آرٽيڪل
لوفلر جي الڪلائن ۽ پولي ڪروم ميٿيلين بلو رنگن جي وضاحت
رڱڻ واري ڪم جي ميز تي ٽي بوتلون گڏ رکيل ٿي سگهن ٿيون، جن مان هر هڪ تي ميٿيلين بلو جي ڪنهن قسم جو نالو لکيل هجي. هڪ تي آبي ميٿيلين بلو 1% لکيل آهي. ٻي تي لوفلر جو الڪلائن ميٿيلين بلو. ٽين تي پولي ڪروم ميٿيلين بلو. مصروف عملي جو ڪو فرد جيڪا بوتل ويجهي هجي، سا کڻي ٿو. پوءِ سمئير يا ته تمام هلڪو رڱجي ٿو، يا هڪجهڙو نيرو ٿي وڃي ٿو، يا ان ۾ واڱڻائي جا اڻڄاتل ڇانورا ظاهر ٿين ٿا، ۽ نتيجي جو ڏوهه نموني تي وڌو وڃي ٿو.
هي ترڪيب جو مسئلو آهي، نموني جو نه. ٽنهي محلولن ۾ هڪ ٻئي سان لاڳاپيل رنگ آهن، پر انهن ۾ رڱڻ جا مختلف تصور ڪم ڪن ٿا. هڪ لڳ ڀڳ غيرجانبدار pH تي هڪ سادو مثبت چارج وارو رنگ آهي. ٻيو ساڳيو رنگ آهي، جنهن کي الڪلي سان وڌيڪ زورائتو بڻايو ويو آهي. ٽيون هاڻي هڪڙو رنگ ئي ناهي، پر ڄاڻي واڻي آڪسائيڊ ڪيل آميزش آهي. غلط محلول استعمال ڪرڻ سان رڱڻ جو اصول توهان جي هٿن ۾ ئي بدلجي وڃي ٿو.
مختصر جواب
سادو آبي ميٿيلين بلو بنيادي معيار آهي: پاڻيءَ ۾ لڳ ڀڳ 1% رنگ، جيڪو بيڪٽيريا جي شڪلي بناوت ۽ عام خوردبيني مشاهدي لاءِ هڪ سادو مثبت چارج وارو رنگ آهي. لوفلر جي الڪلائن ميٿيلين بلو ۾ پاڻيءَ سان هلڪي ڪيل الڪوحل واري اسٽاڪ محلول ۾ هلڪي الڪلي جي ٿوري، ماپيل مقدار شامل ڪئي وڃي ٿي. ان سان pH وڌي ٿو ۽ مثبت چارج وارو رنگ بيڪٽيريا جي تيزابي جوڙجڪن سان وڌيڪ مضبوطيءَ سان لڳي ٿو. پولي ڪروم ميٿيلين بلو اهو ميٿيلين بلو آهي، جنهن کي الڪلي ۾ آڪسائيڊيشن ذريعي ڄاڻي واڻي پڪو ڪيو ويو هجي. تنهنڪري بوتل ۾ بچيل ميٿيلين بلو سان گڏ ميٿائل گروپ وڃايل هم سلسلي مرڪبن (azure A، azure B، azure C)، ٿائيونن ۽ ميٿيلين وايوليٽ جي آميزش هوندي آهي، ۽ اها آميزش مختلف جوڙجڪن کي مختلف رنگن ۾ رڱيندي آهي.
جيڪڏهن رڳو هڪ جملو ياد رکڻو هجي ته: الڪلائن ڪرڻ سان رڱڻ جي شدت بدلجي ٿي، جڏهن ته پولي ڪروم ڪرڻ سان رڱڻ جا رنگ بدلجن ٿا.
عام آبي ميٿيلين بلو: بنيادي حوالو
سڀ کان سادي ترڪيب پاڻيءَ ۾ حل ڪيل ميٿيلين بلو آهي، عام طور 1% w/v تي، بغير الڪلي ۽ بغير آڪسائيڊيشن جي. رنگ وارو ڪيميائي جزو ميٿائل ٿائيونينيم ڪيٽائن آهي، جنهن سان ڪلورائيڊ مخالف آئن گڏ هوندو آهي. هي هڪ ننڍو، هموار فينوٿايازين رنگ آهي، جنهن کي PubChem جي ميٿيلين بلو واري رڪارڊ ۾ ميٿائل ٿائيونينيم ڪلورائيڊ چيو ويو آهي. مثبت چارج وارو آئن هئڻ سبب اهو نيوڪليڪ ايسڊن جي فاسفيٽ واري بنيادي زنجير ۽ بيڪٽيريا جي خلوي ڀتين تي تيزابي گروپن سان ڳنڍجي ٿو، ۽ هلڪي پسمنظر جي سامهون خلين کي نيرو ڪري ٿو.
ان جي خوبي نتيجن جي اڳڪٿي ڪري سگهڻ آهي. نيوڪليئس ۽ بيڪٽيريا نيرا نظر اچن ٿا. تضاد وچولو هوندو آهي. هلڪا نظر ايندڙ جاندار ڪمزور نموني رڱجي سگهن ٿا، ۽ اها ئي حد هئي جنهن کي لوفلر دور ڪرڻ چاهيو ٿي. بيڪٽيريا کي سادي نموني رڱڻ جي وسيع درجي بابت، جنهن ۾ هي محلول شامل آهي، بيڪٽيريا جي سادي رڱڻ جو جائزو ڏسو. هتي به سڃاڻپ جي درستگي اهم آهي: ميٿائل بلو مڪمل طور مختلف ماليڪيول آهي، جيئن ميٿائل بلو ۽ ميٿيلين بلو جو فرق سمجهائي ٿو. تنهنڪري رڳو رنگ جي نالي سان ڪيٽلاگ ۾ ڳولا ڪرڻ سان رنگن جو غلط ڪيميائي درجو ملي سگهي ٿو.
لوفلر جو الڪلائن ميٿيلين بلو: ساڳيو رنگ، وڌيڪ زور سان
لوفلر جي روايتي ترڪيب ۾ الڪوحل واري ميٿيلين بلو اسٽاڪ محلول کي پاڻيءَ ۾ هلڪي الڪلي سان ملايو وڃي ٿو. درسي ڪتابن وارين ترڪيبن ۾ 95% ايٿانول جي 30 mL ۾ 0.3 g رنگ ۽ 0.01% آبي پوٽاشيم هائيڊرو آڪسائيڊ جا 100 mL گهربل هوندا آهن؛ يا برابر طور، سير ٿيل الڪوحل واري ميٿيلين بلو جا 30 mL، مقطر پاڻيءَ جا 100 mL ۽ 1% KOH جو 1 mL. ان سان واضح طور الڪلائن pH تي لڳ ڀڳ 0.3% رنگ وارو استعمال لائق محلول ٺهي ٿو. تجارتي صورتون به ساڳئي اصول تي هلن ٿيون، ۽ Thermo Fisher جي مائڪروبايولاجي رنگن واري ڪيٽلاگ ۾ لوفلر جو الڪلائن ميٿيلين بلو، پولي ڪروم ۽ آبي قسمن سان گڏ، الڳ استعمالن لاءِ الڳ ڪيٽلاگ شيون طور درج آهي.
بنيادي ڪردار الڪلي جو آهي. pH وڌائڻ سان نموني جي ڪاربوڪسل ۽ فاسفيٽ گروپن مان پروٽان نڪري وڃن ٿا، جنهن سان منفي چارج وارن هنڌن جي گهڻائي وڌي ٿي. ساڳئي وقت الڪوحل وارو اسٽاڪ رنگ کي مڪمل طور حل ٿيل رکي ٿو، تنهنڪري اهو انهن هنڌن تائين اڪيلي ماليڪيول واري صورت ۾ پهچي ٿو. نتيجي ۾ بيڪٽيريا غيرجانبدار آبي رنگ جي ڀيٽ ۾ وڌيڪ تيزيءَ ۽ شدت سان رڱجن ٿا، ۽ معمول جي بيڪٽيريالاجي سمئير ۾ سڃاتل گهرا نيرا ڏنڊا ۽ گول بيڪٽيريا نظر اچن ٿا. رڱڻ جو وقت عام طور هڪ کان ٽن منٽن تائين هوندو آهي، جنهن کان پوءِ پاڻيءَ سان ڌوئبو آهي.
روايتي استعمال لوفلر جي سيرم ميڊيم تي وڌايل ڪورينيبيڪٽيريم ڊفٿيريا لاءِ آهي: سنها، اڪثر گدي نما ڏنڊا، جن ۾ ذخيرو ٿيل پولي فاسفيٽ جا بيبس-ارنسٽ داڻا ميٽاڪروميٽڪ نموني سان گهرا رڱجن ٿا. ميڊيم ۽ رنگ جي هيءَ جوڙي تاريخي آهي، ۽ ٻنهي جو ڪريڊٽ ساڳئي بيڪٽيريا جي ماهر کي ڏنو وڃي ٿو؛ داڻن جو چٽو تضاد ان جو تشخيصي فائدو آهي. ڊفٿيريا جي ڪم کان سواءِ، هي رنگ ڪلچرن مان تيار ڪيل سمئيرن لاءِ عام بيڪٽيريالاجي رنگ طور، ڪلينيڪي سمئيرن ۾ نائيسيريا جي شڪلي بناوت ڏسڻ لاءِ، ۽ انهن هنڌن تي ڪم اچي ٿو جتي گرام رنگڻ ضروري نه هجي پر سادو آبي نيرو رنگ تمام هلڪو ثابت ٿئي. هي هڪ رنگ وارو محلول آهي. هر تيزابي جوڙجڪ نيري جي ڪنهن نه ڪنهن ڇانوري ۾ رڱجي ٿي. جڏهن طريقيڪار ۾ رنگن وسيلي فرق ڏيکارڻ گهربل هجي، تڏهن رڳو الڪلي اهو نٿي ڪري سگهي.
هڪ عملي احتياط: الڪلائن رنگ جا محلول ذخيرو ٿيڻ ۽ ڪاربان ڊاءِ آڪسائيڊ جذب ڪرڻ سان خراب ٿين ٿا ۽ انهن ۾ ترسيب ٺهي ٿي. ليبارٽريون يا ته محدود مقدار تيار ڪن ٿيون، يا ڪيٽلاگ وارو محلول خريد ڪري ان جي ذخيرو ڪرڻ واري مدت جو خيال رکن ٿيون، بدران اهڙي پراڻي بوتل کي هلائيندي رهڻ جي جيڪا هاڻي هر سلائيڊ تي تلڇٽ وجهي ٿي.
پولي ڪروم ميٿيلين بلو: هڪ نالو، ڪيترائي رنگ
پولي ڪروم ميٿيلين بلو ساڳئي رنگ مان شروع ٿئي ٿو، پر ان کي الڪلي ۾ ضابطي هيٺ آڪسائيڊيشن مان گذاريو وڃي ٿو، جنهن کي تاريخي طور پڪو ڪرڻ يا پولي ڪروم ڪرڻ چيو ويندو هو. الڪلائن حالت ۾ وقت گذرڻ، ڪاربونيٽ سان گرم ڪرڻ، يا ڊاءِ ڪروميٽ جهڙن عاملن سان آڪسائيڊيشن ڪرڻ، ڊاءِ ميٿائل امينو متبادل گروپن مان ميٿائل گروپ مرحليوار هٽائي ٿو. پيداوار هڪ آميزش هوندي آهي: بچيل ميٿيلين بلو سان گڏ azure B (هڪ ميٿائل هٽيل)، azure A ۽ azure C (وڌيڪ ميٿائل گروپ هٽيل)، ٿائيونن (سڀ ميٿائل گروپ هٽيل)، ۽ ميٿيلين وايوليٽ خاندان جون آڪسائيڊيشن سان ٺهيل ضمني پيداوارون. هر جزو جو پنهنجو رنگ ۽ اوڄن سان لڳاءُ هوندو آهي، تنهنڪري آميزش ميٽاڪروميٽڪ نموني رڱيندي آهي: نيوڪليئس، داڻا، ميوسن ۽ ڪارتليج هر هڪ نيري کان ڳاڙهي-واڱڻائي تائين الڳ ڇانورا وٺن ٿا.
هيءَ ڪيميا ئي مشهور رت جي رنگن جي پٺيان آهي. شروعاتي محققن ڏٺو ته الڪلائن ڪيل ميٿيلين بلو مليريا جي طفيلين جي نيوڪليئس کي واڱڻائي ڇانورن ۾ رڱي ٿو، پر انهن جا آبي، پڪا ڪيل محلول غيرمستحڪم هئا ۽ ڪجهه ڏينهن اندر ترسيب ٺاهيندا هئا. رت جو واڱڻائي رنگ ڪيئن ايجاد ٿيو بابت جائزو بيان ڪري ٿو ته مالاخووسڪي ۽ رومانوسڪي 1891 ۾ الڳ الڳ هن اثر کي ڪيئن استعمال ڪيو، رنگ جي ترسيب کي مستحڪم ڪرڻ ۽ گرميءَ کان سواءِ پتلي تهن کي تثبيت ڪرڻ لاءِ ميٿانول ڪيئن شامل ڪيو ويو، ۽ پوءِ گيمسا ڪيئن ماپيل azure B ۽ ايوسن تي ٻڌل آميزش کي گليسرول سان مستحڪم ڪري معياري بڻايو. جديد گيمسا قسم جا رنگ سڌي طرح پولي ڪروم ميٿيلين بلو ۽ ايوسن مان نڪتل آهن، اها ئي جوڙي جيڪا رومانوسڪي اثر پيدا ڪري ٿي. ايوسن سان جوڙي ۽ azure B جزو جي تفصيل لاءِ، رومانوسڪي قسم جا رنگ ۽ azure B ۽ ايوسن جو باهمي عمل ڏسو.
ڇاڪاڻ ته اهو هڪ آميزش آهي، تنهنڪري پولي ڪروم ميٿيلين بلو فطري طور ٽنهي مان سڀ کان گهٽ معياري ٿيل آهي. ان جي رنگن جو صحيح توازن آڪسائيڊيشن جي طريقي ۽ حد تي دارومدار رکي ٿو. ان ڪري اوڄن جي علم جا سپلائر ان کي پراڻي ٿيل لوفلر محلول طور نه، پر پنهنجي ڪارڪردگيءَ جي جاچ سان هڪ الڳ پيداوار طور وڪڻن ٿا. عام استعمالن ۾ ماسٽ خلين جي داڻن، ميوسن ۽ ڪارتليج کي ميٽاڪروميٽڪ نموني ظاهر ڪرڻ، پلازما خلين جي تفصيل ڏيکارڻ، ۽ گڊپاسچر قسم جي پولي ڪروم طريقن سان اوڄن جي سنهين ڪٽيل حصن ۾ هيليڪوبئڪٽر پائلوري ڏيکارڻ شامل آهن. جڏهن سوال رنگ وسيلي فرق ڪرڻ جو هجي، تڏهن هي صحيح چونڊ آهي؛ پر جڏهن طريقيڪار ۾ بيڪٽيريا جو صاف، هڪ رنگ وارو خاڪو گهربل هجي، تڏهن هي غلط چونڊ آهي.
ترڪيب ۽ مقصد جو مقابلو
| ترڪيب | بوتل ۾ ڇا آهي | pH جي نوعيت | رڱڻ جو اصول | ڪڏهن استعمال ڪجي |
|---|---|---|---|---|
| آبي ميٿيلين بلو (~1%) | پاڻيءَ ۾ ميٿيلين بلو | لڳ ڀڳ غيرجانبدار | هڪڙو مثبت چارج وارو رنگ نيوڪليڪ ايسڊن ۽ ڀتين جي تيزابي گروپن سان ڳنڍجي ٿو؛ هڪ رنگ وارو نيرو | معمول جي شڪلي بناوت، تدريسي سمئير، عام خوردبيني مشاهدو جتي گهڻو تضاد گهربل نه هجي |
| لوفلر جو الڪلائن ميٿيلين بلو (~0.3% رنگ ۽ هلڪو KOH) | الڪوحل واري اسٽاڪ مان هلڪو ڪيل ميٿيلين بلو، گڏوگڏ ~0.01% الڪلي | الڪلائن | ساڳيو مثبت آئن پروٽان وڃايل تيزابي هنڌن تي وڌيڪ زور سان لڳي ٿو؛ وڌيڪ تيز ۽ شديد هڪ رنگ واري رڱڻ | عام بيڪٽيريالاجي، داڻن جي تضاد وارا ڊفٿيريا سمئير، هلڪا نظر ايندڙ جاندار جيڪي غيرجانبدار رنگ سان چڱيءَ طرح نٿا رڱجن |
| پولي ڪروم ميٿيلين بلو | آڪسائيڊيشن سان ميٿائل گروپ وڃايل آميزش: azure A، azure B، azure C، ٿائيونن، ميٿيلين وايوليٽ، بچيل ميٿيلين بلو | تياريءَ دوران الڪلائن؛ آميزش طور مهيا ڪيل | مختلف لڳاءَ وارا ڪيترائي هم سلسلي مرڪب ميٽاڪروميٽڪ، گهڻ رنگا ڇانورا پيدا ڪن ٿا؛ ايوسن سان گڏ رومانوسڪي رنگن جو بنياد | ماسٽ خليا، ميوسن، اوڄن جي ميٽاڪروميشيا، گيمسا قسم جي نڪتل رنگن وسيلي رت ۽ طفيلين جو ڪم |
هن جدول کي فيصلي جي طريقي طور پڙهو. جيڪڏهن نمونو تمام هلڪو رڱجي ٿو، ته pH وارو تصور بدلايو ۽ لوفلر جو محلول کڻو. جيڪڏهن سڀ ڪجهه رڱجي ٿو پر ڪا شيءِ ٻيءَ کان الڳ نٿي سڃاڻجي، ته رنگ وارو تصور بدلايو ۽ پولي ڪروم کڻو. جيڪڏهن لوفلر واري سمئير ۾ داڻا سهڻي نموني ظاهر ٿين ٿا، پر نگران پڇي ٿو ته نيوڪليئس ۽ سائيٽوپلازم هڪڙي ئي نيري رنگ ۾ ڇو آهن، ته جواب اهو آهي ته ڪو به الڪلائن، هڪ رنگ وارو محلول اهو ڪم نٿو ڪري سگهي. اهو سوال پولي ڪروم خاندان ۽ ان مان نڪتل رت جي رنگن سان لاڳاپيل آهي.
عام مونجهارن کان بچڻ
گهڻو مونجهارو ٻن غلطين سبب ٿئي ٿو. پهرين غلطي لوفلر جي محلول کي سادي ميٿيلين بلو جي جاءِ تي استعمال لائق سمجهڻ آهي، ڇاڪاڻ ته ٻئي بوتل ۾ نيرا نظر اچن ٿا. انهن جي pH ۽ شدت مختلف آهي، ۽ جتي لوفلر جو محلول مقرر ٿيل هجي اتي غيرجانبدار رنگ رکڻ سان داڻن جو اهو ئي تضاد وڃائجي ٿو، جنهن کي سامهون رکي طريقيڪار ٺاهيو ويو هو. ٻي غلطي ڪنهن به پراڻي يا اتفاقي طور وقت گذريل الڪلائن نيري محلول کي پولي ڪروم سمجهڻ آهي. بي ضابطي سان وقت گذرڻ اڻڄاتل طاقت واري اڻڄاتل آميزش پيدا ڪري ٿو، جڏهن ته حقيقي پولي ڪروم محلول مقرر آڪسائيڊيشن طريقن سان تيار ٿين ٿا ۽، رت جي رنگن واري سلسلي ۾، ماپيل ايوسن سان گڏايا وڃن ٿا. هتي تاريخ سبق ڏئي ٿي: 1890 واري ڏهاڪي جا غيرمستحڪم آبي، پڪا ڪيل محلول ميٿانول سان مستحڪم ڪيل ترڪيبن سان ان ڪري بدلايا ويا جو بي ضابطي واريون آميزشون ساڳئي نموني ٻيهر ٺاهي نٿي سگهيون. اڻپڪ عمر واري بوتل مان تشخيصي سلائيڊ رڱڻ کان اڳ هي سبق ياد ڪرڻ جهڙو آهي.
نالي جي درست سڃاڻپ معاملو مڪمل ڪري ٿي. رنگ ڏسي اندازو لڳائڻ بدران، ليبل تي ڪيٽلاگ جي شيءِ (آبي، لوفلر يا پولي ڪروم)، رنگ جي مقدار ۽ مقرر استعمال جي پڪ ڪريو. ٽنهي ترڪيبن جي رنگ ڏيندڙ ڪيميائي جوڙجڪ جو بنياد ساڳيو آهي. انهن جو مقصد ساڳيو ناهي.