ලිපිය
මෙතිලීන් බ්ලූ අම්ල-ප්‍රතිරෝධී වර්ණගැන්වීමේ ප්‍රතිවර්ණකයක් ලෙස භාවිත කරන්නේ ඇයි
කාර්මික නිලධාරියෙක් සම්පූර්ණ වර්ණගැන්වීමේ අනුක්‍රමයෙන් පසු සෙම තැවරුමක් පරීක්ෂා කරයි. නිල් දර්ශන ක්ෂේත්‍රය මත රතු දණ්ඩාකාර බැක්ටීරියා පැහැදිලිව කැපී පෙනෙන අතර, අම්ල-ප්‍රතිරෝධී බැසිල දැකගත හැකි බවට වාර්තාව නිකුත් කෙරේ. ඊළඟ දිනයේ වෙනත් ස්ලයිඩයක රතු දණ්ඩාකාර බැක්ටීරියා නොමැති ඒකාකාර නිල් දර්ශන ක්ෂේත්‍රයක් පෙනෙන අතර, එය ක්ෂය රෝගය සඳහා ඍණාත්මක බවට වාර්තා කෙරේ. මේ වාර්තා දෙකෙන් එකක් ස්ලයිඩයෙන් සාධාරණීකරණය කළ හැකි දේ ඉක්මවා යයි. එය පළමු වාර්තාව නොවේ.
ව්‍යාකූලතාව ඇත්තේ සංකල්පය තුළය. මෙතිලීන් බ්ලූ මයිකොබැක්ටීරියා සොයාගැනීමට උපකාරී වනවාක් මෙන්, කාර්මික නිලධාරියා නිල් වර්ණකය හඳුනාගැනීමේ රසායනික ක්‍රියාවලියේ කොටසක් ලෙස සැලකුවේය. එය එසේ නොවේ. මෙතිලීන් බ්ලූ ස්ලයිඩයට යොදන විට පරීක්ෂණය දැනටමත් අවසන්ය. වර්ණකය කරන්නේ ප්‍රතිඵලය කියවිය හැකි වන පරිදි පසුබිම වර්ණගැන්වීම පමණි. මෙම ලිපිය අම්ල-ප්‍රතිරෝධී වර්ණගැන්වීමේදී මෙතිලීන් බ්ලූහි අරමුණ, වෙනත් වර්ණයක් වෙනුවට නිල් භාවිත කරන්නේ ඇයි යන්න සහ නිල් පසුබිමක රතු පැහැය පෙනීමෙන් ඔබට ගත හැකි නිගමන පැහැදිලි කරයි.
කෙටි පිළිතුර
අම්ල-ප්‍රතිරෝධී වර්ණගැන්වීම යනු අදහස් තුනක් මත ගොඩනැගුණු විභේදක පරීක්ෂණයකි. ප්‍රාථමික වර්ණකය වන කාබොල් ෆුක්සින්, ඉටිමය ආවරණයක් ඇති මයිකොබැක්ටීරියා ඇතුළුව සෑම සෛලයකටම බලෙන් ඇතුළු කරනු ලැබේ. අවර්ණකාරකය වන අම්ල-ඇල්කොහොල් සාමාන්‍ය සෛලවලින් රතු වර්ණකය ඉවත් කරන නමුත් අම්ල-ප්‍රතිරෝධී සෛලවලින් එය නිස්සාරණය කිරීමට අසමත් වේ. ඉන්පසු ප්‍රතිවර්ණකය වන මෙතිලීන් බ්ලූ, අවර්ණකාරකය මඟින් වර්ණය ඉවත් කළ සියල්ල වර්ණගන්වයි. එබැවින් අම්ල-ප්‍රතිරෝධී නොවන සෛල, ධාරක සෛල සහ සුන්බුන් නිල් පැහැයෙන් පෙනෙන අතර අම්ල-ප්‍රතිරෝධී බැසිල රතු පැහැයෙන් පවතී. ප්‍රතිවර්ණකය වර්ණ වෙනස සපයයි. සෛලයක් අම්ල-ප්‍රතිරෝධී බවට පත් කරන රසායනික ලක්ෂණයට එහි කිසිදු දායකත්වයක් නැත.
එක් එක් පියවරේ කාර්යය
පහත රූපසටහන කාර්යයන් බෙදී ඇති ආකාරය පෙන්වයි. එය ක්‍රියාපටිපාටියක් ලෙස වමේ සිට දකුණට කියවන්න. එක් එක් වර්ණගැන්වීමේ ක්‍රම කාණ්ඩය වෙනස් ප්‍රශ්නයකට පිළිතුරු සොයන බව සිහිපත් කරගැනීමට පහළ තීරුව කියවන්න.
පළමුව සිදුවන්නේ විනිවිද යාමයි. මයිකොබැක්ටීරියාවල ආවරණය අසාමාන්‍ය ලෙස ජලභීතික බැවින් ඒවා සාමාන්‍ය ජලීය වර්ණක ඇතුළු වීමට ප්‍රතිරෝධය දක්වයි. එබැවින් ක්‍රියාපටිපාටිය වර්ණකය බලෙන් ඇතුළු කරයි. Ziehl-Neelsen ක්‍රමයේදී, වාෂ්ප නැඟෙන තෙක් රත් කිරීමෙන් ෆීනෝල් අඩංගු කාබොල් ෆුක්සින් ඉටිමය බිත්තිය හරහා ඇතුළු කරයි. Kinyoun ශීත ක්‍රමයේදී තාපය වෙනුවට වඩාත් ප්‍රබල ප්‍රාථමික වර්ණක සංයුතියක් භාවිත කෙරෙන අතර, සමහර සංශෝධිත තාපය රහිත ක්‍රමවලට පෘෂ්ඨ සක්‍රියකාරකද එක් කරයි. ඇමරිකානු ක්ෂුද්‍රජීව විද්‍යා සංගමයේ අම්ල-ප්‍රතිරෝධී වර්ණගැන්වීමේ ක්‍රියාපටිපාටි මෙම සංයුති දෙක එකිනෙකට සසඳා දක්වයි. සාන්ද්‍රණ වෙනස කැපී පෙනේ: රත් කරන ක්‍රමයට 100 mL සඳහා මූලික ෆුක්සින් දළ වශයෙන් 0.3 g වන අතර ශීත ක්‍රමයට එය 4 g පමණ වේ.
දෙවනුව සිදුවන්නේ විභේදනයයි. සාමාන්‍යයෙන් සියයට 95 එතනෝල් 97 mL තුළ සාන්ද්‍ර හයිඩ්‍රොක්ලෝරික් අම්ලය 3 mL අඩංගු අම්ල-ඇල්කොහොල්, විශේෂ ප්‍රතිරෝධයක් නොදක්වන බිත්ති ඇති සෑම සෛලයකින්ම රතු වර්ණකය සෝදා ඉවත් කරයි. නොබිඳුණු මයිකොබැක්ටීරියා ලිපිඩ ආවරණය ඇති සෛල වර්ණකය රඳවාගනී. සමස්ත ක්‍රමය රඳා පවතින්නේ මෙම පියවර මත වන අතර, පහත සාකච්ඡා කරන පරිදි ක්‍රියාත්මක කරන ආකාරයේ වෙනස්කම්වලට වඩාත් සංවේදී පියවරද මෙයයි.
අවසානයේ ඇති කරන්නේ වර්ණ වෙනසයි. දැන් ස්ලයිඩයේ ඇත්තේ වර්ණකය ඉවත් වූ සෛලවලින් සැදුණු, පාහේ අවර්ණ පසුබිමක් මත රතු අම්ල-ප්‍රතිරෝධී සෛලය. සියයට 0.3 w/v මෙතිලීන් බ්ලූ, රතු පැහැයට උපරිම ලෙස වෙනස් වර්ණයකින් එම පසුබිම නැවත දෘශ්‍යමාන කරයි. ප්‍රතිවර්ණගැන්වීම කෙටි වේ: රත් කරන ක්‍රමයේදී සාමාන්‍යයෙන් තත්පර 20 සිට 30 දක්වාද, ඇතැම් ශීත ක්‍රම ප්‍රභේදවලදී මිනිත්තු කිහිපයක් දක්වාද වේ. කාලය තීරණය වන්නේ ක්‍රියාපටිපාටිය අනුව මිස වර්ණකයේම ගුණයක් අනුව නොවේ.
මේ වර්ණකය තෝරාගන්නේ ඇයි, නිල් වන්නේ ඇයි
මෙතිලීන් බ්ලූ යනු කැටායනික මූලික වර්ණකයකි. එනම් එහි වර්ණවත් අයනය ධන ආරෝපණයක් දරන අතර, අවර්ණ කළ බැක්ටීරියා, ධාරක සෛල සහ සුන්බුන්වල ඍණ ආරෝපිත පෘෂ්ඨවලට බැඳේ. OpenStax ක්ෂුද්‍රජීව විද්‍යා පාඨය මෙම ආරෝපණ සම්බන්ධ තර්කය මූලික වර්ණකවලට පොදු මූලධර්මය ලෙස විස්තර කරයි. එහෙත් මෙහිදී මෙතිලීන් බ්ලූ රසායනික වශයෙන් සුවිශේෂී නොවේ. ක්‍රිස්ටල් වයලට් සහ සැෆ්‍රනින්ද මූලික වර්ණක වේ. තෝරාගැනීම දෘශ්‍යමය එකක් මිස රසායනික එකක් නොවේ.
රතු දණ්ඩාකාර බැක්ටීරියාවලට ඊට වෙනස් වර්ණයක පසුබිමක් අවශ්‍ය වන අතර, දීප්ත-ක්ෂේත්‍ර අන්වීක්ෂණය සඳහා වඩාත් ප්‍රයෝජනවත් ලෙස නිල් පැහැය රතු පැහැයට ප්‍රතිවිරුද්ධ වේ. සැෆ්‍රනින් සුදුසු ප්‍රතිවර්ණකයක් නොවන්නේ එහි අවසාන රෝස-රතු පැහැය රඳවාගත් කාබොල් ෆුක්සින් පැහැයට ඉතා සමීප බැවිනි. එවිට ක්‍රියාපටිපාටියෙන් ඇති කළ වෙනසම නැති වී යයි. ක්‍රිස්ටල් වයලට් අඳුරු දම් පැහැති පසුබිමක් ලබා දෙන අතර එය සිහින් රතු බැසිල සමඟ අවධානය සඳහා තරග කරයි. මෙහි කාර්යය රසායනික ක්‍රියාවක් නොව වර්ණ වෙනස සැපයීම බවට ප්‍රබලතම සාක්ෂිය වන්නේ ආදේශ කිරීමයි: මැලකයිට් ග්‍රීන් සහ බ්‍රිලියන්ට් ග්‍රීන් වැනි හරිත ප්‍රතිවර්ණක සමහර පශු වෛද්‍ය සහ සංශෝධිත ක්‍රියාපටිපාටිවල භාවිත කළද පරීක්ෂණය තවමත් ක්‍රියා කරයි. ඊට හේතුව පැහැදිලිව වෙනස් ඕනෑම වර්ණයක් එකම කාර්යය ඉටු කිරීමයි.
මෙයින් ප්‍රායෝගික නිගමන දෙකක් ලැබේ. පළමුව, සම්මත වට්ටෝරුවේ pH සකස් කිරීමක් නියම කර නැත. මෙම සරල සියයට 0.3 ජලීය ද්‍රාවණය, වෙනත් වර්ණගැන්වීමේ සංකල්පයකට අයත් Loefflerගේ මෙතිලීන් බ්ලූ වැනි ක්ෂාරීය සංයුති සමඟ පටලවා නොගන්න. දෙවනුව, අධික ලෙස යෙදීම අහිතකරය. අධික ඝනත්වයකින් යුත් නිල් පසුබිමකින් ඉතා සුළු බැසිල සංඛ්‍යාවක් වැසී යා හැකි බව පටක විද්‍යා සාහිත්‍යය විශේෂයෙන් අනතුරු අඟවයි. එබැවින් ක්‍රියාපටිපාටියෙන් අවසර දෙන කාලයට වඩා වැඩි කාලයක් ස්ලයිඩය වර්ණකයෙන් ආවරණය කර තැබීමෙන්, කිසිදු ප්‍රතිලාභයක් නොමැතිව කියවීමේ හැකියාව අහිමි වේ.
පරීක්ෂණය කළ හැකි කරවන බිත්ති රසායනය
අම්ල-ඇල්කොහොල් මඟින් මෙම වෙනස හඳුනාගත හැකි වීමට හේතුව මයිකොබැක්ටීරියා ආවරණය තුළ ඇත. එහි ව්‍යුහාත්මක හරය මයිකොලිල්-ඇරබිනෝගැලැක්ටන්-පෙප්ටිඩොග්ලයිකෑන් සංකීර්ණයයි: ඇරබිනෝගැලැක්ටන් සමඟ සම්බන්ධ වූ පෙප්ටිඩොග්ලයිකෑන් සහ එම ඇරබිනෝගැලැක්ටන්හි පිටත අගවලට සම්බන්ධ ඉතා දිගු දාම සහිත මයිකොලික් අම්ල එයට අයත් වේ. එමඟින් අසාමාන්‍ය ලෙස අඩු පාරගම්‍යතාවක් ඇති, ලිපිඩ බහුල පිටත මයිකොපටලයක් සෑදේ. මයිකොබැක්ටීරියා පිටත පටලය පිළිබඳ සමාලෝචනය මෙම සැකැස්ම විස්තර කරයි. මෙම බාධකය දෙදිශාවටම ක්‍රියා කරයි. එය වර්ණකය ඇතුළු වීමට ප්‍රතිරෝධය දක්වන බැවින් විනිවිද යාමට තාපය හෝ වඩා ප්‍රබල ප්‍රාථමික වර්ණකයක් අවශ්‍ය වේ. එය වර්ණකය නිස්සාරණය කිරීමටද ප්‍රතිරෝධය දක්වන බැවින් කාබොල් ෆුක්සින් ඇතුළට ගිය පසු අම්ල-ඇල්කොහොල් එය ඉවත් කිරීමට අසමත් වේ. සාමාන්‍ය බැක්ටීරියාවල මෙම ආවරණය නොමැති නිසා ඒවායේ වර්ණකය ඉවත් වේ. එබැවින් අම්ල-ප්‍රතිරෝධීතාව වඩාත් හොඳින් තේරුම්ගත හැක්කේ ලිපිඩ බාධකයක් නිසා ඇතිවන සංසිද්ධියක් ලෙස මිස ෆුක්සින් මයිකොලික් අම්ලයට රසායනිකව බැඳීමක් ලෙස නොවේ.
මෙම රසායනය පොදු ප්‍රහේලිකාවක්ද පැහැදිලි කරයි: ග්‍රෑම් ක්‍රමයෙන් මයිකොබැක්ටීරියා දුර්වලව සහ අස්ථිර ලෙස වර්ණගැන්වෙන අතර, සමහර විට ඒවා ලා පැහැති පබළු වැනි ස්වරූප හෝ වර්ණ නොගත් ඡායාකාර රූප ලෙස පෙනේ. ඒවායේ ජලභීතික බිත්තිය ක්‍රිස්ටල් වයලට් විනිවිද යාම සීමා කරයි. අම්ල-ප්‍රතිරෝධී වර්ණගැන්වීම සංශෝධිත ග්‍රෑම් වර්ණගැන්වීමක් නොවේ. එය වෙනත් බිත්ති ගුණයක් මත ගොඩනැගුණු වෙනස් විභේදක මූලධර්මයකි. අනෙක් ක්‍රම දෙක පිළිබඳ සරල වර්ණගැන්වීම සහ ග්‍රෑම් වර්ණගැන්වීම අතර සංසන්දනය මෙය පැහැදිලි කරයි.
ක්‍රම තුනක්, ප්‍රශ්න තුනක්
| ක්‍රමය | සිදු කරන පරීක්ෂණය | ධනාත්මක අවසාන ලක්ෂණය | ප්‍රතිඵලයෙන් තහවුරු වන්නේ කුමක්ද |
|---|---|---|---|
| සරල වර්ණගැන්වීම (උදා. මෙතිලීන් බ්ලූ පමණක්) | කිසිවක් නැත; එක් වර්ණකයක් සියලු සෛල වර්ණගන්වයි | නිශ්චිත හැඩයක නිල් සෛල | රූපවිද්‍යාව පමණි: හැඩය සහ සැකැස්ම; වර්ගීකරණයක් නැත |
| ග්‍රෑම් වර්ණගැන්වීම | ක්‍රිස්ටල් වයලට් අයඩීන් සංකීර්ණය ඇල්කොහොල් හෝ ඇසිටෝන් මඟින් ඉවත් කිරීමට ලක් කිරීම | දම් (ධනාත්මක) හා රෝස (ඍණාත්මක) | ද්‍රාවක නිස්සාරණයට ලක් වූ විට ආවරණයේ හැසිරීම; බිත්ති වර්ග දෙකකට වර්ගීකරණය |
| අම්ල-ප්‍රතිරෝධී වර්ණගැන්වීම | ඉටිමය බිත්ති තුළට බලෙන් ඇතුළු කළ කාබොල් ෆුක්සින් අම්ල-ඇල්කොහොල් මඟින් ඉවත් කිරීමට ලක් කිරීම | රතු (අම්ල-ප්‍රතිරෝධී) හා නිල් (අම්ල-ප්‍රතිරෝධී නොවන) | අම්ල-ඇල්කොහොල් හමුවේ වර්ණකය රඳවාගැනීම; මයිකොබැක්ටීරියා සමඟ ගැළපෙන නමුත් විශේෂය හඳුනාගැනීමක් නොවන අම්ල-ප්‍රතිරෝධීතාව |
එක් වර්ණකයක් භාවිත කරන බැක්ටීරියා වර්ණගැන්වීමේ ක්‍රමවල පුළුල් කාණ්ඩය සඳහා අන්වීක්ෂ වර්ණගැන්වීම් සිතියම් සංග්‍රහය බලන්න.
නිල් පසුබිමක රතු පැහැයෙන් තහවුරු කළ නොහැකි දේ
රතු දණ්ඩාකාර බැක්ටීරියා පෙනීමෙන් අදහස් වන්නේ එම ජීවීන් අම්ල-ඇල්කොහොල් යෙදීමෙන් පසුවත් කාබොල් ෆුක්සින් රඳවාගත් බවයි. එම සොයාගැනීම Mycobacterium tuberculosis සමඟ ගැළපෙන නමුත්, වෙනත් මයිකොබැක්ටීරියාද අම්ල-ප්‍රතිරෝධී බව CDC ක්ෂය රෝග විනිශ්චය මාර්ගෝපදේශ පැහැදිලිව සඳහන් කරයි. එබැවින් විශේෂය හඳුනාගැනීමට අවශ්‍ය වන්නේ වගා සහ නියුක්ලෙයික් අම්ල පරීක්ෂණ මිස වර්ණය නොවේ.
තාක්ෂණික දෝෂ ප්‍රධාන වශයෙන් සේදීම් දෙක ආශ්‍රිතව ඇති වේ. ප්‍රමාණවත් ලෙස අවර්ණ නොකිරීමෙන් පසුබිම් ද්‍රව්‍ය රතු පැහැයෙන් ඉතිරි වන අතර වැරදි ධනාත්මක කියවීම්වලට මඟ පාදයි. අධික ලෙස අවර්ණ කිරීමෙන් දුර්වලව රඳවාගත් ප්‍රාථමික වර්ණකය ඉවත් වී වැරදි ඍණාත්මක ප්‍රතිඵලවලට දායක වේ. ප්‍රතිවර්ණකය අධික ලෙස යෙදීමෙන් සුළු බැසිල සංඛ්‍යාවක් නිල් පැහැය තුළ සැඟවෙයි. ඝන තැවරුම්, අවක්ෂේප වූ ප්‍රතික්‍රියාකාරක සහ දූෂිත සේදුම් ජලයද ඒවාටම ආවේණික කෘත්‍රිම ලක්ෂණ එක් කරයි.
ක්‍රියාත්මක කිරීම කොතරම් නිවැරදි වුවත්, සංවේදීතාව ජීවීන්ගේ ප්‍රමාණය මත සීමා වේ. සාම්ප්‍රදායික තැවරුම් අන්වීක්ෂණයට සෙම මිලිලීටරයකට බැසිල දළ වශයෙන් 5,000 සිට 10,000 දක්වා අවශ්‍ය වන අතර, පැරණි CDC සාක්ෂි සමාලෝචනවල වගා පරීක්ෂණයෙන් තහවුරු වූ පෙනහළු ආසාදන අවස්ථා අතර තැවරුම් සංවේදීතාව සියයට 45 සිට 80 පමණ ලෙස දක්වා තිබුණි. එබැවින් ඍණාත්මක තැවරුමකින් කිසිවිටෙක ක්ෂය රෝගය බැහැර කළ නොහැක. වත්මන් CDC මාර්ගෝපදේශ සෑම තැවරුමක් සමඟම වගා පරීක්ෂණයද පවත්වාගෙන යන අතර, පෙනහළු ක්ෂය රෝගය පිළිබඳ සැකයක් ඇති විට සහ ප්‍රතිඵලය කළමනාකරණය වෙනස් කිරීමට හේතු වන විට, අවම වශයෙන් එක් ශ්වසන නිදර්ශකයක් සඳහා නියුක්ලෙයික් අම්ල වර්ධක පරීක්ෂණයක් නිර්දේශ කරයි.
ප්‍රායෝගික කටයුතු සඳහා අනුමත ක්‍රියාපටිපාටි අවශ්‍යය
මෙම ලිපිය ඇතුළු ඉගැන්වීම් විස්තර සායනික කටයුතු සඳහා අවසර ලබා නොදේ. රසායනාගාරයේ ප්‍රායෝගික කටයුතු සඳහා, වත්මන් CDC, APHL හෝ CLSI ලේඛනවලට අනුකූලව වලංගුකරණය කළ රසායනාගාරයේ සම්මත මෙහෙයුම් ක්‍රියාපටිපාටිය අනුගමනය කරන්න. CDC හි Stacks ලේඛනාගාරයේ ඇති අම්ල-ප්‍රතිරෝධී වර්ණගැන්වීමේ යොමු ලේඛනය එවැනි ක්‍රියාපටිපාටි ප්‍රතික්‍රියාකාරක සහ ප්‍රතිඵල කියවීම් නියම කරන ආකාරය පෙන්වයි. ක්ෂය රෝග නිදර්ශක සමඟ කටයුතු කිරීමේදී ජීව විද්‍යාත්මක අවදානම සීමා කරන ආරක්ෂිත පාලන අවශ්‍ය වේ: තැවරුම් සකස් කිරීමෙන් වායුගත සියුම් බිඳිති සහ දියර ඉසීම් ඇති වන බැවින් ඒවා ජීව විද්‍යාත්මක ආරක්ෂක කැබිනට්ටුවක් තුළ සකස් කෙරේ. තාපයෙන් ස්ථායීකරණය කළ තැවරුම්වල පවා ජීවී ක්ෂය රෝග බැසිල තිබිය හැකි බැවින් ඒවා තවදුරටත් දූෂිත ද්‍රව්‍ය ලෙස හැසිරවිය යුතු බව CDC රසායනාගාර ආරක්ෂණ මාර්ගෝපදේශ සඳහන් කරයි. M. leprae සඳහා පරීක්ෂා කළ කාබොල්-ෆුක්සින් සහ මෙතිලීන් බ්ලූ තැවරුමක් පිළිබඳ CDC මහජන සෞඛ්‍ය රූප පුස්තකාලයේ සටහන මෙම ක්‍රමය ක්ෂය රෝගයෙන් ඔබ්බට භාවිත වන බව සිහිපත් කරවන ප්‍රයෝජනවත් උදාහරණයකි: අම්ල-ප්‍රතිරෝධී ජීවීන් සොයන ඕනෑම අවස්ථාවක එම නිල් පසුබිම මත රතු වර්ණ වෙනසම භාවිත වේ. ප්‍රවේශමෙන් කළ ඍණාත්මක කියවීමක්ද වාර්තා කළ යුතු ප්‍රතිඵලයකි.
අවසන් කළ ස්ලයිඩය කියවීම
මූලික පිරික්සුමේදී ප්‍රතිවර්ණකයේ වැදගත්කම පැහැදිලි වේ. අඩු විශාලනයකින් පිරික්සන අන්වීක්ෂ නිරීක්ෂකයා මුලින්ම නිල් පසුබිම භාවිත කර තැවරුමේ ගුණාත්මකභාවය විනිශ්චය කරයි: සෛල ඒකාකාරව බෙදී තිබීම, නාභිගත කිරීම සඳහා නොබිඳුණු ධාරක සෛල තිබීම සහ අධික අවක්ෂේප නොතිබීම එහිදී බලයි. ඉන්පසු සැක සහිත රතු ව්‍යුහ ඇසට ලක් වන්නේ ස්ලයිඩයේ වෙනත් කිසිවක් රතු නොවන නිසාමය. තහවුරු කිරීම තෙල් ගිල්වීම යටතේ සිදු කෙරේ. එහිදී සැබෑ බැසිල ඒකාකාර වර්ණක සුන්බුන් ලෙස නොව, අපේක්ෂිත සිහින්, සමහර විට මඳක් වක්‍ර හෝ පබළු වැනි දණ්ඩාකාර ව්‍යුහ ලෙස පෙනේ.
පසුබිම් වර්ණගැන්වීම වාර්තාවේ භාවිත කරන වචනද තීරණය කරයි. රතු බැසිල ඇති ස්ලයිඩයක්, අම්ල-ප්‍රතිරෝධී බැසිල දැකගත හැකි බවට වාර්තා කෙරෙන අතර බොහෝ විට රසායනාගාරයේ පරිමාණයට අනුව අර්ධ-ප්‍රමාණාත්මක ශ්‍රේණියක්ද දක්වයි. රතු ජීවීන් නොමැති ස්ලයිඩයක්, අම්ල-ප්‍රතිරෝධී බැසිල නොදුටු බවට වාර්තා කෙරේ; කිසිවිටෙක ක්ෂය රෝගය සඳහා ඍණාත්මක බවට නොවේ. මෙම වෙනස වැදගත් වන්නේ නිල් දර්ශන ක්ෂේත්‍රයෙන් වර්ණගැන්වීම සාර්ථක වූ බව, සෛල ප්‍රතිවර්ණකය ගත් බව සහ දෘශ්‍ය පද්ධතිය ප්‍රමාණවත් වූ බව තහවුරු වන නමුත්, හඳුනාගැනීමේ සීමාවට පහළින් ඇති ජීවීන් ගැන කිසිවක් නොකියන බැවිනි. රතු ව්‍යුහ නොමැති නිල් දර්ශන ක්ෂේත්‍රයක් ස්ලයිඩය පිළිබඳ වලංගු ප්‍රතිඵලයක් මිස රෝගියා පිළිබඳ තීන්දුවක් නොවේ.
කාර්යයන් බෙදී ඇති ආකාරය මතක තබාගත් විට වාර්තා ලිවීම පැහැදිලි වේ. කාබොල් ෆුක්සින් සැක කළ හැකි ජීවීන් හඳුනාගැනීමට උපකාරී වේ. අම්ල-ඇල්කොහොල් පරීක්ෂණය සිදු කරයි. මෙතිලීන් බ්ලූ කරන්නේ පිළිතුර කියවිය හැකි කිරීම පමණි: රතු පැහැයෙන් ඇත්තේ අම්ලය හමුවේ වර්ණකය රඳවාගත් ඒවාය; නිල් පැහැයෙන් ඇත්තේ එය අහිමි වූ ඒවාය. විශේෂය, ජීවීන්ගේ ප්‍රමාණය සහ සායනික අර්ථය ඇතුළු අනෙක් සියල්ල ලැබෙන්නේ ස්ලයිඩයෙන් ඔබ්බට කරන කටයුතුවලිනි.