கட்டுரை

உயிர்ப்படலங்களுக்கு எதிரான மெத்திலீன் நீலம்: ஒளியால் செயல்படுத்தப்படும் ஆய்வக ஆய்வுகள் எதை அளவிடுகின்றன

உயிர்ப்படலங்களுக்கு எதிரான மெத்திலீன் நீலம்: ஒளியால் செயல்படுத்தப்படும் ஆய்வக ஆய்வுகள் எதை அளவிடுகின்றன

உயிர்ப்படலம் என்பது திரவத்தில் மிதக்கும் செல்களின் கூட்டம் அல்ல. அது ஒரு கட்டமைப்பு: மேற்பரப்பில் ஒட்டியுள்ள செல்கள், அவை தாமே உருவாக்கிய பல்சர்க்கரைகள், புரதங்கள், செல்களுக்கு வெளியேயுள்ள DNA ஆகியவற்றால் ஆன அணியில் பொதிந்திருக்கும்; வெளிப்புறத்திலிருந்து உட்புறம் வரை ஆக்சிஜன் மற்றும் ஊட்டச்சத்துகளின் அளவுகள் படிப்படியாக மாறுபடும். திரவத்தில் மிதக்கும் பாக்டீரியாக்களை சில நிமிடங்களில் கொல்லும் ஒரு சேர்மம், அதே நுண்ணுயிரிகள் படலமாக வளரும்போது அவற்றுக்கு எதிராகச் செயல்படாமல் போவதற்கு இந்தக் கட்டமைப்பே காரணம். மெத்திலீன் நீலம் மற்றும் உயிர்ப்படலங்கள் குறித்த எந்தக் கூற்றையும் இந்தக் கட்டமைப்பின் அடிப்படையில் புரிந்துகொள்ள வேண்டும். ஏனெனில், செல்களை எவ்வளவு சாயம் சென்றடைகிறது என்பதையும், சாயத்தை எவ்வளவு ஒளி சென்றடைகிறது என்பதையும் இந்த அணி தீர்மானிக்கிறது.

இந்த மதிப்பாய்வு சரியாக மூன்று ஆதாரங்களை உள்ளடக்கியது. ஒன்று பின்னணித் தகவலுக்கானது. இரண்டு ஆய்வகப் பரிசோதனைகள். அவற்றின் பங்குகளைத் தனித்தனியாக வைத்துப் பார்ப்பதே இங்கு பின்பற்றப்படும் முறை. இதனால், இந்தத் தலைப்பில் மிகவும் பொதுவாக நிகழும் தவறு தடுக்கப்படுகிறது: ஆய்வக வளர்ப்புத் தட்டில் கிடைத்த முடிவை, ஒரு மனிதரின் தொற்றுக்குச் சிகிச்சையளிப்பதற்கான சான்றாக மேற்கோள் காட்டுவது.

பின்னணி ஆதாரம் வேதியியலைப் பற்றியது; நுண்ணுயிரிகளைக் கொல்வதைப் பற்றியது அல்ல

இந்த மூன்றில் மிகப் பழமையானது, 2005-இல் வெளியிடப்பட்ட ஃபீனோதையாசினியம் ஒளி உணர்த்திகளின் உருவாக்கம் குறித்த விளக்க மதிப்பாய்வு. 19-ஆம் நூற்றாண்டின் சாயமாக இருந்த மெத்திலீன் நீலம், புற்றுநோய்க்கான ஒளியியக்கச் சிகிச்சையிலும், பின்னர் ஒளியியக்க நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு வேதிச் சிகிச்சையிலும் முதன்மைச் சேர்மமாக உருவான வரலாற்றை இது விவரிக்கிறது. இதன் பங்களிப்பு, கட்டமைப்புக்கும் செயல்பாட்டுக்கும் உள்ள உறவை விளக்குவதாகும்: நிறத்தைத் தரும் மூலக்கூற்றுப் பகுதியில் மெத்தில் குழுக்களைச் சேர்ப்பது, கொழுப்பில் கரையும் தன்மை, ஒற்றைநிலை ஆக்சிஜன் உருவாக்கம், ஒளியால் பாக்டீரியாக்களைக் கொல்லும் திறன் ஆகியவற்றை அதிகரிக்கிறது; அதே நேரத்தில், குறைந்த செயல்பாடுடைய லியூகோ வடிவமாக ஒடுக்கப்படுவதை மெதுவாக்குகிறது. இந்தத் துறையின் பிரச்சினையையும் அது தெளிவாகக் கூறுகிறது. பெரும்பாலான அறிக்கைகள் வழக்கமான வணிகச் சாயங்களையே பயன்படுத்தின; அவற்றின் வழித்தோன்றல் சேர்மங்களை உருவாக்குவதில் ஒப்பீட்டளவில் குறைந்த பணியே நடந்திருந்தது.

நீங்கள் உருவாக்கிக்கொள்ளும் புரிதல் மாதிரியில் செயல்முறையை விளக்கும் பகுதிக்கு இந்த மதிப்பாய்வைப் பயன்படுத்துங்கள்: ஒளி சாயத்தைத் தூண்டுகிறது; அதன் மும்மை நிலை, Type II ஆற்றல் பரிமாற்றம் மூலம் ஆக்சிஜனுடன் வினைபுரிந்து ஒற்றைநிலை ஆக்சிஜனை உருவாக்குகிறது, அல்லது Type I எலக்ட்ரான் பரிமாற்றம் மூலம் தனி எலக்ட்ரான் கொண்ட வினைத்திறன் துகள்களை உருவாக்குகிறது. இத்தகைய பல்முனைத் தாக்குதலால், வழக்கமான எதிர்ப்புத் திறன் வழிமுறைகள் ஒளியியக்க அழிப்புக்கு எதிராக அதே அளவில் செயல்படுவதில்லை. log அளவிலான குறைப்புக்கான ஆதாரமாக இதை மேற்கோள் காட்டாதீர்கள். அது அத்தகைய குறைப்பை அளவிடவில்லை. இந்தச் செயல்முறைக்குப் பின்னாலுள்ள விரிவான ஒளிவேதியியல், ஒளியியக்கச் சிகிச்சைச் சான்றுகளின் தொகுப்பில் விளக்கப்பட்டுள்ளது. ஒரு குறிப்பிட்ட விளக்கு இதைச் செயல்படுத்த முடியுமா என்பதைத் தீர்மானிக்கும் அலைநீள விதிகள், மெத்திலீன் நீலம் சிவப்பு ஒளியை எவ்வாறு உறிஞ்சுகிறது என்ற கட்டுரையில் விவரிக்கப்பட்டுள்ளன.

இரண்டு உயிர்ப்படலப் பரிசோதனைகள், முடிவை வரையறுக்கும் இரண்டு வெவ்வேறு அணுகுமுறைகள்

இரண்டு பரிசோதனை ஆய்வுக் கட்டுரைகளும் வாய்வழி உயிர்ப்படலங்களில் 660 nm அலைநீளத்தில் மெத்திலீன் நீலத்தின் ஒளியியக்கச் செயல்பாட்டைச் சோதிக்கின்றன. இதைத் தவிர, கிட்டத்தட்ட வேறு எதிலும் அவை ஒத்திருக்கவில்லை. வெவ்வேறு நுண்ணுயிரிச் சமூகங்கள், வெவ்வேறு வயதுடைய படலங்கள், வெவ்வேறு சாயத் தயாரிப்புகள், வெவ்வேறு ஒளி அளவுகள், எல்லாவற்றிற்கும் மேலாக வெவ்வேறு முடிவுநிலை அளவீடுகள். இந்த வேறுபாடுதான் இக்கட்டுரையின் மையக்கருத்து; கீழேயுள்ள தனித்துவமான ஒப்பீட்டு அட்டவணையின் நோக்கமும் இதுவே.

முதலாவது, 2024-இல் வெளியிடப்பட்ட முதிர்ந்த, பல இனங்களைக் கொண்ட ஈறுக்குக் கீழுள்ள உயிர்ப்படலத்தின் ஆய்வக ஆய்வு. முப்பத்து மூன்று இனங்கள் Calgary Biofilm Device-இல் உள்ள பாலிஸ்டைரீன் முளைகளில் ஒன்றாக வளர்க்கப்பட்டன. ஆக்சிஜன் இல்லாத சூழலில் ஊட்டமளிக்கப்பட்டது; 72 மணிநேரத்திற்குப் பிறகு வளர்ப்பு ஊடகம் மாற்றப்பட்டு, திட்டமிட்டபடி 7 நாட்கள் வரை வளர்ப்பு தொடர்ந்தது. பயன்படுத்தப்பட்ட செயல்முறை: தாங்கியுடன் இணைக்கப்படாத மெத்திலீன் நீலம் 0.01 சதவீத செறிவில், 660 nm சிவப்பு LED-உடன், ஒரு சதுர cm-க்கு சுமார் 330 mW என்ற ஒளிச்செறிவில், 2 mm தொலைவில் 5 நிமிடங்களுக்கு பயன்படுத்தப்பட்டது. இதைக் காலத்துடன் பெருக்கிக் கணக்கிட்டால், ஒரு சதுர cm-க்கு சுமார் 99 J கிடைக்கிறது. இது நான்கு பிரிவுகளைக் கொண்ட தெளிவான காரணிப் பரிசோதனை வடிவமைப்பு: எந்தச் செயல்முறையும் செய்யப்படாத கட்டுப்பாடு, ஒளியில்லாத சாயம், சாயமில்லாத ஒளி, சாயமும் ஒளியும் சேர்ந்த பயன்பாடு.

இரண்டாவது, 2021-இல் வெளியிடப்பட்ட ஆரம்பக் குடியேற்ற வாய்வழி உயிர்ப்படலத்தின் ஆய்வக ஆய்வு. நான்கு Streptococcus இனங்கள், 1 சதவீத சுக்ரோஸுடன் 96 கிணறுகள் கொண்ட தட்டுகளில் 24 மணிநேரம் ஒன்றாக வளர்க்கப்பட்டன. ஒளி உணர்த்தியாக, பீட்டா சைக்ளோடெக்ஸ்ட்ரின் நானோதுகள்களுடன் இணைக்கப்பட்ட மெத்திலீன் நீலம் 4.65 micromolar செறிவில் பயன்படுத்தப்பட்டது. இது உயிர்ப்படலத் தடைகளைக் கடந்து சாயத்தைக் கொண்டு செல்லும் நோக்கத்துடன் உருவாக்கப்பட்ட விநியோகத் தயாரிப்பு. இரண்டு ஒளி மூலங்களும் 660 nm அலைநீளமுள்ள சிவப்பு ஒளியை 90 வினாடிகளுக்கு வழங்கின. ஆனால் ஒளி அளவுகள் பெரிதும் வேறுபட்டன: லேசர் பிரிவில் ஒரு சதுர cm-க்கு 320 J; LED பிரிவில் ஒரு சதுர cm-க்கு 8.1 J. கட்டுப்பாடுகளில் ஒளியில்லாத சாயம், லேசர் மட்டும், LED மட்டும், எதிர்மறைக் கட்டுப்பாடாக உப்புநீர்க் கரைசல், நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு ஒப்பீட்டு அளவுகோலாக 0.2 சதவீத குளோர்ஹெக்சிடின் ஆகியவை இடம்பெற்றன.

7 நாட்கள் வயதுடைய, 33 இனங்களைக் கொண்ட, ஆக்சிஜனற்ற நுண்ணுயிரிச் சமூகமும், 24 மணிநேரம் வயதுடைய, 4 இனங்களைக் கொண்ட ஆரம்பக் குடியேற்றப் படலமும் வெவ்வேறு அளவீட்டு அமைப்புகள். அடுத்து வரும் எண்களை ஒன்றிணைத்து சராசரி கணக்கிட முடியாது.

ஒவ்வொரு ஆய்வும் உண்மையில் எதை அளவிட்டது

முதிர்ந்த உயிர்ப்படல ஆய்வில், முடிவுநிலை அளவீடுகளாக TTC ஒடுக்கத்தின் மூலம் வளர்சிதை மாற்றச் செயல்பாடு 485 nm-இல் அளவிடப்பட்டது; பாக்டீரியாக்களின் அளவு, 33 இனங்களுக்கான ஆய்வுத் துண்டுகளைப் பயன்படுத்திய செக்கர்போர்டு DNA–DNA கலப்பிணைவு முறையில் அளவிடப்பட்டது. இதன் கண்டறிதல் வரம்பு சுமார் 10,000 செல்கள். உயிர்வாழும் நுண்ணுயிரிகளை வளர்ப்புத் தட்டில் எண்ணுதல், கிரிஸ்டல் வயலெட் மூலம் உயிர்த்திணிவு அளவிடுதல், உயிருள்ள மற்றும் இறந்த செல்களைப் படமெடுத்தல், மீள்வளர்ச்சியைக் கண்காணித்தல் ஆகியவை செய்யப்படவில்லை. LED மட்டும் பயன்படுத்தியபோது, LED பயன்படுத்தாத பிரிவுகளுடன் ஒப்பிடுகையில் வளர்சிதை மாற்றச் செயல்பாடு சுமார் 50 சதவீதம் குறைந்தது; சாயமும் LED-யும் சேர்ந்த பயன்பாட்டில் சுமார் 55 சதவீதம் குறைந்தது. சாயம் மட்டும் பயன்படுத்திய பிரிவு, புள்ளியியல் அடிப்படையில் செயல்முறை செய்யப்படாத கட்டுப்பாட்டுடன் ஒரே குழுவில் இருந்தது. DNA-இலிருந்து பெறப்பட்ட எண்ணிக்கைகளில், சாயம் மட்டும், LED மட்டும், சாயமும் LED-யும் ஆகிய மூன்று பிரிவுகளும் கட்டுப்பாட்டைவிடக் குறிப்பிடத்தக்க அளவு குறைவாக இருந்தன; அந்த மூன்றுக்கிடையில் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடு இல்லை. இதன் விளைவை ஆசிரியர்கள் நேரடியாகக் கூறுகின்றனர்: இந்தச் செயல்முறைகள் ஏற்கெனவே ஒட்டியிருந்த பல நுண்ணுயிரிகளைக் கொண்ட உயிர்ப்படலத்தை அழிக்கவில்லை. முதிர்ந்த பல்லைச் சுற்றியுள்ள உயிர்ப்படலத்தின் கட்டமைப்பை இயந்திர முறையில் சிதைக்க வேண்டும்; ஒளியியக்க முறைகள் அதிகபட்சம் ஒரு துணைமுறையாக மட்டுமே அமையலாம்.

ஆரம்பக் குடியேற்ற ஆய்வில், தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட வளர்ப்பு ஊடகங்களில் மீட்டெடுக்கப்பட்ட உயிர்வாழும் நுண்ணுயிரிகளின் எண்ணிக்கையே முடிவுநிலை அளவீடாக இருந்தது; அது மடக்கை அளவுகோலில் வெளிப்படுத்தப்பட்டது. ஒளியில்லாத சாயப் பிரிவு, உப்புநீர்க் கரைசல் பிரிவிலிருந்து வேறுபடவில்லை. லேசரும் உறையிடப்பட்ட சாயமும், LED-யும் உறையிடப்பட்ட சாயமும் சேர்ந்த இரண்டு ஒளியால் செயல்படுத்தப்பட்ட பிரிவுகளும், எதிர்மறைக் கட்டுப்பாட்டுடன் ஒப்பிடுகையில் உயிர்வாழும் நுண்ணுயிரிகளின் எண்ணிக்கையை அதிகபட்சம் சுமார் 4 log வரை குறைத்தன. அந்த அளவீட்டில் இது 10,000 மடங்கு அல்லது 99.99 சதவீதக் குறைவு. இந்த இரு பிரிவுகளும் குளோர்ஹெக்சிடினிலிருந்து புள்ளியியல் அடிப்படையில் வேறுபடவில்லை. ஒளி மட்டும் பயன்படுத்திய மற்றும் ஒளியில்லாத பிரிவுகளுக்கான மதிப்புகள், தனித்தனியான நம்பகமான log எண்களாகத் தெரிவிக்கப்படவில்லை. எனவே, ஆய்வுக் கட்டுரை ஆதரிக்கும் நேர்மையான சுருக்கம் இதுதான்: ஒளியால் செயல்படுத்தப்பட்ட உறையிடப்பட்ட சாயம் குறைப்பை ஏற்படுத்தியது; ஒளியில்லாத சாயம் அவ்வாறு செய்யவில்லை; இந்த இளம் படல மாதிரியில் குறைப்பின் அளவு கிருமிநாசினி ஒப்பீட்டு அளவுகோலுடன் ஒத்திருந்தது.

இரண்டு ஆய்வுக் கட்டுரைகளுமே செயல்முறைக்குப் பிந்தைய மீள்வளர்ச்சி, எஞ்சிய உயிர்த்திணிவு அல்லது அணியின் கட்டமைப்பை அளவிடவில்லை. CFU குறைவு, எஞ்சிய அணியைப் பற்றி எதையும் கூறாது. வளர்சிதை மாற்றச் சரிவு, உயிர்வாழும் நுண்ணுயிரிகளைப் பற்றி எதையும் கூறாது. DNA எண்ணிக்கையால் எவை உயிருடன் உள்ளன என்பதைச் சொல்ல முடியாது.

பரிசோதனை முறை மற்றும் முடிவுநிலை அளவீடுகளின் ஒப்பீடு

இந்த அட்டவணை இக்கட்டுரையின் ஒப்பீட்டுக் கருவி. ஒரு ஆய்வு எதை நிரூபிக்கிறது என்பதைப் பார்க்க ஒரு வரிசையின் குறுக்காகப் படியுங்கள்; எந்தக் கேள்விகளுக்கு இரண்டு ஆய்வுகளுமே பதிலளிக்கவில்லை என்பதைப் பார்க்க ஒரு நெடுவரிசையின் கீழ்நோக்கிப் படியுங்கள்.

மாறிமுதிர்ந்த ஈறுக்குக் கீழுள்ள படல மாதிரி (2024)ஆரம்பக் குடியேற்றப் படல மாதிரி (2021)
நுண்ணுயிரிச் சமூகம் மற்றும் வயது33 இனங்கள், சுமார் 7 நாட்கள், ஆக்சிஜனற்ற சூழல்4 Streptococcus இனங்கள், 24 மணிநேரம்
வளர்ப்பு மேற்பரப்புCalgary சாதனம், பாலிஸ்டைரீன் முளைகள்96 கிணறுகள் கொண்ட தட்டின் மேற்பரப்பு
ஒளி உணர்த்திதாங்கியுடன் இணைக்கப்படாத சாயம், 0.01 சதவீதம்பீட்டா சைக்ளோடெக்ஸ்ட்ரின் நானோதுகள்களில் சாயம், 4.65 micromolar
ஒளி660 nm LED, 5 min-இல் ஒரு சதுர cm-க்கு சுமார் 99 J660 nm லேசர் ஒரு சதுர cm-க்கு 320 J மற்றும் LED ஒரு சதுர cm-க்கு 8.1 J, ஒவ்வொன்றும் 90 s
ஒளியில்லாத சாயக் கட்டுப்பாடுஆம், வளர்சிதை மாற்றத்தில் செயல்முறை செய்யப்படாத பிரிவுடன் ஒரே குழுவில் இருந்ததுஆம், உப்புநீர்க் கரைசலிலிருந்து வேறுபாடு இல்லை
ஒளி மட்டும் பயன்படுத்திய கட்டுப்பாடுஆம், கிட்டத்தட்ட முழு வளர்சிதை மாற்ற விளைவையும் விளக்கியதுஆம், லேசர் மட்டும் மற்றும் LED மட்டும் பயன்படுத்திய தனித்தனி பிரிவுகள்
உயிர்வாழும் நுண்ணுயிரிகளின் எண்ணிக்கை (CFU)அளவிடப்படவில்லைஆம், ஒளியால் செயல்படுத்தப்பட்ட சாயத்துடன் அதிகபட்சம் சுமார் 4 log குறைப்பு
வளர்சிதை மாற்றச் செயல்பாடுஆம், TTC, சாயமும் ஒளியும் சேர்ந்த பயன்பாட்டில் சுமார் 55 சதவீதக் குறைப்புஅளவிடப்படவில்லை
DNA அளவுஆம், செக்கர்போர்டு கலப்பிணைவு; செயல்முறைப் பிரிவுகளுக்கிடையே வேறுபாடின்றிக் குறைந்ததுஅளவிடப்படவில்லை
உயிர்த்திணிவு, படமெடுத்தல், மீள்வளர்ச்சிஎதுவும் இல்லைஎதுவும் இல்லை

மூன்று வேறுபாடுகளை வலியுறுத்த வேண்டும். முதலாவதாக, முதிர்ந்த மாதிரியில் ஒளி மட்டும் பயன்படுத்திய பிரிவே கிட்டத்தட்ட முழு வளர்சிதை மாற்ற விளைவுக்கும் காரணமாக இருந்தது. எனவே, 55 சதவீதம் என்ற எண்ணிக்கை சாயத்தின் மூலம் ஏற்பட்ட நுண்ணுயிர் அழிப்பைக் குறிக்கவில்லை. இரண்டாவதாக, இளம் மாதிரியில் ஒளியில்லாத தயாரிப்பில் செயல்பாடு இல்லை; ஒளியுடன் மட்டுமே விளைவு தோன்றுகிறது. இது ஒளியால் செயல்படுத்தப்படுவதற்கான அடையாளம். மூன்றாவதாக, DNA-இலிருந்து பெறப்பட்ட எண்ணிக்கைகளில் 80 சதவீதச் சரிவை, கணித அடிப்படையில் சுமார் 0.7 log எனக் கருத முடிவது, அளவிடப்பட்ட மாறி உயிர்வாழும் நுண்ணுயிரிகளின் எண்ணிக்கையாக இருந்தால் மட்டுமே. இங்கு அது அப்படியல்ல. எனவே, இதை ஒருபோதும் log அளவிலான நுண்ணுயிர் அழிப்பாக மேற்கோள் காட்டக்கூடாது. தொடர்புடைய பல் உயிர்ப்படலப் பின்னணித் தகவல்கள், வாய்வழி உயிர்ப்படலம் மற்றும் பல் ஆராய்ச்சித் தொகுப்பில் சேகரிக்கப்பட்டுள்ளன. ஆய்வுகளுக்கிடையே மாதிரிகள், வழங்கும் வழிகள், முடிவுநிலை அளவீடுகள் ஆகியவற்றைத் தனித்தனியாகப் பிரித்துப் பார்ப்பதற்கான பொதுவான முறை, ஆய்வக முறைகள் வழிகாட்டியில் விரிவாக விளக்கப்பட்டுள்ளது.

உயிர்ப்படல ஆய்வுகளைப் புரிந்துகொள்ள ஏன் தனி விதிகள் தேவை

மெத்திலீன் நீல உயிர்ப்படல ஆய்வின் முடிவு, அதன் சொந்த ஆய்வுத் தட்டிற்கு அப்பால் ஏதேனும் பொருள் கொண்டுள்ளதா என்பதை நான்கு மாறிகள் தீர்மானிக்கின்றன.

உயிர்ப்படலத்தின் வயதும் அணியும் முதலில் வருகின்றன. பழைய படலங்கள் அதிகத் தடிமனுடனும் அதிகக் குறுக்கு இணைப்புகளுடனும் இருப்பதால், சாயம் அவற்றுள் ஊடுருவுவது கடினம். ஒழுங்கமைந்த உயிர்ப்படலத்தின் வழியாகச் சாயம் ஊடுருவுவதும் ஒளி பரவுவதில் உள்ள குறைபாடும் முக்கியக் கட்டுப்பாடுகள் என 2021 ஆய்வின் ஆசிரியர்கள் குறிப்பிடுகின்றனர். சைக்ளோடெக்ஸ்ட்ரின் உறையிடுதல் போன்ற தாங்கி உத்திகள், இந்தக் கட்டுப்பாட்டைத் தீர்க்கும் முயற்சிகளே. அதனால்தான் தயாரிப்பின் வடிவமைப்பு ஒரு சிறிய விவரமாக இல்லாமல், பரிசோதனை மாறியாக உள்ளது.

ஒளி அளவின் கணக்கீடு இரண்டாவதாக வருகிறது. இங்கு ஒரே அலைநீளத்தில் வழங்கப்பட்ட ஒளி ஆற்றல் அளவுகள், ஒரு சதுர cm-க்கு 8.1 முதல் 320 J வரை, கிட்டத்தட்ட நாற்பது மடங்கு வேறுபடுகின்றன. ஒளிச்செறிவு ஒரு சதுர cm-க்கு 90 mW முதல் பல W வரை மாறுபடுகிறது. ஒரே அலைநீளம் என்பது ஒரே ஒளி வெளிப்பாடு என்று பொருளல்ல. ஒளி அளவுக்கும் விளைவுக்கும் உள்ள தொடர்பை ஒரு வளைவரையாக வரையறுக்கத் தேவையான அளவுக்கு, எந்த ஆய்வும் ஒளி அளவை முறையாக மாற்றிச் சோதிக்கவில்லை.

கட்டுப்பாடுகள் மூன்றாவதாக வருகின்றன. ஒளியில்லாத சாயப் பிரிவு இல்லாத ஆய்வால், சாயத்தின் இயல்பான நச்சுத்தன்மையை விலக்க முடியாது. ஒளி மட்டும் பயன்படுத்திய பிரிவு இல்லாத ஆய்வால், எந்த விளைவையும் ஒளியால் செயல்படுத்தப்படுவதற்கே உரியதாகக் கூற முடியாது. இரண்டு ஆய்வுக் கட்டுரைகளிலும் இந்த இரண்டு கட்டுப்பாடுகளும் இடம்பெற்றுள்ளன; இது அவற்றின் சிறப்பு. ஒளி மட்டும் பயன்படுத்திய பிரிவு ஏன் முக்கியம் என்பதை முதிர்ந்த படல ஆய்வு காட்டுகிறது: அது இல்லையெனில், வளர்சிதை மாற்ற முடிவு சாயத்தின் விளைவாகப் புரிந்துகொள்ளப்பட்டிருக்கும்.

முடிவுநிலை அளவீடுகள் நான்காவதாக வருகின்றன. உயிர்வாழ்தல், வளர்சிதை மாற்றம், DNA அளவு, உயிர்த்திணிவு, கட்டமைப்பு, மீள்வளர்ச்சி ஆகியவை ஆறு வெவ்வேறு கூற்றுகளுக்கான அடிப்படைகள். இங்குள்ள எந்த ஆய்வுக் கட்டுரையும் இவற்றில் இரண்டுக்கு மேல் அளவிடவில்லை. குறிப்பாக, மீள்வளர்ச்சி எந்த ஆய்விலும் அளவிடப்படவில்லை. எனவே, விளைவு நீடிக்கிறது என்பது நிரூபிக்கப்படவில்லை; அதன் நீடித்த தன்மை அளவிடப்படாமல் உள்ளது.

தொற்றுக்குச் சிகிச்சையளிப்பது பற்றி இவை எதை நிறுவவில்லை

இந்த ஆய்வக அமைப்புகளில் எதிலும் இரத்த ஓட்டம், நோய் எதிர்ப்புச் செல்கள், உமிழ்நீர் ஓட்டம், ஈறுப் பள்ளத் திரவத்தின் தொடர்ச்சியான மாற்றம் அல்லது இயந்திர முறையிலான சுத்தப்படுத்துதல் இடம்பெறவில்லை. ஆய்வுக் கிணற்றில் உள்ள சாயச் செறிவு, மனிதருக்கு எந்த வழியில் வழங்கிய பின்னரும் திசுவில் காணப்படும் செறிவுக்கு இணையானது அல்ல. இளம் அல்லது முதிர்ந்த ஆய்வகப் படலத்திற்கு ஒருமுறை 5 நிமிடங்கள் அல்லது 90 வினாடிகள் ஒளி வழங்குவது, ஒரு சிகிச்சைத் தொடராகாது. ஒளியியக்க முறையைத் தனித்த அழிப்பு முறையாக அல்லாமல், இயந்திர முறையில் அகற்றுவதற்கான சாத்தியமான துணைமுறையாக முன்வைப்பதன் மூலம் முதிர்ந்த படல ஆய்வின் ஆசிரியர்களே இதைக் கூறுகின்றனர்.

சரியான சுருக்கம் வரம்புடையதாகவும் நிலையானதாகவும் உள்ளது. ஒளியால் செயல்படுத்தப்பட்ட மெத்திலீன் நீலம், முதிர்ந்த ஆய்வக வாய்வழி நுண்ணுயிரிச் சமூகத்தை அழிக்காமல், அதன் வளர்சிதை மாற்றத்தையும் DNA-இலிருந்து பெறப்பட்ட அளவையும் குறைக்கலாம். அந்த அமைப்பில், வளர்சிதை மாற்ற விளைவின் பெரும்பகுதியை ஒளி மட்டுமே ஏற்படுத்தியது. ஒளியால் செயல்படுத்தப்பட்ட, சைக்ளோடெக்ஸ்ட்ரின் மூலம் எடுத்துச் செல்லப்படும் சாயம், இளம் ஆய்வக ஸ்ட்ரெப்டோகாக்கல் படலத்தில் உயிர்வாழும் நுண்ணுயிரிகளின் எண்ணிக்கையைப் பல பத்து மடங்குகளாகக் குறைக்கலாம்; அதே மாதிரியில் குளோர்ஹெக்சிடினுடன் ஒப்பிடக்கூடிய அளவில் இந்தக் குறைவு இருந்தது. இந்த இரு கண்டறிதல்களில் ஏதேனும் ஒன்று மனிதரின் தொற்றுக்கும் பொருந்துமா என்பது, வழங்கும் முறை, ஒளி சென்றடையும் வாய்ப்பு, ஆக்சிஜன், உடற்கூறியல், மருத்துவ முடிவுநிலை அளவீடுகள் ஆகியவற்றைப் பொறுத்தது. அவற்றை அளவிடுவதற்காக இந்தப் பரிசோதனைகள் வடிவமைக்கப்படவே இல்லை.