پر EMB اګار د E. coli او نورو کالونیو د بڼو لوستل

یو زده‌کوونکی یوه ناپېژندل شوې نمونه پر ایوزین میتیلین بلو اګار د کرښو په بڼه کري، ټوله شپه یې په انکیوبېټر کې ساتي، او بیا داسې پلیټ ویني چې تورو کالونیو یې شنه ځلا نیولې ده. په یادښت‌کتاب کې لیکي: "E. coli، تایید شوه." دا یادښت تر هغه زیات څه ادعا کوي چې پلیټ یې ثبوت ورکولای شي. پلیټ په ځانګړو شرایطو کې د ودې او تخمیر ظاهري ځانګړنه ښيي. د نوعې پېژندنه جلا ادعا ده او جلا شواهد غواړي.

دا لارښود د EMB اګار پایلې د تفسیر د یوې دندې په توګه څېړي. بنسټیزه مفکوره یې تشریح کوي، له کنټرولونو سره د پلیټونو انځوریز اطلس درښيي، او هغه حالتونه په ګوته کوي چې د درسي کتاب انځور پکې تېروتنې ته لاره هواروي.

د پلیټ تر شا مفکوره

EMB اګار هم انتخابي دی او هم توپیر ښودونکی. د ایوزین Y او میتیلین بلو رنګونه د ډېرو ګرام مثبتو موجوداتو وده کموي، نو دا چاپېریال د ګرام منفي موجوداتو ودې ته مناسب دی. همدا رنګونه د شاخصونو په توګه هم کار کوي: کله چې یو موجود شته قند تخمیر کړي او په خپل شاوخوا کې کافي اسید تولید کړي، کالوني ډېر رنګ جذبوي او له تیاره ارغواني څخه تر آبي تور رنګ پورې بدلېږي. د اسید د پیاوړي تولید پر مهال د کالونۍ پر سطحه فلزي شنه ځلا څرګندېدای شي. د ایوزین میتیلین بلو اګار پلیټونو لپاره د ASM پروتوکول د انتخاب او توپیر ښودلو دا ګډه ځانګړنه تشریح کوي او د تدریس لپاره مرجع عکسونه وړاندې کوي.

د هرې پایلې له لوستلو مخکې یوه خبره مهمه ده: وګورئ چې کوم ترکیب کارول کېږي. د Holt Harris Teague پخوانی ترکیب لاکتوز او سوکروز دواړه لري، خو Levine EMB یوازې لاکتوز لري. هغه موجود چې سوکروز تخمیر کوي خو لاکتوز نه تخمیر کوي، لکه د Serratia marcescens ډېرې جلا شوې نمونې، پر دې دوو بڼو بېلابېل څرګندېدای شي. د EMB چاپېریالونو د جوړونکي اسناد د ترکیب دا توپیر په څرګنده بیانوي. د پایلې ترڅنګ په یادښت‌کتاب کې جوړونکی او ترکیب هم ثبت کړئ.

چمتو شوی، خو لا نه کرل شوی EMB اګار عموماً له سور نسواري څخه تر سوربخن ارغواني رنګ پورې وي، او کله ناکله شینبخن سیوری یا نری رسوب لري. دا د شالید رنګ وده نه ده. هره مشاهده له یوه ناکرل شوي پلیټ یا ثبت شوې لومړنۍ بڼې سره پرتله کړئ، او اصلي پلیټ په 35 تر 37 C کې له شاوخوا 18 تر 24 ساعتونو هوازي انکیوبېشن وروسته ولولئ، مګر که تدریسي پروتوکول بل څه ټاکلي وي. اوږد انکیوبېشن د تخمیر بڼه بدلولای شي.

پلیټ څنګه وګورئ

دوه ډوله رڼا وکاروئ. لومړی پلیټ په منعکسې یا مایل رڼا کې وګورئ او لږ یې کږ کړئ: فلزي ځلا د لید زاویې له بدلېدو سره رنګ بدلوي او څرګندېدای یا ورکېدای شي. بیا یې په ترې تېرېدونکې رڼا کې وګورئ، څو د کالونیو رنګ او تیاره مرکزونه وارزوئ. له ښه جلا شویو کالونیو کار واخلئ، ځکه ګڼې او ګاونډۍ کالونۍ په خپل شاوخوا کې د اسید راټولېدل بدلوي او رنګ کمزوری یا پیاوړی ښودلای شي. د ASM د انځورونو ټولګه دا په مستقیم ډول ښيي: په ګډ کلتور کې E. coli ښايي خپله تمه کېدونکې ځلا له لاسه ورکړي، ځکه شاوخوا موجودات اسیدي چاپېریال بدلوي.

هر کله چې تمرین اجازه ورکوي، کنټرولونه هم ورسره شامل کړئ. په یوه عام تدریسي ټولګه کې E. coli ATCC 25922 د آبي تور رنګ او فلزي ځلا د ځانګړنې لپاره، یو تخمیر نه کوونکی لکه Salmonella Typhimurium ATCC 14028 یا Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 د بې‌رنګې ځانګړنې لپاره، او یو ګرام مثبت موجود لکه Enterococcus faecalis یا Staphylococcus aureus د ودې د مخنیوي د کنټرول په توګه کارول کېږي؛ لکه څنګه چې د EMB چاپېریالونو د کیفیت کنټرول په معیاري جدولونو کې راغلي دي. که مثبت کنټرول ځلا ونه لري، د ناپېژندل شوې نمونې په اړه له شک کولو مخکې انکیوبېشن، د کالونیو ګڼوالی یا ترکیب وڅېړئ.

د پلیټونو انځوریز اطلس

لاندې پلیټونه جوړې شوې انځوریزې بېلګې دي، نه د ریښتینو کلتورونو عکسونه. دا هغه بڼه ښيي چې باید ورته پام وکړئ، نه د کوم ځانګړي سټرېن دقیق رنګ. له د ASM له مرجع عکسونو او د تدریسي لابراتوار له ریښتینو پلیټونو سره یې پرتله کړئ.

پلیټ 1: پر EMB اګار Escherichia coli، د لاکتوز پیاوړی تخمیر کوونکی

پر EMB اګار E. coli عموماً له تیاره ارغواني څخه تر آبي تور رنګ پورې وي، او ډېری وخت تیاره مرکز او د اسید د پیاوړي تولید له امله فلزي شنه ځلا لري. دا ځلا هغه مشهوره نښه ده چې زده‌کوونکي یې لټوي، خو د تعریف پر ځای یې د مرستندویه شواهدو په توګه وګڼئ. د ځلا شدت له سټرېن، د انکیوبېشن له وخت، د کالونیو له ګڼوالي او د لید له زاویې سره بدلېږي. د ځلا نشتوالی E. coli نه ردوي، او له ځلا پرته تیاره کالوني د څو نورو تخمیر کوونکو احتمال هم ښيي. د هر ډول ورپسې کار لپاره ښه جلا شوې کالوني غوره کړئ، نه دا چې له ګڼې برخې څخه پایله ولولئ.

پلیټ 2: پر EMB اګار Klebsiella pneumoniae، مخاطي تخمیر کوونکی

پر EMB اګار Klebsiella pneumoniae عموماً لویې، ځلېدونکې، مخاطي کالونۍ جوړوي چې له ګلابي ارغواني څخه تر نسواري ارغواني رنګونو پورې وي؛ ډېری وخت تیاره مرکزونه لري، خو معمولاً پیاوړې فلزي ځلا نه لري. ورته بڼه په اړوندو تخمیر کوونکو لکه Enterobacter کې هم لیدل کېږي. مخاطي جوړښت او د کالونۍ اندازه د پایلې د لوستلو برخه دي: یوه کوچنۍ او هواره ګلابي کالوني د یوې لویې، ګنبدي او مخاطي کالونۍ په پرتله بېل تفسیر لري. لکه د E. coli په څېر، پلیټ د تخمیر یوه ظاهري ځانګړنه وړاندیز کوي، او د نوعې په کچه نوم ټاکل هغه بیوکیمیاوي تایید ته اړتیا لري چې لاندې تشریح شوی دی.

پلیټ 3: پر EMB اګار Salmonella او نور تخمیر نه کوونکي، بې‌رنګې کالونۍ

پر EMB اګار Salmonella او ورته لاکتوز نه تخمیر کوونکي، د Shigella او د Pseudomonas د ډېرو جلا شویو نمونو په ګډون، عموماً د بې‌رنګو، نیمه‌شفافو یا کم‌رنګ کهربایي کالونیو په بڼه وده کوي. ځینې ترکیبونه او شرایط یو کمزوری ګلابي سیوری ورکوي، نو کم‌رنګ ګلابي کالوني په خپله د تخمیر کوونکي معنا نه لري. EMB، Salmonella له Shigella یا نورو تخمیر نه کوونکو څخه نه بېلوي؛ دا توپیر په وروستیو ازموینو کې معلومېږي. دا هم په یاد ولرئ چې د Salmonella داسې لاکتوز مثبت سټرېنونه ثبت شوي چې د E. coli په څېر فلزي کالونۍ لري، او دا یو بل دلیل دی چې یو پلیټ په یوازې ځان وروستۍ پرېکړه نه شي کولای.

پلیټ 4: Serratia marcescens او د ترکیب له امله د تېروتنې خطر

Serratia marcescens ته ځانګړې برخه ورکړل شوې، ځکه زده‌کوونکي ډېری وخت د سرو کالونیو تمه لري او بیا پلیټ ناسم لولي. ډېری کلینیکي جلا شوې نمونې لاکتوز نه تخمیر کوي، نو پر Levine EMB عموماً کم‌رنګې یا لږ رنګ لرونکې څرګندېږي. ځکه چې ډېرې جلا شوې نمونې سوکروز تخمیر کوي، سوکروز لرونکی ترکیب ښايي تیاره یا له اسید سره ډېر تړلی غبرګون ورکړي. په 35 تر 37 C کې د دودیز سور پروډیجیوسین رنګدانه هم مه تمه کوئ؛ د انکیوبېټر په تودوخه کې د دې رنګدانې تولید د باور وړ نه دی. کله چې پروتوکول پر EMB اګار د Serratia marcescens یادونه کوي، وګورئ چې خبره یې پر کوم ترکیب ولاړه ده. د Serratia د میتابولیزم یوه بیاکتنه د دې تېروتنې تر شا د لاکتوز منفي او د سوکروز د متغیرې بڼې لنډیز وړاندې کوي.

پلیټ 5: کنټرولونه او هغه موجودات چې وده یې مخنیوی شوې وي

د ګرام مثبتو موجوداتو لکه Staphylococcus، Enterococcus، Streptococcus او Bacillus وده پر EMB اګار عموماً مخنیوی کېږي یا په څرګند ډول کمېږي، خو دا مخنیوی د هر سټرېن لپاره مطلق نه دی. د کنټرولونو یوه ټولګه د پایلې لوستل د باور وړ کوي: د E. coli کنټرول باید له آبي تور رنګ او ځلا سره ښه وده وښيي، د تخمیر نه کوونکي کنټرول باید بې‌رنګه وده وښيي، او د ودې د مخنیوي کنټرول باید لږه یا هېڅ وده ونه ښيي. که د ودې د مخنیوي کنټرول ښه وده وکړي، انتخابي پړاو ناکام شوی او د هغې جوپې نورې ټولې پایلې د شک وړ دي. د رنګولو طریقې د کلتور د چاپېریالونو په پرتله یوې بلې پوښتنې ته ځواب وايي؛ د لابراتوار د سلایډ رنګولو اړخ لپاره د میتیلین بلو د رنګولو اطلس وګورئ.

د محدودیتونو په پام کې نیولو سره پرتله

درې جملې د تېروتنې لامل کېدونکې بڼې راټولوي. تیاره رنګ د E. coli معنا نه لري، ځکه Klebsiella، Enterobacter او نور تخمیر کوونکي له ځلا پرته تیاره مرکزونه جوړوي. ګلابي رنګ د Klebsiella معنا نه لري، ځکه منځني یا ورو تخمیر کوونکي او ځینې هغه موجودات چې تخمیر نه کوونکي ګڼل کېږي، ګلابي یا کم‌رنګ ارغواني ښکاري. ځلا د E. coli د قطعي تایید معنا نه لري، ځکه نور پیاوړي تخمیر کوونکي یې هم تولیدولای شي. تدریسي پروتوکول او د ګډ کلتور انځورونه یې د دغو تېروتنو هره یوه ښيي.

د تایید محدودیتونه

EMB اګار یوه ظاهري ځانګړنه ښيي، نه یوه نوعه. بېلابېل موجودات د کالونۍ یوه بڼه لرلای شي، او یو موجود د سټرېن، عمر، ګڼوالي، ترکیب او انکیوبېشن له امله د درسي کتاب له بڼې څخه توپیر کولای شي. له همدې امله په تدریسي او کلینیکي کاري بهیرونو کې د EMB بڼه د لومړني اټکل په توګه ګڼل کېږي.

د زده‌کوونکي لپاره یو د دفاع وړ کاري بهیر دا دی: جلا شوې کالوني تشریح کړئ (اندازه، رنګ، مرکز، په مایل رڼا کې ځلا، مخاطي ځانګړنه)، ترکیب، د انکیوبېشن وخت او تودوخه، او کنټرولونه ثبت کړئ؛ بیا د هرې تاییدوونکې ازموینې تر ترسره کولو مخکې یوه ښه جلا شوې کالوني بیا وکرئ، څو خالص کلتور ترې ترلاسه شي. عام ورپسې ګامونه د E. coli او کولیفورمونو د لومړنۍ پېژندنې لپاره د ګرام رنګول او د IMViC غبرګونونه، د کولمو اړوندو موجوداتو لپاره TSI یا KIA او د هر موجود ځانګړې بیوکیمیاوي ازموینې دي؛ او چېرې چې دنده یې غواړي، سیرولوژیکه پېژندنه، MALDI TOF یا نورې تایید شوې پېژندنیزې طریقې هم کارول کېږي. د دې شالید لپاره چې EMB د کولمو اړوندو انتخابي او توپیر ښودونکو چاپېریالونو ترمنځ کوم ځای لري، د کولمو اړوندو کلتوري چاپېریالونو پېژندنې او له ګرام رنګولو وروسته تعقیبي ارزونه وګورئ. د دې اړوندې پوښتنې لپاره چې د سلایډ آبي رنګول څه ثابتولای شي او څه نه شي ثابتولای، د میتیلین بلو د رنګولو اطلس په همدې روحیه مشاهده او پایله سره جلا ساتي.

له پایلې مخکې مشاهده ولیکئ. "پر Levine EMB په 24 ساعتونو کې تیاره آبي تورې کالونۍ چې د لید له زاویې سره بدلېدونکې شنه ځلا لري، او د لاکتوز له پیاوړي تخمیر سره سمون لري" د دفاع وړ بیان دی. "E. coli، تایید شوه" هغه تاییدي ګام ته اړتیا لري چې پلیټ یې په یوازې ځان نه شي برابرولای.