Ngawarnaan basajan ku métilén biru dibandingkeun jeung ngawarnaan Gram: naon anu bisa dibuktikeun ku unggal métode

Saurang mahasiswa nyiapkeun apusan tina kultur anu dilabélan E. coli, ngabahekeun métilén biru kana éta apusan salila hiji menit, ngumbahna, tuluy niténan ngaliwatan lénsa imérsi minyak. Sél wangun batang anu biru ngeusi widang panempoan. Laporan laboratorium nyebutkeun: "Baktéri wangun batang Gram-négatif diidéntifikasi minangka E. coli." Hasil paniténna leres. Tapi kacindekanana teu dirojong ku éta préparat.

Kasalahanana aya dina konsép, lain dina téknik. Mahasiswa éta nganggap ngawarnaan basajan saolah-olah mangrupa uji diferensial. Ngawarnaan basajan jeung ngawarnaan Gram ngajawab patarosan anu béda lantaran ngagunakeun konsép ngawarnaan anu béda. Nu hiji nanyakeun: wangun naon anu aya. Nu séjén nanyakeun: kumaha paripolah témbok sél nalika diuji. Lamun duanana pacampur, préparat anu diwarnaan kalayan leres bisa ngahasilkeun laporan anu teu boga dasar.

Babandingan ieu misahkeun dua métode éta, némbongkeun klaim naon anu bisa dirojong ku unggal hasil, sarta ngajawab dua patarosan anu pangmindengna ditanyakeun ku mahasiswa: naha métilén biru bisa dipaké dina ngawarnaan Gram, jeung naon anu sabenerna ditémbongkeun ku ngawarnaan E. coli maké métilén biru.

Jawaban singget

Ngawarnaan basajan ku métilén biru méré warna biru anu sarua ka unggal sél anu bisa diwarnaan, ku kituna némbongkeun morfologi (batang, buleud, spiral) jeung susunan (nyorangan, papasangan, ranté), tapi teu némbongkeun nanaon ngeunaan kategori Gram. Ngawarnaan Gram nambahan iodin, léngkah panghilangan warna, jeung pewarna tandingan, ku kituna ngabédakeun baktéri jadi Gram-positif (wungu) jeung Gram-négatif (jambon atawa beureum) dumasar kana kumaha selubung sélna nahan pewarna. Sél batang biru sanggeus diwarnaan ku métilén biru hartina "aya sél anu wangunna batang." Sél batang jambon sanggeus runtuyan Gram lengkep hartina "aya baktéri wangun batang Gram-négatif." Pernyataan kadua leuwih kuat lantaran prosedurna ngalaksanakeun uji tambahan.

Pikeun kelompok métode baktéri hiji-pewarna anu leuwih lega, anu ngawengku métode dina ieu tulisan, tingali atlas ngawarnaan mikroskopi.

Ngawarnaan basajan: hiji pewarna, hiji patarosan

Métilén biru mangrupa pewarna basa (kationik). Ion anu mawa warnana boga muatan positif sarta ngabeungkeut struktur dina sél anu muatanana négatif, kaasup asam nukléat jeung gugus asam dina beungeut sél, ku kituna sél katingali biru dina latar anu pucet. OpenStax ngajelaskeun prinsip ngawarnaan positif ieu dina bab ngeunaan ngawarnaan. Kation pewarna éta sorangan mangrupa ion fénotiazin leutik anu datar, anu dijelaskeun sacara rinci dina rujukan kimia métilén biru; ion lawan klorida henteu méré warna.

Protokol pangajaran standar ngahaja dijieun basajan: jieun apusan ipis, tegalkeun ku hawa, fiksasi ku panas, bahekeun larutan métilén biru dina cai kira-kira 1% salila kurang leuwih hiji menit, kumbah lalaunan ku cai, tegalkeun ku cara diteken hampang maké kertas nyerep, tuluy pariksa ku imérsi minyak. Protokol pangajaran LibreTexts méré prosedur 1% salila hiji menit ieu persis, bari nyatet yén sababaraha laboratorium manjangkeun waktuna. Euweuh mordan, euweuh panghilang warna, euweuh pewarna kadua. Henteuna bahan-bahan éta téh inti konsépna. Ku ngan hiji pewarna sarta tanpa panghilangan selektif, unggal sél anu ngabeungkeut pewarna ahirna boga warna anu sarua.

Dina E. coli, widang panempoan anu dipiharep nyaéta sél batang biru (basil), nyorangan atawa papasangan atawa dina kelompok leutik. Warna biru asalna tina pewarna. Wangun batang asalna tina organismena. Tapi gabungan éta henteu ngaidéntifikasi organisme, lantaran loba spésiés wangunna batang sarta loba baktéri batang jadi biru dina ngawarnaan basajan. ATCC nétélakeun sacara écés wates anu ngan ukur morfologi ieu dina pituduh kultur mikrobiologina. Laporan anu leres nyebutkeun: "basil biru katitén." Sagala hal saluareun wangun jeung susunan merlukeun bukti tambahan.

Ngawarnaan Gram: opat réagen, hiji uji paripolah

Ngawarnaan Gram mangrupa ngawarnaan diferensial. Sadaya sél ngalaman runtuyan anu sarua, tuluy dititénan sél mana anu nahan pewarna kahiji jeung mana anu kaleungitanana. Protokol ngawarnaan Gram ti American Society for Microbiology netepkeun runtuyan standar opat léngkah: kristal violét (pewarna utama), iodin Gram (mordan), alkohol atawa aséton-alkohol (panghilang warna), tuluy safranin (pewarna tandingan).

Modél pangajaran standar ngajelaskeun bédana ieu dumasar kana struktur selubung sél. Sél Gram-positif boga témbok péptidoglikan kandel anu ngalaman déhidrasi sarta nahan kompléks kristal violét-iodin nalika dikumbah ku alkohol. Sél Gram-négatif boga lapisan péptidoglikan ipis ditambah mémbran luar anu beunghar lipid, anu kaganggu ku panghilang warna, ku kituna kompléksna kabawa ku cucian sarta sél tuluy nyerep safranin. Tinjauan ngawarnaan Gram dina NCBI Bookshelf méré katerangan témbok sél ieu. Para ahli nambahan yén fisikokimia lengkepna leuwih rumit batan ngan ukur kandelna témbok, tapi pikeun interpretasi di méja laboratorium, aturan paripolahna tetep lumaku: wungu hartina pewarna dipertahankeun, jambon hartina pewarna leungit tuluy diwarnaan ku pewarna tandingan.

Panel ilustrasi. Gambar stilisasi pikeun ngabandingkeun métode, lain mikrograf tina kaméra. Warna disederhanakeun pikeun ngajarkeun logikana: hiji warna dina ngawarnaan basajan, dua warna sanggeus panghilangan warna Gram.

Naha métilén biru bisa dipaké dina ngawarnaan Gram

Patarosan ieu boga dua maksud, sarta duanana merlukeun jawaban anu béda.

Maksud kahiji: naha sakali ngabahekeun métilén biru bisa ngagantikeun sakabéh runtuyan Gram. Henteu. Tanpa iodin, panghilang warna, jeung pewarna tandingan, euweuh léngkah diferensial, ku kituna euweuh kategori Gram anu diuji. Widang biru sanggeus ngan diwarnaan ku métilén biru mangrupa hasil ngawarnaan basajan, sanajan botolna disimpen gigireun réagen Gram. Ulah dicatet minangka hasil Gram.

Maksud kadua: naha métilén biru bisa ngaganti safranin minangka pewarna tandingan dina léngkah 4. Sacara fungsi, éta bisa ngawarnaan sél anu warnana geus dileungitkeun, sarta latihan dina buku pangajaran ngaramalkeun sél Gram-positif wungu jeung sél Gram-négatif biru sanggeus panggantian kitu. Logikana leres lantaran sél Gram-négatif anu panghilangan warnana dilakukeun kalayan leres ampir teu boga warna sarta bakal nyerep pewarna kationik séjén. Tapi éta lain protokol standar. Protokol ASM netepkeun safranin, kalayan alternatif anu diaku saperti fuksin basa dina sababaraha varian, lain métilén biru. Aya ogé kakurangan praktisna: biru jeung wungu leuwih hésé dibédakeun batan jambon jeung wungu, utamana pikeun nu kakara diajar sarta utamana nalika lampu mikroskop geus rédup. Pikeun kagiatan pangajaran jeung sagala hasil anu penting, paké pewarna tandingan anu disebutkeun dina protokol anjeun, biasana safranin, sarta anggap pewarna tandingan métilén biru minangka varian démo, lain standar anu sarua.

Patarosan anu patali ngeunaan babandingan métilén biru jeung pilihan hiji-pewarna séjén dibahas dina babandingan ngawarnaan baktéri basajan.

Naon anu dibuktikeun ku ngawarnaan E. coli maké métilén biru, jeung naon anu henteu

E. coli mangrupa baktéri wangun batang Gram-négatif, tapi éta kalimah ngahijikeun fakta tina sababaraha métode: morfologi tina mikroskopi, réaksi Gram tina ngawarnaan Gram, idéntitas tina kultur ditambah uji biokimia atawa molekular. Apusan métilén biru ngan nyumbangkeun bagian kahiji. Éta mastikeun yén aya sél wangun batang dina sampel anu diwarnaan sarta némbongkeun kumaha susunanana. Éta henteu mastikeun réaksi Gram, lantaran euweuh uji panghilangan warna anu dilaksanakeun. Éta henteu ngaidéntifikasi spésiés, lantaran baktéri batang tina loba spésiés katingali sarua dina résolusi ieu.

Dina ieu bagian laporan mindeng salah ku pola anu bisa dipiharep. Nu nulis ngalebetkeun pangaweruh latar ("ieu kultur sakuduna E. coli, sarta E. coli téh Gram-négatif") kana kalimah hasil panitén, sahingga préparat siga ngonfirmasi hal anu sabenerna ngan diasumsikeun. Laporan anu leuwih écés misahkeun lapisan-lapisan éta: "Ngawarnaan basajan ku métilén biru: basil biru katitén; ngan morfologi, euweuh kategori Gram anu diuji." Tuluy, lamun ngawarnaan Gram dilaksanakeun kalayan leres tur maké kontrol: "Ngawarnaan Gram: sél batang jambon, saluyu jeung Gram-négatif." Idéntitas spésiés ditangtukeun saterusna, tina alur gawé idéntifikasi, lain tina warna wungkul.

Pituduh interpretasi praktis

Paké aturan kaputusan ieu di méja laboratorium. Lamun sadaya sél boga hiji warna sarta protokolna ngagunakeun hiji pewarna tanpa panghilang warna, anjeun ngalaksanakeun ngawarnaan basajan. Laporkeun wangun, perkiraan ukuran, jeung susunan. Eureun nepi ka dinya. Lamun protokolna ngagunakeun kristal violét, iodin, panghilang warna, jeung pewarna tandingan kalayan kontrol positif jeung négatif anu geus dipikanyaho, anjeun ngalaksanakeun ngawarnaan Gram. Laporkeun warna ditambah morfologi: kokus wungu dina ranté, sél batang jambon, jeung saterusna.

Tilu kasalahan jadi sabab sabagéan gedé kabingungan. Kahiji, napsirkeun sél batang biru kaleuleuwihi minangka konfirmasi E. coli. Kadua, nyatet préparat métilén biru dina judul "ngawarnaan Gram" dina buku catetan, anu engké bakal disalahhartikeun ku nu maca. Katilu, ngaganti pewarna tandingan sambarangan tuluy ngabandingkeun warna antarlaboratorium saolah-olah palét warnana sarua. Unggal kasalahan boga cara ngalereskeun anu sarua: sebutkeun métode anu sabenerna dilaksanakeun, sarta ngan nyieun klaim ngeunaan naon anu diuji ku éta métode.

Ngawarnaan basajan pantes dipaké justru lantaran klaimna kawates. Métode ieu gancang, henteu gampang kaganggu ku kasalahan leutik, sarta cukup lamun patarosanana ngeunaan morfologi: naha aya sél, jeung kumaha wangunna. Lamun patarosanana ngeunaan klasifikasi, laksanakeun uji diferensial. Préparat biru némbongkeun kumaha rupa sélna. Préparat wungu atawa jambon némbongkeun kumaha paripolah témbokna. Taya hiji ogé tina éta préparat, lamun nyorangan, anu nangtukeun spésiésna.