ලිපිය
නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ සහ රෙටිකියුලෝසයිට් රංජනය: වෙනම සායමක් සහ ජීව සෛල ක්‍රමයක්
ශිෂ්‍යයෙක් රෙටිකියුලෝසයිට් ගණනයක් සඳහා සූදානම් වෙමින් මෙතිලීන් බ්ලූ ඇණවුම් කර, එය රුධිරය සමඟ මිශ්‍ර කරයි. එහෙත් ඔහුට කිසිවක් පාහේ නොපෙනේ. පන්තියේ තවත් ශිෂ්‍යයෙක් නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ ලෙස ලේබල් කළ බෝතලයක් භාවිත කර, රතු රුධිර සෛලවලින් කොටසක් තුළ පැහැදිලි නිල් තන්තු ලබාගනී. පළමු ශිෂ්‍යයා සිතන්නේ දෙවන බෝතලයේ සායම වඩා අලුත් හෝ වඩා සාන්ද්‍ර බවයි. ඒ දෙකෙන් එකක්වත් නොවේ. එහි ඇත්තේ වෙනත් අණුවකි.
මෙම ක්ෂේත්‍රයේ බොහෝ ව්‍යාකූලතා පිටුපස ඇති සංකල්පීය වරද මෙයයි. නමෙන් හැඟෙන්නේ නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ යනු මෙතිලීන් බ්ලූවල වැඩිදියුණු කළ නිෂ්පාදන කාණ්ඩයක් බවයි. රසායන විද්‍යාව පෙන්වන්නේ වෙනත් දෙයකි. නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ N යනු තමන්ටම ආවේණික Colour Index අංකයක්, ආදේශන රටාවක් සහ රුධිරවේදයේ ප්‍රමිතිගත භූමිකාවක් ඇති වෙනම ෆීනොතයසීන් සායමකි. එම වෙනස පැහැදිලි වූ පසු, ක්‍රමයේ ඉතිරි කරුණු — රංජනය කරන විට සෛල ජීවමානව තිබිය යුත්තේ ඇයි, රෙටිකියුලෝසයිට් ලෙස ගණන් ගන්නේ කුමක්ද, හෙයින්ස් දේහවල ස්ථානය කුමක්ද සහ බ්‍රිලියන්ට් ක්‍රෙසිල් බ්ලූ අදාළ වන්නේ කවදාද — සරලව තේරුම්ගත හැකිය.
කෙටි පිළිතුර
රුධිරවේද ප්‍රතික්‍රියාකාරකයක් වන නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ N සාමාන්‍යයෙන් හඳුනාගන්නේ නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ සඳහා වන PubChem වාර්තාවේ Basic Blue 24 ලෙසයි. එහි C.I. අංකය 52030, CAS අංකය 1934-16-3 සහ සූත්‍රය C18H22ClN3S වේ. සාමාන්‍ය මෙතිලීන් බ්ලූ යනු එහි PubChem වාර්තාවේ සඳහන් මෙතිල්තයෝනීනියම් ක්ලෝරයිඩ්, Basic Blue 9 වේ. එහි C.I. අංකය 52015, CAS අංකය 61-73-4 සහ සූත්‍රය C16H18ClN3S වේ. ව්‍යුහය අනුව, නිව් මෙතිලීන් බ්ලූවල වළල්ලට බැඳුණු මෙතිල් කාණ්ඩ දෙකක් සහ එතිල්ඇමිනෝ පැති දාම ඇත; මෙතිලීන් බ්ලූවල එම ස්ථානවල ඇත්තේ ඩයිමෙතිල්ඇමිනෝ කාණ්ඩය. එම වෙනස රංජන හැසිරීම වෙනස් කරයි. රුධිරවේද ග්‍රන්ථ සාමාන්‍ය මෙතිලීන් බ්ලූ සාපේක්ෂව දුර්වල රෙටිකියුලෝසයිට් සායමක් ලෙසත්, නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ වඩා තද සහ ඒකාකාර රංජනයක් ලබාදෙන සායමක් ලෙසත් විස්තර කරයි. මෙම සැසඳීම නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ පිළිබඳ ScienceDirect මාතෘකාවේ සාරාංශ කර ඇත.
ඔව්, නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ යනු සුප්‍රාවයිටල් සායමකි. සුප්‍රාවයිටල් රංජන මූලධර්ම පිළිබඳ NCBI සමාලෝචනයේ දක්වා ඇති අර්ථ දැක්වීම අනුව, සුප්‍රාවයිටල් රංජනය යනු සිරුරෙන් ඉවත් කළ ජීව සෛල සවි කිරීමට පෙර රංජනය කිරීමයි. නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ සහ බ්‍රිලියන්ට් ක්‍රෙසිල් බ්ලූ යන දෙකම මෙම කාණ්ඩයට අයත් වන අතර, CLSI රෙටිකියුලෝසයිට් ප්‍රමිතිය නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ සුප්‍රාවයිටල් සායමක් ලෙස පැහැදිලිවම ආවරණය කරයි. ශිෂ්‍යයන් ඇතැම්විට මෙය සවි කළ ආලේපවල රොමානොව්ස්කි රංජනය සමඟ එකම කාණ්ඩයට දමයි. එම සිතුවිලි රාමුව මෙහිදී වැරදියි. මුලින් සවි කළහොත් ක්‍රමය ක්‍රියා නොකරයි.
සමාන සායම් නම් පිළිබඳ සොයන පාඨකයන් සඳහා, මෙතිල් බ්ලූ සහ මෙතිලීන් බ්ලූ අතර වෙනස යන ලිපිය, ඍණ අයනික ට්‍රයිඇරිල්මෙතේන් සායමක් සහ ධන අයනික ෆීනොතයසීන් පවුල අතර ඇති වෙනත්, වඩා පුළුල් ව්‍යාකූලතාවක් ආවරණය කරයි. රසායනාගාර රංජනය පිළිබඳ දළ විශ්ලේෂණය සවි කළ ආලේප ක්‍රම සමඟ සුප්‍රාවයිටල් ක්‍රමයද ස්ථානගත කරන අතර, රුධිර සෛල රූපවිද්‍යා මාර්ගෝපදේශය පුළුල් විභේදක සෛල ගණනය තුළ රෙටිකියුලෝසයිට් ඇගයීමේ ස්ථානය පෙන්වයි.
| ප්‍රතික්‍රියාකාරකය | අනන්‍යතාව | C.I. / CAS | රෙටිකියුලෝසයිට් කාර්යයේ භූමිකාව |
|---|---|---|---|
| නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ N | එතිල්ඇමිනෝ කාණ්ඩ සහ වළල්ලේ මෙතිල් කාණ්ඩ දෙකක් ඇති ෆීනොතයසීන් | C.I. 52030 (Basic Blue 24); ක්ලෝරයිඩ් සඳහා CAS 1934-16-3 | ප්‍රමිතිගත අතින් සිදුකරන සුප්‍රාවයිටල් රංජනය; වඩාත් කැමති සැසඳුම් ක්‍රමය |
| සාමාන්‍ය මෙතිලීන් බ්ලූ | බිස්(ඩයිමෙතිල්ඇමිනෝ) ෆීනොතයසීන් (මෙතිල්තයෝනීනියම් ක්ලෝරයිඩ්) | C.I. 52015 (Basic Blue 9); CAS 61-73-4 | දුර්වල රෙටිකියුලෝසයිට් සායමක්; ආදේශකයක් නොවේ |
| බ්‍රිලියන්ට් ක්‍රෙසිල් බ්ලූ | ඔක්සසීන් සායමක්; සැපයුම්කරු අනුව සංයුතිය වෙනස් වේ | C.I. 51010; ලවණ ආකාරය අනුව CAS 81029-05-2 හෝ 10127-36-3 | පිළිගත හැකි සුප්‍රාවයිටල් සායමක්; ඒකාකාර බව අඩුය; සමගි කළ ප්‍රමිතියෙහි සැසඳුම් ක්‍රමය නොවේ |
නාමාවලි පිළිබඳ එක් අවවාදයක්: නිව් මෙතිලීන් බ්ලූවල වෙනම සින්ක් ක්ලෝරයිඩ් ද්විත්ව ලවණ ආකාරයක් CAS 6586-05-6 යටතේ පවතී. එබැවින් ක්‍රම විස්තර කරන කොටසක පොදු නම පමණක් නොව, ලවණ ආකාරය සහ සැපයුම්කරුද සඳහන් කළ යුතුය.
සුප්‍රාවයිටල් රංජනය සැබවින්ම කරන්නේ කුමක්ද?
රෙටිකියුලෝසයිට් යනු න්‍යෂ්ටිය අහිමි වී තිබුණත් ඉතිරි රයිබොසෝමීය RNA රඳවාගෙන සිටින තරුණ රතු රුධිර සෛලයකි. රංජනය නොකළ තෙත් සූදානමක එම RNA නොපෙනේ. සුප්‍රාවයිටල් සායම ජීව සෛලයට ඇතුළු වී, එම RNA නිල් කැටිති සහ තන්තු බවට අවක්ෂේප කරයි හෝ එකතු කරයි. තෙල් ගිල්වුම් නිරීක්ෂණයේදී පෙනෙන ජාලාකාර තන්තුමය ද්‍රව්‍යය එයයි. එබැවින් එම ජාලය රංජනයේ ප්‍රතිඵලයක් මිස, වර්ණ ගැන්වීමට බලා සිටින පෙර සිටම සෑදුණු සැකිල්ලක් නොවේ. ක්‍රියාපටිපාටියේ විචල්‍යයන් — සායම් සාන්ද්‍රණය, ස්වාරක්ෂක ද්‍රාවණය, රුධිරය හා සායම අතර අනුපාතය, උෂ්ණත්වය සහ කාලය — සායමේ නම තරම්ම වැදගත් වන්නේ මේ නිසාය.
ප්‍රායෝගිකව මෙයින් අදහස් වන්නේ පියවර දැඩි අනුපිළිවෙළකට කළ යුතු බවයි: මුලින් කැටිගැසීම වළක්වා ඇති රුධිරය සායම සමඟ මිශ්‍ර කර, නියමිත කාලයක් තබා, ඉන්පසු ආලේප සකස් කර ඒවා සවි නොකර සහ ප්‍රතිරංජනය නොකර පරීක්ෂා කරන්න. රංජනයට පෙර සවි කිරීම හෝ මඳ පැහැති තන්තු සඟවන ප්‍රතිරංජනයක් භාවිත කිරීම, ගණනයට අවශ්‍ය තොරතුරු විනාශ කරයි.
නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ සමඟ රෙටිකියුලෝසයිට් සඳහා ප්‍රායෝගික ක්‍රියාපටිපාටියක්
සෑම තැනකටම පොදු එකම සංයුතියක් නොමැති බැවින්, භාවිත කළ සංයුතිය වාර්තා කරන්න. ලේඛනගත වෙනස් ක්‍රම තුනක් එහි පරාසය පෙන්වයි.
සාම්ප්‍රදායික Brecher වර්ගයේ ක්‍රියාපටිපාටිය ආසන්න වශයෙන් සියයට 0.5 නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ සහ පොටෑසියම් ඔක්සලේට් භාවිත කරයි. එය හොඳින් මිශ්‍ර කළ EDTA රුධිරය සමඟ සමාන පරිමාණවලින් මිශ්‍ර කර, කාමර උෂ්ණත්වයේ මිනිත්තු 10 සිට 15 පමණ තබයි. මෘදුව නැවත මිශ්‍ර කිරීමෙන් පසු, තුනී කූඤ්ඤ හැඩැති ආලේප සකස් කර, වාතයේ වියළා, සවි නොකර 100x තෙල් ගිල්වුම් වස්තු කාචයෙන් පරීක්ෂා කරයි. රෙටිකියුලෝසයිට් ගණනය සඳහා වන NCBI ක්‍රියාපටිපාටිය මෙම කාර්ය ප්‍රවාහය සහ ඒ සමඟ භාවිත කරන ගණන් කිරීමේ රාමුව විස්තර කරයි.
Dacie සහ Lewis ක්‍රම ප්‍රභේදය සයිට්‍රේට් සේලයින්වල සියයට 1.0 නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ භාවිත කරයි. එය රුධිරයේ පරිමාණ 2 සිට 4 සමඟ මිශ්‍ර කර, ආලේප සකස් කිරීමට පෙර 37 C උෂ්ණත්වයේ මිනිත්තු 15 සිට 20 තබයි. CLSI H44 ක්‍රියාපටිපාටිය සමගි කිරීම සඳහා මෑතකදී සිදු කළ ක්‍රියාත්මක කිරීමකදී, pH 7.4 සහිත පොස්ෆේට් ස්වාරක්ෂිත සේලයින්වල වඩා අඩු සාන්ද්‍රණයක සියයට 0.1 ද්‍රාවණයක් භාවිත කර, 20 C උෂ්ණත්වයේ මිනිත්තු 10 තබා, සවි කිරීමකින් තොරව පරීක්ෂා කර ඇත. මෙය 2026 NMB සමගිකරණ අධ්‍යයනයේ වාර්තා කර ඇත.
ගණන් කිරීමේ නීති මෙම ප්‍රභේද සියල්ලටම පොදුය. සෛලයක අවම වශයෙන් වෙන්ව හඳුනාගත හැකි නිල් පැහැයෙන් රංජනය වූ කැටිති දෙකක් හෝ තන්තු කොටස් දෙකක් තිබේ නම්, එය රෙටිකියුලෝසයිට් ලෙස ගණන් කරන්න. මෙයින් තනිව පවතින සායම් තැන්පතුවක් ගණනයෙන් බැහැර කෙරේ. සාමාන්‍ය කාර්යයේදී අවම වශයෙන් රතු රුධිර සෛල 1,000 ක් ගණන් කර, රෙටිකියුලෝසයිට් ප්‍රතිශතයක් ලෙස වාර්තා කරන්න. ප්‍රතිශතය අඩු විට, සංඛ්‍යානමය අවශ්‍යතාව අනුව වැඩි සෛල ගණනක් ගණන් කළ යුතුය. CLSI H44 ක්‍රමවේදය පිළිබඳ සමාලෝචනයක සඳහන් වන්නේ, රෙටිකියුලෝසයිට් සියයට 1 පමණ වන විට ගණන් කිරීමේ විචලනය සියයට 5 දක්වා අඩු කිරීමට සෛල 4,400 පමණ අවශ්‍ය බවයි. මෙය De Gruyter හි CLSI H44 සමාලෝචනයේ දක්වා ඇත. Miller නේත්‍ර කාච තැටියක් විශාල ගණනයන් ප්‍රායෝගික කරයි. අවක්ෂේප කැටිතිමය අන්තර්ගතයන් මෙන් පෙනෙන බැවින්, සායම පෙරාගන්න හෝ අලුතින් සකස් කරන්න.
එකම සූදානමේ හෙයින්ස් දේහ
එම සුප්‍රාවයිටල් ආලේපයෙන්ම හෙයින්ස් දේහද පෙන්විය හැකිය. ඒවා ඉතිරි RNA නොව, ඔක්සිකරණය වූ සහ ස්වාභාවික ව්‍යුහය වෙනස් වූ හිමොග්ලොබින් එකතු වී සෑදුණු දේහ වේ. නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ සූදානම්වල ඒවා වටකුරු දේහ ලෙස පෙනේ; බොහෝවිට තනිව සහ සෛල පටලය අසල පවතින අතර, ජාලාකාර තන්තුමය ද්‍රව්‍යයට වඩා ලා නිල් පැහැයකින් රංජනය වේ. සවි කිරීම සහ ප්‍රතිරංජනය හරහා ඒවා හොඳින් රැඳී නොපවතින බැවින්, සවි නොකළ ආලේපය පරීක්ෂා කරන්න. EDTA රුධිරය මයික්‍රොලීටර් 20 ක් සමඟ සියයට 1 නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ මයික්‍රොලීටර් 20 ක් මිශ්‍ර කර මිනිත්තු 15 ක් තැබූ මෑත ක්‍රියාපටිපාටියකදී, රතු රුධිර සෛල 250 ක් අතර හෙයින්ස් දේහ සහිත සෛල ගණනය කර ඇත. මෙය එම ක්‍රියාපටිපාටිය වාර්තා කරන PMC අධ්‍යයනයේ දක්වා ඇත.
වෙනස්කම් දෙකක් වැරදි අර්ථකථන වළක්වයි. පළමුව, හෙයින්ස් දේහ පිළිබඳ ScienceDirect මාතෘකාවේ සඳහන් පරිදි, මෙතිල් වයලට් සහ ක්‍රිස්ටල් වයලට් නිව් මෙතිලීන් බ්ලූවලට වඩා තදින් හෙයින්ස් දේහ රංජනය කරයි. රෙටිකියුලෝසයිට් සහ හෙයින්ස් දේහ එකට ඇගයීමේදී නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ පහසු තේරීමක් වුවත්, හෙයින්ස් දේහ සඳහාම වෙන් වූ වඩාත් ප්‍රබල සායම එය නොවේ. දෙවනුව, ඇල්ෆා තැලසීමියා ලක්ෂණයේ HbH අන්තර්ගතයන් සුප්‍රාවයිටල් රංජනයෙන් පසු සෛලය පුරා සියුම් තිත් රාශියක් ලෙස පෙනෙන අතර, සාම්ප්‍රදායික හෙයින්ස් දේහ ගණනින් අඩු, ප්‍රමාණයෙන් විශාල සහ බොහෝවිට සෛල පටලයට සම්බන්ධ වේ. තුන්වන සමාන පෙනුමක් ඇති දෙය සායම් තැන්පතුවයි: එය සෛලවල නාභිගත තලයෙන් පිටත පිහිටන අතර, දෘශ්‍ය ක්ෂේත්‍ර අතර වෙනස් වේ.
බ්‍රිලියන්ට් ක්‍රෙසිල් බ්ලූ සහ නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ අතර සැසඳීම
සායම් දෙකම රෙටිකියුලෝසයිට් සඳහා සුප්‍රාවයිටල් සායම් වුවත්, ප්‍රමිතිකරණයේදී ඉන් එකකට ප්‍රමුඛත්වය ලැබේ. රුධිරවේද ප්‍රමිතිකරණය සඳහා වූ ජාත්‍යන්තර සභාව සමඟ ඒකාබද්ධව සකස් කර, CLSI H44 ප්‍රමිති පිටුවේ ලැයිස්තුගත කර ඇති CLSI H44-A2 රෙටිකියුලෝසයිට් ක්‍රමය, EDTA රුධිරය නිව් මෙතිලීන් බ්ලූවලින් රංජනය කිරීම අතින් සිදුකරන සැසඳුම් ක්‍රමය ලෙස නම් කරයි. පෙනුම පිළිබඳ සාම්ප්‍රදායික රුධිරවේද ඉගැන්වීම්ද ඊට එකඟය: නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ වඩා තද සහ ඒකාකාර තන්තු රංජනයක් ලබාදෙන අතර, බ්‍රිලියන්ට් ක්‍රෙසිල් බ්ලූ නිෂ්පාදන කාණ්ඩ සහ නියැදි අතර වැඩි වෙනස්කම් දක්වයි.
එම තත්ත්වය සඳහන් කරන විට සීමාවක්ද දැක්විය යුතුය. ICSH විශ්ලේෂක ඇගයීම් මාර්ගෝපදේශය අතින් සිදුකරන නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ අන්වීක්ෂ පරීක්ෂාව යොමු සැසඳුම් ප්‍රවේශයක් ලෙස පිළිගන්නා නමුත්, එය නිරීක්ෂකයාගේ විනිශ්චය මත රඳා පවතින සහ සාපේක්ෂව අඩු නිරවද්‍යතාවක් ඇති ක්‍රමයක් ලෙස හඳුන්වයි. ප්‍රවාහ සෛලමිතික යොමු ක්‍රියාපටිපාටි තිබේ නම් ඒවාට ප්‍රමුඛත්වය දෙයි. නියැදි 100 ක් යොදාගත් 2022 සැසඳීමකදී, එහි විශ්ලේෂකය සමඟ සැසඳූ විට නිව් මෙතිලීන් බ්ලූවලට වඩා බ්‍රිලියන්ට් ක්‍රෙසිල් බ්ලූ අඩු ක්‍රමානුකූල අපගමනයක් පෙන්වා ඇත. මෙය රංජන ක්‍රම පිළිබඳ PMC සැසඳීමේ වාර්තා කර ඇත. ශිෂ්‍යයන් සඳහා සාධාරණව තහවුරු කළ හැකි සාරාංශය මෙයයි: නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ ප්‍රමිතිගත අතින් සිදුකරන සැසඳුම් ක්‍රමය ලෙස භාවිත කරන්න; ඕනෑම දේශීය බ්‍රිලියන්ට් ක්‍රෙසිල් බ්ලූ ක්‍රමයක් එයට හෝ ස්වයංක්‍රීය ක්‍රමයකට සාපේක්ෂව තහවුරු කරන්න; කුමන සායම භාවිත කළත් අතින් සිදුකරන අන්වීක්ෂ පරීක්ෂාවෙන් ප්‍රතිඵලවල වැඩි විසිරීමක් බලාපොරොත්තු වන්න. වාණිජ සායම් කාණ්ඩ අතර වෙනස්කම් තිබූ නිසා, පැරණි ප්‍රමිතිකරණ සාහිත්‍යය රසායනිකව වඩා පිරිසිදු විකල්පයක් ලෙස පිරිසිදු කළ Azure B භාවිතයද යෝජනා කළේය. එය Azure B පිළිබඳ Marshall අධ්‍යයනයේ සඳහන් වන අතර, ක්‍රම පිළිබඳ සාකච්ඡාවල ප්‍රතික්‍රියාකාරක ශ්‍රේණිය තවමත් සඳහන් වන්නේ ඇයිද යන්න පැහැදිලි කරයි.
පොදු වැරදි වළක්වා ගැනීම
අසාර්ථක සූදානම් බොහොමයකට හේතුව වැරදි හතරකි. නිව් මෙතිලීන් බ්ලූ N වෙනුවට සාමාන්‍ය මෙතිලීන් බ්ලූ ඇණවුම් කිරීමෙන් දුර්වල රංජනයක් ඇති වන්නේ තාක්ෂණික ක්‍රමය නිසා නොව රසායනික වෙනස නිසාය. නිරීක්ෂණයට පෙර සවි කිරීම හෝ ප්‍රතිරංජනය කිරීම සුප්‍රාවයිටල් සංඥාව ඉවත් කරයි. සායම් අවක්ෂේපය කැටිති ලෙස ගණන් කිරීම ප්‍රතිඵලය වැඩි කරයි; කැටිති දෙකේ නීතිය සහ පෙරූ සායම එය වළක්වයි. රෙටිකියුලෝසයිට් ප්‍රතිශතය අඩු විට ඉතා අඩු සෛල ගණනක් ගණන් කිරීමෙන්, නිරවද්‍ය ලෙස පෙනෙන නමුත් පුළුල් විශ්වාස සීමා සහිත අගයක් ලැබේ. සෑම වරදකම එකම රටාවක් ඇත: ප්‍රතික්‍රියාකාරක පියවරෙන් තීරණය වූ ප්‍රතිඵලයකට අන්වීක්ෂ නිරීක්ෂකයා අන්වීක්ෂයට දොස් පවරයි.