مقاله
د زیبرا کب په څېړنو کې مېتیلین بلو: د روزنې ورزیاتېدونکی مواد او د تجربې ګډوډوونکی عامل
د زیبرا کب د هګیو اوبه ډېری وخت لږې شنېنیلي وي، او نږدې هېڅوک یې لامل نه ثبتوي. دا رنګ مېتیلین بلو دی چې د فنګس پر ضد ورزیاتېږي، او ډېری پروتوکولونه یې د شالید یوه برخه ګڼي. دلته د شالید مفهوم سم نه دی. غوره تعبیر یې یو ناثبت شوی تجربوي عامل دی: داسې څه چې په درملنه شوو لوښو کې شته او په کنټرولونو کې نشته، په کارول شوو غلظتونو کې درملپوهنیز فعالیت لري، او هماغه پایشاخصونه بدلولی شي چې تجربه یې اندازه کوي.
همدا توپیر لاندې ټول بحث منظموي. د فنګس پر ضد د روزنې معمول کارول یوه پوښتنه ده. دا چې دغه ورزیات شوی مواد ستاسو د ازمېښت په تړاو بېاغېزې دی که نه، بله پوښتنه ده. د زیبرا کب وروستۍ څېړنیزې لیکنې لومړۍ ته ډاډ ورکوونکی او دویمې ته اندېښمنوونکی ځواب ورکوي.
لارښودونه په حقیقت کې څه سپارښتنه کوي
یو واحد معیار نشته، او دا د ستونزې یوه برخه ده. د حیواناتو د پاملرنې د کاناډا شورا لارښود د فنګسي ودې د کمولو لپاره د هګیو او لاروا د لېږد په محلول کې 0.5 mg/L، یا 0.00005%، ته اجازه ورکوي. د اروپايي لابراتواري حیواناتو لارښود داسې جنینونه بیانوي چې په داسې منځني محلول کې ساتل کېږي چې ډېری وخت همدا 0.00005% پکې وي. د Cold Spring Harbor د E3 ترکیب د ترکیب د یوې برخې په توګه د دې دوه برابره، یعنې 1 mg/L یا 0.0001%، ټاکي. د دې پر وړاندې یوه څرګنده تشه شته: د OECD د کب د جنین د زهریت د ازموینې لارښود له سره جوړې شوې رقیقوونکې اوبه او ازمویل کېدونکې کیمیاوي ماده مشخصوي، خو نه یې د 2013 په نسخه او نه په وروستۍ بیاکتنه کې د مېتیلین بلو سپارښتنه شته. نو یو لابراتوار د زیبرا کب جنینونه د ژوند له لومړیو ساعتونو څخه په مېتیلین بلو لرونکو نیلي اوبو کې روزي، بل بیا د مقرراتو له مخې د جنین ازمېښت په بېرنګو اوبو کې ترسره کوي، او دواړه خپل منځنی محلول عادي بولي. هر څوک چې د لابراتوارونو ترمنځ پایلې پرتله کوي، یا د پخوانیو ازموینو کنټرولونه سره یوځای کوي، دغه ناهمغږي ورپاتې کېږي.
د غلظتونو د وضاحت لپاره، 0.00005% شاوخوا 1.56 مایکرومولر او 0.0001% شاوخوا 3.13 مایکرومولر دی. دا ټیټې شمېرې دي، او سړی ښايي داسې وانګېري چې دومره ټیټې دي چې اغېزه نه لري. لاندې څېړنې همدا انګېرنه په همدغو غلظتونو کې ازمويي.
هغه لوستونکي چې د لابراتوار پر ځای د کب ساتنې له برخې راځي، له همدې مالیکول سره په بل چاپېریال کې مخ کېږي، چې د مېتیلین بلو د اکواریوم لارښود کې بیان شوی دی. کیمیا یې یوه ده؛ دا بحث چې رنګ څنګه په حجرو کې الکترونونه لېږدوي، روښانوي چې ولې د اکسیدېشن او احیا فعال مرکب بیا بیا د میتابولیزم په څېړنو کې راڅرګندېږي. لاندې بحث په ځانګړي ډول د زیبرا کب د هګیو هغو اوبو ته ځانګړی دی چې مېتیلین بلو لري.
میتابولیزم: د اغېزې لوری له پړاو سره بدلېږي
تر ټولو معلوماتي څېړنې په عادي ډول وده کوونکي زیبرا کبان د ژوند له لومړۍ ورځې د القاح تر 5 ورځو وروسته پورې له رنګ سره مخ کړل او په هر پړاو کې یې اکسیداتیف میتابولیزم اندازه کړ، لکه څنګه چې د جنین د میتابولیزم د تجربو خپور شوی راپور یې بیانوي. دا بڼه باید په دقت بیان شي، ځکه لوری یې سرچپه کېږي.
د القاح په 1 ورځ وروسته، په دواړو روزنیزو غلظتونو کې د رنګ سره مخ شوو جنینونو د اکسیجن بنسټیز مصرف لوړ شو. په 2 ورځو کې، د لاروا په سطحي پوړ کې د مایټوکانډریا د غشا پوتنسیال د 0.00005%، 0.0001% او 0.0003% په ټولو تماسونو کې لوړ شوی و. تر 4 تر 5 ورځو پورې، له هګۍ څخه تر راوتلو وروسته، د اغېزې لوری سرچپه شوی و: د اکسیداتیف انرژۍ لګښت راکم شو، که تماس له القاح راهیسې پرلهپسې و او که یوازې له 3 ورځې تر 4 ورځې لنډمهاله تماس و. په ورته وخت کې، د مایټوکانډریا د تنفسي کمپلکس د فرعي واحدونو اړوند ټرانسکرېپټونه په 1 او 4 دواړو ورځو کې راکم شول، او ورسره د سټېرویډونو او له غیرکاربوهایډرېټي سرچینو څخه د ګلوکوز له جوړېدو سره تړلي ټرانسکرېپټونه هم کم شول.
دوه نورې مشاهدې دا انځور لا روښانه کوي. په لوړ روزنیز غلظت کې له هګیو راوتل لږ وختي وشول؛ له رنګ سره مخ شوي جنینونه په 2 ورځو کې مخکې وو، خو کنټرولونه تر 3 ورځې پورې ورسره برابر شول. او د فشار د غبرګون محور خپله سالم ښکارېده: کله چې 5 ورځنۍ لاروا د تاوېدونکي خوځښت له فشار عامل سره مخ شوه، په دواړو ډلو کې د ټول بدن کورټیزول په عادي ډول لوړ شو. نو په دغو اندازو کې رنګ د ودې عمومي زهر نه دی، او هر فزیولوژیک غبرګون نه ځپي. دا د انرژۍ میتابولیزم د پړاو له مخې بدلوي: له هګۍ تر راوتلو مخکې یې لوړوي او وروسته یې راکموي.
چلند: ولې دوه څېړنې سره اختلاف لري، او ولې دواړه سمې کېدای شي
د چلند څېړنیزې لیکنې تر هغه متناقضې ښکاري چې د تماس طرحې یې څنګ په څنګ کېښودل شي. یوې د ودې او چلند د خوندیتوب څېړنې جنینونه د القاح له شاوخوا 6 ساعتونو وروسته تر 10 مایکرومولر پورې غلظتونو سره مخ کړل، تر 4 ورځې پورې یې هره ورځ محلولونه نوي کړل، بیا یې لاروا د 5 او 6 ورځو لپاره بېرنګه منځني محلول ته ولېږدوله او په 6 ورځ یې د رڼا او تیارو په ازمېښت کې خوځښت وازمایه. پایله: پر مړینې، له هګیو راوتلو یا مورفولوژۍ د پام وړ اغېزه نه وه، او پر خوځښت د درملنې اغېزه هم نه وه. لیکوالانو په معقول ډول د خپلو شرایطو لاندې 10 مایکرومولر د لوړې پولې په توګه سپارښتنه وکړه.
دویمې ډلې، چې ځینې لیکوالان یې د میتابولیزم په څېړنه کې هم وو، تماس په هغه ډول ترسره کړ چې روزنه عملاً پرې کېږي: رنګ د القاح له 2 تر 3 ساعتونو وروسته موجود و، هره ورځ د محلول یوه برخه نوې کېده، او چلند په داسې وخت کې اندازه کېده چې تماس لا روان و یا تازه پای ته رسېدلی و. په همدغو معمول غلظتونو کې، لاروا په یوه 24 ساعته ازمېښت کې لږ خوځښت وښود، چې دا پایله په بېلابېلو سویو او لابراتوارونو کې بیا تکرارېدله. د چلندي ګډوډۍ څېړنې د اغېزې سرچینه د سېروټونیني فعالیت له کچې سره وتړله، چې د رنګ له پېژندل شوي مونوامین اکسیدېز مخنیوي سره سمون لري. تر ټولو څرګنده نښه دا وه چې د جنین مېتیلین بلو لرونکي منځني محلول د SSRI فلوکسیټین په وړاندې د خوځښت تمه کېدونکی غبرګون پټ کړ. له همدې امله، په نیلي اوبو کې ترسره شوی سکرینینګ ازمېښت د درملو هغه اغېزه له پامه غورځولی شي چې بېرنګې اوبه به یې څرګنده کړي.
په حقیقت کې هېڅ تناقض نشته. یو مرکب کېدای شي په یوه ازمېښت کې تر مینځلو او لرې کېدو دوه ورځې وروسته د اغېزې هېڅ د کشف وړ پاتې شونی ونه لري، خو په بل ازمېښت کې د موجودیت پر مهال لا فعال وي. عملي تعبیر دا دی چې د اغېزې نه موندلو پایله د غلظت یوه لوړه پوله توجیه کوي، نه د بېاغېزې والي ادعا؛ خو د اغېزې موندلو پایله هغه خطر بیانوي چې مهم دی: د اندازهګیرۍ په موده کې فعال تماس، په هماغه ترتیب کې چې ډېری لابراتوارونه یې کاروي.
د اکسیدېشن او احیا په ازمېښت کې د اکسیدېشن او احیا رنګ
یو بل دام د جلا پراګراف وړ دی، ځکه د حیوان پر ځای د اندازهګیرۍ وسیله ګډوډوي. د انرژۍ د لګښت د Alamar Blue ازمېښت پخپله د اکسیدېشن او احیا کیمیا ده: رېزازورین په فلورېسنت رېزوروفین احیا کېږي. مېتیلین بلو هم د اکسیدېشن او احیا په کیمیا کې برخه لري. په بېحجرو کنټرولونو کې، دواړو روزنیزو غلظتونو له 24 ساعتونو وروسته د Alamar Blue فلورېسنس لږ، خو په احصایوي لحاظ د پام وړ، راکم کړ. په حیواني تجربو کې، له رنګ سره مخ شوي جنینونه تر ازمېښت مخکې لږ تر لږه درې ځله په بېرنګه منځني محلول کې ومینځل شول، او له هګیو راوتلې لاروا کې بیولوژیکه اغېزه تر بېحجرو مداخلې زیاته وه. نو دواړه خبرې سمې دي: مینځل شوي حیوانات رښتینې میتابولیکه اغېزه لري، او نه مینځل شوی رنګ پرې یو مستقیم کیمیاوي مصنوعي انحراف ورزیاتوي. کنټرولونه باید دا دواړه سره بېل کړي، کنه هېڅ یوه شمېره معنا نه لري. د رنګمحورو ازمېښتونو د پایلو د لوستلو عمومي لارښوونې دلته ځانګړی اهمیت لري.
د ودې د پړاوونو مهالوېش
د دې مقالې اصلي محتوا. پرته له هغو ځایونو چې جلا یادونه شوې، غلظتونه د روزنې دوه معیاري ارزښتونه، 0.00005% او 0.0001%، دي.
| پړاو | څه ازمویل شوي وو | په روزنیزو غلظتونو کې موندنه |
|---|---|---|
| 0 تر 1 dpf، له هګۍ تر راوتلو مخکې جنین | د اکسیجن بنسټیز مصرف، د مایټوکانډریا ټرانسکرېپټونه | مصرف لوړ؛ د کمپلکس I او IV ټرانسکرېپټونه کم |
| 2 dpf، له هګۍ د راوتلو موده | د غشا پوتنسیال؛ له هګۍ د راوتلو پرمختګ | پوتنسیال له 0.00005% تر 0.0003% پورې لوړ؛ په 0.0001% کې له هګۍ راوتل لنډمهاله مخکې شوي |
| 3 تر 4 dpf، له هګۍ تر راوتلو وروسته لنډمهاله تماس | یوازې له 24 h تماس وروسته د انرژۍ لګښت | لګښت کم، له پرلهپسې تماس سره برابر |
| 4 تر 5 dpf، له هګۍ راوتلې لاروا | د انرژۍ لګښت؛ د مایټوکانډریا ټرانسکرېپټونه | په 24 او 48 h کې لګښت کم؛ د کمپلکس I، II، III او ATP سنتېز ټرانسکرېپټونه کم |
| 5 تر 6 dpf، د لاروا چلند | 24 ساعته خوځښت؛ د فلوکسیټین غبرګون | خوځښت کم؛ د SSRI غبرګون پټ شوی |
| 6 dpf، د رنګ تر 2 ورځني لرې کولو وروسته | په رڼا او تیارو کې خوځښت؛ مورفولوژي | تر 10 مایکرومولر پورې هېڅ پاتې اغېزه نشته |
د یادولو وړ بڼه په میتابولیکو پایشاخصونو کې لومړنی لوړوالی او وروسته ټیټوالی دی؛ چلندي اغېزې د تماس پر مهال موجودې وي، خو په هغه یوه ازمېښت کې چې دا موضوع یې وازمویله، له بدن څخه د رنګ تر پاکېدو وروسته د کشف وړ نه وې.
د کنټرول د طرحې چکلېست
دویمه اصلي محتوا. هغه وخت یې وکاروئ چې د مېتیلین بلو لرونکي زیبرا کب پروتوکولونه له یوې تجربې سره یوځای کېږي.
- رنګ د ریجنټ په توګه راپور کړئ، نه د اوبو په توګه. غلظت په سلنه او مایکرومولر دواړو کې، د تماس پیل او پای د القاح وروسته په ساعتونو یا ورځو کې، د محلول د نوي کولو مهالوېش، او تر هرې اندازهګیرۍ مخکې د رنګ د لرې کولو موده بیان کړئ.
- کنټرولونه له پوښتنې سره برابر کړئ. د ازمویل کېدونکې کیمیاوي مادې څېړنه بېرنګه کنټرولونو ته اړتیا لري؛ د روزنې څېړنه بېرنګه او رنګ لرونکو ډلو ته اړتیا لري، او د فنګس پر ضد پایله باید ثبت شي، ځکه له یادو شوو څېړنو هېڅ یوې د فنګس پر ضد اغېزمنتیا نه ده اندازه کړې.
- د اکسیدېشن او احیا تر ازمېښتونو مخکې یې ومینځئ، بیا یې تایید کړئ. لږ تر لږه درې ځله یې په بېرنګه منځني محلول کې ووینځئ او ترڅنګ یې د رنګ او ریجنټ یو بېحجرو کنټرول هم ترسره کړئ، ځکه رنګ د Alamar Blue سیګنال مستقیماً راکموي.
- چلندي او مونوامیني پایشاخصونه لوړخطره وګڼئ. د خوځښت، ناڅاپي ټکان غبرګون، اضطرابته ورته چلند، د خپګان ضد موادو او MAO مخنیوونکو څېړنې باید د اندازهګیرۍ پر مهال له رنګ څخه ډډه وکړي یا د هماغه پایشاخص لپاره یې بېاغېزې والی وښيي؛ د یوې تر دوو ورځو د رنګ لرې کولو مودې یوه د خوځښت اغېزه له منځه یوړه، خو دا د نورو ازمېښتي بڼو لپاره نه ده ثابته شوې.
- میتابولیک او مایټوکانډریایي پایشاخصونه په هر پړاو کې لوړخطره وګڼئ. د اکسیجن مصرف، د انرژۍ لګښت، د غشا پوتنسیال او د تنفسي ځنځیر ټرانسکرېپټونه په روزنیزو غلظتونو کې بدلېږي، او له هګۍ تر راوتلو مخکې او وروسته یې لوري مخالف وي.
- د یوې طرحې بېاغېزې والی بلې ته مه غځوئ. د رنګ تر لرې کولو وروسته د اغېزې نه موندلو پایله پر روان تماس نه تطبیقېږي؛ پر مورفولوژۍ د اغېزې نه موندلو پایله میتابولیزم یا له درملو سره تعامل نه رانغاړي؛ په یوه سویه، تودوخه یا د ازمېښت موده کې پایله پر نورو نه تطبیقېږي.
- هغه لارښود چې تاسو تعقیب کړی او بدیل یې بیان کړئ. د CCAC، اروپايي یا Cold Spring Harbor غلظتونه په څرګند ډول نوم کړئ، او یادونه وکړئ چې د OECD د جنین ازموینه رنګ نه شاملوي، څو لوستونکی پوه شي چې ستاسو حیوانات په کومو شرایطو کې ساتل شوي دي.
له دې څخه هېڅ یوه خبره د هګیو د ژوندي ساتلو لپاره د رنګ د کارولو مخالفت نه کوي. دا د دې مخالفت کوي چې د روزنې یو انتخاب بېله ارزونې معلوماتو ته لار ومومي. په لوښي کې نیلي رنګ داسې مالیکول دی چې درملپوهنیزې ځانګړنې لري، او هغه تجربې چې تر ټولو ډېرې د ګډوډېدو احتمال لري، هماغه په لوړ ظرفیت ترسره کېدونکي میتابولیک او عصبيچلندي سکرینینګونه دي چې اوس ورته ځوان زیبرا کبان غوره کېږي. ثبت یې کړئ، کنټرول یې کړئ، تر اندازهګیرۍ مخکې یې په مینځلو لرې کړئ، او هغه ازمېښت وڅېړئ چې ښايي دا رنګ پکې په پټه برخه اخلي.