Pedaran pewarna métiléna bulao alkalin Loeffler jeung polikrom

Tilu botol bisa ngajajar dina méja ngawarnaan, masing-masing dilabélan ku salah sahiji varian métiléna bulao. Hiji dilabélan larutan cai métiléna bulao 1%. Hiji deui métiléna bulao alkalin Loeffler. Anu hiji deui métiléna bulao polikrom. Patugas anu keur sibuk nyokot botol anu pangdeukeutna. Preparat hapusan tuluy kawarnaan samar teuing, atawa bulao rata teuing, atawa némbongkeun nuansa wungu anu teu disangka-sangka, sarta sampel anu disalahkeun pikeun hasilna.

Ieu masalah formulasi, lain masalah sampel. Katilu larutan éta ngandung zat warna anu patali, tapi ngagunakeun konsép ngawarnaan anu béda. Hiji mangrupa zat warna kationik biasa dina pH anu deukeut nétral. Hiji deui mangrupa zat warna anu sarua, tapi dijieun leuwih kuat ku alkali. Anu hiji deui lain deui zat warna tunggal, tapi campuran anu dihaja dioksidasi. Lamun salah milih, prinsip ngawarnaanana robah dina prosés anu keur dilakukeun.

Jawaban singget

Larutan cai métiléna bulao biasa mangrupa patokan dasar: kira-kira 1% zat warna dina cai, nyaéta pewarna kationik basajan pikeun morfologi baktéri jeung mikroskopi umum. Métiléna bulao alkalin Loeffler nambahkeun sajumlah leutik alkali éncér anu diukur kana larutan stok dina alkohol anu diéncérkeun ku cai. Ieu naékkeun pH sarta ngajadikeun zat warna kationik leuwih kuat ngabeungkeut struktur baktéri anu asam. Métiléna bulao polikrom nyaéta métiléna bulao anu dihaja dimatengkeun ku oksidasi dina alkali. Ku kituna, botolna ngandung campuran homolog anu geus didémétilasi (azure A, azure B, azure C), tionin, jeung métiléna violét, bareng jeung sésa métiléna bulao. Campuran ieu ngawarnaan struktur anu béda ku nuansa warna anu béda.

Lamun ngan rék nginget hiji kalimah: alkalinisasi ngarobah inténsitas ngawarnaan, ari polikromisasi ngarobah warna anu dihasilkeun.

Larutan cai métiléna bulao biasa: titik acuan

Formulasi pangbasajanna nyaéta métiléna bulao anu leyur dina cai, ilaharna dina 1% w/v, tanpa alkali jeung tanpa oksidasi. Spésiés anu boga warna nyaéta kation métiltioninium jeung ion lawan klorida, hiji zat warna fén tiazin anu leutik jeung datar, anu dijelaskeun dina éntri métiléna bulao di PubChem minangka métiltioninium klorida. Salaku kation, ieu zat ngabeungkeut rorongkong fosfat asam nukléat jeung gugus asam dina témbok sél baktéri, sahingga sél kawarnaan bulao dina latar anu caang.

Kaunggulanana nyaéta hasil anu bisa diperkirakeun. Inti sél jeung baktéri katingali bulao. Kontrasna henteu pati kuat. Organisme anu samar bisa kawarnaan lemah, sarta ieu pisan kakurangan anu hayang dibebenah ku Loeffler. Pikeun golongan anu leuwih lega tina pewarna basajan pikeun baktéri anu ngawengku larutan ieu, tingali tinjauan ngeunaan ngawarnaan basajan baktéri. Katepatan idéntitas tetep penting di dieu: métil bulao téh molekul anu béda pisan, sakumaha dijelaskeun dina métil bulao dibandingkeun jeung métiléna bulao. Ku kituna, néangan dina katalog ngan dumasar kana ngaran warna bisa ngahasilkeun golongan zat warna anu salah.

Métiléna bulao alkalin Loeffler: zat warna anu sarua, dijieun leuwih kuat

Resep klasik Loeffler ngahijikeun larutan stok métiléna bulao dina alkohol jeung alkali éncér dina cai. Vérsi dina buku pangajaran merlukeun 0.3 g zat warna dina 30 mL étanol 95% ditambah 100 mL larutan cai kalium hidroksida 0.01% (atawa sarimbag jeung 30 mL larutan jenuh métiléna bulao dina alkohol, 100 mL cai sulingan, jeung 1 mL KOH 1%). Ieu ngahasilkeun larutan siap paké anu ngandung zat warna kira-kira 0.3% dina pH anu écés alkalin. Vérsi komérsial nuturkeun prinsip anu sarua, sarta katalog pewarna mikrobiologi Thermo Fisher ngadaptarkeun métiléna bulao alkalin Loeffler babarengan jeung varian polikrom sarta larutan cai minangka barang katalog anu misah, kalayan tujuan pamakéan anu béda.

Alkali téh unsur koncina. Naékkeun pH nyababkeun déprotonasi gugus karboksil jeung fosfat dina spésimén, sahingga kapadetan situs nu boga muatan négatif nambahan. Samentara éta, larutan stok étanol ngajaga zat warna tetep leyur sagemblengna sangkan nepi ka situs-situs éta dina wangun monomér. Hasilna nyaéta ngawarnaan baktéri anu leuwih gancang jeung leuwih kuat batan ku zat warna dina larutan cai nétral, kalayan baktéri batang jeung kokus bulao kolot anu ilahar dina preparat hapusan baktériologis rutin. Waktu ngawarnaan ilaharna hiji nepi ka tilu menit, tuluy dikumbah ku cai.

Pamakéan klasikna nyaéta pikeun Corynebacterium diphtheriae anu dipelak dina médium sérum Loeffler: baktéri batang anu langsing, mindeng ngabareuhan kawas gada, kalayan granula métakromatik Babes-Ernst tina simpenan polifosfat anu kawarnaan kuat. Pasangan médium jeung pewarna ieu miboga sajarah; duanana dipatalikeun jeung ahli baktériologi anu sarua, sarta kontras granulana mangrupa mangpaat pikeun diagnosis. Salian ti pagawéan patali jeung diftéria, pewarna ieu dipaké minangka pewarna baktériologis umum pikeun preparat hapusan tina kultur, pikeun morfologi Neisseria dina preparat hapusan klinis, jeung dina kaayaan nalika ngawarnaan Gram henteu diperlukeun tapi larutan cai bulao biasa samar teuing. Ieu pewarna monokrom. Sakabéh bagian anu asam bakal boga salah sahiji nuansa bulao. Lamun protokol merlukeun warna anu ngabédakeun struktur, alkali wungkul moal bisa nyadiakeunana.

Hiji hal praktis anu kudu diwaspadaan: larutan zat warna alkalin bisa ruksak jeung ngabentuk éndapan salila disimpen sarta nyerep karbon dioksida. Laboratorium biasana nyieun dina jumlah anu henteu loba atawa meuli larutan tina katalog sarta nurut kana umur simpénna, lain terus ngagunakeun botol heubeul anu ayeuna ninggalkeun éndapan dina unggal kaca objék.

Métiléna bulao polikrom: hiji ngaran, sababaraha zat warna

Métiléna bulao polikrom dimimitian tina zat warna anu sarua, tapi diolah ku oksidasi anu dikontrol dina alkali, anu sacara sajarah disebut pematangan atawa polikromisasi. Pematangan dina kaayaan alkalin, pemanasan jeung karbonat, atawa oksidasi ku agén saperti dikromat ngaleupaskeun gugus métil tina substituén dimétilamino sacara bertahap. Produkna mangrupa campuran: sésa métiléna bulao ditambah azure B (leungit hiji métil), azure A jeung azure C (démétilasi salajengna), tionin (didémétilasi sagemblengna), sarta produk samping oksidatif tina golongan métiléna violét. Unggal komponén miboga nuansa warna jeung afinitas sorangan kana jaringan, jadi campuran ieu ngawarnaan sacara métakromatik: inti sél, granula, musin, jeung tulang rawan masing-masing meunang nuansa anu béda tina bulao nepi ka beureum-wungu.

Kimia ieu sarua jeung kimia anu jadi dasar pewarna getih anu kasohor. Para panalungtik baheula manggihan yén métiléna bulao anu dialkalinisasi ngawarnaan inti parasit malaria ku nuansa wungu, tapi larutan cai maranéhna anu geus dimatengkeun henteu stabil sarta ngabentuk éndapan dina sababaraha poé. Tinjauan ngeunaan kumaha pewarna getih wungu diciptakeun ngaguar kumaha Malachowski jeung Romanowsky sacara mandiri ngamangpaatkeun éfék ieu dina 1891, kumaha métanol diwanohkeun pikeun nyaimbangkeun éndapan zat warna jeung ngafiksasi lapisan hapusan tanpa panas, sarta kumaha Giemsa saterusna ngabakukeun campuran dumasar kana azure B anu diukur ditambah éosin, kalayan gliserol pikeun ngajaga stabilitasna. Pewarna modéren tipe Giemsa asalna langsung tina métiléna bulao polikrom ditambah éosin, kombinasi anu ngahasilkeun éfék Romanowsky. Pikeun pedaran leuwih jéntré ngeunaan pasangan éosin jeung komponén azure B, tingali pewarna tipe Romanowsky jeung interaksi azure B-éosin.

Ku lantaran mangrupa campuran, métiléna bulao polikrom sacara alami paling hésé dibakukeun di antara katiluna. Kasaimbangan nuansa warnana anu pasti gumantung kana jalur jeung darajat oksidasi. Éta sababna panyadia bahan histologi ngajualna minangka produk anu misah kalayan tés kinerja sorangan, lain minangka Loeffler anu geus lila disimpen. Pamakéan ilaharna ngawengku mintonkeun granula sél mast, musin, jeung tulang rawan sacara métakromatik, jéntré sél plasma, sarta Helicobacter pylori dina irisan jaringan ku métode polikrom tipe Goodpasture. Ieu pilihan anu pas lamun anu dipikabutuh nyaéta ngabédakeun struktur ku warna, sarta pilihan anu salah lamun protokol ngarepkeun siluét baktéri monokrom anu écés.

Babandingan formulasi jeung tujuan

Baca tabél ieu minangka cara nyieun kaputusan. Lamun spésimén kawarnaan samar teuing, robah konsép pH sarta paké Loeffler. Lamun sakabéhna kawarnaan tapi henteu aya bagian anu bisa dibédakeun, robah konsép zat warna sarta paké polikrom. Lamun preparat hapusan Loeffler némbongkeun granula kalayan écés pisan tapi pangawas nanya naha inti sél jeung sitoplasma boga warna bulao anu sarua, jawabanana nyaéta yén teu aya pewarna monokrom alkalin anu bisa ngalakukeun pancén ngabédakeun éta. Éta patalékan mah kaasup kana ranah golongan polikrom jeung turunan pewarna getihna.

Ngahindarkeun kasalahan anu ilahar

Dua kasalahan jadi sumber kalolobaan kabingungan. Anu kahiji nyaéta nganggap Loeffler bisa silih ganti jeung métiléna bulao biasa lantaran duanana katingali bulao dina botol. Duanana béda dina pH jeung inténsitas, sarta ngaganti Loeffler ku zat warna nétral nalika protokol netepkeun Loeffler bakal ngaleungitkeun kontras granula anu jadi dasar éta protokol. Anu kadua nyaéta nganggap sagala larutan bulao alkalin anu heubeul atawa teu kahaja ngalaman pematangan minangka polikrom. Pematangan anu henteu dikontrol ngahasilkeun campuran anu teu dipikanyaho kalayan kakuatan anu teu dipikanyaho, ari larutan polikrom anu saéstuna disiapkeun ngaliwatan jalur oksidasi anu ditetepkeun sarta, dina garis turunan pewarna getih, dihijikeun jeung éosin anu diukur. Sajarah méré palajaran di dieu: larutan cai anu geus dimatengkeun tapi henteu stabil dina taun 1890-an diganti ku formulasi dina métanol anu distabilkeun, justru lantaran campuran anu henteu dikontrol teu bisa dihasilkeun deui sacara konsistén. Ieu palajaran pantes diinget saméméh ngawarnaan preparat diagnostik tina botol anu umurna teu pasti.

Katepatan ngaran ngalengkepan ieu prosés. Pastikeun barang katalogna (larutan cai vs Loeffler vs polikrom), kandungan zat warna, jeung tujuan pamakéan dina labél, lain nyimpulkeun tina warnana. Katilu formulasi ieu asalna tina kromofor anu sarua. Tapi tujuanana henteu sarua.