ලිපිය
මෙතිලීන් බ්ලූ පරීක්ෂණවලදී ප්‍රතික්‍රියාශීලී ඔක්සිජන් විශේෂ මැනීම
රසායනාගාර දෙකක්, තමන් මෙතිලීන් බ්ලූ ප්‍රතිඔක්සිකාරක පරීක්ෂණයක් ලෙස හඳුන්වන පරීක්ෂණයක් බැගින් සිදු කරයි. එකක් වාර්තා කරන්නේ වර්ණකය ප්‍රතික්‍රියාශීලී ඔක්සිජන් විශේෂ මර්දනය කරන බවයි. අනෙක වාර්තා කරන්නේ එය ඒවා ජනනය කරන බවයි. දෙකම පැහැදිලි මාත්‍රා-ප්‍රතිචාර වක්‍ර පෙන්වයි. දෙපාර්ශ්වයම අවංකය. වෙනස වංචාවක් හෝ නොහැකියාවක් නොවේ. කණ්ඩායම් දෙක වෙනස් ආලෝක තත්ත්ව යටතේ, වෙනස් ප්‍රශ්නවලට පිළිතුරු දෙන සංවේදක භාවිතයෙන් වෙනස් දේ මැන, එම පිළිතුරු දෙකම එකම වචනයෙන් විස්තර කිරීමයි: ROS.
මෙතිලීන් බ්ලූ නිවැරදිව මැනීමට අපහසු අණුවක් වන්නේ, එය නිරීක්ෂණය කිරීමට නියමිත රසායනික ක්‍රියාවලියට එයම සහභාගී වන නිසාය. අඳුරේදී එය දායකයන් සහ ප්‍රතිග්‍රාහකයන් අතර ඉලෙක්ට්‍රෝන හුවමාරු කරමින්, නැවත චක්‍රයකට සූදානම්ව සිය ආරම්භක ස්වරූපයට පැමිණේ. ආලෝකය යටතේ එය ප්‍රකාශ සංවේදීකාරකයක් බවට පත්ව, උත්තේජිත ත්‍රිත්ව තත්ත්වයකට ළඟා වේ. එම තත්ත්වයෙන් ඔක්සිජන් වෙත ශක්තිය ලබා දී සිංග්ලට් ඔක්සිජන් සෑදීමට හෝ ඉලෙක්ට්‍රෝන මාරු කර රැඩිකල සහ හයිඩ්‍රජන් පෙරොක්සයිඩ් සෑදීමට එයට හැකිය. එම පද්ධතියට එක් කරන ඕනෑම සංවේදකයක් වර්ණකය නිසාම ඔක්සිකරණයට, ඔක්සිහරණයට හෝ විරංජනයට ලක් විය හැකිය; නැතහොත් එහි සංඥාව දෘශ්‍යමය වශයෙන් වැසී යා හැකිය. එබැවින් ඕනෑම ROS කියවීමකදී මුලින්ම ඇසිය යුතු ප්‍රශ්නය කිසිවිටෙකත් අගය කුමක්ද යන්න නොවේ. පරීක්ෂණය සැබවින්ම හඳුනාගන්නේ කුමක්ද සහ වර්ණකය පරීක්ෂණයට කරන්නේ කුමක්ද යන්නයි.
Amplex Red: ක්‍රමාංකනය කළ හයිඩ්‍රජන් පෙරොක්සයිඩ් පරීක්ෂණයක්
නිසි ලෙස සකස් කළ විට, මෙතිලීන් බ්ලූ සහ Amplex Red සංයෝජනය මෙම පර්යේෂණ සාහිත්‍යයේ වඩාත්ම සාධාරණීකරණය කළ හැකි යුගලයයි. එහි රසායනය නිශ්චිතය: හෝස්රැඩිෂ් පෙරොක්සිඩේස්, හයිඩ්‍රජන් පෙරොක්සයිඩ් භාවිතයෙන් Amplex උපස්තරය ප්‍රතිදීප්ත නිෂ්පාදනයක් වන රෙසොරුෆින් බවට ඔක්සිකරණය කරයි. මෙය ආසන්න වශයෙන් එකට එක ස්ටොයිකියෝමිතික අනුපාතයකින් සිදු වේ. නියැදියේ පෙරොක්සයිඩ් අනාවරකය තුළ ප්‍රතිදීප්තතාව බවට පත්වේ. සාම්ප්‍රදායික ROS කාණ්ඩයේ වෙනත් කිසිවක් එම ප්‍රතික්‍රියාව සෘජුව සිදු නොකරයි.
තීරණාත්මක වාසිය වන්නේ ක්‍රමාංකනයයි. සැලකිලිමත් පර්යේෂකයෙක් එකම බෆරය, එකම පෙරොක්සිඩේස් සහ උපස්තර සාන්ද්‍රණ, එකම ඉන්කියුබේෂන් කාලය සහ එකම දෘශ්‍ය සැකසුම් යටතේ දන්නා පෙරොක්සයිඩ් ප්‍රමාණ සහිත ප්‍රමිතීන් පරීක්ෂා කර, එම වක්‍රයට සාපේක්ෂව නියැදි කියවයි. මෙම ක්‍රමයට පදනම සපයන, වෙන් කළ මොළයේ මයිටොකොන්ඩ්‍රියා පිළිබඳ අධ්‍යයනයේ කතුවරු එයම කළහ. ඔවුහු සෑම පරීක්ෂණ වාරයක් අවසානයේම දන්නා පෙරොක්සයිඩ් ප්‍රමාණ එක් කළ අතර, අගයන් අත්තනෝමතික ප්‍රතිදීප්තතා ඒකක ලෙස නොව ප්‍රෝටීන මිලිග්‍රෑමයකට මිනිත්තුවකට පිකෝමෝල් ලෙස වේගයන් වශයෙන් වාර්තා කළහ. ආලෝක විමෝචනයක් මිනුමක් බවට පත් කරන්නේ එයයි.
එම අධ්‍යයනයේ විස්තර තුනක් අනුගමනය කිරීම වටී. පළමුව, කතුවරු පෙරොක්සයිඩ් විනාශ කරන කැටලේස් භාවිතයෙන් සංඥාව තහවුරු කළහ. කැටලේස් එක් කළ විට මෙතිලීන් බ්ලූ මගින් ඇති කළ ප්‍රතිදීප්තතා වැඩිවීම නතර වූ අතර, සංඥාව දෘශ්‍යමය කෘත්‍රිම බලපෑමක් නොව පෙරොක්සයිඩ් බව තහවුරු විය. දෙවනුව, නියැදිවලට සාමාන්‍ය ආලෝක ප්‍රමාණයෙන් අටෙන් එකක් පමණක් ලැබෙන ලෙස උත්තේජන කිරණයට ෂටරයක් යොදා, ඔවුහු ආලෝකකරණයේ බලපෑම සෘජුව පරීක්ෂා කළහ. සංඥාව අඩු වූයේ සියයට නවයකින් පමණි. ඔවුන් වාර්තා කළ පෙරොක්සයිඩ්වලින් සියයට අනූවකට වැඩි ප්‍රමාණයක් මිනුම් සඳහා යොදාගත් ආලෝකයෙන් ස්වාධීන විය. තෙවනුව, ඔවුහු ඉලෙක්ට්‍රෝඩයක් භාවිතයෙන් පෙරොක්සයිඩ් ඉවත් වීම වෙනම මැන, වර්ණකය නිෂ්පාදනය වැඩි කරන අතරම ඉවත් වීම මන්දගාමී කරන බව සොයාගත්හ. ශුද්ධ ප්‍රතිදීප්තතාව පමණක් වාර්තා කරන සංවේදකයක් එම බලපෑම් දෙක එකට මිශ්‍ර කර දක්වනු ඇත.
මෙම පරීක්ෂණයට තවමත් අසාර්ථක විය හැකි ආකාර තිබෙන අතර, මෙතිලීන් බ්ලූ ඒවායින් කිහිපයක් මතු කරයි. රෙසොරුෆින් ආලෝකය විමෝචනය කරන රතු කලාපය පුරාම වර්ණකය පුළුල් ලෙස ආලෝකය අවශෝෂණය කරයි. එබැවින් ඉහළ වර්ණක සාන්ද්‍රණවලදී අභ්‍යන්තර පෙරහන් බලපෑම් නිසා නියැදියට තමන්ගේම සංඥාව වැසිය හැකිය. ඒ නිසා ප්‍රමිතීන් තුළද නියැදිවල ඇති වර්ණක සාන්ද්‍රණයම තිබිය යුතුය. Amplex Red තනිවමද ප්‍රකාශ-ඔක්සිකරණයට ලක් විය හැකි අතර, එහි නිෂ්පාදනය වන රෙසොරුෆින්ට සුපර්ඔක්සයිඩ් සහ පෙරොක්සයිඩ් ජනනය කරන ප්‍රකාශ-ඔක්සිකරණ-ඔක්සිහරණ චක්‍රවලට ඇතුළු විය හැකිය. පරීක්ෂණයේදී ප්‍රකාශ සංවේදීකාරකයකටද ආලෝකය ලබා දෙන විට මෙය ඉතා වැදගත් වේ. ප්‍රායෝගික විසඳුම වන්නේ වර්ණකයට සහ සංවේදකයට එකවර ආලෝකය ලබා දීම වෙනුවට, පළමුව මෙතිලීන් බ්ලූ නියැදි විකිරණයට නිරාවරණය කර, පසුව ඒවායේ උපනියැදි Amplex ප්‍රතික්‍රියාකාරක සමඟ අඳුරේ පරීක්ෂා කිරීමයි. අවසාන වශයෙන්, සුපර්ඔක්සයිඩ් ඩිස්මියුටේස් හුදෙක් Amplex සංඥාව මර්දනය කරන්නේ නැත: සුපර්ඔක්සයිඩ් පෙරොක්සයිඩ් බවට පරිවර්තනය කිරීමෙන් එය වැඩි විය හැකිය. ප්‍රතිදීප්තතාව වැඩි කරන SOD පාලකයක් අසාර්ථක වී නැත. එය ප්‍රතික්‍රියා මාර්ගයේ පෙර අවධියක ඇති විශේෂයක් ලෙස සුපර්ඔක්සයිඩ් හඳුනාගෙන ඇත.
DCFDA: විශේෂිත නොවන ඔක්සිකරණ දර්ශකයක්
බොහෝ ව්‍යාකූලතාවල මූලාශ්‍රය වන්නේ මෙතිලීන් බ්ලූ සහ DCFDA යුගලයයි. DCFH-DA යනු සෛල තුළට ඇතුළත් කෙරෙන පූර්වගාමී සංයෝගයකි. සෛලය තුළ ඇති එස්ටරේස් එහි ඇසිටේට් කාණ්ඩ ඉවත් කර ප්‍රතිදීප්ත නොවන DCFH ඉතිරි කරන අතර, DCFH ඔක්සිකරණයෙන් ප්‍රතිදීප්ත DCF ලැබේ. එය ඔක්සිකරණය කරන දේවල ලැයිස්තුව දිගුය: හයිඩ්‍රොක්සිල් රැඩිකල, පෙරොක්සිඩේස් සහ හීම් අතරමැදි සංයෝග, නයිට්‍රජන් ඩයොක්සයිඩ්, හයිපොක්ලෝරස් අම්ලය සහ පෙරොක්සිනයිට්‍රයිට්වලින් ඇති වන රැඩිකල. හයිඩ්‍රජන් පෙරොක්සයිඩ් පමණක් එය ප්‍රයෝජනවත් වේගයකින් සෘජුව ඔක්සිකරණය නොකරයි; පෙරොක්සයිඩ් මත රඳා පවතින ප්‍රතිදීප්තතාව සඳහා සාමාන්‍යයෙන් එම ක්‍රියාවලියට යකඩ, හීම් ප්‍රෝටීන හෝ පෙරොක්සිඩේස් රසායනය සම්බන්ධ විය යුතුය.
සෑම ක්‍රමවේද කොටසකම උපුටා දැක්විය යුතු විවේචනය පැමිණෙන්නේ කල්‍යාණරාමන් සහ සගයන් විසින් DCFH සංවේදකයක් ලෙස විශ්ලේෂණය කිරීමෙනි. මෙම හේතුව නිසා DCFDA ප්‍රතික්ෂේප කළ මොළයේ මයිටොකොන්ඩ්‍රියා අධ්‍යයනයේ සාරාංශ කර ඇති පරිදි, වර්ණකය සෙමින් ප්‍රතික්‍රියා කරන බවත්, එහි ස්ටොයිකියෝමිතිය නිසි ලෙස විස්තර කර නොමැති බවත්, වලංගු ක්‍රමාංකනයක් නොමැති බවත්, ROS නොවන සංයෝග සමඟද ප්‍රතික්‍රියා කරන බවත් ඔවුහු පෙන්වා දුන්හ. සංවේදකය තමන් මනින දේ වර්ධනයද කරයි: DCFH හි එක් ඉලෙක්ට්‍රෝන ඔක්සිකරණයෙන් DCF රැඩිකලයක් සෑදෙන අතර, එය ඔක්සිජන් සමඟ ප්‍රතික්‍රියා කර සුපර්ඔක්සයිඩ් සාදයි. එය ඩිස්මියුටේෂන් මගින් අමතර පෙරොක්සයිඩ් බවට පත්වේ. කියවීමෙන් වාර්තා වන රසායනයෙන් කොටසක් කියවීමේ ක්‍රියාවලිය විසින්ම නිපදවයි.
මේ කිසිවක් DCFDA නිෂ්ප්‍රයෝජනවත් කරන්නේ නැත. එයින් එය හඳුනාගැනීමේ ක්‍රමයක් නොව මූලික පිරික්සුම් ක්‍රමයක් බවට පත්වේ. DCF ප්‍රතිදීප්තතාව ඉහළ යාමෙන් අදහස් වන්නේ ඔක්සිකාරක මත රඳා පවතින සංවේදක ඔක්සිකරණය වැඩි වූ බවයි. එයින් පෙරොක්සයිඩ් වැඩි වූ බව අදහස් නොවන අතර, කිසිදු තනි සංවේදකයකින් මැනිය නොහැකි ප්‍රමාණයක් වන සමස්ත ROS වැඩි වූ බවද කිසිසේත් අදහස් නොවේ. එක් මයික්‍රෝමෝලර් සාන්ද්‍රණයකට ඉහළදී DCF ඔක්සිකරණය මත රඳා පැවති පෙර මෙතිලීන් බ්ලූ පර්යේෂණ ඔක්සිකරණය ප්‍රවර්ධනය කරන බලපෑම් වාර්තා කළ අතර, එම යුගයේම වෙනත් පද්ධති පෙරොක්සයිඩ් මගින් ඇති කරන සෛල මරණයෙන් ආරක්ෂාව වාර්තා කළහ. වෙනස් ඔක්සිකරණ-ඔක්සිහරණ පසුබිම්වලදී එකම වර්ණකය සම්බන්ධයෙන් නිරීක්ෂණ දෙකම සත්‍ය විය හැකි අතර, සංඥාවට හේතු වූ ඔක්සිකාරකය කුමක්දැයි DCF ප්‍රතිඵලය පමණක් පැවසිය නොහැකිය. පෙර මොළයේ මයිටොකොන්ඩ්‍රියා පර්යේෂණය වැදගත් වන්නේ, එය මෙම මූලික පිරික්සුම වෙනුවට ක්‍රමාංකනය කළ පෙරොක්සයිඩ් මිනුමක් භාවිත කර බරපතළත්වය සෘජුව හඳුනාගත් නිසාය: නැනෝමෝලර් සියයක වර්ණක සාන්ද්‍රණයක් පවා පරීක්ෂා කළ සෑම උපස්තරයකදීම සහ ශ්වසන තත්ත්වයකදීම පෙරොක්සයිඩ් මුදාහැරීම කිහිප ගුණයකින් වැඩි කළේය.
DCFDA සතුව මෙතිලීන් බ්ලූ සඳහා විශේෂ වූ තවත් උගුලක් ඇත. වර්ණකය දැඩි පැහැයක් සහිත වන අතර ඔක්සිකරණ-ඔක්සිහරණ ක්‍රියාකාරීත්වයක්ද දක්වයි. එබැවින් එයට ප්‍රතිදීප්තතාව විරංජනය කිරීමට, විමෝචනය නිවා දැමීමට හෝ සෛලීය ROSවලින් ස්වාධීනව සංවේදකයේ රසායනය ඔක්සිකරණය කිරීමට හැකිය. සෛල නොමැතිව වර්ණකය සහ සංවේදකය පමණක් යොදා කරන සෛල-රහිත පාලක පරීක්ෂණයක් අමතර අලංකාරයක් ලෙස සලකා මඟ හැරිය නොහැකිය. වර්ණකය සංවේදකය සමඟ අන්තර්ක්‍රියා කරන්නේද යන්න ඔබට කියා දෙන්නේ එම පරීක්ෂණයයි.
ස්පින් උගුල්කරණය සහ ඔක්සිජන් පරිභෝජනය: අනන්‍යතාව සහ ප්‍රවාහය
ප්‍රතිදීප්ත සංවේදක ඔක්සිකරණයට ලක් විය හැකි යමක් ඇති වූ බව වාර්තා කරන තැන, ස්පින් උගුල් සමඟ ඉලෙක්ට්‍රෝන ස්පින් අනුනාදය එය කුමක්ද යන්නට වඩා සමීප තොරතුරු වාර්තා කරයි. සම්භාව්‍ය මෙතිලීන් බ්ලූ ප්‍රකාශ රසායනික අධ්‍යයනය වර්ණකය, ඇස්කෝබේට් සහ ආලෝකයෙන් ඇති වූ ඇස්කෝබේට් රැඩිකලය හඳුනාගැනීමට ESR භාවිත කළේය. ඉන්පසු ඔක්සිජන් පරිභෝජන පරීක්ෂණවලදී පෙරොක්සයිඩ් සෑදීමත්, ස්පින් උගුල්කරණ පරීක්ෂණවලදී යකඩ මගින් උත්ප්‍රේරිත හයිඩ්‍රොක්සිල් රැඩිකල සෑදීමත් පෙන්වා දුන්නේය. සෑම තාක්ෂණයක්ම අනෙක් තාක්ෂණවලට පිළිතුරු දිය නොහැකි ප්‍රශ්නයකට පිළිතුරු දුන්නේය: ESR රැඩිකලයේ අනන්‍යතාව ලබා දුන්නේය; ඔක්සිජන් පරිභෝජනය ඕනෑම ප්‍රතිදීප්ත සංවේදකයකින් ස්වාධීනව ප්‍රතික්‍රියා ප්‍රවාහය ලබා දුන්නේය; ඒවායේ සංයෝජනය එකම ආලෝකයට නිරාවරණය කළ පද්ධතිය තුළ සිංග්ලට් ඔක්සිජන් සහ රැඩිකල මාර්ග දෙකම ක්‍රියාත්මක වන බව පෙන්වා දුන්නේය.
එම 1984 ප්‍රතිඵලය තවමත් අනතුරු ඇඟවීමක් සේ කියවිය හැකිය. ආලෝකකරණය සහ ඔක්සිහාරක කාරකයක් තිබූ විට වර්ණකය පෙරොක්සයිඩ් ජනනය කළ අතර, යකඩ තිබූ විට පද්ධතිය එම කාණ්ඩයේ වඩාත්ම ප්‍රතික්‍රියාශීලී විශේෂය වන හයිඩ්‍රොක්සිල් රැඩිකලය නිපදවීය. කතුවරු මෙය ඇසේ ඇති ඇස්කෝබේට් සමඟ සම්බන්ධ කර, සැලකිල්ලකින් තොරව අක්ෂි භාවිතයට යොදාගැනීම ප්‍රශ්න කළහ. නවීන පාඨකයන් මෙම තත්ත්ව සැලකිල්ලට ගත යුතුය: ආලෝකය සමඟ ඔක්සිහාරකයක් සහ යකඩ. ඒවායින් ඕනෑම එකක් ඉවත් කළ විට මාර්ගය දුර්වල වේ හෝ අතුරුදහන් වේ.
ඔක්සිජන් ඉලෙක්ට්‍රෝඩවල වැදගත්කම වෙනස් ආකාරයකින් තහවුරු වේ. ක්ලාක් වර්ගයේ ඉලෙක්ට්‍රෝඩයක් ශුද්ධ ඔක්සිජන් පරිභෝජනය මනී. එමගින් වර්ණකය මගින් මෙහෙයවන ඔක්සිකරණ-ඔක්සිහරණ රසායනය අණුක ඔක්සිජන් පරිභෝජනය කරන බව තහවුරු කර, ප්‍රතිදීප්තතාවේ කිසිදු කෘත්‍රිම බලපෑමකින් ව්‍යාජ ලෙස නිපදවිය නොහැකි චාලක තොරතුරු ලබා දෙයි. එය නිෂ්පාදනය හඳුනා නොගනී. පෙරොක්සයිඩ්, සුපර්ඔක්සයිඩ් සහ ජලය සෑදීමත්, සිංග්ලට් ඔක්සිජන් ක්ෂය වීමත් ඔක්සිජන් පරිභෝජනය කරයි. අනන්‍යතාව නොමැති ප්‍රවාහයක්, ප්‍රවාහය නොමැති අනන්‍යතාවක් තරමටම අසම්පූර්ණය. ඒ නිසා ශක්තිමත් පර්යේෂණ ලිපි ඉලෙක්ට්‍රෝඩය සමඟ ක්‍රමාංකනය කළ පෙරොක්සයිඩ් පරීක්ෂණයක් හෝ උගුලක් යොදාගනී.
ප්‍රතිඔක්සිකාරක ප්‍රතිඵල පරස්පර වන්නේ ඇයි
කියවීම් තුන එකිනෙක සමඟ සසඳන විට, මෙතිලීන් බ්ලූ පර්යේෂණ සාහිත්‍යයේ පෙනෙන පරස්පරතා ක්‍රමවේද වෙනස්කම් සහ ජීව විද්‍යාත්මක කරුණු තුනක් මගින් පැහැදිලි වේ.
පළමුව, වර්ණකය ඉලෙක්ට්‍රෝන හුවමාරුකාරකයක් මෙන්ම පෙරොක්සයිඩ් ප්‍රභවයක්ද වේ. වෙනත් ආකාරයකින් ඔක්සිජන් සුපර්ඔක්සයිඩ් බවට පත්වන ශ්වසන ස්ථානවලින් ඉලෙක්ට්‍රෝන වෙනත් මඟකට යොමු කිරීමෙන්, එයට එක් ROS වර්ගයක් අඩු කළ හැකිය. ඒ අතරම එහි ඔක්සිහරණය වූ ස්වරූපය ඔක්සිජන් සෘජුව පෙරොක්සයිඩ් බවට ඔක්සිහරණය කර තවත් වර්ගයක් වැඩි කරයි. එබැවින් මයිටොකොන්ඩ්‍රියා ඔක්සිකරණ-ඔක්සිහරණ රසායනය සහ එහි විකල්ප මාර්ග භූමිකාව අධ්‍යයනය කරන රසායනාගාරයක් සංවේදකය මත රඳා පවතින පිළිතුරු බලාපොරොත්තු විය යුතුය: එකම කියුවෙට්ටුව තුළ සුපර්ඔක්සයිඩ්වලට සංවේදී කියවීමක් පහළ යන අතර පෙරොක්සයිඩ් කියවීමක් ඉහළ යයි.
දෙවනුව, අඩු මාත්‍රාවල පෙරොක්සයිඩ් යනු හානියක් පමණක් නොව සංඥාවකි. පෙර පර්යේෂණයට පසුව සිදු කළ මී මොළයේ මයිටොකොන්ඩ්‍රියා අධ්‍යයනය, නැනෝමෝලර් පනහක් වැනි අඩු වර්ණක සාන්ද්‍රණයකින් පවා පෙරොක්සයිඩ් ජනනය වන බවත්, චිකිත්සක මට්ටම්වලදී මයිටොකොන්ඩ්‍රියා DNA හානි නොවන බවත් සොයාගත්තේය. පූර්ව ප්‍රතිකාරයෙන් පසු රොටෙනෝන් මගින් ඇති කරන හානිවලින් ආරක්ෂාවද තිබිණි. චිකිත්සක පරාසයට වඩා බෙහෙවින් ඉහළ මයික්‍රෝමෝලර් සියයකදී පමණක් වර්ණකය තෝරාගත් DNA කොටස්වලට හානි කළ අතර, රතු ආලෝකය සමඟ මයික්‍රෝමෝලර් විස්සක වර්ණක සාන්ද්‍රණයක් පරීක්ෂා කළ සියලු කොටස්වලට හානි කරන සිංග්ලට් ඔක්සිජන් නිපදවීය. යෝජිත යාන්ත්‍රණය හෝර්මේසිස් මත පදනම් වේ: මෘදු පෙරොක්සයිඩ් නිෂ්පාදනය Nrf2 හා සම්බන්ධ ප්‍රතිඔක්සිකාරක ආරක්ෂක ක්‍රියා සහ මයිටොකොන්ඩ්‍රියා ජෛවජනනය අවුලුවයි. එබැවින් කෙටි කාලීනව ඔක්සිකරණය ප්‍රවර්ධනය කරන කියවීමකට පසුව දිගු කාලීන ප්‍රතිඔක්සිකාරක ප්‍රතිඵලයක් ලැබේ. පැයකදී කියවන පරීක්ෂණයක් සහ දිනකදී කියවන පරීක්ෂණයක් අතර නොගැළපීමක් ඇති විය හැක්කේ ඒ අතරතුර ජීව විද්‍යාත්මක තත්ත්වය වෙනස් වූ නිසාය.
තෙවනුව, පවතින්නේ කුමන අණුවද යන්න පවා ආලෝකය තීරණය කරයි. ආලෝකකරණය වර්ණකයේ මෙතිල් කාණ්ඩ ඉවත් කරමින් එය Azure B සහ ආශ්‍රිත නිෂ්පාදන දෙසට පරිවර්තනය කරන අතර, බඳුනක් මත ඇති අන්වීක්ෂ ලාම්පුවේ ආලෝකය එය ප්‍රකාශ සංවේදී කිරීමට ප්‍රමාණවත්ය. අඳුරේ කරන පරීක්ෂණ සහ ආලෝකයට නිරාවරණය කර කරන පරීක්ෂණ වෙනස් පරීක්ෂණ වන අතර, ඕනෑම ක්‍රියාපටිපාටියක ආලෝකකරණය සහ වර්ණකය හැසිරවීම සඳහා පාලක කොටස ඒවා එලෙස සැලකිය යුතුය.
අවම පාලක කට්ටලයක් සහ ඕනෑම ප්‍රකාශයක් කියවිය යුතු ආකාරය
පහත සංසන්දනය මෙම ලිපියේ මුල් යොමු සම්පතයි. ඕනෑම මෙතිලීන් බ්ලූ ROS ප්‍රතිඵලයක් පිළිගැනීමට පෙර, කතුවරු කුමන පේළි සම්පූර්ණ කළේද සහ කුමන පේළි මඟ හැරියේද යන්න පරීක්ෂා කරන්න.
| පාලකය | එයින් බැහැර කරන්නේ කුමක්ද | එය සිදු කරන ආකාරය |
|---|---|---|
| අඳුර සහ නිර්වචිත ආලෝකකරණය සැසඳීම | මූලික තත්ත්වයේ ඔක්සිකරණ-ඔක්සිහරණ බලපෑම් ප්‍රකාශ රසායනය සමඟ පටලවා ගැනීම | එකම වර්ණකය, එකම මාධ්‍ය සංයුතිය; එක් පරීක්ෂණ කාණ්ඩයක් අඳුරේත්, අනෙක මනින ලද ආලෝක ප්‍රමාණයක් යටතේත් තබන්න |
| සංවේදකය සහ ආලෝකය, වර්ණකය නොමැතිව | සංවේදකයේ ප්‍රකාශ රසායනය | සංවේදකයට පමණක් ආලෝකය ලබා දෙන්න; ඕනෑම සංඥාවක් කෘත්‍රිම බලපෑමේ මූලික මට්ටමයි |
| වර්ණකය සහ ආලෝකය, සෛල හෝ උපස්තරය නොමැතිව | සෛලීය ROS සහ වර්ණකයටම ආවේණික ROS අතර ව්‍යාකූලතාව | සෛල-රහිත මාධ්‍ය සංයුතියක් භාවිත කරන්න; වර්ණකය තනිවම ජනනය කරන්නේ කුමක්ද යන්න තහවුරු කරයි |
| කැටලේස් | Amplex පරීක්ෂණයක පෙරොක්සයිඩ් නොවන සංඥාවක් | සංඥාව අඩු විය යුතුය; ආලෝකයට නිරාවරණය කළ වර්ණකයට කැටලේස්වලටම හානි කළ හැකි බව සැලකිල්ලට ගන්න |
| SOD | සුපර්ඔක්සයිඩ් සහභාගීත්වය | Amplex සංඥාව ඉහළ යාමෙන් දැක්වෙන්නේ ප්‍රතික්‍රියා මාර්ගයේ පෙර අවධියක සුපර්ඔක්සයිඩ් සම්බන්ධ වන බව මිස පරීක්ෂණයේ අසාර්ථකත්වයක් නොවේ |
| ඩෙෆෙරොක්සැමීන් වැනි යකඩ කීලේටකයක් | ෆෙන්ටන් වර්ගයේ හයිඩ්‍රොක්සිල් රසායනය | ඔක්සිකරණ-ඔක්සිහරණ ක්‍රියාකාරී යකඩ DCFH හෝ උගුල් සංඥාවට හේතු වන්නේද යන්න පරීක්ෂා කරයි |
| සම්පූර්ණ මාධ්‍ය සංයුතිය තුළ පෙරොක්සයිඩ් ප්‍රමිතීන් | ක්‍රමාංකනය නොකළ ප්‍රතිදීප්තතාව | එකම වර්ණක සාන්ද්‍රණය සහ දෘශ්‍ය සැකසුම් සමඟ දන්නා පෙරොක්සයිඩ් ප්‍රමාණ එක් කරන්න |
මෙයින් ප්‍රායෝගික කියවීමේ රීතියක් ලැබේ. පෙරොක්සිඩේස් සමඟ භාවිත කළ, ක්‍රමාංකනය කළ සහ කැටලේස් මගින් පරීක්ෂා කළ Amplex පරීක්ෂණයක් පෙරොක්සයිඩ් පිළිබඳ සාක්ෂියකි. DCFDA යනු විශේෂිත නොවන සංවේදක ඔක්සිකරණය පිළිබඳ සාක්ෂියක් පමණි; ඊට වැඩි යමක් නොවේ. රැඩිකල ඉවත් කරන කාරක සහිත පාලක සමඟ කරන ස්පින් උගුල්කරණය රැඩිකල අනන්‍යතාව පිළිබඳ සාක්ෂියකි. ඔක්සිජන් පරිභෝජනය ප්‍රවාහය පිළිබඳ සාක්ෂියකි. පරීක්ෂණයෙන් තහවුරු කළ හැකි ප්‍රමාණයට වඩා වැඩි යමක් ප්‍රකාශ කරන වාක්‍යයක්, කෙතරම් විශ්වාසයෙන් ලියා තිබුණත්, වර්ණකය පිළිබඳ නොව සංවේදකය පිළිබඳ වාක්‍යයකි. මාත්‍රා මත රඳා පැවතීම සහ හෝර්මේසිස් පරාසය, මයිටොකොන්ඩ්‍රියා ඉලෙක්ට්‍රෝන ප්‍රවාහය, වර්ණක යෙදූ නියැදිවල විශ්ලේෂණ පරීක්ෂණයට ඇති බාධා සහ අන්වීක්ෂ ආලෝකකරණයෙන් ඇතිවන කෘත්‍රිම බලපෑම් පිළිබඳ ආශ්‍රිත සාකච්ඡා මෙම එක් එක් කරුණ තවදුරටත් විස්තර කරයි. ඒවායේ තාවකාලික යොමු ප්‍රතිස්ථාපනය කළ පසුවද සෑම කරුණක්ම වලංගුව පවතී.