ميٿيلين بلو کي تيزاب مزاحم رنگائيءَ ۾ پسمنظر جي رنگ طور ڇو استعمال ڪيو وڃي ٿو

هڪ ٽيڪنيشن رنگائيءَ جو مڪمل سلسلو پورو ٿيڻ کان پوءِ ٿُڪ جي سمئير جو معائنو ڪري ٿو. نيري پسمنظر تي ڳاڙهيون سلاخون نما بيڪٽيريا چٽي نموني نظر اچن ٿيون، ۽ رپورٽ ۾ لکيو وڃي ٿو ته تيزاب مزاحم بيسلائي ڏٺا ويا آهن. ٻئي ڏينهن هڪ ٻي سلائيڊ تي هڪجهڙو نيرو پسمنظر آهي، جنهن ۾ ڳاڙهيون سلاخون نظر نٿيون اچن، ۽ ان کي تپ دق لاءِ منفي ڄاڻايو وڃي ٿو. انهن رپورٽن مان هڪ اهڙي دعويٰ ڪري ٿي، جنهن جي سلائيڊ مان تصديق نٿي ٿئي، ۽ اها پهرين رپورٽ ناهي.

مونجهارو تصوراتي آهي. ٽيڪنيشن نيري رنگ کي ڳولڻ واري ڪيميائي عمل جو حصو سمجهيو، ڄڻ ميٿيلين بلو مائيڪوبيڪٽيريا ڳولڻ ۾ مدد ڪئي هجي. ان ائين نه ڪيو. جڏهن ميٿيلين بلو سلائيڊ تائين پهچي ٿو، تڏهن جاچ اڳ ئي مڪمل ٿي چڪي هوندي آهي. رنگ رڳو پسمنظر کي رنگي ٿو ته جيئن نتيجو پڙهڻ جهڙو ٿئي. هي مضمون تيزاب مزاحم رنگائيءَ ۾ ميٿيلين بلو جو مقصد، ڪنهن ٻئي رنگ بدران نيرو چونڊڻ جو سبب، ۽ نيري پسمنظر تي ڳاڙهو رنگ ڏسي ڪهڙو نتيجو ڪڍڻ جائز آهي، بيان ڪري ٿو.

مختصر جواب

تيزاب مزاحم رنگائي هڪ فرق ڪندڙ جاچ آهي، جيڪا ٽن خيالن تي ٻڌل آهي. بنيادي رنگ، ڪاربول فُڪسن، هر خليي اندر داخل ڪرايو وڃي ٿو، جنهن ۾ ميڻ جهڙي ڀت وارا مائيڪوبيڪٽيريا به شامل آهن. رنگ لاهيندڙ تيزاب-الڪوحل عام خلين مان ڳاڙهو رنگ ڪڍي ڇڏي ٿو، پر تيزاب مزاحم خلين مان ان کي ڪڍڻ ۾ ناڪام رهي ٿو. پوءِ پسمنظر وارو رنگ، ميٿيلين بلو، انهن سڀني شين کي رنگي ٿو جن مان رنگ لاهيندڙ مادو رنگ ڪڍي چڪو آهي. اهڙيءَ طرح غير تيزاب مزاحم خليا، ميزبان جا خليا ۽ خلوي ملبي جا ذرڙا نيرا نظر اچن ٿا، جڏهن ته تيزاب مزاحم بيسلائي ڳاڙها رهن ٿا. پسمنظر وارو رنگ بصري فرق پيدا ڪري ٿو. ڪنهن خليي کي تيزاب مزاحم بڻائيندڙ ڪيميائي خاصيت ۾ ان جو ڪو ڪردار ناهي.

هر قدم ڇا ڪري ٿو

هيٺيون خاڪو ڪم جي ورهاست ڏيکاري ٿو. طريقيڪار سمجهڻ لاءِ ان کي کاٻي کان ساڄي پڙهو، ۽ هيٺين پٽي کي ياد ڏياريندڙ طور پڙهو ته رنگائيءَ جي هر قسم جو سوال مختلف آهي.

پهريون قدم رنگ جو اندر داخل ٿيڻ آهي. مائيڪوبيڪٽيريا عام پاڻيءَ تي ٻڌل رنگن جي مزاحمت ڪن ٿا، ڇاڪاڻ⁠تہ سندن ٻاهرين تهه غيرمعمولي طور پاڻيءَ کي ڌڪيندڙ آهي، تنهنڪري طريقيڪار رنگ کي اندر داخل ڪرائي ٿو. زيل-نيلسن طريقي ۾ گرم ٻاڦ فينول وارو ڪاربول فُڪسن ميڻ جهڙي ڀت مان اندر پهچائي ٿي. ڪنيون جي ٿڌي طريقي ۾ گرميءَ بدران بنيادي رنگ جو گهڻو وڌيڪ طاقتور محلول استعمال ٿئي ٿو، ۽ ڪجهه تبديل ڪيل، بنا گرميءَ وارن نسخن ۾ مٿاڇري جو تناؤ گهٽائيندڙ مادا شامل ڪيا وڃن ٿا. آمريڪن سوسائٽي فار مائيڪروبايولاجي جا تيزاب مزاحم رنگائيءَ جا طريقيڪار ٻنهي محلولن جي ترڪيبن کي گڏ بيان ڪن ٿا، ۽ ڪنسنٽريشن جو فرق نمايان آهي: گرم طريقي لاءِ لڳ ڀڳ 0.3 g بيسڪ فُڪسن في 100 mL، جڏهن ته ٿڌي طريقي لاءِ لڳ ڀڳ 4 g.

ٻيو قدم فرق ڪرڻ آهي. تيزاب-الڪوحل، جيڪو عام طور 97 mL جي 95 سيڪڙو ايٿانول ۾ 3 mL مرڪوز هائڊروڪلورڪ تيزاب هوندو آهي، هر ان خليي مان ڳاڙهو رنگ ڌوئي ڪڍي ٿو جنهن جي ڀت ڪا خاص مزاحمت نٿي ڏيکاري. مائيڪوبيڪٽيريا جي سالم لپڊ تهه وارا خليا رنگ کي پاڻ وٽ رکن ٿا. سڄو طريقو هن قدم تي دارومدار رکي ٿو، ۽ اهو ئي قدم عملي ٽيڪنڪ کان سڀ کان وڌيڪ متاثر ٿئي ٿو، جيئن هيٺ بيان ڪيو ويو آهي.

آخري قدم بصري فرق پيدا ڪرڻ آهي. هاڻي سلائيڊ تي ڳاڙها تيزاب مزاحم خليا آهن، جن جي چوڌاري رنگ وڃايل خلين جو لڳ ڀڳ بي رنگ پسمنظر آهي. 0.3 سيڪڙو w/v ميٿيلين بلو ان پسمنظر کي ٻيهر ڏسڻ لائق بڻائي ٿو، اهڙي رنگ ۾ جيڪو ڳاڙهي کان وڌ ۾ وڌ مختلف هجي. پسمنظر جي رنگائي مختصر هوندي آهي، عام طور گرم طريقي ۾ 20 کان 30 سيڪنڊ ۽ ڪجهه ٿڌي طريقي جي صورتن ۾ چند منٽن تائين. وقت طريقيڪار تي دارومدار رکي ٿو، نه ڪي خود رنگ جي خاصيت تي.

هي رنگ ڇو، ۽ نيرو ڇو

ميٿيلين بلو هڪ مثبت آئن وارو بيسڪ رنگ آهي، يعني ان جو رنگين آئن مثبت چارج رکي ٿو ۽ رنگ لٿل بيڪٽيريا، ميزبان جي خلين ۽ ملبي جي منفي چارج وارين مٿاڇرين سان ڳنڍجي ٿو. اوپن اسٽيڪس مائيڪروبايولاجي چارج جي هن منطق کي بيسڪ رنگن پٺيان عام اصول طور بيان ڪري ٿي. پر هتي ميٿيلين بلو ڪيميائي لحاظ کان ڪو منفرد رنگ ناهي. ڪرسٽل وايوليٽ ۽ سيفرانن به بيسڪ رنگ آهن. چونڊ بصري آهي، ڪيميائي نه.

ڳاڙهين سلاخن لاءِ مختلف رنگ وارو پسمنظر ضروري آهي، ۽ روشن ميدان واري خوردبينيءَ لاءِ نيرو، ڳاڙهي جي مقابلي ۾ سڀ کان ڪارائتو فرق ڏيکاري ٿو. سيفرانن پسمنظر لاءِ نامناسب رنگ هوندو، ڇاڪاڻ⁠تہ ان جو آخري گلابي-ڳاڙهو رنگ برقرار رهيل ڪاربول فُڪسن جي رنگ جي تمام ويجهو آهي، جنهن سان طريقيڪار جو پيدا ڪيل فرق ئي ختم ٿي وڃي ٿو. ڪرسٽل وايوليٽ گهاٽو واڱڻائي پسمنظر ڏيندو، جيڪو سنهڙن ڳاڙهن بيسلائي سان ڌيان ڇڪائڻ ۾ مقابلو ڪندو. ان ڳالهه جو سڀ کان مضبوط ثبوت ته ڪم بصري فرق پيدا ڪرڻ آهي، نه ڪيميائي عمل، متبادل رنگن جو استعمال آهي: ڪجهه جانورن جي طب ۽ تبديل ڪيل طريقيڪارن ۾ ميلاڪائيٽ گرين ۽ برليئنٽ گرين جهڙا ساوا پسمنظر وارا رنگ استعمال ٿين ٿا ۽ جاچ پوءِ به ڪم ڪري ٿي، ڇاڪاڻ⁠تہ ڪو به چٽي نموني مختلف رنگ ساڳيو ڪم ڪري ٿو.

ان مان ٻه عملي نتيجا نڪرن ٿا. پهريون، معياري ترڪيب ۾ pH جي ڪا ترتيب مقرر ناهي؛ هن سادي پاڻيءَ واري 0.3 سيڪڙو محلول کي لوفلر جي ميٿيلين بلو جهڙين الڪلي ترڪيبن سان نه منجهايو، جيڪي رنگائيءَ جي هڪ مختلف تصور سان واسطو رکن ٿيون. ٻيو، وڌيڪ رنگ نقصانڪار آهي. هسٽولاجيءَ جي علمي مواد ۾ خاص خبرداري ڏنل آهي ته تمام گهاٽو نيرو پسمنظر ٿورن بيسلائي کي لڪائي سگهي ٿو؛ تنهنڪري سلائيڊ تي طريقيڪار جي اجازت کان وڌيڪ وقت رنگ رکڻ سان، ڪنهن فائدي کان سواءِ، پڙهڻ جي آساني گهٽجي ٿي.

ڀت جي ڪيميا جيڪا جاچ کي ممڪن بڻائي ٿي

تيزاب-الڪوحل جي فرق ڪرڻ جو سبب مائيڪوبيڪٽيريا جي ٻاهرين تهه ۾ آهي. ان جو بنيادي ڍانچو مائيڪولائل-ارابينوجليڪٽن-پيپٽيڊوگليڪان ڪمپليڪس آهي: پيپٽيڊوگليڪان ارابينوجليڪٽن سان ڳنڍيل هوندو آهي، جنهن جي ٻاهرين ڇيڙن سان تمام ڊگهي زنجير وارا مائيڪولڪ تيزاب لڳل هوندا آهن. اهي لپڊ سان ڀرپور ٻاهرين مائيڪوميمبرين ٺاهين ٿا، جنهن جي پارگذرڻ جي صلاحيت غيرمعمولي طور گهٽ آهي. مائيڪوبيڪٽيريا جي ٻاهرين جھليءَ جو جائزو هن بناوت جي تفصيل ڏئي ٿو. هي رڪاوٽ ٻنهي طرفن ۾ ڪم ڪري ٿي. اها رنگ جي اندر داخل ٿيڻ جي مزاحمت ڪري ٿي، تنهنڪري اندر پهچائڻ لاءِ گرمي يا وڌيڪ طاقتور بنيادي رنگ جي ضرورت پوي ٿي. اها رنگ جي ٻاهر نڪرڻ جي به مزاحمت ڪري ٿي، تنهنڪري ڪاربول فُڪسن اندر پهچڻ کان پوءِ تيزاب-الڪوحل ان کي ڪڍڻ ۾ ناڪام رهي ٿو. عام بيڪٽيريا وٽ اها تهه نه هوندي آهي ۽ اهي رنگ وڃائي ڇڏين ٿا. تنهنڪري تيزاب مزاحمت کي لپڊ جي رڪاوٽ واري خاصيت طور سمجهڻ بهتر آهي، نه ڪي فُڪسن جي مائيڪولڪ تيزاب سان ڪيميائي طور ڳنڍجڻ طور.

هي ڪيميا هڪ عام مونجهاري جي به وضاحت ڪري ٿي: گرام طريقي سان مائيڪوبيڪٽيريا جي رنگائي ڪمزور ۽ غيريقيني هوندي آهي؛ ڪڏهن اهي هلڪين داڻيدار شڪلين يا بي رنگ پاڇن وانگر نظر اچن ٿا. سندن پاڻيءَ کي ڌڪيندڙ ڀت ڪرسٽل وايوليٽ جي داخل ٿيڻ کي محدود ڪري ٿي. تيزاب مزاحم رنگائي، گرام رنگائيءَ جي تبديل ڪيل صورت ناهي. اها فرق ڪرڻ جو هڪ ٻيو اصول آهي، جيڪو ڀت جي هڪ ٻي خاصيت تي ٻڌل آهي، جيئن ٻين ٻن طريقن لاءِ سادي رنگائي ۽ گرام رنگائيءَ جي ڀيٽ ڏيکاري ٿي.

ٽي طريقا، ٽي سوال

هڪ رنگ وارن بيڪٽيريل طريقن جي وڌيڪ وسيع خاندان لاءِ، خوردبيني رنگائيءَ جو ائٽلس ڏسو.

نيري پسمنظر تي ڳاڙهو رنگ ڇا ثابت نٿو ڪري سگهي

ڳاڙهين سلاخن جو مطلب آهي ته جاندارن تيزاب-الڪوحل جي باوجود ڪاربول فُڪسن برقرار رکيو. هي مشاهدو Mycobacterium tuberculosis سان ٺهڪي اچي ٿو، پر CDC جي تپ دق جي تشخيص بابت رهنمائي واضح ڪري ٿي ته ٻيا مائيڪوبيڪٽيريا به تيزاب مزاحم آهن؛ تنهنڪري نوع جي سڃاڻپ لاءِ ڪلچر ۽ نيوڪليڪ ايسڊ جي جاچ گهربل آهي، رنگ نه.

عملي ٽيڪنڪ جون غلطيون گهڻو ڪري ڌوئڻ جي ٻن مرحلن سان لاڳاپيل هونديون آهن. گهٽ رنگ لاهڻ سان پسمنظر جو مواد ڳاڙهو رهجي وڃي ٿو ۽ غلط مثبت پڙهڻ جو امڪان پيدا ٿئي ٿو. وڌيڪ رنگ لاهڻ سان ڪمزور نموني برقرار رهيل بنيادي رنگ به لهي وڃي ٿو ۽ غلط منفي نتيجن ۾ حصو پوي ٿو. پسمنظر وارو رنگ تمام گهڻو لڳائڻ سان ٿورا بيسلائي نيري رنگ ۾ لڪي وڃن ٿا. ٿلها سمئير، راسب ٿيل ريجنٽ ۽ آلوده ڌوئڻ وارو پاڻي پنهنجا مصنوعي نقش پيدا ڪن ٿا.

ٽيڪنڪ ڀلي ڪيتري به صاف هجي، جاچ جي حساسيت جاندارن جي تعداد سان محدود آهي. روايتي سمئير خوردبينيءَ لاءِ ٿُڪ جي هر ملي ليٽر ۾ لڳ ڀڳ 5,000 کان 10,000 بيسلائي گهربل هوندا آهن، ۽ CDC جي پراڻن ثبوتن جي جائزي ۾ ڪلچر سان تصديق ٿيل ڦڦڙن جي ڪيسن ۾ سمئير جي حساسيت لڳ ڀڳ 45 کان 80 سيڪڙو ڄاڻائي وئي هئي. تنهنڪري منفي سمئير ڪڏهن به تپ دق کي خارج نٿو ڪري. CDC جي موجوده رهنمائي هر سمئير سان گڏ ڪلچر برقرار رکي ٿي ۽ گهٽ ۾ گهٽ هڪ ساهه جي رستي واري نموني تي نيوڪليڪ ايسڊ ايمپليفڪيشن جاچ جي سفارش ڪري ٿي، جڏهن ڦڦڙن جي تپ دق جو امڪان سمجهيو وڃي ۽ نتيجو ڪيس جي سنڀال ۾ تبديلي آڻي سگهي.

عملي ڪم منظور ٿيل طريقيڪارن موجب ٿيڻ گهرجي

تدريسي وضاحتون، جن ۾ هي مضمون به شامل آهي، ڪلينڪي ڪم جي اجازت نٿيون ڏين. ليبارٽريءَ جي عملي ڪم لاءِ ان جي تصديق ٿيل معياري عملي طريقيڪار تي عمل ڪريو، جيڪو CDC، APHL يا CLSI جي موجوده دستاويزن سان مطابقت رکي؛ CDC جي Stacks آرڪائيو ۾ رکيل تيزاب مزاحم رنگائيءَ جو حوالو ڏيکاري ٿو ته اهڙا طريقيڪار ريجنٽن ۽ نتيجن جي پڙهڻ کي ڪيئن مقرر ڪن ٿا. تپ دق جي نمونن تي ڪم لاءِ حياتياتي خطري جي روڪٿام ضروري آهي: سمئير حياتياتي حفاظت واري ڪيبنيٽ ۾ تيار ڪيا وڃن ٿا، ڇاڪاڻ⁠تہ تياريءَ سان هوا ۾ معلق باريڪ ذرڙا ۽ ڇنڊا پيدا ٿين ٿا. CDC جي ليبارٽري حفاظت واري رهنمائي ٻڌائي ٿي ته گرميءَ سان فڪس ڪيل سمئيرن ۾ به زنده تپ دق جا بيسلائي ٿي سگهن ٿا ۽ انهن کي پوءِ به آلوده سمجهي سنڀالڻ گهرجي. CDC پبلڪ هيلٿ اميج لائبريريءَ ۾ M. leprae لاءِ جاچيل ڪاربول فُڪسن ۽ ميٿيلين بلو واري سمئير جي داخلا تپ دق کان ٻاهر هن طريقي جي دائري جي ڪارائتي ياد ڏياريندڙ آهي: جتي به تيزاب مزاحم جاندار ڳوليا وڃن ٿا، اتي نيري تي ڳاڙهي جو ساڳيو بصري فرق ڪم اچي ٿو، ۽ احتياط سان پڙهيل منفي نتيجو به پاڻ ۾ رڪارڊ ڪرڻ جهڙو نتيجو آهي.

مڪمل ٿيل سلائيڊ کي پڙهڻ

پسمنظر واري رنگ جي اهميت ابتدائي ڇنڊڇاڻ دوران ظاهر ٿئي ٿي. گهٽ وڏائيءَ تي سلائيڊ ڏسندڙ خوردبين ماهر پهرين نيري پسمنظر مان سمئير جي معيار جو اندازو لڳائي ٿو: خلين جي هڪجهڙي ورڇ، فوڪس لاءِ ميزبان جا سالم خليا، ۽ ڳرو راسب نه هجڻ. پوءِ ڳاڙها امڪاني جاندار اک ڇڪين ٿا، خاص ڪري ان ڪري جو سلائيڊ تي ٻيو ڪجهه به ڳاڙهو ناهي. تصديق تيل ۾ ٻوڙيل آبجيڪٽو لينس سان ٿئي ٿي، جتي حقيقي بيسلائي رنگ جي هڪجهڙي ملبي بدران متوقع سنهڙين، ڪڏهن ٿورين وريل يا داڻيدار سلاخن وانگر نظر اچن ٿا.

پسمنظر جي رنگائي رپورٽ جا لفظ به طئي ڪري ٿي. ڳاڙهن بيسلائي واري سلائيڊ جي رپورٽ ۾ لکيو وڃي ٿو ته تيزاب مزاحم بيسلائي ڏٺا ويا آهن، ۽ اڪثر ليبارٽريءَ جي پيماني موجب هڪ نيم مقداري درجو به ڏنو وڃي ٿو. جنهن سلائيڊ تي ڳاڙها جاندار نه هجن، ان جي رپورٽ ۾ لکيو وڃي ٿو ته تيزاب مزاحم بيسلائي نه ڏٺا ويا آهن، ڪڏهن به اهو نه ته تپ دق لاءِ منفي آهي. هي فرق اهم آهي، ڇاڪاڻ⁠تہ نيرو پسمنظر ثابت ڪري ٿو ته رنگائي ڪم ڪيو، خلين پسمنظر وارو رنگ جذب ڪيو ۽ بصري نظام مناسب هو، پر ڳولڻ جي حد کان گهٽ تعداد ۾ موجود جاندارن بابت ڪجهه نٿو ٻڌائي. خالي نيرو ميدان سلائيڊ بابت هڪ جائز نتيجو آهي، مريض بابت فيصلو نه.

ڪم جي ورهاست ياد رکو ته رپورٽ لکڻ سولي ٿي ويندي. ڪاربول فُڪسن امڪاني جاندارن کي ظاهر ڪري ٿو. تيزاب-الڪوحل جاچ ڪري ٿو. ميٿيلين بلو رڳو جواب کي پڙهڻ لائق بڻائي ٿو: ڳاڙهي تيزاب جي باوجود رنگ برقرار رکيو، نيري اهو وڃايو. باقي سڀ ڪجهه، نوع، جاندارن جو تعداد ۽ ڪلينڪي مطلب، سلائيڊ کان ٻاهر ڪيل ڪم مان معلوم ٿئي ٿو.