢታት ይስዕቡ። እቲ ምእሳር ኮቫለንታዊ ስለ ዘይኮነ፣ ቀለሙ ብምሕጻብ ይወጽእ። ናይ ፖሊኣክሪላማይድ ባንድታት፣ ብፍሉይ መንገዲ እንተ ዘይተጸኒዖም፣ ቀልጢፎም ይሃስሱ። ከምቲ Sotoን Draperን ብዛዕባ PAGE ጄላት ዝገለጽዎ፣ መደበኛ ምቕላም ግዜያዊ ስለ ዝኾነ፣ ንቐዋሚ ምጽናዕ ዝተዳለወ ፍሉይ ሜላ ኣሎ። እቲ ቀለም ፎቶሴንሲታይዘር ስለ ዝኾነ፣ ኦክስጅን ኣብ ዘለዎ ኩነታት ንዝተቐልመ DNA ንነዊሕ ግዜ ብብሩህ ብርሃን ምብራህ፣ ንጉዋኒን ኦክሲዳይዝ ክገብሮን ኣብ መወዳእታ ድማ ኣብ ሰንሰለታት ንኣሽቱ ምቑራጻት ክፈጥርን ይኽእል። እዚ መስርሕ ኣብ ብመቲሊን ብሉ ዝምራሕ ኦክሲዴሽን ጉዋኒን ዝምልከት ስራሕ ብዝርዝር ተገሊጹ ኣሎ። ንሓጺር ግዜ ብጻዕዳ ብርሃን ምርኣይ፣ ኣብ ክላሲካዊ ናይ ኤቲድየም ብሮማይድ ኣሰራርሓታት ዝፍለጥ ብUV ዝመጽእ ጉድኣት የወግድ። እዚ ድማ ንድሒሩ ዝጥቀሙሉ DNA ኣብ ምምላስ ናይ ብሓቂ ረብሓ ኣለዎ። ዝርአ ብርሃን ዝለስለሰ እዩ፣ ጉድኣት ዘይብሉ ግን ኣይኮነን። DNA ክሎን ክግበር እንተ ኾይኑ፣ ናይ ምብራህ ግዜ ሓጺር ግበሩ። ነቲ ጥንቃቐ ዘብርህ ሰፊሕ ፎቶኬሚስትሪ ንምርዳእ፣ ክልተ መንገድታት ኣብ ፎቶኬሚስትሪ መቲሊን ብሉ ርኣዩ። እቲ ኦክሲዳይዝድ ቅርጺ ስለምንታይ ከም ዝኣስር፣ እቲ ሪዱስድ ቅርጺ ግን ስለምንታይ ከም ዘይኣስር ዘብርሁ ናይ ሬዶክስ ጽምድን ኩነታት ክፍያን ንምፍላጥ፣ ኬሚስትሪ ኣቃውማን ባህርያትን መቲሊን ብሉ ርኣዩ።

ቀዳማይ ዕማም፦ ኣብ ውሽጢ ጄላት ምቕላም

ኣብ ጄል ምቕላም ንሓደ ሕቶ መልሲ ይህብ፦ ኣብዚ ባንድ ብዓይኒ ክርአ ዝኽእል እኹል ኑክሊክ ኣሲድ ኣሎዶ? ኣብ ኣጋሮዝ ዘሎ ድርብ ሰንሰለት DNA፣ እቲ ዝበለጸ ዝተጸንዐ ጉዳይ እዩ። እቲ ቀዳማይ ናይ Floresን መሳርሕቱን ብመቲሊን ብሉ ጄል ናይ ምቕላም ሜላ፣ ነቲ 0.02 percent ፈጣን ፕሮቶኮል ኣብ 1 percent ኣጋሮዝ ኣረጋጊጹ፣ ድሕሪኡ ዕዉት ምምላስ DNAን ክሎኒንግን ከም ዝተኻየደ ኣርእዩ። እቲ ተመሳሳሊ ናይ ኣቕራቢ ፕሮቶኮል ኣብ ናይ IBI Scientific መቲሊን ብሉ ፍርያት ገጽ እውን ይርከብ። እቲ ገጽ ናይ 0.04 percent መምብሬን ኣዘገጃጅባን ፈጣን ናይ ጄል ሜላን ጎድኒ ጎድኒ ይዝርዝር።

ተግባራዊ ኣሰራርሓ፦

1. ነቲ ጄል ብመደበኛ መንገዲ ኣካይድዎ። ንዝተቐየረ ሜላ ምትሕልላፍ ወይ ተፈላልዮም ናይ ምርኣይ ብቕዓት እንተ ዘይተረጋጊጹ፣ ድሕሪ ኤሌክትሮፎረሲስ ቀልምዎ፣ ኣብ እዋኑ ኣይትቐልምዎ።
2. ኣብ ብዝተነጽሀ ማይ ዝተዳለወ 0.02 percent w/v መቲሊን ብሉ ንኣስታት 15 minutes ኣጥልቕዎ፣ ቀስ ኢልኩም እናነቓነቕኩም።
3. እቲ ናይ ማትሪክስ ድሕረ ባይታ ክሳብ ዝቕንስን ባንድታት ብንጹር ክሳብ ዝርኣዩን፣ ማይ ብተደጋጋሚ እናቐየርኩም ቀለሙ ኣወግዱ፤ ጠቕላላ ግዜኡ ኣስታት 15 minutes እዩ።
4. ኣብ ጻዕዳ ብርሃን ዝህብ መብራህቲ ብቕልጡፍ ስእሊ ኣልዕሉ።

ኣጋሮዝን ፖሊኣክሪላማይድን ዝተፈላለየ ባህሪ ኣለዎም። ኣጋሮዝ ኣብቲ ማትሪክስ ቀለም ይዕቅብ፣ ስለዚ ቀለም ምውጋድ እቲ ዝደንጎየ ደረጃ እዩ። ቀጠንቲ ፖሊኣክሪላማይድ ጄላት ቀልጢፎም ይቕለሙ፣ ቀለሞም እውን ቀልጢፉ ይወጽእ። እዚ ንናሙና ቆሪጽካ ንምውጻእ ይሕግዝ፣ ንነዊሕ ግዜ ዝዕቀብ መዝገብ ግን ይጎድእ። ኣብ ፖሊኣክሪላማይድ ዘለዉ ሰብ ዝሰርሖም ኦሊጎኑክሊዮታይዳት፣ ነቶም ከም Current Protocols ዝኣመሰሉ ዝተመስረቱ ናይ PAGE ሜላታት ብምኽታል፣ በቲ ተመሳሳሊ 0.02 percent ኣዘገጃጅባን ተደጋጋሚ ምሕጻብ ብማይን ኣብ 20 ክሳብ 30 minutes ክርከቡ ይኽእሉ። ንድሒሮም ዝጥቀሙሎም ኦሊጎታት፣ ኣብ ዝተቐጠነ TBE ኣብ ከባቢ 0.0002 percent ዝኾኑ ኣዝዮም ዝተቐጠኑ ሜላታት ንብዙሓት ሰዓታት ከም ዝተጠቕሙ ተገሊጹ ኣሎ፣ መሰረት መርትዖኦም ግን ዝደኸመ እዩ።

ናይ DNAን RNAን ፍልልይ ኣገዳሲ እዩ። ድርብ ሰንሰለት ዘለዎ DNA እቲ ዝሓየለ ብኣቃውማ ዝምራሕ ምእሳር ይህብ። RNAን ንጽል ሰንሰለት ዘለዎ DNAን ይቕለሙ እዮም፣ ግን ብዝደኸመን ኣቐዲምካ ክትግምቶ ብዝኸብድን መንገዲ። ንፎርማልደሃይድ ኣጋሮዝ RNA ጄላት፣ መብዛሕትኦም ቤተ ፈተነታት ኣብ ውሽጢ ጄል ብሰማያዊ ቀለም ምቕላም ይገድፉ፣ መጀመርታ ነቲ RNA ናብ መምብሬን የሕልፍዎ፣ ድሕሪኡ ኣብኡ ይቐልምዎ። እዚ ስጉምቲ፣ ድኹም ናይ ጄል ምልክት ብዝነጸረ ናይ መምብሬን ምልክትን መዝገብ ናይ ዝተጻዕነ ናሙናን ይትክእ።

ካልኣይ ዕማም፦ ኣብ መምብሬናት ምቕላም

ኣብ መምብሬን ምቕላም ንኻልእ ሕቶ መልሲ ይህብ፦ ምትሕልላፍ ተሳኺዑዶ፣ እቶም መስመራትከ ንምንጽጻር ዝበቕዑ ድዮም? እቲ ክላሲካዊ ኣጠቓቕማ፣ ናይ Herrinን Schmidtን ክወግድ ዝኽእል ናይ Northern blot ቀለም እዩ። ኣብ መጀመርታ ኣብ 50 mM ሶድየም ኣሴቴት፣ ኣብ pH 5.0፣ 0.04 percent ቀለም ን2 ክሳብ 3 minutes ይጥቀም ነይሩ፣ ድሕሪኡ ብማይ ይሕጸብ ነይሩ። ቅድሚ ሃይብሪዳይዜሽን፣ ኣብ SSPE ብዘሎ ዝተቐጠነ SDS ክወግድ ይኽእል ነይሩ።

እቲ ብሰፊሑ ዝጥቀሙሉ ዘመናዊ ሜላ ከምዚ ይካየድ፦

1. RNA ወይ ኣቃውማኡ ዝተፈትሐ DNA ናብ ናይሎን ወይ ናይትሮሴሉሎዝ ኣሕልፉ። ድሕሪኡ፣ እቲ ናሙና ኣብ እዋን ምቕላም ከይጠፍእ፣ ብUV መስቀላዊ ምእሳር ወይ ብምውዓይ ኣብ ቦታኡ ኣጽንዕዎ።
2. ኣማራጺ እዩ፣ ግን ልሙድ፦ ነቲ መምብሬን ኣብ 5 percent ኣሴቲክ ኣሲድ ንኣስታት 15 minutes ኣርጥብዎ።
3. ኣብ 0.3 ክሳብ 0.5 M ሶድየም ኣሴቴት፣ ኣብ ከባቢ pH 5.2፣ ብ0.02 ክሳብ 0.04 percent መቲሊን ብሉ ን5 ክሳብ 10 minutes ቀልምዎ።
4. ን5 ክሳብ 15 minutes ብማይ ሕጸብዎን ቀለሙ ኣወግዱን፣ ምስሉ መዝግቡ፣ ድሕሪኡ ቅድሚ ሃይብሪዳይዜሽን ዝተረፈ ቀለም ኣወግዱ።

ኣወንታዊ ክፍያ ዘለዎ ናይሎን ኣብ ናይ Northern ስራሕ ዓብላሊ እዩ። ናይትሮሴሉሎዝ እውን በቲ ተመሳሳሊ ኣሴቲክ ኣሲድን ኣሴቴትን ዝጥቀም ኣሰራርሓ ይሰርሕ። እቲ ምስሊ፣ ምትሕልላፍ ንምርግጋጽ፣ 28Sን 18Sን ባንድታት ንምንጽጻር (ወይ ንባክተርያዊ RNA፣ 23Sን 16Sን)፣ ናይ መጠን መለክዒ ደረጃታትን መወከሲ ናሙናታትን ንምምልካት፣ ከምኡውን ግምታዊ ናይ ጠቕላላ RNA ኖርማላይዜሽን መዝገብ ንምዕቃብ ይጥቀም። ዝተሓትሙ ናይ Northern ሜላታት፣ መጠን ዝተጻዕነ ናሙና ንምፍታሽ ንዝተቐልሙ ሪቦዞማዊ ባንድታት ይዕቅኑ። እዚ፣ ብመቲሊን ብሉ ዝተቐልሙ ሪቦዞማዊ ባንድታት ንኖርማላይዜሽን ዝተጠቕመ ናይ ሳይንስ ጸባ ስራሕ እውን የጠቓልል። ናይ Southern መምብሬናት በዚ ተመሳሳሊ መንገዲ ክርኣዩ ይኽእሉ። እቲ ቀለም ግን ከም ናይ Northern ጽዕነትን ምትሕልላፍን መፈተሺ ዝያዳ ዝተመስረተ እዩ። ናይ Southern DNA ቅድሚ ምትሕልላፍ ኣቃውማኡ ይፍታሕ፣ ስለዚ ናይ ጄል ተነቃፍነት ኣሃዛት ብቐጥታ ኣብኡ ኣይሰርሑን።

ደረታት ምልላይን ድሕረ ባይታን፦ ሰማያዊ ቀለም ኣበይ ይደክም

እዚ ኣብ ታሕቲ ዘሎ ምንጽጻር ኮነ ኢሉ ግምታዊ እዩ። ናይ ቀለም ኣፈጻጽማ፣ ኣብ ሚእታዊት ጄል፣ ስፍሓት ባንድ፣ ኦፕቲክስን ናይ ቀለም ምውጋድ ስነ ስርዓትን ይምርኮስ። ነፍሲ ወከፍ ቁጽሪ ከም ግምታዊ ደረጃ መጠን እምበር፣ ከም ዝተወሰነ መለክዒ ኣይትውሰድዎ።

ምቁጽጻር ድሕረ ባይታ፣ እቲ ውሱን ምልክት ጠቓሚ ክኸውን ይኽእል ድዩ ኣይክእልን ይውስን። ናጻ ቀለም ኣዝዩ ሓያል ሕብሪ ኣለዎ፣ ስለዚ ንዝተኣስረ ቀለም ከይኣወገድካ፣ ነቲ ዘይተኣስረ ቀለም ብምውጋድ እዩ ፍልልይ ሕብሪ ዝርከብ። ዝያዳ ዝተወከለ ቀለም ሳሕቲ ጥራይ ተነቃፍነት ይውስኽ። ብቐንዱ ናይ ቀለም ምውጋድ ግዜ እዩ ዝውስኽ። በቶም ብልክዕ እትጥቀሙሎም ጄል፣ መምብሬንን ካሜራን ተኸታታሊ ዝተቐጠኑ ናሙናታት ፈትኑ፣ እቲ ዝተደመረ ሓይሊ ምስሊ ምስ ዝተጻዕነ መጠን ተመጣጣኒ ኣብ ዝጸንሓሉ ክልል ጥራይ ተጠቐሙ። መቲሊን ብሉ ንፍርቂ ዕቅናዊ ናይ ጽዕነት ኖርማላይዜሽን ይድግፍ። ናይ መምብሬን ዓቕሚ፣ ብቕዓት ምትሕልላፍ፣ ምጽጋብን ቀለም ምውጋድን ካብ መስመር ናብ መስመር ስለ ዝፈላለዩ፣ ሰፊሕ ናይ ዕቅና ክልል ዘለዎ መርመራ ኣይኮነን።

ደረታት ተሰማምዖ፦ ድሕሪ ምቕላም እንታይ ብቕዓቱ ይዕቅብ

ድሕሪ ብሰማያዊ ቀለም ምቕላም፣ ክሎኒንግ ክካየድ ከም ዝኽእል ተራእዩ እዩ። Floresን መሳርሕቱን ዝተቐልሙ ናይ ኣጋሮዝ ባንድታት ቆሪጾም ኣውጺኦም፣ DNA መሊሶም ረኺቦም፣ ብሊጌሽን ኣተኣሳሲሮሞን ብትራንስፎርሜሽን ናብ ዋህዮታት ኣእትዮሞን። ምስ ኤቲድየም ብሮማይድን UVን ድሕሪ ምጥቃም ካብ ዝርከብ ውጽኢት ዝሓሸ ክሎኒንግ ከም ዝረኸቡ ሓቢሮም። እቲ ዝበለጸ ዝኸውን ምኽንያት፣ ካብቲ ቀለም ባዕሉ ዝመጽእ ረብሓ ዘይኮነስ፣ ዝወሓደ ብብርሃን ዝመጽእ ጉድኣት እዩ። ንጻዕዳ ብርሃን ዝቃላዕ ግዜ ሓጺር ግበሩ፣ ነቲ ዝተመልሰ DNA ድማ ብመደበኛ ናይ ጄል ምውጻእ መስርሕ ኣጽርይዎ።

ንPCRን ንምውሳን ቅደም ተኸተል መሰረታትን ዘሎ መርትዖ ዝውሕድ እዩ። ዝተረፈ ቀለም ንኑክሊክ ኣሲዳት ይኣስር፣ ስለዚ ቅድሚ ኤንዛይማዊ ደረጃታት ቀለሙ ኣወግዱን ኣጽርይዎን። ካብ ብሰማያዊ ቀለም ዝተቐልመ ጄል ብግቡእ ዝተጻረየ DNA ክሰርሕ ትጽቢት ይግበር፣ ግን ዝተፈላለዩ ፖሊመሬዛትን ናይ ቅደም ተኸተል ምውሳን ኬሚስትሪታትን ብቐጥታ ዝተረፈ ቀለም ክንደይ ክጻወሩ ከም ዝኽእሉ ብግቡእ ኣይተዓቀነን። ከም ዝጻወሩ ኣይትገምቱ።

ናይ ብሎት ሃይብሪዳይዜሽን ምስ ምቕላም ይሰማማዕ፣ እቲ ቅደም ተኸተል ግን ብጥብቂ ክኽተል ኣለዎ፦ ምትሕልላፍ፣ ኣብ ቦታኡ ምጽናዕ፣ ምቕላም፣ ምስሊ ምምዝጋብ፣ ቀለም ምውጋድ፣ ሃይብሪዳይዜሽን። እዚ ቅደም ተኸተል ናይ Herrinን Schmidtን ንድፊ እዩ። ቅድሚ ምትሕልላፍ ምቕላም፣ ወይ ቀለም ምውጋድ ምግዳፍ፣ ዝተፈልየ ሜላ እዩ፣ ናይ ባዕሉ መረጋገጺ ድማ የድልዮ። ድሕሪ ቀለም ምውጋድ፣ መደበኛ ፕሮብ ምእላይን ዳግማይ ብፕሮብ ምምርማርን ብንቡር ይቕጽሉ። በዚ ተመሳሳሊ ስድራ ቀለማት ኣብ ደረጃ ዋህዮ ምቕላምን፣ ንዝተጸንዐ ቀጢን ናሙና ዝሰርሕ ኣተሓሳስባ ስለምንታይ ናብ ናይ ህያው ዋህዮ ሜላታት ክሰጋገር ከም ዘይክእልን ንምፍላጥ፣ ኣትላስ ናይ ማይክሮስኮፒ ምቕላም ርኣዩ።

ባንድ ቆሪጽካ ምውጻእ፣ ንድሒሩ ዝጥቀሙሉ ኣጋሮዝን ብሰማያዊ ቀለም ዝተለለዩ ናይ PAGE ኦሊጎታትን ይሰርሕ፣ እቲ ናይ ቀዋሚ ምጽናዕ ሜላ እንተ ተወጊዱ። ቀለም ድሕሪ ምውጋድ ብኤሌክትሪክ ኣውጺእካ ምእካብ፣ ንክምለስ ዝኽእል ማእሰር ካብ ኬሚካላዊ መንገዲ ርትዓዊ እዩ። ንመቲሊን ብሉ ብፍሉይ ዝምልከቱ ብቁጽጽር ዝተረኽቡ ናይ ምምላስ መጠን ሓበሬታታት ግን ውሑዳት እዮም። ድሕሪ ምውጻእ፣ ጨው ኣወግዱ ወይ ብምርጋእ እከቡ።

ብተደጋጋሚ ዝርኣዩ ጸገማት

ድኹማት ናይ ጄል ባንድታት፣ ብተለይ ንሓጸርቲ ንጽል ሰንሰለት ወይ RNA ዒላማታት፣ ብሕብሪ ንዝልለ ቀለም እቲ መጠን ኣዝዩ ውሑድ ምዃኑ እዮም መብዛሕትኡ ግዜ ዘመልክቱ። ዝያዳ ናሙና ጽዓኑ፣ ሓድሽ ቀለም ተጠቐሙ፣ ናይ ቀለም ውክለት ቅድሚ ምውሳኽኩም ናይ ምቕላም ግዜ ኣናውሑ፣ ቀለም ምውጋድ ድማ ቀልጢፍኩም ኣቋርጹ። ብምሉኡ ሰማያዊ ኮይኑ ዝርአ፣ ፍልልይ ሕብሪ ዘይብሉ ጄል፣ መብዛሕትኡ ግዜ ካብ መጠን ንላዕሊ ምቕላም ወይ ማይ ብእኹል ግዜ ዘይምቕያር የመልክት። ዝሃስሱ ናይ PAGE ባንድታት፣ ትጽቢት ዝግበረሉ ኬሚስትሪ እምበር ዝፈሸለ ምቕላም ኣይኮኑን። ብቕልጡፍ ስእሊ ኣልዕሉ። ዘይማዕረ ናይ መምብሬን ድሕረ ባይታ፣ ዕጻፋት፣ ኣረፋታት፣ ኣሰር ኣጻብዕቲ፣ ዘይማዕረ ምንቕናቕ ወይ በብቦታኡ ዝፈላለ ምትሕልላፍ ከም ዘሎ የመልክት። ብዘይ ናይ ሃይብሪዳይዜሽን መቆጻጸሪ ናሙና፣ ከም ዘይማዕረ ጽዕነት ኣይትተርጉምዎ። ዝተበታተነን ድኹምን ሪቦዞማዊ ቅርጺ፣ ምብስባስ ከመልክት ይኽእል፤ ግን ዘይተማልአ ምትሕልላፍ፣ ኣዝዩ ውሑድ ጠቕላላ RNA (ንቡራት መስመራት ካብ ገለ ክሳብ ዓሰርተታት micrograms ይሕዙ)፣ ወይ ካብ መጠን ንላዕሊ ቀለም ምውጋድ እውን ክኸውን ይኽእል። እቲ ቀለም ብብዝሒ ዘሎ ሪቦዞማዊ RNA የርኢ። ሓደ ዝተወሰነ ትራንስክሪፕት ኣየርእን። እቲ ስራሕ ናይ ፕሮብ እዩ።

ድሕነትን ኣተሓሕዛን፣ ካብ መጠን ንላዕሊ ከይገለጽካ

መቲሊን ብሉ ካብ ኤቲድየም ብሮማይድ ንምትሓዝ ዝቐለለ እዩ፣ ጉድኣት ዘይብሉ ግን ኣይኮነን። ሓደ እዋናዊ ናይ MilliporeSigma ድሕነት ሓበሬታ ወረቐት፣ ነቲ ቀለም ኣብ ናይ ሃንደበታዊ ብኣፍ ዝኣቱ መርዛማነት Category 4 ይምድቦ፣ እንተ ተዋሒጡ ጎዳኢ ምዃኑ ድማ ይገልጽ። ብመሰረት ናይ Sigma-Aldrich መቲሊን ብሉ SDS፣ ብዝተፈቕደ ናይ ጎሓፍ መንገዲ ክውገድ ኣለዎ። ኤቲድየም ብሮማይድ ዝሓየሉ ናይ ጄኖቶክሲሲቲ መጠንቀቕታታት ኣለዎ። እዚ፣ ኣብ ናይ Sigma-Aldrich ኤቲድየም ብሮማይድ SDS ዝተጠቕሱ ኣብ ናይ መራብሒ ዋህዮታት ክህልዉ ዝጥርጠሩ ጽልዋታት እውን የጠቓልል። ከምቲ ኣብ ናይ Thermo Fisher ኑክሊክ ኣሲድ ቀለማት መምርሒ ዝተገልጸ፣ ጄላቱን ፈሳሲታቱን ብተለምዶ ከም ሓደገኛ ኬሚካላዊ ጎሓፍ ተፈልዮም ይእከቡ። ንክልቲኦም፣ SDSን ሕግታት ትካልኩምን ተኸተሉ። ደረቕ ቀለም ብጥብቂ ተዓጽዩን ደሪቑን ይጽናሕ፣ ኣብ ስራሕ ዝጥቀሙሉ ቀለም እቲ ፕሮቶኮል ብዝፈቕዶ ጥራይ ዳግማይ ተጠቐሙሉ፣ ዝተቐልሙ መምብሬናት ኣብ መንጎ መጻረዪ ወረቓቕቲ ደሪቖም ዕቀቡ፣ ባንድታት ተበታቲኖም ቅድሚ ምጥፋኦም ድማ ናይ ጄላት ስእሊ ኣልዕሉ።

ነታ ኣብ ጠረጴዛ ቤተ ፈተነ እትሕግዝ ሓረግ ዘክሩ። ጄላት፣ ብጻዕዳ ብርሃን ኣብ ልዑል መጠን ጽዕነት ምርኣይ ይፍትሹ። መምብሬናት፣ እቲ ፕሮብ ተነቃፊ ስራሑ ቅድሚ ምፍጻሙ፣ ምትሕልላፍን ጽዕነትን ይፍትሹ። ሓደ ቀለም ንክልቲኦም የገልግል፣ ብውሱን ተነቃፍነት፣ ክምለስ ብዝኽእል ምእሳርን ጥቡቕ ቅደም ተኸተል ስራሕን።