Мақола
Тафсири намуди колонияҳои E. coli ва дигар организмҳо дар агари EMB
Донишҷӯ намунаи номаълумро бо усули хаткашӣ ба агари эозин-метиленӣ кабуд кишт мекунад, онро шабона инкубатсия мекунад ва баъд дар косача колонияҳои тираеро бо ҷилои сабз мебинад. Дар дафтар чунин менависад: «E. coli, тасдиқ шуд». Ин навишта аз он чизе, ки косача асоснок карда метавонад, бештарро иддао мекунад. Косача фенотипи афзоиш ва ферментатсияро дар шароити муайян нишон медиҳад. Муайян кардани намуд хулосаи алоҳидаест, ки далелҳои алоҳида талаб мекунад.
Ин дастур натиҷаҳои агари EMB-ро ҳамчун масъалаи тафсир баррасӣ мекунад. Он принсипи асосиро шарҳ медиҳад, атласи тасвирии косачаҳоро бо намунаҳои назоратӣ қадам ба қадам баррасӣ мекунад ва ҳолатҳоеро нишон медиҳад, ки тасвири китобӣ метавонад ба иштибоҳ барад.
Принсипи кори муҳит
Агари EMB ҳам интихобӣ ва ҳам тафриқавӣ аст. Рангҳои эозин Y ва метиленӣ кабуд афзоиши бисёр организмҳои граммусбатро бозмедоранд, бинобар ин муҳит барои афзоиши организмҳои грамманфӣ мусоидтар аст. Ҳамин рангҳо ҳамчун индикатор низ амал мекунанд: вақте организм қанди мавҷударо ферментатсия карда, дар маҳалли колония ба қадри кофӣ кислота ҳосил мекунад, колония рангро ба миқдори зиёд ҷаббида, аз бунафши тира то кабуду сиёҳ мешавад. Ҳангоми ҳосилшавии босуръати кислота дар сатҳи колония ҷилои металлии сабзи тобон пайдо шуда метавонад. Протоколи ASM барои косачаҳои агари эозин-метиленӣ кабуд ин якҷояшавии интихоб ва тафриқаро шарҳ медиҳад ва барои таълим аксҳои намунавӣ пешниҳод мекунад.
Пеш аз тафсири ҳар натиҷа як ҷузъиёти муҳимро бояд санҷид: кадом таркиби муҳит истифода шудааст. Таркиби қадимии Holt Harris Teague лактоза ва сахароза дорад, дар ҳоле ки Levine EMB танҳо лактоза дорад. Организме, ки сахарозаро ферментатсия мекунад, вале лактозаро не, масалан бисёр изолятҳои Serratia marcescens, дар ин ду навъи муҳит метавонад намуди гуногун дошта бошад. Ҳуҷҷатҳои истеҳсолкунанда оид ба муҳитҳои EMB ин фарқияти таркибро ошкоро баён мекунанд. Истеҳсолкунанда ва таркиби муҳитро дар дафтар дар паҳлуи натиҷа қайд кунед.
Агари EMB-и омодашуда, ки ба он ҳанӯз кишт нашудааст, одатан аз сурху қаҳваранг то сурхтобу бунафш аст; баъзан тобиши сабзтоб ё таҳшини майда дорад. Ин ранги замина нишонаи афзоиш нест. Ҳар натиҷаро бо косачаи бекишт ё ҳолати ибтидоии ҳуҷҷатшуда муқоиса кунед ва косачаи аввалияи киштро пас аз тақрибан 18 то 24 соати инкубатсияи аэробӣ дар 35 то 37 C арзёбӣ кунед, агар протоколи таълимӣ шароити дигареро муқаррар накарда бошад. Инкубатсияи тӯлонӣ метавонад намуди аломатҳои ферментатсияро тағйир диҳад.
Тарзи мушоҳидаи косача
Аз ду навъи равшанӣ истифода баред. Аввал косачаро дар рӯшноии инъикосшуда ё моил дида, онро хам кунед: ҷилои металлӣ тобон аст ва вобаста ба кунҷи мушоҳида метавонад намоён ё нонамоён шавад. Сипас онро дар рӯшноии гузаранда мушоҳида кунед, то ранги колонияҳо ва марказҳои тираи онҳоро арзёбӣ намоед. Колонияҳои хуб ҷудошударо интихоб кунед, зеро зичии колонияҳо ва колонияҳои ҳамсоя ҷамъшавии маҳаллии кислотаро тағйир дода, рангро суст ё пурзӯр карда метавонанд. Маҷмӯаи тасвирҳои ASM инро бевосита нишон медиҳад: E. coli дар кишти омехта метавонад ҷилои интизоршавандаро гум кунад, зеро организмҳои атроф муҳити кислотагиро тағйир медиҳанд.
Ҳар гоҳ ки машқ имкон диҳад, намунаҳои назоратиро дохил кунед. Маҷмӯаи маъмули таълимӣ E. coli ATCC 25922-ро барои фенотипи кабуду сиёҳ бо ҷилои металлӣ, организми ғайриферменткунанда, ба монанди Salmonella Typhimurium ATCC 14028 ё Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853-ро барои фенотипи беранг ва организми граммусбат, ба монанди Enterococcus faecalis ё Staphylococcus aureus-ро барои назорати боздории афзоиш дар бар мегирад, чунон ки дар ҷадвалҳои стандартии назорати сифат барои муҳитҳои EMB оварда шудааст. Агар намунаи назоратии мусбат ҷило надошта бошад, пеш аз шубҳа кардан ба намунаи номаълум инкубатсия, зичии колонияҳо ё таркиби муҳитро санҷед.
Атласи тасвирии косачаҳо
Косачаҳои зер тасвирҳои сохташудаанд, на аксҳои киштҳои воқеӣ. Онҳо аломатҳоеро нишон медиҳанд, ки бояд ҷустуҷӯ кард, на сояи дақиқи ранги ягон штамми алоҳидаро. Онҳоро бо аксҳои намунавии ASM ва косачаҳои воқеии озмоишгоҳи таълимӣ муқоиса кунед.
Косачаи 1: Escherichia coli дар агари EMB, ферменткунандаи пурқуввати лактоза
E. coli дар агари EMB одатан аз бунафши тира то кабуду сиёҳ аст ва аксаран маркази тира ва ҷилои металлии сабз дорад, ки аз ҳосилшавии босуръати кислота ба вуҷуд меояд. Ҷило ҳамон аломати машҳурест, ки донишҷӯён меҷӯянд, аммо онро далели ёрирасон шуморед, на аломати таърифкунанда. Шиддати ҷило аз штамм, вақти инкубатсия, зичии колонияҳо ва кунҷи мушоҳида вобаста аст. Набудани ҷило E. coli-ро истисно намекунад ва колонияи тираи беҷило метавонад ба чандин ферменткунандаи дигар ишора кунад. Барои ҳар кори минбаъда колонияи хуб ҷудошударо интихоб кунед, на он ки натиҷаро аз бахши серколония хонед.
Косачаи 2: Klebsiella pneumoniae дар агари EMB, ферменткунандаи луобмонанд
Klebsiella pneumoniae дар агари EMB одатан колонияҳои калон, дурахшон ва луобмонандро бо сояҳои аз гулобию бунафш то қаҳварангу бунафш ташкил медиҳад. Онҳо аксаран маркази тира доранд, вале одатан ҷилои металлии қавӣ надоранд. Морфологияи монанд дар ферменткунандаҳои наздик, ба монанди Enterobacter, низ дида мешавад. Сохтори луобмонанд ва андозаи колония ҷузъи тафсир мебошанд: колонияи гулобии хурду ҳамвор назар ба колонияи калони гунбазшаклу луобмонанд аҳамияти дигар дорад. Мисли E. coli, косача танҳо ба фенотипи ферментатсия ишора мекунад ва номгузорӣ дар сатҳи намуд тасдиқи биокимиёвиро талаб менамояд, ки дар поён шарҳ дода шудааст.
Косачаи 3: Salmonella дар агари EMB ва дигар ғайриферменткунандаҳо, колонияҳои беранг
Salmonella дар агари EMB ва дигар организмҳои наздике, ки лактозаро ферментатсия намекунанд, аз ҷумла Shigella ва бисёр изолятҳои Pseudomonas, одатан ҳамчун колонияҳои беранг, нимшаффоф ё қаҳрабоии камранг афзоиш меёбанд. Баъзе таркибҳои муҳит ва шароитҳо тобиши сусти гулобӣ медиҳанд, бинобар ин колонияи гулобии камранг худ аз худ нишонаи ферменткунанда нест. EMB Salmonella-ро аз Shigella ё аз дигар ғайриферменткунандаҳо фарқ намекунад; ин фарқгузорӣ ба санҷишҳои баъдӣ тааллуқ дорад. Ҳамчунин дар назар дошта бошед, ки штаммҳои лактозамусбати Salmonella бо колонияҳои металлии монанд ба E. coli ҳуҷҷат шудаанд. Ин боз як сабабест, ки як косача барои хулосаи ниҳоӣ кофӣ нест.
Косачаи 4: Serratia marcescens ва иштибоҳи вобаста ба таркиби муҳит
Serratia marcescens бахши алоҳида дорад, зеро донишҷӯён аксаран колонияҳои сурхро интизор мешаванд ва баъдан косачаро нодуруст тафсир мекунанд. Аксари изолятҳои клиникӣ лактозаро ферментатсия намекунанд, бинобар ин дар Levine EMB онҳо одатан камранг ё сустранг мешаванд. Азбаски бисёр изолятҳо сахарозаро ферментатсия мекунанд, таркиби дорои сахароза метавонад аксуламали тиратар ё бештар вобаста ба ҳосилшавии кислота диҳад. Дар 35 то 37 C пигменти сурхи маъмули продигиозинро низ интизор нашавед; ҳосилшавии пигмент дар ҳарорати инкубатор боэътимод нест. Вақте протокол Serratia marcescens-ро дар агари EMB зикр мекунад, санҷед, ки ин гуфта кадом таркиби муҳитро дар назар дорад. Шарҳи мубодилаи моддаҳои Serratia хусусияти лактозаманфӣ ва тағйирпазирии ферментатсияи сахарозаро, ки сабаби ин иштибоҳанд, ҷамъбаст мекунад.
Косачаи 5: намунаҳои назоратӣ ва организмҳои афзоишашон боздошташуда
Афзоиши организмҳои граммусбат, ба монанди Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus ва Bacillus, дар агари EMB одатан боздошта мешавад ё ба таври назаррас суст мегардад, ҳарчанд ин боздорӣ барои ҳар штамм мутлақ нест. Маҷмӯаи намунаҳои назоратӣ тафсирро боэътимод мекунад: намунаи назоратии E. coli бояд афзоиши хуб бо ранги кабуду сиёҳ ва ҷило нишон диҳад, намунаи назоратии ғайриферменткунанда бояд афзоиши беранг дошта бошад ва намунаи назоратии боздории афзоиш бояд кам афзоиш ёбад ё тамоман афзоиш наёбад. Агар намунаи назоратии боздорӣ хуб афзоиш ёбад, марҳилаи интихобӣ кор накардааст ва ҳар тафсири дигари он силсилаи муҳит зери шубҳа мемонад. Усулҳои рангкунӣ ба саволи дигаре ҷавоб медиҳанд, на ба ҳамон саволи муҳитҳои кишт; барои бахши рангкунии шишаҳои ашёӣ дар озмоишгоҳ ба атласи рангкунӣ бо метиленӣ кабуд нигаред.
Муқоиса бо дарназардошти маҳдудиятҳо
| Мушоҳида дар агари EMB | Маънои эҳтимолӣ | Чиро муайян намекунад |
|---|---|---|
| Колонияи тираи кабуду сиёҳ бо ҷилои сабз дар рӯшноии моил | Ферментатсияи пурқувват; E. coli яке аз номзадҳои асосӣ аст | Шиносоии намуд; дигар ферменткунандаҳои пурқувват низ ҷило дода метавонанд |
| Колонияи калони луобмонанди гулобию бунафш, бе ҷило | Ферменткунанда бо хусусияти капсулавӣ; Klebsiella номзад аст | Махсусан Klebsiella pneumoniae; Enterobacter намуди монанд дорад |
| Колонияи беранг ё нимшаффоф | Организме, ки лактозаро ферментатсия намекунад, масалан Salmonella, Shigella, Pseudomonas | Кадом ғайриферменткунанда будани он; фарқ кардани Salmonella аз Shigella санҷишҳои дигар талаб мекунад |
| Колонияи камранг дар ҷое, ки ранги сурх интизор буд | Эҳтимол Serratia дар EMB-и танҳо лактозадор дар 37 C | Набудани Serratia; таркиби муҳит ва ҳароратро санҷед |
| Набудани афзоиш ё колонияҳои хеле хурд бо афзоиши боздошташуда | Эҳтимол боздории организмҳои граммусбат | Беҷурмӣ ё шиносоии организм; баъзе штаммҳо аз боздорӣ раҳо мешаванд |
Се ҷумла намудҳои зоҳирии гумроҳкунандаро ҷамъбаст мекунанд. Ранги тира маънои E. coli-ро надорад, зеро Klebsiella, Enterobacter ва дигар ферменткунандаҳо марказҳои тираи беҷило ҳосил мекунанд. Ранги гулобӣ маънои Klebsiella-ро надорад, зеро ферменткунандаҳои мӯътадил ё суст ва баъзе организмҳое, ки маъмулан ғайриферменткунанда шуморида мешаванд, гулобӣ ё бунафши равшан менамоянд. Ҷило маънои тасдиқи қатъии E. coli-ро надорад, зеро дигар ферменткунандаҳои пурқувват низ онро ҳосил карда метавонанд. Протоколи таълимӣ ва тасвирҳои кишти омехтаи он ҳар яке аз ин ҳолатҳои тафсири нодурустро нишон медиҳанд.
Маҳдудиятҳои тасдиқ
Агари EMB фенотипро нишон медиҳад, на намудро. Организмҳои гуногун метавонанд колонияҳои ҳамнамуд дошта бошанд ва як организм вобаста ба штамм, синну сол, зичии колонияҳо, таркиби муҳит ва инкубатсия метавонад аз тасвири китобии худ фарқ кунад. Аз ҳамин сабаб, дар равандҳои таълимӣ ва клиникӣ морфологияи EMB ҳамчун нишонаи пешакӣ баррасӣ мешавад.
Тартиби кори асоснок барои донишҷӯ чунин аст: колонияи ҷудошударо тавсиф кунед — андоза, ранг, марказ, ҷило дар рӯшноии моил ва хусусияти луобмонанд; таркиби муҳит, вақт ва ҳарорати инкубатсия ва намунаҳои назоратиро қайд кунед; сипас пеш аз ҳар санҷиши тасдиқӣ колонияи хуб ҷудошударо дубора кишт карда, кишти холис ба даст оред. Санҷишҳои маъмули минбаъда рангкунии Грам ва реаксияҳои IMViC барои шиносоии пешакии E. coli ва колиформҳо, TSI ё KIA ва маҷмӯаҳои санҷишҳои биокимиёвии махсуси организм барои организмҳои рӯдаиро дар бар мегиранд. Вақте вазифа талаб мекунад, шиносоии серологӣ, MALDI TOF ё дигар усулҳои тасдиқшуда низ истифода мешаванд. Барои маълумоти заминавӣ дар бораи ҷойгоҳи EMB дар байни муҳитҳои интихобӣ ва тафриқавии рӯдаӣ ба маводи муқаддимавӣ оид ба муҳитҳои кишти организмҳои рӯдаӣ ва санҷишҳои минбаъда пас аз рангкунии Грам нигаред. Дар масъалаи вобастаи он ки рангкунии кабуди шишаи ашёӣ чиро исбот карда метавонад ва чиро не, атласи рангкунӣ бо метиленӣ кабуд низ бо ҳамин равиш мушоҳидаро аз хулоса ҷудо мекунад.
Пеш аз хулоса мушоҳидаро нависед. «Колонияҳои тираи кабуду сиёҳ бо ҷилои сабзи вобаста ба кунҷи мушоҳида дар Levine EMB пас аз 24 соат, ки ба ферментатсияи пурқуввати лактоза мувофиқат мекунанд» — навиштаи асоснок аст. «E. coli, тасдиқ шуд» марҳилаи тасдиқеро талаб мекунад, ки танҳо худи косача таъмин карда наметавонад.