ميٿيلين بلو سان ڳل جي خلين کي رنگڻ: ڇا ڏسجي

هڪ شاگردياڻي ڳل جي خلين واري معلق محلول جو هڪ ڦڙو سلائيڊ تي رکي ٿي، خوردبين مان ڏسي ٿي، ۽ کيس لڳ ڀڳ ڪجهه به نظر نٿو اچي. روشن ميدان ۾ ڪجهه هلڪا پاڇا ترندا نظر اچن ٿا. هوءَ فوڪس بهتر ڪري ٿي، پوءِ روشني وڌائي ٿي، ۽ آخر ۾ نتيجو ڪڍي ٿي ته سلائيڊ خالي آهي. سلائيڊ خالي ناهي. خليا اتي موجود آهن. اهي لڳ ڀڳ شفاف آهن، ۽ اها شفافيت ئي اهو مسئلو آهي جنهن کي حل ڪرڻ لاءِ هي رنگ استعمال ٿئي ٿو.

توقع ۽ تصوير جي وچ ۾ ان فرق کي طريقيڪار شروع ڪرڻ کان اڳ واضح ڪرڻ گهرجي. نوان سکندڙ سمجهن ٿا ته خوردبين تفصيل اهڙيءَ طرح ڏيکاريندي، جيئن ڪئميرا جو زوم پري واري تختي کي چٽو ڪري ٿو. روشن ميدان واري خوردبين جو ڪم ان کان وڌيڪ محدود آهي: اها روشنيءَ جي جذب ۾ فرق ڏيکاري ٿي. اڻ رنگيل ڳل جو خلو لڳ ڀڳ ڪا به روشني جذب نٿو ڪري، تنهنڪري اهو لڳ ڀڳ ڪو به فرق پيدا نٿو ڪري. ميٿيلين بلو اهو فرق پيدا ڪري ٿو. اهو خلي جي اندر اڻ هڪجهڙي نموني ڳنڍجي ٿو ۽ بناوت کي بصري فرق ۾ بدلائي ٿو. جڏهن شاگرد اهو تصور سمجهي وٺن ٿا، ته پوءِ هر ايندڙ قدم کين رڳو نسخي بدران انهيءَ تصور جو نتيجو لڳي ٿو.

اسڪول جي ليبارٽريءَ ۾ سادا رنگ بصري فرق ڪيئن وڌائين ٿا، ان جو پسمنظر هتي مددگار آهي، ۽ رنگڻ کان اڳ روشن ميدان واري خوردبين کي تيار ڪرڻ بابت ورجاءُ اڌ ناڪام سلائيڊن کان بچائي ٿو. رنگ جي پويان ڪيميا خوردبيني مشاهدي ۾ ميٿيلين بلو جي تعارف ۾ بيان ٿيل آهي، جنهن ۾ سمجهايو ويو آهي ته هي خاص رنگ ليبارٽريءَ جي ميز تي بار بار ڇو نظر اچي ٿو.

ڪلاس جو طريقيڪار

هيٺ ڏنل آلي مائونٽ وارو طريقو عام ڪلاسن لاءِ وڌيڪ سادو بنيادي انتخاب آهي. ان لاءِ نه باهه جي شعلي جي ضرورت آهي، نه نموني کي تثبيت ڪرڻ جي ڪنهن قدم جي. ڪجهه ڪاليجي دستورنامن ۾ استعمال ٿيندڙ تثبيت ڪيل سميئر واري صورت ۾ هوا ۾ سڪائڻ ۽ پوءِ ٿوري دير گرميءَ سان تثبيت ڪرڻ شامل آهي، جيئن Biology LibreTexts وسيلي شايع ٿيل North Central Texas College جي ڳل جي سميئر واري سرگرمي ۾ ڏنل آهي. پر گرميءَ سان تثبيت ڪرڻ خرد حياتيات ۾ عام رواج آهي، اپيٿيليئل خلين کي ڏسڻ لاءِ لازمي شرط نه آهي.

گهربل شيون: صاف سلائيڊون ۽ ڍڪڻ واريون شيشي جون پٽيون، جراثيم کان پاڪ هڪ ڀيرو استعمال ٿيندڙ سوئاب، جيڪي ترجيحي انتخاب آهن، يا نيون چپٽيون ڏند کوٽڻ واريون ڪاٺيون، 0.5 کان 1 سيڪڙو آبي ميٿيلين بلو جي ڦڙا وجهڻ واري بوتل، تقطير ڪيل يا آئنن کان پاڪ پاڻي، جذب ڪندڙ ڪاغذ، دستانا، ۽ 100x ۽ 400x جي ڪل وڏائي واري مرڪب خوردبين.

1. سادي پاڻيءَ سان وات کي ڪُلي ڪريو. ان سان کاڌي جا اهي ذرڙا نڪري وڃن ٿا، جيڪي پوءِ گهاٽو رنگ وٺي خلين تان ڌيان هٽائين ٿا.
2. هر شاگرد رڳو پنهنجي ڳل مان نمونو وٺي. نئين جراثيم کان پاڪ سوئاب سان ڳل جي اندرئين پاسي کي هلڪي نموني رڳڙيو. هلڪو دٻاءُ ڏيو، کرچيو نه. تڪليف يا رت اچڻ کان گهڻو اڳ روڪي ڇڏيو.
3. سوئاب کي صاف سلائيڊ جي وچ تي هلڪو ڦيرائي سنهي تهه پکيڙيو. سنهي تهه اهو سڀ کان اهم عامل آهي، جيڪو ٻڌائي ٿو ته سلائيڊ چٽي طرح ڏسي سگهبي يا نه. ٿلهي اڇي تهه رنگجڻ کان پوءِ اهڙو نيرو ڍير بڻجي ويندي، جنهن ۾ تفصيل سڃاڻي نه سگهبا.
4. سميئر تي ميٿيلين بلو جو هڪ ڦڙو وڌو. ان کي 1 کان 3 منٽن تائين ڇڏي ڏيو. ڪيترن ڪاليجي طريقيڪارن ۾ هڪ منٽ ڪافي هوندو آهي؛ NCERT جي نائين درجي جي سائنس ليبارٽري دستورنامي ۾ عارضي مائونٽ لاءِ لڳ ڀڳ 3 منٽ ڏنل آهن. وڌيڪ وقت بهتر ناهي، ۽ وڌيڪ رنگجي وڃڻ وقت بابت سڀ کان عام غلطي آهي.
5. مقامي طريقيڪار مطابق تقطير ڪيل پاڻيءَ سان آهستي ڌوئو يا جذب ڪندڙ ڪاغذ سان اضافي رنگ جذب ڪريو. پسمنظر هلڪو نيرو ٿيڻ گهرجي، تمام گهرو نيرو نه.
6. ڍڪڻ واري شيشي جي پٽي کي ترڇو هيٺ آڻيو ته پهرين هڪ ڪنارو لڳي، پوءِ ان کي آهستي ويهڻ ڏيو. ان سان هوا جا ڦوڪڻا اندر نه ڦاسندا.
7. خلين کي ڳولڻ لاءِ گهٽ وڏائيءَ کان شروع ڪريو، فوڪس ۽ وچ ۾ بيهڪ جي تصديق ڪريو، پوءِ 100x ۽ آخر ۾ 400x ڏانهن وڃو. 400x تي رڳو سنهو فوڪس استعمال ڪريو.

رنگ جي ڪنسنٽريشن بابت هڪ ڳالهه صاف ڪرڻ ضروري آهي. اسڪولن جا طريقيڪار گهڻو ڪري 1 سيڪڙو آبي ميٿيلين بلو استعمال ڪن ٿا. وڌيڪ گهاٽو ذخيرو محلول يا گهڻي دير تائين رنگ سان رابطي ۾ رهڻ، مرڪزڪ جي ڀيٽ ۾ پسمنظر کي وڌيڪ تيزيءَ سان گهاٽو ڪري ٿو، جنهن سان اهو بصري فرق ابتو ٿي وڃي ٿو جنهن تي هي مشق دارومدار رکي ٿي.

ڳل جي مواد کي محفوظ نموني سنڀالڻ

ڳل جي نمونن سان لعاب ۽ وات جا عام خرد جاندار به اچن ٿا، تنهنڪري هر تازي سميئر کي امڪاني طور متعدي مواد سمجهو، ڀلي نمونو ڏيندڙ صحتمند هم ڪلاسي هجن. American Society for Microbiology جون تدريسي ليبارٽرين لاءِ حياتياتي حفاظت جون هدايتون عام اصول بيان ڪن ٿيون: سيشن کان اڳ خطري جو جائزو وٺو، دستانا پائڻ، جتي ڇنڊا پوڻ جو امڪان هجي اتي اکين جي حفاظت ڪرڻ، پوءِ هٿ ڌوئڻ، ليبارٽريءَ جون ميزون جراثيم کان پاڪ ڪرڻ، ۽ آلوده هڪ ڀيرو استعمال ٿيندڙ شين کي حياتياتي ڪچري جي منظور ٿيل طريقي سان نيڪال ڪرڻ.

ڪلاس جا چار قاعدا گهڻي ڀاڱي خطري کي سنڀالين ٿا. هر سوئاب ۽ هر سلائيڊ لاءِ رڳو هڪ نمونو ڏيندڙ هجي؛ اهي ڪڏهن به ونڊيا نه وڃن. رڳو پنهنجو نمونو وٺو، ڀرسان ويٺل ڪنهن ٻئي جو نه. هڪ ڀيرو استعمال ٿيندڙ سوئاب ۽ ڏند کوٽڻ واريون ڪاٺيون سڌو مقرر ڪچري جي ٿانءَ ۾ وڃن، واپس ميز تي نه. ميٿيلين بلو پاڻ چمڙي ۽ ڪپڙن تي داغ ڇڏي ٿو ۽ اکين ۾ جلن پيدا ڪري ٿو، تنهنڪري دستانا ۽ رنگن سان ڪم ڪرڻ جا عام صفائيءَ جا اصول لاڳو ٿين ٿا. هن مشق کي سميئر مان ڪنهن به شيءِ جي ڪلچر وڌائڻ تائين نه وڌايو، ۽ اسڪول جي حفاظتي طريقيڪار کان ٻاهر تازي انساني مواد کي پنهنجي ٺاهيل طريقي سان گرميءَ ذريعي تثبيت نه ڪريو.

ڇا ڏسجي، ۽ اهو ائين ڇو نظر اچي ٿو

100x تي ويڪرا، چپٽا، هلڪا نيرا خليا ڳوليو، جن جون ٻاهريون حدون اڻ هڪجهڙيون بيضوي يا گهڻ ڪنڊيون هجن. اهي اڪيلا يا هلڪي نموني هڪ ٻئي تي چڙهيل تهن ۾ هوندا آهن. هر خلي ۾ عام طور هڪ وڌيڪ گهاٽو نيرو ٽٻڪو هوندو آهي. اهو ٽٻڪو مرڪزڪ آهي. ترتيب تي به ڌيان ڏيو: چپٽا اپيٿيليئل خليا سنهين ٽائلن جهڙا آهن، گولن جهڙا نه، تنهنڪري انهن جا ڪنارا گول ڦوڪڻن بدران چيرون پيل چمڪدار تهه جهڙا نظر اچن ٿا.

400x تي ٽي خاصيتون صاف ڌار نظر اچن ٿيون. خلي جي حد هڪ سنهي، وڌيڪ گهاٽي ليڪ جي صورت ۾ نظر اچي ٿي، جيڪا خلي کي گهيري ٿي. سائٽوپلازم اندرئين حصي کي هلڪي هڪجهڙي نيري رنگ سان ڀري ٿو. مرڪزڪ وڌيڪ گهاٽو ۽ ٺوس نظر اچي ٿو، اڪثر بيضوي هوندو آهي، ۽ عام طور وچ جي ويجهو هوندو آهي، پر هميشه نه. شاگردن کي چئو ته انهن ٽنهي سان گڏ شڪل ۽ وڏائي به درج ڪن، ڇو ته ڪم جي شيٽ ۾ بلڪل اهي ئي شيون گهريون ويون آهن.

هتي درستگيءَ بابت هڪ اهم نڪتو آهي، جيڪو ڪيترين ڪم جي شيٽن ۾ غلط ڏنو ويندو آهي. نظر ايندڙ حد پلازما جھليءَ واري علائقي سان لاڳاپيل آهي، پر جھلي پاڻ، جيڪا لڳ ڀڳ 7 کان 10 نينوميٽر ٿلهي لپڊ جي ٻٽي تهه آهي، اسڪول جي خوردبين جي ڌار سڃاڻڻ جي صلاحيت کان گهڻو هيٺ آهي. شاگرد جيڪو ڏسن ٿا، اهو خلي جو بصري ڪنارو ۽ اتي گڏ ٿيل رنگ آهي. خلوي عضون بابت به ساڳي احتياط ضروري آهي. مائٽوڪانڊريا، اينڊوپلازمڪ ريٽيڪيولم، گولجي جسم ۽ رائبوسوم هن تياريءَ ۾ نظر نٿا اچن. سٺين حالتن ۾ روايتي روشنيءَ واري خوردبين لڳ ڀڳ 0.2 مائڪروميٽر تائين تفصيل ڌار سڃاڻي سگهي ٿي، جيئن خوردبيني اوزارن بابت NCBI جو خلوي حياتيات وارو پسمنظر سمجهائي ٿو، ۽ گهڻيون انتهائي نفيس بناوتون ان حد کان هيٺ يا ان جي ويجهو هونديون آهن. وڌيڪ خالي وڏائي تصوير کي وڏو ڪري ٿي، پر وڌيڪ تفصيل نٿي وڌائي.

مرڪزڪ سڀ کان گهاٽو رنگ ڇو وٺي ٿو؟ ميٿيلين بلو هڪ ڪيٽيوني رنگ آهي، جيڪو محلول ۾ مثبت چارج رکي ٿو، ۽ خلي ۾ منفي چارج واري مواد سان ڳنڍجي ٿو، خاص ڪري نيوڪليڪ ايسڊن سان. ڪروميٽن مرڪزڪ ۾ DNA کي مرڪوز ڪري ٿو، تنهنڪري مرڪزڪ سڀ کان وڌيڪ رنگ گڏ ڪري ٿو. سائٽوپلازم ۾ RNA ۽ ٻيا چارج وارا ماليڪيول هوندا آهن، تنهنڪري اهو به رنگجي ٿو، پر وڌيڪ پکڙيل ۽ هلڪي نموني. اهم وضاحت هيءَ آهي: ميٿيلين بلو خاص طور DNA لاءِ مخصوص رنگ ناهي. مرڪزڪ جي تصويرڪشيءَ ۾ ميٿيلين بلو جي ورڇ بابت تحقيق بيان ڪري ٿي ته ڪيٽيون نيوڪليڪ ايسڊن سان ڀرپور علائقن سان ڳنڍجي ٿو، ۽ خلوي تيارين ۾ ميٿيلين بلو جي ڳنڍجڻ بابت پراڻي مقداري تحقيق ۾ مليو ته ڳنڍيل رنگ جو وڏو حصو نيوڪليڪ ايسڊن سان لاڳاپيل هو. تنهنڪري گهاٽو مرڪزڪ ۽ هلڪو سائٽوپلازم بصري فرق جو هڪ نمونو آهي، ماليڪيولي جاچ نه.

شاگرد جيڪي غلطيون ڪندا، ۽ انهن کي ڪيئن سمجهجي

لڳ ڀڳ هر ناڪام سلائيڊ پنجن مان ڪنهن هڪ نموني ۾ اچي ٿي. شاگردن کي سيکاريو ته بنا سوچڻ جي ساڳيو ڪم ورجائڻ بدران سلائيڊ جي خرابي سڃاڻن.

وڌيڪ رنگڻ سان خليا ۽ پسمنظر هڪجهڙا گهاٽا ٿي وڃن ٿا، تنهنڪري مرڪزڪ نظر ايندڙ ميدان ۾ گم ٿي وڃي ٿو. ان کي گهٽ وقت رنگڻ يا وڌيڪ چڱيءَ طرح ڌوئڻ سان درست ڪريو. گهٽ رنگڻ سان رڳو هلڪا پاڇا رهجي وڃن ٿا، جيڪي روشني وڌائڻ سان گم ٿي وڃن ٿا؛ وقت ٽيهه سيڪنڊن جي واڌ سان وڌايو. ٿلها سميئر هڪ ٻئي تي چڙهيل گهاٽا ڍير ٺاهين ٿا، جن ۾ ڪا حد سڃاڻي نٿي سگهجي؛ ان جي درستگي عملي آهي: ايندڙ ڀيري وڌيڪ سنهو پکيڙيو، ڇو ته ڌوئڻ سان خلين جو ڍير درست نٿو ٿئي. هوا جا ڦوڪڻا تيز، گهاٽن ڪنارن وارن مڪمل گولن وانگر نظر اچن ٿا ۽ نون سکندڙن جو ڌيان هٽائين ٿا، جيڪي انهن کي خلوي بناوتون سمجهن ٿا؛ ڍڪڻ واري شيشي جي پٽي کي ٻيهر ترڇي زاويي تي آهستي رکو. خلين تي يا انهن جي چوڌاري پکڙيل ننڍڙا گهاٽا ٽٻڪا عام طور وات جا معمولي بيڪٽيريا هوندا آهن، جيئن اسڪولي طريقيڪار، مثال طور Ingrid Science جو ڳل جي خلين وارو طريقو، ڄاڻائين ٿا. اهي تصديق ڪن ٿا ته وات ۾ جاندار رهن ٿا، جيڪا ڳالهه شاگردن لاءِ يادگار ٿي سگهي ٿي، پر هن مشق ۾ انهن کي نوع جي سطح تائين سڃاڻي نٿو سگهجي ۽ انهن کي خلي جا حصا سمجهي نه ڪڍڻ گهرجي. کاڌي جا رهيل ذرڙا ۽ بلغم جون تندون اڻ هڪجهڙو ۽ گهاٽو رنگ وٺن ٿيون؛ اڳواٽ ڪُلي ڪرڻ جو مقصد انهن کي گهٽائڻ آهي.

هيءَ مشق ڇا نٿي ڪري سگهي

هي هڪ تعليمي مشاهدو آهي، تشخيصي جاچ نه. ڪلاس ۾ رنگيل خلين جي ظاهر مان انفيڪشن، ڪينسر يا ڪنهن به بيماريءَ جي تشخيص نٿي ڪري سگهجي، ۽ مضمون کي ان جي ابتڙ اشارو سمجهي نه پڙهڻ گهرجي. هيءَ تياري ٻن وڏاين تي شڪل، حد، سائٽوپلازم ۽ مرڪزڪ ڏيکاري ٿي. اها جھليءَ جي انتهائي نفيس بناوت، خلوي عضون جا تفصيل يا ماليڪيولي سڃاڻپ نٿي ڏيکاري. حد کي صاف بيان ڪرڻ سان سائنس ۽ شاگردن ٻنهي جي حفاظت ٿئي ٿي: سٺو نتيجو اهڙي صحيح نالن سان نشان لڳل خاڪي کي چئبو، جنهن ۾ وڏائي ۽ استعمال ٿيل رنگ درج هجي، نه صحت بابت ڪنهن نتيجي کي.

شاگردن جي ڪم جي شيٽ ۽ نالن سان نشان لڳل خوردبيني تصويرون

هن صفحي لاءِ منصوبي جا ٻه وسيلا آهن: مٿي ڏنل نالن سان نشان لڳل خوردبيني تصوير ۽ هيٺ ڏنل ڪم جي شيٽ. هر شاگرد لاءِ ڪم جي شيٽ جي هڪ ڪاپي ڇپايو، يا ان کي اسڪرين تي ڏيکاري شاگردن کان خانا سندن نوٽ بڪن ۾ نقل ڪرايو.

45 منٽن جي سيشن ۾ ان کي ڪيئن استعمال ڪجي: حفاظت بابت ڄاڻ ۽ نمونو وٺڻ لاءِ ڏهه منٽ، رنگڻ ۽ مائونٽ تيار ڪرڻ لاءِ ڏهه منٽ، ٻنهي وڏاين تي مشاهدي ۽ خاڪا ٺاهڻ لاءِ پندرهن منٽ، ۽ چڪاس جي فهرست ۽ نالن سان نشان لڳل خوردبيني تصوير سان ڀيٽ لاءِ ڏهه منٽ. چڪاس جي فهرست جا نقطا ڄاڻي واڻي سڌا عملي رکيا ويا آهن. سنهو سميئر، رنگڻ جو صحيح وقت، سائٽوپلازم کان وڌيڪ گهاٽو مرڪزڪ، ۽ درج ڪيل وڏائي. جيڪو شاگرد چئني تي صحيح جو نشان لڳائي سگهي ٿو، تنهن اهو تصور سمجهي ورتو آهي، جيڪو هي سبق سيکارڻ لاءِ آهي: خوردبينون فرق ڏيکارين ٿيون، ۽ رنگ اهي فرق پيدا ڪن ٿا، جيڪي ڏيکارڻ جوڳا آهن.