Naha métilén biru dipaké salaku pewarna pangimbang tahan asam

Hiji téknisi mariksa apusan dahak sanggeus sakabéh runtuyan pewarnaan réngsé. Baktéri wangun batang anu beureum katingali écés dina widang biru, sarta laporan dikaluarkeun kalawan hasil yén basil tahan asam katénjo. Poé saterusna, préparat séjén némbongkeun widang biru anu rata tanpa baktéri wangun batang anu beureum, sarta dilaporkeun négatif tuberkulosis. Salah sahiji laporan ieu nyieun kacindekan anu ngaleuwihan bukti tina préparat, sarta éta lain laporan anu kahiji.

Kabingunganana aya dina konsép. Téknisi nganggap pewarna biru minangka bagian tina kimia deteksi, saolah-olah métilén biru mantuan manggihan mikobaktéri. Padahal henteu. Nalika métilén biru keuna kana préparat, tésna geus réngsé. Pewarna ieu ngan ngawarnaan latar tukang sangkan hasilna bisa dibaca. Artikel ieu ngajelaskeun tujuan métilén biru dina pewarnaan tahan asam, naha warnana biru lain warna séjén, sarta kacindekan naon anu bisa dijieun tina beureum dina latar biru.

Jawaban singget

Pewarnaan tahan asam nyaéta tés diferénsial anu diwangun tina tilu gagasan. Karbol fuksin, pewarna primér, dipaksa asup ka unggal sél, kaasup mikobaktéri anu lapisanna kawas lilin. Asam-alkohol, pangluntur warna, ngaleungitkeun pewarna beureum tina sél biasa, tapi teu bisa ngaluarkeunana tina sél tahan asam. Métilén biru, pewarna pangimbang, tuluy ngawarnaan sakabéh bahan anu pewarnana geus dileungitkeun ku pangluntur warna, sangkan sél anu teu tahan asam, sél inang, jeung rémah sél katingali biru, sedengkeun basil tahan asam tetep beureum. Pewarna pangimbang nyadiakeun kontras. Éta teu boga peran dina kimia anu ngajadikeun sél tahan asam.

Fungsi unggal léngkah

Diagram di handap némbongkeun babagian tugasna. Baca ti kénca ka katuhu minangka prosedur, sarta baca bagian panghandapna minangka pangéling yén unggal kelompok pewarnaan ngajawab patalékan anu béda.

Penetrasi lumangsung heula. Mikobaktéri nolak pewarna biasa anu dumasar cai lantaran lapisan pangbungkusna kacida hidrofobikna, ku kituna protokolna maksa pewarna asup. Dina métode Ziehl-Neelsen, pemanasan nepi ka ngebul ngadorong karbol fuksin anu ngandung fénol nembus témbok anu kawas lilin. Dina métode tiis Kinyoun, panas diganti ku formulasi pewarna primér anu jauh leuwih kuat, sarta sababaraha vérsi modifikasi tanpa panas nambahkeun surfaktan. Protokol pewarnaan tahan asam ti American Society for Microbiology ngadokuméntasikeun duanana formulasi sacara sajajar, sarta bédana konséntrasi kacida écésna: kira-kira 0.3 g fuksin basa per 100 mL pikeun métode anu dipanaskeun, dibandingkeun jeung kira-kira 4 g pikeun métode tiis.

Diferénsiasi lumangsung dina léngkah kadua. Asam-alkohol, ilaharna 3 mL asam hidroklorat pekat dina 97 mL étanol 95 persén, ngumbah kaluar pewarna beureum tina unggal sél anu témbokna teu boga résistansi husus. Sél anu lapisan lipid mikobaktérina masih gembleng nahan pewarna éta. Ieu léngkah anu jadi inti sakabéh métode, sarta léngkah anu pangpeka kana téknik, sakumaha dipedar di handap.

Kontras dijieun pangahirna. Préparat ayeuna ngandung sél tahan asam anu beureum dina latar tukang sél anu ampir teu boga warna lantaran pewarnana geus dileungitkeun. Métilén biru dina konséntrasi 0.3 persén w/v ngajadikeun latar tukang éta katingali deui ku warna anu kontrasna panggedéna jeung beureum. Pewarnaan pangimbang lumangsung sakeudeung, ilaharna 20 nepi ka 30 detik dina métode anu dipanaskeun sarta nepi ka sababaraha menit dina sababaraha varian métode tiis. Lilana gumantung kana protokol, lain sipat pewarna éta sorangan.

Naha pewarna ieu, sarta naha biru

Métilén biru nyaéta pewarna basa kationik, hartina ion anu méré warnana mawa muatan positif sarta ngabeungkeut kana permukaan anu muatanana négatif dina baktéri anu geus dilunturkeun warnana, sél inang, jeung rémah sél. OpenStax Microbiology ngajelaskeun logika muatan ieu minangka prinsip umum pewarna basa. Tapi métilén biru teu boga kaunikan kimia dina ieu hal. Kristal vi olét jeung safranin ogé pewarna basa. Pilihanana dumasar kana optik, lain kimia.

Baktéri wangun batang anu beureum merlukeun latar tukang anu warnana kontras, sarta biru paling merenah pikeun ngabédakeun beureum dina mikroskopi widang caang. Safranin kurang merenah minangka pewarna pangimbang lantaran warna ahirna anu beureum ngora nepi ka beureum deukeut teuing kana warna karbol fuksin anu tetep napel, sahingga ngaleungitkeun bédana anu dijieun ku prosedur éta. Kristal violét bakal ngahasilkeun latar tukang wungu poék anu ngaganggu perhatian kana basil beureum anu ipis. Bukti pangkuatna yén tugasna nyaéta nyadiakeun kontras lain kimia nyaéta kamungkinan ngagantina: pewarna pangimbang héjo saperti héjo malakit jeung héjo brilian dipaké dina sababaraha protokol vétérinér jeung protokol modifikasi, sarta tésna tetep jalan, sabab warna naon waé anu écés béda ngalaksanakeun tugas anu sarua.

Aya dua implikasi praktis. Kahiji, resep baku teu netepkeun panyaluyuan pH; ulah nyaruakeun larutan cai biasa 0.3 persén ieu jeung formulasi basa saperti métilén biru Loeffler, anu kaasup kana konsép pewarnaan anu béda. Kadua, pamakéan kaleuleuwihi matak ngarugikeun. Literatur histologi sacara husus ngingetkeun yén latar biru anu teuing pekat bisa nyumputkeun basil anu jumlahna saeutik, ku kituna ngagenangan préparat leuwih lila tibatan anu diidinan ku protokol ngan ngurangan kajelasan tanpa aya mangpaatna.

Kimia témbok sél anu ngamungkinkeun tés ieu

Alesan asam-alkohol bisa ngabédakeun sél aya dina lapisan pangbungkus mikobaktéri. Inti strukturna nyaéta kompléks mikolil-arabinogalaktan-peptidoglikan: peptidoglikan nyambung kana arabinogalaktan anu tungtung luarna mawa asam mikolat ranté panjang pisan, ngabentuk mikomémbran luar anu beunghar lipid sarta perméabilitasna kacida handapna. Tinjauan mémbran luar mikobaktéri ngajelaskeun arsitéktur ieu sacara rinci. Panghalang ieu gawé dina dua arah. Éta nolak asupna pewarna, ku sabab éta penetrasi merlukeun panas atawa pewarna primér anu leuwih kuat, sarta nolak kaluarna pewarna, ku sabab éta asam-alkohol teu bisa ngaleungitkeun karbol fuksin sanggeus asup. Baktéri biasa teu boga lapisan ieu sarta kaleungitan pewarnana. Ku kituna, sipat tahan asam leuwih merenah dipahami minangka fénoména panghalang lipid, lain minangka fuksin anu sacara kimia ngabeungkeut kana asam mikolat.

Kimia ieu ogé ngajelaskeun hiji hal anu mindeng matak bingung: mikobaktéri hésé diwarnaan ku métode Gram sarta hasilna teu bisa diprediksi, sakapeung katingali minangka wangun samar kawas runtuyan manik atawa kalangkang anu teu diwarnaan. Témbokna anu hidrofobik ngawatesan penetrasi kristal violét. Pewarnaan tahan asam lain pewarnaan Gram anu dimodifikasi. Ieu prinsip diferénsial anu béda, diwangun dumasar kana sipat témbok sél anu béda, sakumaha anu dipedar pikeun dua métode séjén dina babandingan pewarnaan basajan jeung pewarnaan Gram.

Tilu métode, tilu patalékan

Pikeun kelompok métode baktéri anu ngagunakeun hiji pewarna sacara leuwih lega, tingali atlas pewarnaan mikroskopi.

Naon anu teu bisa dibuktikeun ku beureum dina latar biru

Baktéri wangun batang anu beureum hartina organisme éta nahan karbol fuksin nalika kakeunaan asam-alkohol. Papanggihan éta saluyu jeung Mycobacterium tuberculosis, tapi pituduh diagnostik tuberkulosis CDC sacara écés nyebutkeun yén mikobaktéri séjén ogé tahan asam, ku kituna idéntifikasi spésiés merlukeun kultur jeung tés asam nukléat, lain warna.

Kasalahan téknik utamana aya dina dua tahap pangumbahan. Pelunturan warna anu kurang nyésakeun bahan latar tukang tetep beureum sarta bisa nyababkeun hasil bacaan positif palsu. Pelunturan warna anu kaleuleuwihi ngaleungitkeun pewarna primér anu ditahan sacara lemah sarta nyumbang kana négatif palsu. Pewarna pangimbang anu dipaké kaleuleuwihi nyumputkeun basil anu saeutik dina warna biru. Apusan anu kandel, réagen anu ngendap, jeung cai bilas anu kacemar nambahan artéfak séwang-séwangan.

Sensitivitas diwatesan ku jumlah organisme, sanajan téknikna dilaksanakeun kalayan hadé. Mikroskopi apusan konvénsional merlukeun kira-kira 5,000 nepi ka 10,000 basil per mililiter dahak, sarta tinjauan bukti CDC anu leuwih heubeul netepkeun sensitivitas apusan kira-kira 45 nepi ka 80 persén dina kasus tuberkulosis paru anu dikonfirmasi ku kultur. Ku kituna, apusan négatif henteu kantos ngaluarkeun kamungkinan tuberkulosis. Pituduh CDC ayeuna tetep netepkeun kultur babarengan jeung unggal apusan sarta nyarankeun tés amplifikasi asam nukléat dina sahanteuna hiji spésimén saluran napas nalika tuberkulosis paru keur dipertimbangkeun sarta hasilna bakal ngarobah panatalaksanaan.

Prakték laboratorium kudu nuturkeun protokol anu disahkeun

Pedaran pikeun pangajaran, kaasup artikel ieu, henteu méré wewenang pikeun ngalaksanakeun pagawéan klinis. Pikeun prakték di méja laboratorium, turutan prosedur operasional baku laboratorium anu geus divalidasi sarta saluyu jeung dokumén CDC, APHL, atawa CLSI panganyarna; rujukan pewarnaan tahan asam CDC anu disimpen dina arsip Stacks némbongkeun kumaha prosedur sapertos kitu netepkeun réagen jeung cara maca hasil. Pagawéan anu ngalibetkeun spésimén tuberkulosis merlukeun pangurungan biologis: apusan disiapkeun dina kabinet kaamanan biologis lantaran prosés persiapan ngahasilkeun aérosol jeung cipratan, sarta pituduh kaamanan laboratorium CDC nyebutkeun yén sanajan apusan geus difiksasi ku panas, éta masih bisa ngandung basil tuberkulosis anu hirup sarta kudu tetep ditangani minangka bahan anu kacemar. Éntri CDC Public Health Image Library ngeunaan apusan karbol fuksin jeung métilén biru anu dipariksa pikeun M. leprae mangrupa pangéling anu mangpaat ngeunaan cakupan métode ieu saluareun tuberkulosis: kontras beureum dina biru anu sarua dipaké di mana waé organisme tahan asam ditéangan, sarta hasil bacaan négatif anu taliti ogé mangrupa hasil anu pantes dicatet.

Maca préparat anu geus réngsé

Pewarna pangimbang némbongkeun mangpaatna nalika panyaringan awal. Ahli mikroskopi anu nyeken dina perbesaran rendah mimiti ngagunakeun latar biru pikeun meunteun kualitas apusan: sebaran sél anu rata, sél inang anu gembleng pikeun nangtukeun fokus, sarta henteuna éndapan anu loba. Calon basil anu beureum tuluy narik panon lantaran euweuh bahan séjén dina préparat anu beureum. Konfirmasi dilakukeun dina imérsi minyak, nalika basil sajati némbongkeun wangun batang ipis anu dipiharep, sakapeung rada melengkung atawa kawas runtuyan manik, lain rémah pewarna anu wangunna saragam.

Pewarnaan latar tukang ogé nangtukeun istilah dina laporan. Préparat anu ngandung basil beureum dilaporkeun minangka basil tahan asam katénjo, mindeng dibarengan ku tingkat semikuantitatif dumasar kana skala laboratorium. Préparat anu teu ngandung organisme beureum dilaporkeun minangka euweuh basil tahan asam anu katénjo, lain négatif tuberkulosis. Bédana penting lantaran widang biru ngabuktikeun yén pewarnaan jalan, sél nyerep pewarna pangimbang, sarta optikna nyukupan, bari teu méré informasi ngeunaan organisme anu jumlahna sahandapeun wates deteksi. Widang biru kosong mangrupa hasil anu sah ngeunaan préparat, lain putusan ngeunaan pasién.

Inget babagian tugasna, sarta nyusun laporan bakal leuwih gampang. Karbol fuksin ngadeteksi calon organisme. Asam-alkohol ngalaksanakeun tésna. Métilén biru ngan ngajadikeun jawabanana bisa dibaca: anu beureum nahan pewarna ngalawan asam, anu biru kaleungitan éta pewarna. Sakabéh hal séjén, nyaéta spésiés, jumlah organisme, jeung harti klinisna, ditangtukeun ku pagawéan saluareun préparat.