Maelezo ya rangi za bluu ya methilini ya Loeffler yenye alkali na ya rangi nyingi

Chupa tatu zinaweza kukaa kando kwa kando kwenye meza ya kutia sampuli rangi, kila moja ikiwa na lebo ya aina fulani ya bluu ya methilini. Moja imeandikwa bluu ya methilini iliyoyeyushwa katika maji 1%. Nyingine imeandikwa bluu ya methilini ya Loeffler yenye alkali. Nyingine imeandikwa bluu ya methilini ya rangi nyingi. Mfanyakazi mwenye shughuli nyingi huchukua yoyote iliyo karibu zaidi. Kisha sampuli iliyopakwa kwenye slaidi hupata rangi hafifu mno, au bluu inayofanana kila mahali, au vivuli vya zambarau visivyotarajiwa, na sampuli ndiyo inayolaumiwa kwa matokeo hayo.

Hili ni tatizo la mchanganyiko, si la sampuli. Myeyusho hiyo mitatu ina rangi zinazohusiana lakini inawakilisha dhana tofauti za kutia rangi. Mmoja ni rangi ya kawaida yenye chaji chanya katika pH iliyo karibu na hali ya kutokuwa na asidi wala alkali. Mwingine ni rangi hiyo hiyo iliyoimarishwa kwa alkali. Mwingine si rangi moja tena, bali mchanganyiko uliofanyiwa oksidesheni kimakusudi. Ukitumia usiofaa, kanuni ya kutia rangi hubadilika wakati wa kazi yako.

Jibu fupi

Bluu ya methilini ya kawaida iliyoyeyushwa katika maji ndiyo msingi: takribani 1% ya rangi katika maji, rangi rahisi yenye chaji chanya kwa uchunguzi wa umbo la bakteria na matumizi ya jumla ya hadubini. Bluu ya methilini ya Loeffler yenye alkali huongeza kiasi kidogo kilichopimwa cha alkali iliyopunguzwa ukolezi kwenye myeyusho mama wa alkoholi uliopunguzwa ukolezi kwa maji. Hii huongeza pH na kufanya rangi yenye chaji chanya ishikamane kwa nguvu zaidi na miundo yenye asidi ya bakteria. Bluu ya methilini ya rangi nyingi ni bluu ya methilini iliyokomazwa kimakusudi kwa oksidesheni katika alkali. Kwa hiyo, chupa huwa na mchanganyiko wa homologi zilizoondolewa vikundi vya methili (azure A, azure B, azure C), thionin, na methylene violet pamoja na bluu ya methilini iliyobaki, na mchanganyiko huo hutia miundo tofauti rangi zenye vivuli tofauti.

Ukikumbuka sentensi moja tu: kuongeza hali ya alkali hubadilisha ukali wa rangi, ilhali kuifanya iwe ya rangi nyingi hubadilisha rangi zinazopatikana.

Bluu ya methilini ya kawaida iliyoyeyushwa katika maji: msingi wa kulinganisha

Mchanganyiko rahisi zaidi ni bluu ya methilini iliyoyeyushwa katika maji, kwa kawaida katika 1% w/v, bila alkali na bila oksidesheni. Spishi yenye rangi ni kationi ya methylthioninium yenye ioni ya kloridi ya chaji kinzani, rangi ndogo ya fenothiazini yenye umbo bapa inayoelezwa katika rekodi ya PubChem ya bluu ya methilini kama kloridi ya methylthioninium. Kwa kuwa ni kationi, hushikamana na minyororo ya msingi ya fosfati ya asidi za nukleiki na vikundi vyenye asidi kwenye kuta za seli za bakteria, na kuzipa seli rangi ya bluu dhidi ya mandharinyuma yenye rangi hafifu.

Faida yake ni matokeo yanayotabirika. Viini vya seli na bakteria huonekana bluu. Utofauti wa rangi ni wa wastani. Viumbe vinavyoonekana kwa shida vinaweza kupata rangi hafifu, na huo ndio upungufu ambao Loeffler alikusudia kurekebisha. Kwa kundi pana zaidi la rangi rahisi za bakteria ambamo myeyusho huu unapatikana, tazama muhtasari wa kutia bakteria rangi kwa njia rahisi. Kuzingatia utambulisho wa rangi bado ni muhimu hapa: bluu ya methili ni molekuli tofauti kabisa, kama makala ya bluu ya methili ikilinganishwa na bluu ya methilini inavyoeleza. Kwa hiyo, kutafuta kwenye katalogi kwa kutumia jina la rangi pekee kunaweza kukupatia kundi lisilofaa la rangi.

Bluu ya methilini ya Loeffler yenye alkali: rangi ileile, iliyoimarishwa

Kichanganyio cha jadi cha Loeffler huunganisha myeyusho mama wa bluu ya methilini katika alkoholi na alkali iliyopunguzwa ukolezi katika maji. Matoleo ya vitabu vya kiada yanahitaji 0.3 g ya rangi katika 30 mL ya ethanoli ya 95% pamoja na 100 mL ya hidroksidi ya potasiamu ya 0.01% iliyoyeyushwa katika maji (au, kwa uwiano unaolingana, 30 mL ya myeyusho uliojaa wa bluu ya methilini katika alkoholi, 100 mL ya maji yaliyotiwa, na 1 mL ya KOH ya 1%). Hii hutoa myeyusho wa matumizi wenye takribani 0.3% ya rangi katika pH yenye alkali dhahiri. Matoleo ya kibiashara hufuata kanuni hiyo hiyo, na katalogi ya Thermo Fisher ya rangi za mikrobiolojia huorodhesha bluu ya methilini ya Loeffler yenye alkali pamoja na aina ya rangi nyingi na ile iliyoyeyushwa katika maji kama bidhaa tofauti za katalogi zenye matumizi tofauti yaliyokusudiwa.

Alkali ndiyo msingi wa utendaji wake. Kuongeza pH huondoa protoni kwenye vikundi vya karboksili na fosfati vya sampuli, na hivyo kuongeza msongamano wa sehemu zenye chaji hasi. Wakati huo huo, myeyusho mama wa ethanoli huweka rangi ikiwa imeyeyuka kikamilifu ili ifikie sehemu hizo katika umbo la monoma. Matokeo yake ni kutia bakteria rangi haraka zaidi na kwa ukali zaidi kuliko rangi iliyoyeyushwa katika maji isiyo na asidi wala alkali, huku bakteria wenye umbo la vijiti na kokasi wakionekana katika bluu iliyokolea inayofahamika katika sampuli za kawaida za bakteriolojia zilizopakwa kwenye slaidi. Muda wa kutia rangi kwa kawaida ni dakika moja hadi tatu, ukifuatiwa na kusuuza kwa maji.

Matumizi ya jadi ni kwa Corynebacterium diphtheriae iliyokuzwa kwenye mazingira ya ukuzaji ya seramu ya Loeffler: bakteria wembamba wenye umbo la vijiti, mara nyingi wenye ncha zilizovimba, na chembechembe metakromatiki za Babes-Ernst za polifosfati iliyohifadhiwa zinazopata rangi iliyokolea. Uhusiano huu kati ya mazingira ya ukuzaji na rangi ni wa kihistoria, vyote vikihusishwa na mtaalamu yuleyule wa bakteria, na utofauti wa rangi wa chembechembe ndio faida ya kiutambuzi. Mbali na kazi zinazohusu dondakoo, rangi hii hutumika kama rangi ya jumla ya bakteriolojia kwa sampuli zilizopakwa kwenye slaidi kutoka kwenye bakteria waliokuzwa, kwa uchunguzi wa umbo la Neisseria katika sampuli za kliniki zilizopakwa kwenye slaidi, na popote ambapo kutia rangi kwa Gram si lazima lakini bluu ya kawaida iliyoyeyushwa katika maji huwa hafifu mno. Ni rangi ya aina moja. Kila kitu chenye asidi hupata kivuli fulani cha bluu. Utaratibu unapohitaji kutofautisha kwa rangi, alkali pekee haiwezi kutoa tofauti hiyo.

Tahadhari moja ya matumizi: myeyusho ya rangi yenye alkali huharibika na kutengeneza mashapo wakati wa kuhifadhiwa na kufyonza dioksidi ya kaboni. Maabara huandaa kiasi kidogo au hununua myeyusho wa katalogi na kuzingatia muda wake wa matumizi, badala ya kuendelea kutumia chupa ya zamani ambayo sasa huacha mashapo kwenye kila slaidi.

Bluu ya methilini ya rangi nyingi: jina moja, rangi kadhaa

Bluu ya methilini ya rangi nyingi huanzia kwenye rangi ileile lakini huifanyia oksidesheni inayodhibitiwa katika alkali, ambayo kihistoria huitwa ukomazaji au uundaji wa rangi nyingi. Kuzeeshwa katika alkali, kupashwa joto kwa kabonati, au kufanyiwa oksidesheni kwa vitendanishi kama dikromati huondoa vikundi vya methili kutoka kwenye vikundi mbadala vya dimethylamino hatua kwa hatua. Bidhaa inayopatikana ni mchanganyiko: bluu ya methilini iliyobaki pamoja na azure B (kikundi kimoja cha methili kimeondolewa), azure A na azure C (vikundi zaidi vya methili vimeondolewa), thionin (vikundi vyote vya methili vimeondolewa), na bidhaa za pembeni za oksidesheni za familia ya methylene violet. Kila sehemu ina kivuli chake cha rangi na uwezo wake wa kushikamana na tishu. Kwa hiyo, mchanganyiko hutia rangi kwa namna ya metakromasia: viini vya seli, chembechembe, musini, na gegedu kila kimoja hupata toni tofauti kuanzia bluu hadi nyekundu-zambarau.

Kemia hii ndiyo iliyo nyuma ya rangi maarufu za damu. Watafiti wa awali waligundua kwamba bluu ya methilini iliyofanywa kuwa na alkali ilitia viini vya vimelea vya malaria rangi za zambarau, lakini myeyusho yao iliyokomazwa katika maji haikuwa thabiti na ilitengeneza mashapo ndani ya siku chache. Mapitio ya jinsi rangi ya zambarau ya damu ilivyobuniwa yanaeleza jinsi Malachowski na Romanowsky walivyotumia athari hii kila mmoja kwa kujitegemea mwaka wa 1891, jinsi methanoli ilivyoanzishwa ili kuimarisha mashapo ya rangi na kufiksisha tabaka za sampuli bila joto, na jinsi Giemsa baadaye alivyosanifisha mchanganyiko kwa kutumia azure B iliyopimwa pamoja na eosini, huku gliseroli ikitumika kuufanya uwe thabiti. Rangi za kisasa za aina ya Giemsa zimetokana moja kwa moja na bluu ya methilini ya rangi nyingi pamoja na eosini, mchanganyiko unaozalisha athari ya Romanowsky. Kwa maelezo ya kina kuhusu kuunganisha na eosini na kuhusu sehemu ya azure B, tazama rangi za aina ya Romanowsky na mwingiliano wa azure B na eosini.

Kwa kuwa ni mchanganyiko, bluu ya methilini ya rangi nyingi ndiyo yenye usanifishaji mdogo zaidi kati ya hizi tatu kwa asili yake. Uwiano wake halisi wa vivuli vya rangi hutegemea njia na kiwango cha oksidesheni. Ndiyo maana wauzaji wa bidhaa za histolojia huiuza kama bidhaa tofauti yenye majaribio yake ya utendaji, badala ya kuiuza kama rangi ya Loeffler iliyozeeka. Matumizi ya kawaida yanajumuisha kuonyesha kwa metakromasia chembechembe za seli za masti, musini, na gegedu, kuonyesha maelezo ya seli za plazma, na kuonyesha Helicobacter pylori katika vipande vya tishu kwa mbinu za rangi nyingi za aina ya Goodpasture. Ni chaguo sahihi lengo linapokuwa kutofautisha kwa rangi, na chaguo lisilofaa utaratibu unapotarajia umbo dhahiri la bakteria lenye rangi moja.

Ulinganisho wa michanganyiko na matumizi

Soma jedwali kama mwongozo wa kufanya uamuzi. Sampuli ikipata rangi hafifu mno, badilisha dhana ya pH na utumie ya Loeffler. Ikiwa kila kitu kinapata rangi lakini hakuna kinachojitofautisha, badilisha dhana ya rangi na utumie ya rangi nyingi. Ikiwa sampuli iliyotiwa rangi ya Loeffler inaonyesha chembechembe vizuri sana lakini msimamizi anauliza kwa nini viini vya seli na saitoplazimu vina bluu ileile, jibu ni kwamba hakuna rangi moja yenye alkali inayoweza kufanya kazi hiyo. Swali hilo linahusu familia ya rangi nyingi na rangi zake zinazotokana nayo kwa ajili ya damu.

Kuepuka mikanganyiko ya kawaida

Makosa mawili yanasababisha sehemu kubwa ya mkanganyiko. La kwanza ni kuichukulia ya Loeffler kama inayoweza kubadilishana na bluu ya methilini ya kawaida kwa sababu zote zinaonekana bluu ndani ya chupa. Zinatofautiana katika pH na ukali wa rangi, na kutumia rangi isiyo na asidi wala alkali mahali ambapo ya Loeffler imetajwa huondoa utofauti uleule wa rangi wa chembechembe ambao utaratibu uliandaliwa kuonyesha. La pili ni kuichukulia bluu yoyote ya zamani yenye alkali, au iliyozeeka kwa bahati, kama ya rangi nyingi. Kuzeeka kusikodhibitiwa huzalisha mchanganyiko usiojulikana wenye ukolezi usiojulikana, ilhali myeyusho halisi ya rangi nyingi huandaliwa kwa njia maalumu za oksidesheni na, katika mfululizo wa rangi za damu, huunganishwa na eosini iliyopimwa. Historia inatoa funzo hapa: myeyusho isiyo thabiti iliyokomazwa katika maji ya miaka ya 1890 ilibadilishwa na michanganyiko thabiti ya methanoli hasa kwa sababu michanganyiko isiyodhibitiwa haikuweza kuzalishwa tena kwa namna ileile. Ni funzo la kukumbuka kabla ya kutia rangi slaidi ya uchunguzi kwa kutumia chupa yenye umri usiojulikana.

Kuzingatia majina kunakamilisha suala hili. Thibitisha bidhaa ya katalogi (iliyoyeyushwa katika maji, ya Loeffler, au ya rangi nyingi), kiasi cha rangi, na matumizi yaliyokusudiwa kwenye lebo badala ya kukisia kutokana na rangi yake. Michanganyiko hiyo mitatu ina asili moja ya kromofori. Haina matumizi yanayofanana.