Ngawarnaan sél pipi ku metilén biru: naon anu kudu dititénan

Hiji murid nunda satétés suspénsi sél pipi dina kaca objék, ningali ngaliwatan mikroskop, tuluy ampir teu ningali nanaon. Sababaraha wangun samar ngambang dina médan anu caang. Manéhna nyaluyukeun fokus, tuluy nambahan cahaya, tuluy nyimpulkeun yén kaca objékna kosong. Kaca objék éta henteu kosong. Sélna aya di dinya. Sél éta ampir transparan, sarta sipat transparan ieu pisan masalah anu rék diréngsékeun ku pewarna ieu.

Bédana antara anu dipiharep jeung gambar anu katingali perlu dijelaskeun saméméh protokol dimimitian. Pamula ngaharepkeun mikroskop némbongkeun rinci saperti zum kaméra anu ngajelaskeun papan tulisan ti kajauhan. Mikroskop médan caang ngalakukeun hal anu leuwih kawates: némbongkeun bédana dina nyerep cahaya. Sél pipi anu teu diwarnaan ampir teu nyerep cahaya, jadi ampir teu ngahasilkeun bédana. Metilén biru nambahan éta bédana. Pewarna ieu ngabeungkeut di jero sél, henteu rata, sarta ngarobah struktur jadi kontras. Sanggeus murid ngarti kana konsép éta, unggal léngkah satuluyna bakal kaharti minangka akibat anu logis, lain saukur resep anu kudu diturutan.

Pangaweruh dasar ngeunaan kumaha pewarnaan basajan nambahan kontras di laboratorium sakola bakal ngabantu di dieu, sarta ngingetkeun deui ngeunaan nyiapkeun mikroskop médan caang saméméh ngawarnaan bisa nyegah satengah tina kagagalan préparat. Kimia anu nyababkeun warnana dibahas dina bubuka ngeunaan metilén biru dina mikroskopi, anu ngajelaskeun naha pewarna ieu mindeng kapanggih dina méja laboratorium.

Protokol kelas

Vérsi préparat baseuh di handap mangrupa pilihan standar anu leuwih basajan pikeun kelas umum. Ieu henteu merlukeun seuneu atawa léngkah fiksasi. Varian olesan anu difiksasi, anu dipaké dina sababaraha buku pituduh paguron luhur, nambahan panggaringan ku hawa jeung fiksasi panas sakeudeung, saperti dina kagiatan olesan pipi North Central Texas College anu diterbitkeun ngaliwatan Biology LibreTexts, tapi fiksasi panas téh kabiasaan dina mikrobiologi, lain sarat pikeun ningali sél épitél.

Anu diperlukeun: kaca objék jeung kaca panutup anu beresih, usap stéril sakali paké (leuwih dianjurkeun) atawa congkrang huntu anyar anu datar, botol tetes anu eusina larutan metilén biru 0.5 nepi ka 1 persén dina cai, cai sulingan atawa cai deionisasi, kertas nyerep, sarung leungeun, jeung mikroskop majemuk kalayan pembesaran total 100x jeung 400x.

1. Kumur ku cai biasa. Ieu miceun partikel dahareun anu engkéna bisa diwarnaan pisan sarta ngaganggu paniténan sél.
2. Unggal murid ngan nyokot sampel tina pipina sorangan. Usap bagian jero pipi lalaunan ku usap stéril anyar. Teken, ulah dikikis. Eureun jauh saméméh karasa teu genah atawa aya perdarahan.
3. Gulungkeun usap dina bagian tengah kaca objék anu beresih pikeun nyieun lapisan ipis. Lapisan ipis mangrupa faktor pangpentingna anu nangtukeun naha préparat bisa dititénan kalayan écés. Endapan bodas anu kandel bakal diwarnaan jadi gumpalan biru anu teu bisa dibédakeun rincianna.
4. Tambahkeun satétés metilén biru dina olesan. Antebkeun salila 1 nepi ka 3 menit. Hiji menit geus cukup dina loba protokol paguron luhur; buku pituduh laboratorium sains NCERT Kelas IX ngagunakeun kira-kira 3 menit pikeun préparat samentara. Leuwih lila lain hartina leuwih hadé, sarta ngawarnaan kaleuleuwihi mangrupa kasalahan waktu anu pangmindengna.
5. Bilas lalaunan ku cai sulingan atawa serep kaleuwihan pewarna ku kertas nyerep, saluyu jeung protokol satempat. Latar tukang kuduna jadi biru ngora, lain biru dongker.
6. Turunkeun kaca panutup dina posisi miring sangkan hiji sisina nyabak heula, tuluy antepkeun turun lalaunan. Ieu nyegah gelembung hawa asup.
7. Mimitian ku pembesaran handap pikeun manggihan sél, pastikeun fokus jeung posisi di tengah, tuluy pindah ka 100x sarta ahirna 400x. Dina 400x, ngan paké pangatur fokus halus.

Konséntrasi pewarna perlu dijelaskeun kalayan taliti. Protokol sakola umumna ngagunakeun larutan metilén biru dina cai kira-kira 1 persén. Larutan stok anu leuwih pekat atawa paparan anu lila ngajadikeun latar tukang leuwih poék leuwih gancang tibatan inti sél, sahingga ngabalikeun kontras anu jadi dasar latihan ieu.

Nanganan bahan tina pipi kalayan aman

Sampel pipi mawa ciduh jeung mikroorganisme normal dina sungut, jadi anggap unggal olesan seger minangka bahan anu berpoténsi népakeun inféksi, sanajan nu méré sampel téh babaturan sakelas anu séhat. Pituduh kaamanan biologis American Society for Microbiology pikeun laboratorium pangajaran netepkeun prinsip umum: évaluasi résiko saméméh kagiatan, paké sarung leungeun, lindungan panon lamun aya kamungkinan cipratan, kumbah leungeun sanggeusna, disinféksi méja laboratorium, sarta piceun barang sakali paké anu kacemar ngaliwatan jalur runtah biologis anu disatujuan.

Opat aturan kelas bisa ngungkulan sabagian gedé résiko. Hiji usap jeung hiji kaca objék pikeun hiji jalma anu méré sampel, ulah dipaké babarengan. Ngan meunang nyokot sampel sorangan, ulah nyokot sampel ti batur. Usap jeung congkrang huntu sakali paké kudu langsung diasupkeun kana wadah runtah anu geus ditangtukeun, ulah diteundeun deui dina méja laboratorium. Metilén biru sorangan bisa ngawarnaan kulit jeung papakéan sarta ngairitasi panon, jadi sarung leungeun jeung prakték kabersihan anu biasa pikeun pewarna kudu diterapkeun. Ulah ngalegaan latihan ieu nepi ka ngabudidayakeun naon waé tina olesan, sarta ulah nyieun cara sorangan pikeun fiksasi panas bahan seger tina manusa di luar prosedur kaamanan sakola.

Naon anu kudu dititénan, jeung naha rupana kitu

Dina 100x, téangan sél anu lega jeung datar, biru ngora, kalayan garis luar oval teu teratur atawa wangun poligon. Sélna aya nyorangan atawa dina lapisan anu silih tumpang tindih sacara renggang. Unggal sél biasana boga hiji bintik biru anu leuwih poék. Éta bintik téh inti sél. Titénan ogé susunanana: sél épitél pipih téh siga ubin ipis, lain buleudan, ku sabab éta sisina siga lapisan glasir anu rétak tibatan balon buleud.

Dina 400x, tilu ciri bisa dibédakeun kalayan écés. Wates sél katingali minangka garis ipis anu leuwih poék ngurilingan sél. Sitoplasma ngeusian bagian jero ku warna biru ngora anu rata. Intina leuwih poék jeung leuwih padet, mindeng oval, biasana deukeut tengah tapi henteu salawasna. Ménta murid pikeun nyatet tiluanana, ditambah wangun jeung pembesaranna, sabab éta pisan anu dipénta dina lembar gawé.

Aya hiji hal ngeunaan katepatan anu penting di dieu sarta mindeng salah dina lembar gawé. Wates anu katingali saluyu jeung wewengkon mémbran plasma, tapi mémbranna sorangan, nyaéta lapisan ganda lipid anu kandelna kira-kira 7 nepi ka 10 nanométer, jauh leuwih leutik tibatan anu bisa dibédakeun ku mikroskop sakola. Anu katempo ku murid téh sisi optik sél ditambah pewarna anu ngumpul di dinya. Kudu ati-ati ogé dina ngajelaskeun organél. Mitokondria, rétikulum éndoplasma, badan Golgi, jeung ribosom henteu katingali dina préparat ieu. Mikroskop cahaya konvénsional bisa ngabédakeun rinci nepi ka kira-kira 0.2 mikrométer dina kaayaan anu hadé, sakumaha dijelaskeun dina pangaweruh dasar biologi sél NCBI ngeunaan pakakas mikroskopi, sarta lolobana ultrastruktur aya di handapeun atawa deukeut wates éta. Pembesaran kosong anu leuwih luhur ngajadikeun gambar leuwih gedé tanpa nambahan rinci.

Naha inti sél diwarnaan pangpoékna? Metilén biru téh pewarna kationik, anu muatanana positif dina larutan, sarta pakait jeung bahan anu muatanana négatif dina sél, utamana asam nukléat. Kromatin ngumpulkeun DNA dina inti, ku kituna inti ngumpulkeun pewarna panglobana. Sitoplasma ngandung RNA jeung molekul séjén anu boga muatan, jadi éta ogé diwarnaan, tapi leuwih sumebar jeung leuwih samar. Catetan pentingna: metilén biru lain pewarna anu husus pikeun DNA. Panalungtikan ngeunaan sebaran metilén biru dina pencitraan inti sél ngajelaskeun kation anu pakait jeung wewengkon beunghar asam nukléat, sarta panalungtikan kuantitatif anu leuwih heubeul ngeunaan beungkeutan metilén biru dina préparat sél manggihan yén lolobana pewarna anu ngabeungkeut pakait jeung asam nukléat. Ku kituna, inti poék jeung sitoplasma caang téh pola kontras, lain uji molekular.

Kasalahan anu bakal dilakukeun ku murid, jeung cara napsirkeunana

Ampir unggal préparat anu gagal kaasup kana salah sahiji tina lima pola. Ajar murid pikeun manggihan panyabab masalah dina préparat, lain ngan saukur ngulang deui tanpa ngarti.

Ngawarnaan kaleuleuwihi ngajadikeun sél jeung latar tukang sarua poékna, sahingga inti teu bisa dibédakeun tina médan paniténan. Benerkeun ku waktu ngawarnaan anu leuwih pondok atawa bilasan anu leuwih tuntas. Ngawarnaan anu kurang ngahasilkeun wangun samar anu ngaleungit nalika cahaya ditambahan; tambahkeun waktuna saeutik-saeutik, unggal tilu puluh detik. Olesan kandel ngahasilkeun gumpalan padet anu silih tumpang tindih, nepi ka euweuh garis luar anu bisa dituturkeun; benerkeun ku cara mékanis, nyaéta nyebarkeun leuwih ipis dina percobaan salajengna, sabab bilasan moal bisa ngabebenah tumpukan sél. Gelembung hawa katingali minangka bunderan sampurna kalayan sisi poék anu écés sarta ngaganggu pamula anu nyangka éta struktur sél; pasang deui kaca panutup lalaunan dina posisi miring. Titik-titik poék leutik anu sumebar dina atawa di sabudeureun sél biasana baktéri normal dina sungut, sakumaha dicatet ku protokol sakola saperti prosedur sél pipi Ingrid Science. Éta némbongkeun yén sungut dicicingan ku mikroorganisme, anu bisa jadi hal anu matak inget pikeun murid, tapi spésiésna teu bisa diidéntifikasi dina latihan ieu sarta ulah digambar minangka bagian sél. Sésa dahareun jeung untaian mukus diwarnaan teu rata sarta pekat; kumur saméméhna dimaksudkeun pikeun ngurangan éta.

Naon anu teu bisa dilakukeun ku latihan ieu

Ieu paniténan pikeun pangajaran, lain tés diagnostik. Rupa sél dina pewarnaan di kelas teu bisa dipaké pikeun ngadiagnosis inféksi, kanker, atawa panyakit naon waé, sarta artikel ieu ulah ditapsirkeun minangka nyarankeun sabalikna. Préparat ieu némbongkeun wangun, wates, sitoplasma, jeung inti dina dua pembesaran. Ieu henteu némbongkeun ultrastruktur mémbran, rinci organél, atawa idéntitas molekular. Nyebutkeun watesanana sacara écés ngajaga élmu jeung murid: hasil anu hadé téh gambar anu dibéré labél kalayan bener, dibarengan ku catetan pembesaran jeung pewarna, lain kacindekan ngeunaan kaséhatan.

Lembar gawé murid jeung mikrograf anu dibéré labél

Dua bahan proyék pikeun kaca ieu nyaéta mikrograf anu dibéré labél di luhur jeung lembar gawé di handap. Citak hiji lembar gawé pikeun unggal murid atawa témbongkeun ku proyéktor sarta ménta murid nyalin kotak-kotakna kana buku catetan.

Cara ngagunakeunana dina sési 45 menit: sapuluh menit pikeun pengarahan kaamanan jeung nyokot sampel, sapuluh menit pikeun ngawarnaan jeung masang préparat, lima belas menit pikeun niténan jeung nyieun skétsa dina duanana pembesaran, sapuluh menit pikeun daptar pariksa jeung ngabandingkeun jeung mikrograf anu dibéré labél. Eusi daptar pariksa ngahaja museur kana léngkah praktis. Olesan ipis, waktu ngawarnaan anu bener, inti leuwih poék tibatan sitoplasma, pembesaran dicatet. Murid anu bisa mariksa sarta nyumponan opat hal éta geus ngarti kana konsép anu rék diajarkeun dina palajaran ieu: mikroskop némbongkeun bédana, sarta pewarna nyiptakeun bédana anu penting pikeun ditingalikeun.