వ్యాసం
EMB అగార్ వర్సెస్ MacConkey అగార్: మీడియా ఎంపిక మరియు వ్యాఖ్యానం
ఒక విద్యార్థి అదే నీటి నమూనాను రెండు ప్లేట్లపై స్ట్రీక్ చేస్తాడు. ఒకదానిపై ఆకుపచ్చ లోహపు మెరుపుతో ముదురు కాలనీలు కనిపిస్తాయి. మరొకదానిపై మసక హాలోతో ప్రకాశవంతమైన గులాబీ కాలనీలు కనిపిస్తాయి. రెండు ప్లేట్లకూ అదే ట్యూబ్ నుంచి ఇనాక్యులేట్ చేసి, పక్కపక్కనే ఇన్క్యుబేట్ చేసి, అదే గంటకు పరిశీలించారు. ఏ ప్లేట్ సరైనదో విద్యార్థి అడుగుతాడు.
రెండు ప్లేట్లూ సరైనవే. అవి వేర్వేరు ప్రశ్నలకు సమాధానం ఇస్తాయి. ఈ రెండు మీడియాను పేగు బ్యాక్టీరియాకు పరస్పరం మార్చి ఉపయోగించగల స్క్రీనింగ్ పద్ధతులుగా భావించినప్పుడు గందరగోళం వస్తుంది. రెండింటి ఉద్దేశ్యం ఒకటే: Gram negative ఎంటెరిక్ జీవులను ఎంపిక చేయడం మరియు లాక్టోస్ ఫెర్మెంటర్లను నాన్‌ఫెర్మెంటర్ల నుంచి వేరు చేయడం. కానీ ఆ ఉద్దేశ్యాన్ని అవి వేర్వేరు రసాయనశాస్త్రం, వేర్వేరు దృశ్య సంకేతాలతో అమలు చేస్తాయి. ఈ రెండు ప్రాథమిక భావనలు అర్థమైన తర్వాత, ప్లేట్ ఎంపిక మరియు కాలనీ రీడింగ్ సాధారణ ప్రక్రియగా మారుతాయి.
సంక్షిప్త సమాధానం
EMB అగార్ eosin Y మరియు methylene blue అనే రెండు డైలను ఉపయోగిస్తుంది. ఇవి రెండు పనులు చేస్తాయి: Gram positive వృద్ధిని అణచివేస్తాయి, అలాగే ఎక్కువ ఆమ్లాన్ని ఉత్పత్తి చేసే జీవుల చుట్టూ అవక్షేపించి ముదురు కాలనీలను సృష్టిస్తాయి; Escherichia coli విషయంలో సాంప్రదాయంగా లోహపు ఆకుపచ్చ మెరుపు కనిపిస్తుంది. MacConkey అగార్ ఈ పనులను వేరు చేస్తుంది: bile salts మరియు crystal violet Gram positivesను అణచివేస్తాయి, lactose ఫెర్మెంటేషన్‌కు సబ్‌స్ట్రేట్‌గా పనిచేస్తుంది, neutral red ఆమ్లాన్ని గులాబీ లేదా ఎరుపు కాలనీల రూపంలో చూపిస్తుంది. లక్ష్యం E. coli యొక్క స్పష్టమైన ప్రాథమిక గుర్తింపును ప్రదర్శించడం అయితే EMB ఉపయోగకరంగా ఉంటుంది. ముఖ్యంగా మలం లేదా మూత్ర నమూనా వర్క్‌ఫ్లోల్లో, లాక్టోస్ ఫెర్మెంటర్లను నాన్‌ఫెర్మెంటర్ల నుంచి గులాబీ వర్సెస్ రంగులేని రూపంలో సులభంగా వేరు చేయడం లక్ష్యమైతే MacConkey సాధారణంగా చదవడానికి సులభమైనది. రంగు ఒక్కటితో ఏ ప్లేట్ కూడా జీవిని గుర్తించదు.
EMB: ఒకేసారి ఎంపిక చేసే మరియు సంకేతం ఇచ్చే డైలు
EMB భావనలో ఎంపిక మరియు సూచన రెండూ అదే అణువుల్లో ఉంటాయి. ASM eosin methylene blue agar ప్రోటోకాల్ EMBను ఎంపికాత్మక మరియు భేదాత్మక మాధ్యమంగా వివరిస్తుంది. ఇందులోని డై జంట అనేక Gram positive జీవులను అణచివేస్తుంది, కాగా lactose fermentation డై గ్రహణం మరియు అవక్షేపణను ప్రేరేపిస్తుంది. ప్రామాణిక Levine ఫార్ములేషన్‌లో peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue మరియు agar ఉంటాయి; ఇవి Levine EMB agar కోసం FDA BAM పద్ధతిలో జాబితా చేయబడ్డాయి. పాత EMB ఫార్ములాల్లో కొన్ని lactoseతో పాటు sucrose కూడా కలిగి ఉండేవి, అయితే Levine EMBలో lactose ఉంటుంది కానీ sucrose ఉండదు. కాబట్టి మీ ప్రయోగశాలలో ఏ ఫార్ములేషన్ నిల్వలో ఉందో నమోదు చేయండి.
EMBను చదవడం అంటే డై ప్రవర్తనను చదవడం. బలమైన lactose fermentation ఎక్కువ ఆమ్లాన్ని ఉత్పత్తి చేసి అధిక డై అవక్షేపణను కలిగిస్తుంది. దీని వల్ల E. coli కాలనీలకు ముదురు నీలం-నలుపు కేంద్రాలు, అలాగే సాంప్రదాయ సందర్భంలో ప్రతిఫలిత కాంతిలో ఆకుపచ్చ లోహపు మెరుపు కనిపిస్తాయి. Enterobacter మరియు Klebsiella వంటి బలహీన ఫెర్మెంటర్లు సాధారణంగా ఆ మెరుపు లేకుండా గులాబీ నుంచి ఊదా రంగు వరకు ఉండే మ్యూకాయిడ్ కాలనీలుగా పెరుగుతాయి. Salmonella, Shigella మరియు Proteus వంటి నాన్‌ఫెర్మెంటర్లు సాధారణంగా రంగులేని లేదా పారదర్శక కాలనీలుగా పెరుగుతాయి, ఎందుకంటే డైలను అవక్షేపించేంత తీవ్ర ఆమ్ల ఉత్పత్తి వాటిలో ఉండదు. Gram positives సాధారణంగా అణచివేయబడతాయి, అయితే అణచివేత స్థాయి strain మరియు productపై ఆధారపడి మారుతుంది. methylene blue మొదటగా కాటయానిక్ స్టెయిన్‌గా ఎందుకు ప్రవర్తిస్తుందనే అంశంతో సహా పూర్తి డై తయారీ రసాయనశాస్త్రం, డై ఫార్ములేషన్లపై ప్రత్యేక చర్చకు చెందుతుంది. సాధారణ మైక్రోస్కోపీ నేపథ్యం స్టెయినింగ్ పద్ధతుల అట్లాస్లో ఉంది. ఈ వ్యాసం ప్లేట్ ఎంపిక మరియు రీడింగ్‌పైనే దృష్టి పెడుతుంది.
పై చిత్రం వివరణాత్మకమైనది. ఇది ఆశించాల్సిన దృశ్య తర్కాన్ని చూపిస్తుంది: EMBపై ముదురు మెరుపు కాలనీలు, గులాబీ మ్యూకాయిడ్ రకాలు మరియు పలుచని రకాలు; MacConkeyపై గులాబీ వర్సెస్ పలుచని రకాలు. నమూనాను నేర్చుకోవడానికి దీన్ని ఉపయోగించండి; తర్వాత మీ బెంచ్‌పై ఉన్న ఖచ్చితమైన మీడియాకు సంబంధించిన ఫోటోగ్రాఫ్ చేసిన కంట్రోల్స్ మరియు product insertతో ప్రతి నిర్ణయాన్ని ధృవీకరించండి.
MacConkey: వేరు చేసిన పనులు, సులభమైన దృశ్య నియమం
MacConkey భావన ప్రతి పనిని వేరే పదార్థానికి కేటాయిస్తుంది. ASM MacConkey agar ప్రోటోకాల్ కూడా ఇదే ఎంపికాత్మక మరియు భేదాత్మక నిర్మాణాన్ని వివరిస్తుంది. MacConkey agar కోసం FDA BAM పద్ధతి ప్రధాన భాగాలను జాబితా చేస్తుంది: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet మరియు agar. Bile salts మరియు crystal violet కలిసి Gram positivesను అణచివేస్తాయి. Lactose ఫెర్మెంటేషన్ సబ్‌స్ట్రేట్‌ను అందిస్తుంది. Neutral red pH సూచికగా పనిచేసి ఆమ్లం ఏర్పడిన చోట గులాబీ నుంచి ఎరుపు రంగుకు మారుతుంది; బలమైన ఫెర్మెంటర్ల చుట్టూ కొన్నిసార్లు bile అవక్షేపం కూడా కనిపిస్తుంది.
రీడింగ్ నియమం ఉద్దేశపూర్వకంగా సులభం: గులాబీ అంటే lactose fermenter; రంగులేని లేదా పలుచని రంగు అంటే nonfermenter. E. coli గులాబీ నుంచి ఎరుపు రంగులో కనిపిస్తుంది, తరచుగా bile అవక్షేప హాలోతో ఉంటుంది. Klebsiella మరియు Enterobacter గులాబీ రంగులో కనిపిస్తాయి మరియు వాటి capsules కారణంగా తరచుగా మ్యూకాయిడ్‌గా ఉంటాయి. Salmonella, Shigella, Proteus మరియు అనేక ఇతర Gram negative rods రంగులేని రూపంలో కనిపిస్తాయి. బోధనా ప్రయోగశాలల్లో ఒక అదనపు ప్రయోజనం కూడా ఉంది: bile salts సాధారణంగా Proteus swarmingను తగ్గిస్తాయి, కాబట్టి nonselective mediaతో పోలిస్తే MacConkeyపై విడివిడిగా కాలనీలు పొందడం సులభం. అయితే ఈ అణచివేత సంపూర్ణం కాదు; swarming నియంత్రణ ప్రధాన లక్ష్యమైతే salt free ప్రత్యామ్నాయాలు కూడా ఉన్నాయి.
డైలు ఇలా ప్రవర్తించడానికి అణు స్థాయి కారణం వాటి charge మరియు structureకు సంబంధించినది. Methylene blue ఒక cationic phenothiazine dye. దాని నిర్మాణం మరియు లక్షణాలు ఆమ్ల స్వభావం గల బ్యాక్టీరియా ఉపరితలాల పట్ల దాని ఆకర్షణను వివరిస్తాయి; EMBపై ఆమ్ల ప్రాంతాల్లో అది అవక్షేపించేటప్పుడు కూడా ఇదే ఆకర్షణ పనిచేస్తుంది.
ఒక చూపులో పోలిక
| లక్షణం | EMB agar | MacConkey agar |
|---|---|---|
| ఎంపికాత్మక వ్యవస్థ | Eosin Y plus methylene blue | Bile salts plus crystal violet |
| భేదాత్మక సబ్‌స్ట్రేట్ | Lactose (Levine has no sucrose) | Lactose |
| సూచిక | Dye precipitation itself (dark colonies, green sheen) | Neutral red (pink to red acid colonies) |
| బలమైన E. coli సంకేతం | Dark blue black colony, often metallic green sheen | Pink to red colony, often bile precipitate |
| Klebsiella and Enterobacter | Pink to purple, mucoid, usually no sheen | Pink to red, often mucoid |
| Salmonella, Shigella, Proteus | Usually colorless or translucent | Usually colorless or pale |
| Gram positives | Usually suppressed | Usually suppressed on crystal violet formulas |
| బోధనలో ప్రధాన ప్రయోజనం | Strong versus weak fermentation made visible | Simplest fermenter versus nonfermenter sort |
పట్టికను నిర్ణయ ప్రక్రియగా చదవండి. ఒక వ్యాయామంలో ఫెర్మెంటేషన్ బలం ఎలా క్రమంగా మారుతుందో, చివరలో ఒక స్పష్టమైన దృశ్య ఫలితంతో విద్యార్థులు చూడాల్సి ఉంటే EMB దాన్ని చూపిస్తుంది. బయోకెమికల్ ధృవీకరణకు ముందు త్వరగా రెండు వర్గాలుగా విభజించాల్సి ఉంటే MacConkey దాన్ని చూపిస్తుంది.
ఏ నమూనాకు ఏ మీడియం
ప్రాథమిక fecal coliform లేదా E. coli గుర్తింపును లక్ష్యంగా పెట్టుకున్న నీటి ప్రయోగాల్లో EMB ఆకర్షణీయంగా ఉంటుంది, ఎందుకంటే దాని మెరుపు దృశ్యపరంగా ప్రత్యేకంగా ఉంటుంది. MacConkey కూడా enteric Gram negativesకు ఉపయోగపడుతుంది మరియు నీటి పరీక్షల్లో చారిత్రక వినియోగం ఉంది. అయితే ఏ ప్లేట్ కూడా నియంత్రణ సంస్థ నిర్దేశించిన నీటి పరీక్షా పద్ధతికి ప్రత్యామ్నాయం కాదు; పరీక్షను బట్టి modified mTEC లేదా MI వంటి మీడియాను నిర్దేశించవచ్చు. మీ ప్రయోగశాల తప్పనిసరిగా అనుసరించాల్సిన పద్ధతిని తనిఖీ చేయండి.
మలం తరహా నమూనాల్లో ఫెర్మెంటర్లను నాన్‌ఫెర్మెంటర్ల నుంచి వేరు చేయడానికి, ఈ రెండింటిలో MacConkey సాధారణంగా ఎక్కువ ఉపయోగకరమైనది. Salmonella లేదా Shigella కోసం ప్రాయోగిక మలం పరీక్షల్లో MacConkey ఒక్కదానిపై ఆధారపడకుండా సాధారణంగా XLD లేదా Hektoen enteric వంటి మరింత ఎంపికాత్మక enteric mediaను కూడా ఉపయోగిస్తారు.
క్లినికల్ వర్క్‌ఫ్లోను అనుకరించే మూత్ర నమూనా బోధనలో MacConkeyను blood agarతో జత చేయండి. MacConkey ప్రారంభ Gram negative విభజనను అందిస్తుంది, అయితే blood agar MacConkey అణచివేసే జీవులను కూడా పెంచుతుంది. మూత్ర కల్చర్ ఏర్పాటుకు సంబంధించిన క్లినికల్ వివరణల్లో ఈ జత సాధారణంగా ఉపయోగించబడుతుంది.
పూర్తిగా భావన బోధించడమే లక్ష్యమైతే రెండింటినీ ఉపయోగించండి. EMB ఫెర్మెంటేషన్ బలం ముఖ్యం అని, ఒకే అణువు రెండు పాత్రలు పోషించగలదని బోధిస్తుంది. MacConkey మాడ్యులర్ డిజైన్‌ను బోధిస్తుంది: selector, substrate మరియు reporter వేర్వేరుగా ఉంటాయి. తెలిసిన E. coli, తెలిసిన Klebsiella aerogenes మరియు తెలిసిన Salmonellaను రెండు మీడియాలపైనా పక్కపక్కనే స్ట్రీక్ చేసిన విద్యార్థులు సాధారణంగా ఈ రెండు తర్కాలను మళ్లీ గందరగోళం చేయరు.
ప్రతి టర్మ్‌లో మళ్లీ కనిపించే రీడింగ్ పొరపాట్లు
అత్యంత సాధారణమైన పొరపాటు రంగు ఒక్కటితో గుర్తింపు చేయడం. MacConkeyపై గులాబీ రంగు E. coli, Klebsiella, Enterobacter లేదా మరొక fermenter కావచ్చు. రంగులేని కాలనీ Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas లేదా మరొక nonfermenter కావచ్చు. రంగు అనేది Gram stain, oxidase, biochemical panels లేదా instrument identification వంటి ధృవీకరణ పరీక్షలను ఎటు తీసుకెళ్లాలో సూచించే screening phenotype మాత్రమే; అది species పేరు కాదు.
రెండో పొరపాటు sheen కనిపించకపోవడాన్ని అతిగా అర్థం చేసుకోవడం. నిజమైన కొన్ని E. coli కాలనీలు, ముఖ్యంగా విడిగా ఉన్నవి, EMBపై చాలా తక్కువ లేదా అసలు metallic sheen చూపకపోవచ్చు. sheen లేకపోవడం E. coliని తప్పించదు; sheen ఉండటం కూడా దానిని నిరూపించదు. sheenను ప్రాథమిక సూచనగా మాత్రమే పరిగణించండి.
మూడో పొరపాటు వేర్వేరు వయస్సుల ప్లేట్లను పోల్చడం. ఆలస్యంగా lactose ferment చేసే జీవులు ఎక్కువసేపు incubation తర్వాత MacConkeyపై గులాబీ రంగుకు మారవచ్చు. దీంతో స్పష్టమైన fermenter వర్సెస్ nonfermenter విభజన మసకబారుతుంది. ప్రయోగశాల నిర్దేశించిన గంటకు ప్లేట్లను చదవండి మరియు ఫలితంతో పాటు incubation timeను నమోదు చేయండి.
నాలుగో పొరపాటు mixed growthను ఒకే జీవిగా చదవడం. గులాబీ కాలనీ పక్కన రంగులేని కాలనీ కనిపిస్తే అది రెండు phenotypesను సూచిస్తుంది, మధ్యస్థ స్థితిని కాదు. బాగా విడిపోయిన కాలనీలను ఎంచుకుని ప్రతి morphotypeను విడిగా పరిశీలించండి. Mucoid texture కూడా ఇలాంటి ఉచ్చును సృష్టిస్తుంది: Klebsiella మరియు Enterobacter రెండూ mucoidగా కనిపించవచ్చు, కాబట్టి capsule ఒక్కటే పేరును నిర్ణయించదు. ఒకప్పుడు Enterobacter aerogenesగా బోధించిన జీవి ఇప్పుడు Klebsiella aerogenesగా వర్గీకరించబడింది; అందుకే పాత చార్టులు మరియు కొత్త లేబుళ్లు పరస్పరం విభేదిస్తున్నట్లు కనిపిస్తాయి.
కంట్రోల్స్ మరియు చివరి నియమం
ప్రతి సెషన్‌లో ఫోటోగ్రాఫ్ చేసిన లేదా తాజా controls ఉపయోగించండి: బలమైన fermenter ప్రతిచర్య కోసం E. coli, సాంప్రదాయ sheen లేకుండా mucoid fermentation కోసం Klebsiella aerogenes, రంగులేని nonfermenter ప్రతిచర్య కోసం ఒక Salmonella strain, అలాగే మీ ఖచ్చితమైన productపై Gram positive suppressionను ధృవీకరించడానికి Staphylococcus aureus. strain numbers మరియు acceptance criteriaను manufacturer insertతో సరిపోల్చండి, ఎందుకంటే bile, crystal violet మరియు dye content మార్పులతో selectivity కూడా మారుతుంది.
బెంచ్ వద్ద ఒక వాక్యం గుర్తుంచుకోండి. EMBలో డైలు ఎంపిక కూడా చేస్తాయి, సంకేతం కూడా ఇస్తాయి; దీని వల్ల E. coliకి స్పష్టమైన సంకేతం లభిస్తుంది, కానీ రీడింగ్ కొంత సూక్ష్మంగా ఉంటుంది. MacConkeyలో ఎంపిక చేసే పని మరియు సంకేతం ఇచ్చే పని వేరు; దీని వల్ల గులాబీ వర్సెస్ పలుచని రంగు అనే సులభమైన విభజన లభిస్తుంది, కానీ fermentation వివరాలు తక్కువగా ఉంటాయి. ప్రశ్నకు సరిపోయే భావన ఉన్న మీడియాన్ని ఎంచుకోండి, రంగు ఆధారిత నిర్ణయాన్ని సరైన పరీక్షలతో ధృవీకరించండి; అప్పుడు ఈ రెండు ప్లేట్లు పరస్పరం పోటీ చేయడం మానేసి పరస్పరం సహకరిస్తాయి.