பாலுக்கான மெத்திலீன் நீல ஒடுக்கச் சோதனை: அடிப்படைக் கோட்பாடும் வரம்புகளும்

ஒரு மாணவி பால் நிரப்பிய இரண்டு சோதனைக் குழாய்களை உயர்த்திக் காட்டுகிறாள். ஒன்று ஒரு மணிநேரத்தில் வெள்ளையாக மாறியது. மற்றொன்று ஐந்து மணிநேரம் நீலமாகவே இருந்தது. நீலமாக இருக்கும் குழாயைச் சுட்டிக்காட்டி, அந்தப் பாலைக் குடிப்பது பாதுகாப்பானது என்கிறாள்.

அந்த முடிவு ஒரு தவறான புரிதலை வெளிப்படுத்துகிறது. மெத்திலீன் நீலப் பால் சோதனை பாதுகாப்பைக் கண்டறிவதில்லை. நிர்ணயிக்கப்பட்ட சூழ்நிலைகளில், அந்தக் குழாயிலுள்ள நுண்ணுயிரிகளின் தொகுதி ஆக்சிஜனேற்ற–ஒடுக்க மின்னழுத்தத்தை எவ்வளவு வேகமாகக் குறைக்கிறது என்பதையே அது காட்டுகிறது. மெதுவான முடிவு, மாதிரியின் ஒட்டுமொத்த வளர்சிதை மாற்றச் செயல்பாடு குறைவாக இருப்பதைக் குறிக்கிறது. எந்த உயிரினங்கள் உள்ளன, அவற்றில் நோய்க்கிருமி உள்ளதா, பால் முறையாகப் பாஸ்டுரைசேஷன் செய்யப்பட்டதா என்பவை குறித்து அது எதுவும் கூறுவதில்லை.

சோதனை நம்பகமானதாகத் தோன்றுவதால் இந்த வேறுபாடு முக்கியமானது. நீல நிறம் மறைகிறது. கடிகாரம் ஒரு எண்ணைத் தருகிறது. அந்த எண்களிலிருந்து அளவுக்கு மீறிய முடிவுகளை எடுக்கத் தோன்றுகிறது. இந்தக் கட்டுரை பயனுள்ள விளக்கத்தைத் தக்கவைத்து, பாதுகாப்பற்ற விளக்கத்தைத் தவிர்க்கிறது.

ஒடுக்கம் உண்மையில் எதை அளவிடுகிறது

மெத்திலீன் நீலம் ஆக்சிஜனேற்றம் அடைந்த நிலையில் நீலமாகவும், லியூகோமெத்திலீன் நீலமாக ஒடுக்கப்பட்ட நிலையில் கிட்டத்தட்ட நிறமற்றதாகவும் இருக்கும். புதிதாகப் பெறப்பட்ட பாலில் கரைந்த ஆக்சிஜன் உள்ளது; அது சாயத்தை நீலமாக வைத்திருக்கிறது. சுவாசம் மற்றும் நொதித்தல் செய்யும் பாக்டீரியாக்கள் அந்த ஆக்சிஜனைப் பயன்படுத்தி, ஒடுக்கும் சேர்மங்களை வெளியிடுகின்றன. ஆக்சிஜனேற்ற–ஒடுக்க மின்னழுத்தம் போதுமான அளவு குறையும்போது, சாயம் எலக்ட்ரான்களை ஏற்றுக்கொண்டு நிறத்தை இழக்கிறது. குவெல்ஃப் பல்கலைக்கழகத்தின் பால் நுண்ணுயிரியல் நூலும் இதே நிகழ்வுத் தொடரை, முதலில் ஆக்சிஜன் அகற்றப்படுதல், பின்னர் பாக்டீரிய வளர்சிதை மாற்றத்தின்போது ஒடுக்கும் பொருட்கள் உருவாதல் என விவரிக்கிறது.

Journal of Dairy Science இதழில் வெளியான முன்னோடி ஆய்வு இதை இரண்டு நிலைச் செயல்முறையாக விளக்குகிறது: முதலில் நுண்ணுயிரிகளின் தொகுதி ஆக்சிஜனைத் தீர்த்துவிடுகிறது; பின்னர் பாலின் கூறுகள் சாயத்தை விரைவாக ஒடுக்குகின்றன. எனவே, பாலுக்கான மெத்திலீன் நீல ஒடுக்கச் சோதனையை, செல்களை எண்ணும் சோதனையாக அல்லாமல், ஒருங்கிணைந்த வளர்சிதை மாற்றச் செயல்பாட்டை மதிப்பிடும் செயல்பாட்டுச் சோதனையாகப் புரிந்துகொள்வதே பொருத்தமானது. மெத்திலீன் நீலத்தின் ஆக்சிஜனேற்ற–ஒடுக்க நடத்தை இந்த மாற்றத்தின் பின்னுள்ள வேதியியலை விளக்குகிறது.

ஆக்சிஜன் இறுதிநிலையை மீண்டும் மாற்றுகிறது. ஒடுக்கப்பட்ட லியூகோ சாயம் காற்றுடன் தொடர்பு கொள்ளும்போது மீண்டும் ஆக்சிஜனேற்றம் அடைந்து நீலமாக மாறுகிறது. ஆகவே குலுக்குதல், ஊற்றுதல், அகலமான குழாய்கள் மற்றும் திரவத்துக்கு மேலுள்ள அதிக காலியிடம் ஆகியவை முடிவைத் தாமதப்படுத்துகின்றன. குழாயிலுள்ள பாலின் பெரும்பகுதி நிறமிழந்த பின்னரும், காற்றுடன் தொடர்புடைய மேற்பரப்பில் ஒரு மெல்லிய நீல வளையம் பெரும்பாலும் நீடிக்கும். நிலையான செய்முறைகள் அந்த வளையம் மறையும் வரை காத்திருக்காமல், அது இருப்பதை ஏற்றுக்கொள்கின்றன.

நுண்ணுயிரியின் வகை மேலும் ஒரு விலகலை ஏற்படுத்துகிறது. கோலிஃபார்ம்களும் பல லாக்டிக் அமில நுண்ணுயிரிகளும் சாயத்தை விரைவாக ஒடுக்குகின்றன. குளிரில் வளரக்கூடிய பல நுண்ணுயிரிகளும் வெப்பத்தைத் தாங்கக்கூடிய நுண்ணுயிரிகளும் அதை மெதுவாக ஒடுக்குகின்றன அல்லது கிட்டத்தட்ட ஒடுக்குவதில்லை. ஒரே தகட்டு எண்ணிக்கையைக் கொண்ட இரண்டு பால் மாதிரிகள், பல மணிநேர இடைவெளியில் நீல நிறத்தை இழக்கலாம். நேரத்தைக் காலனி எண்ணிக்கையாக மாற்ற முடியாது என்பதை இந்த உண்மை மட்டுமே காட்டுகிறது.

கட்டுப்படுத்தப்பட்ட ஆய்வகச் செய்முறை

களச் சோதனை மற்றும் பாடநூல் செய்முறைகளின் விவரங்கள் வேறுபடுகின்றன. எனவே, ஒரு முடிவு அதை உருவாக்கிய முறைக்குள் மட்டுமே செல்லுபடியாகும். வழக்கமான உணவு ஆய்வகச் செய்முறை பின்வருமாறு:

1. பச்சைப் பாலைக் காற்றுடன் குறைந்த அளவே கலக்கும்படி சேகரித்து, உடனடியாகக் குளிர்விக்கவும். மாதிரி எடுப்பதற்கு முன் மெதுவாகத் தலைகீழாகத் திருப்பிக் கலக்கவும்.
2. கிருமிநீக்கம் செய்யப்பட்ட குழாயில் 10 mL பாலையும், பயன்படுத்தத் தயாரான சாயக் கரைசல் 1 mL-ஐயும் சேர்க்கவும். பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் ஒரு செறிவு 0.005 சதவீதச் சாயம்; பால் மற்றும் சாயத்தின் விகிதம் 10 க்கு 1.
3. குழாயை அடைத்து, மெதுவாக இருமுறை தலைகீழாகத் திருப்பி, சில நிமிடங்களுக்குள் நீர்க் குளியலில் வைக்கவும். குறிப்பிடப்பட்ட தரநிலையைப் பொறுத்து, வழக்கமான அடைகாப்பு வெப்பநிலை 35 முதல் 38 டிகிரி செல்சியஸ் வரை இருக்கும். நீங்கள் பின்பற்றும் தரநிலையைப் பதிவு செய்யவும்.
4. ஒளி ஒடுக்கத்தை விரைவுபடுத்துவதால், அடைகாப்பின்போது குழாய்களை ஒளியிலிருந்து பாதுகாக்கவும்.
5. 30 நிமிடங்களில் கவனித்து, பின்னர் நிர்ணயிக்கப்பட்ட இடைவெளிகளில் கவனிக்கவும். குழாயின் நிறம் கொதிக்கவைத்த பால் ஒப்பீட்டு மாதிரியுடன் பொருந்தும் நேரம் அல்லது செய்முறையில் வரையறுக்கப்பட்ட நிற இழப்பை அடையும் நேரமே இறுதிநிலை.
6. முறையில் காட்சி ஒப்பீட்டுக் கட்டுப்பாடு தேவைப்பட்டால், அதே பாலிலிருந்து சாயம் சேர்க்காத ஒரு குழாயை வைத்திருக்கவும்.

FAO பால் சோதனைக் கையேடு இந்த நிகழ்வுத் தொடருக்கான தெளிவான களச் செய்முறையை வழங்குகிறது: 10 mL பாலுடன் 1 mL சாயம் சேர்த்தல், குழாயை அடைத்தல், மெதுவாகத் தலைகீழாகத் திருப்புதல், சுமார் 37 முதல் 38 டிகிரியில் அடைகாத்தல், ஒவ்வொரு 30 நிமிடங்களுக்கும் கவனித்தல். அதன் கட்டுப்பாட்டுக் குழாய்களில், இயற்கையான ஒடுக்கும் அமைப்பை அழித்து நிற ஒப்பீட்டுக்கு அடிப்படையாக அமைக்கக் கொதிக்கவைத்த பால் பயன்படுத்தப்படுகிறது.

மேலுள்ள வரைபடம் கட்டுப்பாட்டு வரம்பைக் காட்டுகிறது. ஒரே கொள்ளளவுகள், ஒரே சாயம், ஒரே வெப்பநிலை, ஒரே கலக்கும் முறை, ஒரே ஒளிப் பாதுகாப்பு, ஒரே இறுதிநிலை விதி. இவற்றில் ஏதேனும் ஒன்றை மாற்றினால், நேரமும் அதற்கேற்ப மாறும். அதனால்தான் தன்னிச்சையான சாயச் செறிவைப் பயன்படுத்தும் வீட்டுச் சோதனைகளை ஆய்வகத் தரங்களுடன் ஒப்பிட முடியாது.

ஒடுக்க நேரம் எதைக் குறிக்கிறது

நீண்ட நேரம் என்பது குறிப்பிடப்பட்ட சூழ்நிலைகளில் குறைந்த ஒட்டுமொத்தச் செயல்பாட்டைக் குறிக்கிறது. குறுகிய நேரம் அதிக ஒட்டுமொத்தச் செயல்பாட்டைக் குறிக்கிறது. பால் அறிவியல் கற்பித்தல் அட்டவணைகள் இந்த நேரங்களுக்குத் தோராயமான தரங்களை வழங்குகின்றன. எடுத்துக்காட்டாக, BIS அடிப்படையிலான ஒரு வகைப்பாட்டில் 5 அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட மணிநேரம் மிக நல்லதாகவும், 30 நிமிடங்களுக்குக் குறைவான நேரம் மோசமானதாகவும் குறிப்பிடப்படுகிறது.

இந்த வேறுபாடுதான் முக்கியப் பாடம். 5 மணிநேர முடிவுக்கு எல்லா முறைகளுக்கும் பொருந்தும் ஒரு தரம் இல்லை. அதை வரையறுத்த செய்முறைக்கே அது உரியது. எனவே, ஆதாரத்துடன் பயன்படுத்தக்கூடிய அறிக்கை வடிவம்:

குறிப்பிட்ட முறையின்படி MBRT என்பது X மணிநேரம்; இது அந்த முறையின் தர வகைப்பாட்டுடன் பொருந்துகிறது.

MBRT என்பது ஒரு mL-க்கு X காலனி உருவாக்கும் அலகுகள் என்று ஒருபோதும் கூற முடியாது. Standard Methods அடிப்படையிலான வழிகாட்டுதல், சாய ஒடுக்கச் சோதனை முடிவுகளைப் பாக்டீரிய எண்ணிக்கையாக அறிக்கையிடக் கூடாது எனக் கூறுகிறது. மெத்திலீன் நீலத்துடன் செய்யப்படும் எளிய சாயமிடும் செய்முறை வேறொரு கேள்விக்குப் பதிலளிக்கிறது; அது குழாயிலுள்ள ஒட்டுமொத்தச் செயல்பாட்டைக் காட்டாமல், நுண்ணோக்கியில் செல்களின் வடிவத்தைக் காட்டுகிறது.

விளக்கமும் வரம்புகளும்: அட்டவணை

இந்த அட்டவணையே கட்டுரையின் முதன்மைக் குறிப்பாதாரம். ஒவ்வொரு வரிசையையும் முழுமையாகப் படிக்கவும். எந்த ஓர் அட்டவணைக் கலத்தையும் தனியாகப் புரிந்துகொள்ளக் கூடாது.

பாக்டீரிய வளர்ப்பு ஊடகங்கள் போன்ற வளர்ச்சி அடிப்படையிலான சோதனைகளே எண்ணிக்கையிடுவதற்கும் தனிமைப்படுத்துவதற்குமான வழியாகத் தொடர்கின்றன. ஒடுக்கச் சோதனைக் குழாய் ஆரம்பநிலை மதிப்பீட்டைச் செய்கிறது. வளர்ப்புத் தகடு அடையாளம் காணவும் எண்ணிக்கையிடவும் உதவுகிறது.

பாதுகாப்பு குறித்து இந்தச் சோதனை நிரூபிக்க முடியாதவை

மெதுவான முடிவு நோய்க்கிருமிகள் இல்லை என்பதை நிரூபிக்க முடியாது. மருத்துவ ரீதியில் முக்கியத்துவம் பெறும் அளவில் இருக்கும் ஒரு நோய்க்கிருமி, ஒட்டுமொத்த ஆக்சிஜன் நுகர்வுக்கு மிகக் குறைவாகவே பங்களிக்கலாம். நோய்க்கிருமிகளைக் கண்டறிவதற்கு அந்தந்த உயிரினத்துக்கான தனிப்பட்ட முறைகள் தேவை. தற்போதைய Standard Methods, இதைப் பொதுத் தர மதிப்பீட்டிலிருந்து தனியான பகுதியாகக் கருதுகிறது.

இது பாஸ்டுரைசேஷனை உறுதிப்படுத்த முடியாது. Codex பால் சுகாதார வழிகாட்டுதலின்படி, வெப்பச் சிகிச்சையை உறுதிப்படுத்த அல்கலைன் பாஸ்படேஸ் சோதனை அல்லது வேறொரு சரிபார்க்கப்பட்ட முறை பயன்படுத்தப்படுகிறது. வெள்ளை அல்லது நீல நிறக் குழாய், அந்தப் பால் தொகுதியின் நேர–வெப்பநிலை வரலாற்றைப் பற்றி எதுவும் கூறுவதில்லை.

இது உணவுப் பாதுகாப்புக்குச் சான்றளிக்க முடியாது. பாதுகாப்பு என்பது நோய்க்கிருமிகள், ஏற்கெனவே உருவான நச்சுகள், மருந்து எச்சங்கள், வேதியியல் மாசுபடுத்திகள், குளிர்ச் சங்கிலி வரலாறு மற்றும் மாதிரி எடுத்த பின்னர் ஏற்பட்ட மாசுபாடு ஆகியவற்றைப் பொறுத்தது. Codex, பால் பாதுகாப்பை ஒரே ஆரம்பநிலைச் சோதனை முடிவாக அல்லாமல், கட்டுப்பாட்டு நடவடிக்கைகளின் தொடராகக் கருதுகிறது.

உணவு ஆய்வகச் சூழல் வீட்டுச் சோதனைக்கு ஒப்பானதல்ல

பால் ஆய்வகத்தில் இந்தச் சோதனை, வரவேற்கப்படும் பாலின் ஆரம்பத் தரத்தை மதிப்பிடவும், காலப்போக்கில் வழங்குநர்களை ஒப்பிடவும், மேற்பார்வையின்கீழ் ஆக்சிஜனேற்ற–ஒடுக்க நுண்ணுயிரியலைக் கற்பிக்கவும் பயன்படுகிறது. மாதிரிகளின் மூலத்தையும் கையாளுதலையும் பின்தொடர முடியும். வினைப்பொருட்கள் தரப்படுத்தப்பட்டவை. வெப்பநிலைகள் பதிவு செய்யப்படுகின்றன. கழிவுகள் ஆய்வகக் கழிவு அகற்றல் முறையில் அகற்றப்படுகின்றன.

வீட்டுச் சோதனையில் இவை எதுவும் இல்லை. சமையலறை அளவுகள் தோராயமானவை. இணையத்தில் விற்கப்படும் சாயங்களின் செறிவுகள் பெரிதும் வேறுபடுகின்றன. அளவுத்திருத்தம் செய்யப்பட்ட நீர்க் குளியலுக்குப் பதிலாக, அடைகாப்பு பெரும்பாலும் வெப்பமான அறையில் செய்யப்படுகிறது. நிற மாற்றம் அப்போதும் நிகழ்கிறது. அதன் பொருளை உறுதிப்படுத்திய அனைத்து கட்டுப்பாடுகளும் இல்லாதபோதும், அது முடிவை நம்பகமானதாக உணரச் செய்கிறது.

மிகவும் தீவிரமான ஆபத்து நடத்தை சார்ந்தது. வீட்டில் ஒரு நீலக் குழாய், பச்சைப் பாலைக் குடிக்கத் தூண்டுகிறது; ஆனால் ஆய்வகம் அதே பாலைத் தகட்டு எண்ணிக்கை, நோய்க்கிருமி ஆய்வு மற்றும் எச்சச் சோதனைகளுக்கு இன்னும் அனுப்பும். பாலுக்கான மெத்திலீன் நீலச் சோதனை, வரவேற்கப்படும் பச்சைப் பாலின் தரத்தை வகைப்படுத்துவதற்காக வடிவமைக்கப்பட்டது; பாலை நுகர்வுக்கு அனுமதிப்பதற்காக அல்ல. விரைவான ரெசாசுரின் ஆரம்பநிலைச் சோதனைக்கும் இதே வரம்பு உள்ளது: நிற முடிவை விரைவாகக் காணலாம், ஆனால் நோய்க்கிருமிகள் குறித்த பதில் அப்போதும் கிடைக்காது.

ஆய்வக மேசைக்கான சுருக்கமான விதி

சாயம், விகிதம், வெப்பநிலை, கலக்கும் முறை, ஒளி மற்றும் இறுதிநிலையைத் தரப்படுத்தவும். முறையின் பெயர் மற்றும் தரத்துடன் நேரத்தை அறிக்கையிடவும். சேமிப்பு வரலாறு, நுண்ணுயிரித் தொகுதியின் வகை, எச்சங்கள் மற்றும் மாதிரி எடுப்பின் தரம் ஆகியவற்றுடன் சேர்த்து அந்த நிமிடங்களைப் புரிந்துகொள்ளவும். குறுகிய நேரம், மேலும் ஆராய வேண்டிய செயல்பாட்டைக் காட்டுகிறது. நீண்ட நேரம் ஒருபோதும் பாதுகாப்புக்குச் சான்றளிக்காது.