ପ୍ରବନ୍ଧ
ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଓ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍: NOS, cGMP ଏବଂ ରକ୍ତବାହିନୀ ସଙ୍କେତନ
ପ୍ରଶ୍ନଟି ସରଳ ମନେହୁଏ: ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ କ’ଣ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍କୁ ନିରୋଧ କରେ? ପରୀକ୍ଷାଗାରରେ ଏହାର ଉତ୍ତର ଚାରିଟି ପୃଥକ ପ୍ରଶ୍ନରେ ବିଭକ୍ତ ହୁଏ, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପାଇଁ ଭିନ୍ନ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଯାଞ୍ଚ ରହିଛି। ଏଗୁଡ଼ିକୁ ଏକାଠି ଗୋଳାଇବା ହିଁ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଓ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ବିଷୟକ ଲେଖା ଦୃଢ଼ ଶୁଣାଗଲେ ମଧ୍ୟ ଅସ୍ପଷ୍ଟ ଲାଗିବାର ମୁଖ୍ୟ କାରଣ।
ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ସଙ୍କେତକୁ ଚାରିଟି କଡ଼ି ଥିବା ଏକ ଶୃଙ୍ଖଳ ଭାବେ ଭାବନ୍ତୁ। ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ସିନ୍ଥେଜ୍ ତିଆରି କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଜିନ୍ର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସନ୍ ହୁଏ। ଏନ୍ଜାଇମ୍ଟି ଆର୍ଜିନିନ୍କୁ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ରେ ପରିଣତ କରେ। ଏହି ଗ୍ୟାସ୍ ଅନ୍ୟ କିଛି ସହ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରିବା ପୂର୍ବରୁ ବିସରଣ ମାଧ୍ୟମରେ ତାହାର ଲକ୍ଷ୍ୟସ୍ଥଳକୁ ପହଞ୍ଚେ। ଦ୍ରବଣୀୟ ଗୁଆନିଲେଟ୍ ସାଇକ୍ଲେଜ୍ ଏହାକୁ ଚିହ୍ନଟ କରି ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP ତିଆରି କରେ। ପ୍ରତ୍ୟେକ କଡ଼ିରେ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁର ପ୍ରଭାବ ସମ୍ପର୍କରେ ଗବେଷଣା ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଛି, କିନ୍ତୁ ସେହି ପ୍ରମାଣ ଭିନ୍ନ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରସ୍ତୁତି, ଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଏବଂ ଭିନ୍ନ ଆଇସୋଫର୍ମରୁ ଆସିଛି। ଗୋଟିଏ କଡ଼ିରେ ମିଳିଥିବା ଫଳାଫଳ ଅନ୍ୟ କଡ଼ିରେ କ୍ରିୟା ହେଉଥିବାର ପ୍ରମାଣ ନୁହେଁ।
ପ୍ରଚଳିତ ଶୃଙ୍ଖଳର ସରଳ ବ୍ୟାଖ୍ୟା
ରକ୍ତବାହିନୀର କାନ୍ଥରେ ସାଧାରଣ କ୍ରମଟି ଏହିପରି ଚାଲେ। ଏକ ଉଦ୍ଦୀପକ ଏକ ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ କୋଷ ଉପରେ କ୍ରିୟା କରେ। ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ସିନ୍ଥେଜ୍, ଯାହାକୁ eNOS ବା NOS3 କୁହାଯାଏ, ଅଳ୍ପ ପରିମାଣର ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ କ୍ଷଣିକ ଭାବେ ଉତ୍ପନ୍ନ କରେ। ଏହି ଗ୍ୟାସ୍ ପାଖରେ ଥିବା ମସୃଣ ପେଶୀ କୋଷକୁ ବିସରଣ କରେ, ଦ୍ରବଣୀୟ ଗୁଆନିଲେଟ୍ ସାଇକ୍ଲେଜ୍ର ବିଜାରିତ ଲୌହଯୁକ୍ତ ହିମ୍ ସହ ବନ୍ଧିତ ହୁଏ ଏବଂ GTPରୁ ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMPକୁ ରୂପାନ୍ତରଣ ତ୍ୱରାନ୍ୱିତ କରେ। ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ Gକୁ ସକ୍ରିୟ କରେ, କ୍ୟାଲସିୟମ୍ର ପରିଚାଳନା ବଦଳେ ଏବଂ ପେଶୀ ଶିଥିଳ ହୁଏ।
ଆଉ ଏକ ଶୃଙ୍ଖଳକୁ ପୃଥକ ରଖିବା ଜରୁରୀ। ସଂକ୍ରମଣ ସମୟରେ ବା ସାଇଟୋକାଇନ୍ ସଂସ୍ପର୍ଶରେ ଆସିଲେ, କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଭିନ୍ନ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ପାଇଁ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସନ୍ କରନ୍ତି: ଇଣ୍ଡ୍ୟୁସିବଲ୍ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ସିନ୍ଥେଜ୍ ବା iNOS, ଯାହାକୁ NOS2 ମଧ୍ୟ କୁହାଯାଏ। ଏହା eNOS ତୁଳନାରେ ଅଧିକ ପରିମାଣର ଏବଂ ଅଧିକ ସମୟ ରହୁଥିବା ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ପ୍ରବାହ ଉତ୍ପନ୍ନ କରେ। ତୃତୀୟ ଆଇସୋଫର୍ମ, ନ୍ୟୁରୋନାଲ୍ NOS ବା nNOS, ଆଉ ଏକ ଭିନ୍ନ ପ୍ରସଙ୍ଗ ସହ ସମ୍ପୃକ୍ତ। କୌଣସି ଗବେଷଣାପତ୍ରରେ ଆଇସୋଫର୍ମ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ନକରି ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ସିନ୍ଥେଜ୍ କୁହାଯାଇଥିଲେ, ଅଟକି ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ କେଉଁଟି ମାପାଯାଇଥିଲା। ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ କିପରି ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରେ, ତାହାର ସାରାଂଶ ରେଡକ୍ସ ଲକ୍ଷ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ସାଧାରଣ ଭାବେ ସେହି କଥା କହେ: ଏହି ସ୍ଥାନାନ୍ତର ବ୍ୟବସ୍ଥା ନିଜେ ଏକାକୀ କିଛି କରେ ନାହିଁ, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ରାନ୍ତର ସହଭାଗୀ ଫଳାଫଳ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରେ।
ମାପାଯାଇଥିବା ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP ମଧ୍ୟ ଏକ ସମନ୍ୱିତ ଫଳସୂଚକ, ସିଧାସଳଖ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ପରୀକ୍ଷା ନୁହେଁ। ଏହାର ସ୍ତର ସାଇକ୍ଲେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ସଂଶ୍ଳେଷଣରୁ ଫସ୍ଫୋଡାଇଏଷ୍ଟେରେଜ୍ଗୁଡ଼ିକ ଦ୍ୱାରା ବିଘଟନକୁ ବିୟୋଗ କଲେ ଯାହା ରହେ, ତାହାକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ; ରକ୍ତବାହିନୀର ମସୃଣ ପେଶୀରେ ବିଶେଷକରି PDE5 ଏଥିରେ ଭୂମିକା ନିଏ। ତେଣୁ ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP ହ୍ରାସର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ଚିହ୍ନଟକାରୀ ପାଖରେ କମ୍ ସଙ୍କେତ ପହଞ୍ଚିଲା। ଏହା ନିଜେ କେଉଁ କଡ଼ି ବିଫଳ ହେଲା ତାହା କହେ ନାହିଁ।
କଡ଼ି 1: କମ୍ iNOS ଏନ୍ଜାଇମ୍ ତିଆରି ହୁଏ
ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆର ଲିପୋପଲିସାକାରାଇଡ୍, ଇଣ୍ଟରଫେରନ୍ ଗାମା ବା ଉଭୟ ଦ୍ୱାରା ଉଦ୍ଦୀପିତ ମୂଷାର ମ୍ୟାକ୍ରୋଫେଜ୍ଗୁଡ଼ିକରେ, ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ iNOS ପ୍ରୋଟିନ୍ର ଆଶା କରାଯାଉଥିବା ବୃଦ୍ଧିକୁ ରୋକିଥିଲା ଏବଂ ମ୍ୟାକ୍ରୋଫେଜ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସନ୍ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡ଼ିକରେ iNOS ମେସେଞ୍ଜର୍ RNAକୁ ଦୃଢ଼ ଭାବେ ଦମନ କରିଥିଲା। ଏଠାରେ କ’ଣ ବଦଳିନଥିଲା, ତାହା ବିଶେଷ ସୂଚନାଦାୟକ। ନିରୋଧକ I କାପ୍ପା B ଆଲ୍ଫାର ବିଘଟନ, NF କାପ୍ପା B ଓ STAT1ର ଫସ୍ଫୋରିଲେସନ୍ ଏବଂ ସେହି କାରକଗୁଡ଼ିକର ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟସ୍କୁ ଗମନ ବହୁମାତ୍ରାରେ ଅକ୍ଷୁଣ୍ଣ ରହିଥିଲା। ଯାହା କମିଥିଲା, ତାହା ଥିଲା DNA ସହ ସେମାନଙ୍କର ବନ୍ଧନ; କ୍ରୋମାଟିନ୍ ଇମ୍ୟୁନୋପ୍ରେସିପିଟେସନ୍ରେ iNOS ପ୍ରୋମୋଟର୍ରେ ସେମାନଙ୍କର ଅଧିକାର କମିଥିବା ଦେଖାଯାଇ ଏହା ନିଶ୍ଚିତ ହୋଇଥିଲା।
ଏହା ଏନ୍ଜାଇମ୍ର ପରିମାଣ ନିର୍ଦ୍ଧାରିତ ହେବାର ପୂର୍ବ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଏକ ଜିନ୍-ନିୟାମକ ପ୍ରଭାବ, ପୂର୍ବରୁ ଥିବା ଏନ୍ଜାଇମ୍ର ତତ୍କାଳ ଅବରୋଧ ନୁହେଁ। ଏହା ପ୍ରଦାହଜନିତ ସଙ୍କେତନ ସହ ସମ୍ପୃକ୍ତ, ଯେଉଁଠାରେ ପ୍ରୋଟିନ୍ ତିଆରି ହେବା ପୂର୍ବରୁ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସନ୍ କାରକଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ପ୍ରୋମୋଟର୍ ସହ ବନ୍ଧିତ ହେବାକୁ ପଡ଼େ। ବିଶ୍ରାମାବସ୍ଥାରେ ଥିବା ରକ୍ତବାହିନୀର ସଦା ଉପସ୍ଥିତ eNOS ବିଷୟରେ ଏହା ସିଧାସଳଖ କିଛି କହେ ନାହିଁ, ଏବଂ ଏହାକୁ ସେହି ସୀମା ମଧ୍ୟରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବା ଉଚିତ।
କଡ଼ି 2: ପୂର୍ବରୁ ଥିବା NOS ଏନ୍ଜାଇମ୍ ଧୀରେ କାମ କରେ
ଏକ ରାଟ୍ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଭିନ୍ନ ସ୍ତରରେ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। ସଚେତନ ପୁରୁଷ ରାଟ୍ମାନଙ୍କୁ ଶିରା ମାଧ୍ୟମରେ ଲିପୋପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଦିଆଯାଇଥିଲା; ତିନି ଘଣ୍ଟା ପରେ ସେମାନଙ୍କୁ ଶିରା ମାଧ୍ୟମରେ ସାଲାଇନ୍ କିମ୍ବା 3 mg per kg ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ହାଇପୋଥାଲାମସ୍ର NOS ସକ୍ରିୟତା ଅଧ୍ୟୟନରେ ଚିହ୍ନିତ ଆର୍ଜିନିନ୍ରୁ ସିଟ୍ରୁଲିନ୍କୁ ରୂପାନ୍ତରଣ ମାପି ମିଡିଆଲ୍ ବେସାଲ୍ ହାଇପୋଥାଲାମସ୍ର ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ସିନ୍ଥେଜ୍ ସକ୍ରିୟତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। କେବଳ ଚାପ ସହିତ ସାଲାଇନ୍ କିଛି କ୍ୟାଲସିୟମ୍-ସ୍ୱାଧୀନ ସକ୍ରିୟତା ଉଦ୍ଦୀପିତ କରିଥିଲା, ଏବଂ ଲିପୋପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଏହାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ସ୍ତରର ପ୍ରାୟ ଦଶ ଗୁଣକୁ ବଢ଼ାଇଥିଲା। ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଉଭୟ ଉଦ୍ଦୀପିତ ଉପାଦାନକୁ ଦୂର କରିଥିଲା। ସେହି ଟିସୁରେ, ସେହି ମାତ୍ରା ଓ ସମୟବିନ୍ଦୁରେ କ୍ୟାଲସିୟମ୍-ନିର୍ଭର ସଦା ଉପସ୍ଥିତ ସକ୍ରିୟତା ବଦଳିନଥିଲା।
ଏହି ଫଳାଫଳକୁ ଯେପରି ଲେଖାଯାଇଛି ଠିକ୍ ସେପରି ପଢ଼ନ୍ତୁ: ସେହି ପରିସ୍ଥିତିରେ ମାପାଯାଇଥିବା iNOS ପ୍ରକାରର ସକ୍ରିୟତା ଦମିଥିଲା। ଏହା ଜିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତିର ମାପ ନୁହେଁ, ଏବଂ eNOS ବା nNOS ତୁଳନାରେ iNOS ପାଇଁ ସବୁବେଳେ ଚୟନାତ୍ମକ ହେବାର ପ୍ରମାଣ ମଧ୍ୟ ନୁହେଁ। ଶୁଦ୍ଧୀକୃତ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ଉପରେ ହୋଇଥିବା କାର୍ଯ୍ୟ ଏହି ସତର୍କତାକୁ ଆହୁରି ସ୍ପଷ୍ଟ କରେ। ଶୁଦ୍ଧୀକୃତ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ସିନ୍ଥେଜ୍ର ସିଧାସଳଖ ପରୀକ୍ଷାରେ, ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ 30 micromolarରେ ସିଟ୍ରୁଲିନ୍ ଗଠନକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଅବରୋଧ କରିଥିଲା। ଶୁଦ୍ଧୀକୃତ NOS ଓ ଗୁଆନିଲେଟ୍ ସାଇକ୍ଲେଜ୍ର ତୁଳନାରେ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିବା ଅନୁସାରେ, ଅର୍ଦ୍ଧ ନିରୋଧ ପାଇଁ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଡିସ୍ମ୍ୟୁଟେଜ୍ ବିନା ପ୍ରାୟ 5.3 micromolar ଏବଂ ଏହା ଥିଲେ 9.2 micromolar ଥିଲା। ଶୁଦ୍ଧୀକୃତ nNOS ଉପରେ ଏକ ପୃଥକ ଅଧ୍ୟୟନ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ସହ ବନ୍ଧିତ ହିମ୍ର ଜାରଣର ଭୂମିକା ସୂଚାଇଥିଲା। ଏଥିରୁ ବ୍ୟବହାରିକ ଶିକ୍ଷା ହେଉଛି, ପୃଥକୀକୃତ ପ୍ରଣାଳୀରେ ସିଧାସଳଖ NOS ନିରୋଧ ପ୍ରକୃତରେ ଘଟେ; କିନ୍ତୁ ହାଇପୋଥାଲାମସ୍ର ଫଳାଫଳକୁ ବିସ୍ତାର କରି ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ସବୁ ସ୍ଥାନରେ ସମସ୍ତ ସଦା ଉପସ୍ଥିତ NOSକୁ ଅପ୍ରଭାବିତ ରଖେ ବୋଲି ସାଧାରଣ ଦାବି କରିହେବ ନାହିଁ।
କଡ଼ି 3: ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ପହଞ୍ଚିବା ପୂର୍ବରୁ ନଷ୍ଟ ହୁଏ
ଏନ୍ଜାଇମ୍ ଅବରୋଧ ବ୍ୟତୀତ ଅନ୍ୟ କିଛି ମଧ୍ୟ ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP ହ୍ରାସକୁ ବୁଝାଇପାରେ ବୋଲି ସବୁଠାରୁ ସ୍ପଷ୍ଟ ପ୍ରମାଣ ମିଳେ କଲ୍ଚର୍ କରାଯାଇଥିବା ଖରଗୋଶର ଫୁସଫୁସୀୟ ଧମନୀର ମସୃଣ ପେଶୀ କୋଷରୁ। ପରୀକ୍ଷାର ରୂପରେଖାରେ ସିଧାସଳଖ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ଦାତା ଯୋଗ କରି ଅନ୍ତର୍ଜାତ NOSକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଏଡ଼ାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ତା’ପରେ ରକ୍ତବାହିନୀର ମସୃଣ ପେଶୀରେ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଅଧ୍ୟୟନରେ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ତଥାପି ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ଦମନ କରୁଛି କି ନାହିଁ, ତାହା ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା।
1ରୁ 100 micromolar ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ତିନିଟି ଦାତା ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା: S ନାଇଟ୍ରୋସୋ L ସିଷ୍ଟିନ୍, ସୋଡିୟମ୍ ନାଇଟ୍ରୋପ୍ରୁସାଇଡ୍ ଏବଂ MPANO ନାମକ ଏକ ସ୍ଥିର, ଡିଆମିନେଟେଡ୍ ସଦୃଶ ଯୌଗିକ। ସମସ୍ତେ ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMPକୁ ପ୍ରାୟ 1.5 ଗୁଣରୁ 12 ଗୁଣ ମଧ୍ୟରେ ବଢ଼ାଇଥିଲେ। 10 micromolar ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ପ୍ରଥମ ଦୁଇଟିର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ 51ରୁ 100 percent ନିରୋଧ କରିଥିଲା ଏବଂ MPANO ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ଅପରିବର୍ତ୍ତିତ ରଖିଥିଲା। ଯଦି ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ କେବଳ ସାଇକ୍ଲେଜ୍ର ଉତ୍ପ୍ରେରକ ସ୍ଥଳକୁ ଅବରୋଧ କରୁଥାନ୍ତା, ତେବେ ଏହି ଦାତା-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଚୟନାତ୍ମକତାକୁ ବୁଝାଇବା କଷ୍ଟକର ହୋଇଥାନ୍ତା, କାରଣ ତିନୋଟିଯାକ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଏକା ଏନ୍ଜାଇମ୍ରେ ମିଳିତ ହୁଅନ୍ତି।
ତା’ପରେ ତିନିଟି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପରୀକ୍ଷା ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ସହ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବେ ଯୋଡ଼ିଥିଲା। ପ୍ରଥମେ, ଜାନ୍ଥିନ୍ ସହ ଜାନ୍ଥିନ୍ ଅକ୍ସିଡେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରି କୋଷବାହ୍ୟ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଉତ୍ପନ୍ନ କରିବାରୁ ସେହି ଏକା ଧରଣର ଫଳ ମିଳିଥିଲା: CYSNO ଓ ନାଇଟ୍ରୋପ୍ରୁସାଇଡ୍ ଅବରୋଧିତ ହୋଇଥିଲେ, MPANO ଅପ୍ରଭାବିତ ରହିଥିଲା। ଦ୍ୱିତୀୟରେ, ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ମସୃଣ ପେଶୀ କୋଷଗୁଡ଼ିକରୁ ମାତ୍ରା ଓ ସମୟ ଉପରେ ନିର୍ଭରଶୀଳ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଉତ୍ପାଦନ ଘଟାଇଥିଲା, ଯାହା ସାଇଟୋକ୍ରୋମ୍ cର ବିଜାରଣ ଦ୍ୱାରା ମାପାଯାଇଥିଲା। ତୃତୀୟରେ, ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଡିସ୍ମ୍ୟୁଟେଜ୍ ନିରୋଧକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୋକିଥିଲା, କିନ୍ତୁ କାଟାଲେଜ୍ ରୋକିନଥିଲା। ଏହା ସୂଚାଏ ଯେ ସେହି ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରସ୍ତୁତିରେ ତତ୍କାଳ କ୍ରିୟାଶୀଳ ରାସାୟନିକ ପ୍ରଜାତି ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରଅକ୍ସାଇଡ୍ ନୁହେଁ, ବରଂ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଥିଲା।
ପରୀକ୍ଷାର ସହ-କଲ୍ଚର୍ ସଂସ୍କରଣକୁ ଉଲ୍ଲେଖ କରିବା ଜରୁରୀ, କାରଣ ଏହା ପ୍ରଭାବଟି କେଉଁ ସ୍ଥାନରେ ଘଟୁଛି ତାହା ଚିହ୍ନଟ କରେ। କଭର୍ସ୍ଲିପ୍ରେ ଥିବା ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଅଳ୍ପ ସମୟ ପାଇଁ ମସୃଣ ପେଶୀ କୋଷ ସହ ସହ-କଲ୍ଚର୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଫଳରେ ମୂଳ ଅବସ୍ଥାରେ ମୁକ୍ତ ହେଉଥିବା ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ କାରକ ମସୃଣ ପେଶୀର ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMPକୁ ତିନିରୁ ଆଠ ଗୁଣ ବଢ଼ାଇଥିଲା। ଦୁଇଟି କୋଷୀୟ ଅଂଶ ମଧ୍ୟରୁ ଯେକୌଣସି ଗୋଟିଏକୁ ଆଗରୁ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁର ସଂସ୍ପର୍ଶରେ ଆଣିଲେ ସେହି ସଙ୍କେତ କମିଥିଲା, ଏବଂ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଡିସ୍ମ୍ୟୁଟେଜ୍ ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ କୋଷର ପୂର୍ବ-ସଂସ୍ପର୍ଶ ପ୍ରଭାବକୁ ଆଂଶିକ ଭାବେ ପ୍ରତିହତ କରିଥିଲା। ଅର୍ଥାତ୍, ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁକୁ ମସୃଣ ପେଶୀର ଚିହ୍ନଟକାରୀ କୋଷ ଭିତରେ କ୍ରିୟା କରିବା ଆବଶ୍ୟକ ନୁହେଁ। ଏହା ପଥ ମଝିରେ ବାର୍ତ୍ତାବାହକକୁ ହଟାଇ ସଙ୍କେତ କମାଇପାରେ। ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଗବେଷଣା ପଢ଼ିବାର ମାର୍ଗଦର୍ଶିକା ଏହାକୁ ଏକ ସାଧାରଣ ନିୟମ ଭାବେ ଗ୍ରହଣ କରେ: ଆଣବିକ ଲକ୍ଷ୍ୟର ନାମ କହିବା ପୂର୍ବରୁ ହସ୍ତକ୍ଷେପ କେଉଁ ଅଂଶରେ ହୋଇଥିଲା ତାହା କହନ୍ତୁ।
ଏହାକୁ NOS ନିରୋଧ କହିବା ଭୁଲ୍ ହେବ। ଦାତାଗୁଡ଼ିକ କାମ କରିବା ପାଇଁ କୌଣସି ସିନ୍ଥେଜ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଆବଶ୍ୟକ ନଥିଲା, ତଥାପି ସଙ୍କେତ କମିଥିଲା।
କଡ଼ି 4: ଚିହ୍ନଟକାରୀ ନିଜେ କମ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରେ
ଦ୍ରବଣୀୟ ଗୁଆନିଲେଟ୍ ସାଇକ୍ଲେଜ୍ ଉପରେ ସିଧାସଳଖ ପ୍ରଭାବ ରହିଛି, କିନ୍ତୁ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ଉପରେ ଉଲ୍ଲେଖିତ ଶୁଦ୍ଧୀକୃତ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ତୁଳନାରେ, ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ଦ୍ୱାରା ଉଦ୍ଦୀପିତ ସାଇକ୍ଲେଜ୍କୁ ଅର୍ଦ୍ଧ ନିରୋଧ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରାୟ 60 micromolar ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ଆବଶ୍ୟକ ହୋଇଥିଲା; ଏହାର ବିପରୀତରେ NOSର ଅର୍ଦ୍ଧ ନିରୋଧ ପ୍ରାୟ 5ରୁ 9 micromolarରେ ହୋଇଥିଲା। ଏପରିକି 1 millimolarରେ ମଧ୍ୟ ସର୍ବାଧିକ ଅବରୋଧ କେବଳ ଆଂଶିକ ଥିଲା। ଏହା ପ୍ରାୟ ଛଅରୁ ଏଗାର ଗୁଣର ଅନ୍ତର। ତେଣୁ କମ୍ micromolar ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ କରାଯାଇଥିବା କୋଷ ପରୀକ୍ଷାରେ ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP କମିଲେ, କେବଳ ସେହି ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP ମୂଲ୍ୟ ଆଧାରରେ ଏହାକୁ ଚୟନାତ୍ମକ ସାଇକ୍ଲେଜ୍ ନିରୋଧ ବୋଲି କୁହାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ।
ପରବର୍ତ୍ତୀ ଏକ ରେଡକ୍ସ ଅଧ୍ୟୟନ ଆଉ ଏକ ସତର୍କତା ଯୋଡ଼ିଥିଲା: ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ଦ୍ୱାରା ସକ୍ରିୟ ହୋଇଥିବା ସାଇକ୍ଲେଜ୍କୁ ଏପରି ଏକ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ନିଷ୍କ୍ରିୟ କରିଥିଲା, ଯାହା ହିମ୍ ଲୌହର ସରଳ ବାୟୁଜନିତ ଜାରଣଠାରୁ ଭିନ୍ନ। ତେଣୁ ଚିହ୍ନଟକାରୀର କାର୍ଯ୍ୟ ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇପାରେ, କିନ୍ତୁ ଏହାର ରସାୟନ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସ୍ପଷ୍ଟ ହୋଇନାହିଁ। ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଏହି ଅନ୍ତରର ଅର୍ଥ ହେଉଛି, କମ୍ micromolar ସଂସ୍ପର୍ଶରେ ପ୍ରଥମେ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଓ NOS ପ୍ରଭାବଗୁଡ଼ିକୁ ଯାଞ୍ଚ କରି ବାଦ୍ ଦେବା ଆବଶ୍ୟକ। ଫସ୍ଫୋଡାଇଏଷ୍ଟେରେଜ୍ ପାଇଁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପରୀକ୍ଷା ମଧ୍ୟ ଏଠାରେ ପ୍ରସଙ୍ଗିକ। ବିଘଟନ ମାପାଯାଇନଥିଲେ ବା ଅବରୋଧ କରାଯାଇନଥିଲେ, ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMPର କମ୍ ସଞ୍ଚୟ କମ୍ ସଂଶ୍ଳେଷଣ, ଦ୍ରୁତ ବିଘଟନ ବା ଉଭୟ ସହ ସଙ୍ଗତିପୂର୍ଣ୍ଣ।
ଏହାକୁ କାହିଁକି ରକ୍ତଚାପ ବିଷୟକ ଗୋଟିଏ ଦାବିରେ ସୀମିତ କରିହେବ ନାହିଁ
ପ୍ରତ୍ୟେକ କଡ଼ି ଭିନ୍ନ ପ୍ରଣାଳୀରେ ପ୍ରତିଷ୍ଠିତ ହୋଇଥିଲା। ମ୍ୟାକ୍ରୋଫେଜ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସନ୍ ହାଇପୋଥାଲାମସ୍ର ଏନ୍ଜାଇମ୍ ସକ୍ରିୟତା ନୁହେଁ। ଲିପୋପଲିସାକାରାଇଡ୍ ପରେ ହାଇପୋଥାଲାମସ୍ର ସକ୍ରିୟତା ବିଶ୍ରାମାବସ୍ଥାର ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ ଟୋନ୍ ନୁହେଁ। ସହ-କଲ୍ଚର୍ରେ ମୂଳ ଅବସ୍ଥାରେ ମୁକ୍ତ ହେଉଥିବା ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ କାରକ ଆଗୋନିଷ୍ଟ ଦ୍ୱାରା ଉଦ୍ଦୀପିତ ରକ୍ତବାହିନୀ ପ୍ରସାରଣ ନୁହେଁ। 10 micromolar ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁରେ ଥିବା କଲ୍ଚର୍ କରାଯାଇଥିବା ଫୁସଫୁସୀୟ ଧମନୀ କୋଷ ମଣିଷର ରକ୍ତସଞ୍ଚାଳନ ପ୍ରଣାଳୀ ନୁହେଁ। ଏଗୁଡ଼ିକୁ ଏକାଠି ଗୋଳାଇ ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍କୁ ଅବରୋଧ କରି ରକ୍ତଚାପ ବଢ଼ାଏ ବୋଲି କହିବା ଅର୍ଥ, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପରୀକ୍ଷାଗୁଡ଼ିକ ଯେଉଁ ପାର୍ଥକ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ ଅକ୍ଷୁଣ୍ଣ ରଖିବା ପାଇଁ ତିଆରି ହୋଇଥିଲା, ଠିକ୍ ସେଗୁଡ଼ିକୁ ଛାଡ଼ିଦେବା।
ତିନିଟି ଯାଞ୍ଚ ଏହି ବ୍ୟାଖ୍ୟାକୁ ତଥ୍ୟନିଷ୍ଠ ରଖେ। ପ୍ରଥମେ, ଆଇସୋଫର୍ମର ନାମ କହନ୍ତୁ: ବିଶ୍ରାମାବସ୍ଥାର ରକ୍ତବାହିନୀ ଟୋନ୍ ପାଇଁ eNOS, ଉଦ୍ଦୀପିତ ପ୍ରଦାହଜନିତ ପ୍ରବାହ ପାଇଁ iNOS, ଏବଂ ସ୍ନାୟୁକୋଷ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଓ କିଛି ଶୁଦ୍ଧୀକୃତ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ପ୍ରସଙ୍ଗ ପାଇଁ nNOS। ଦ୍ୱିତୀୟରେ, ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ସଙ୍କେତ କିପରି ପହଞ୍ଚୁଛି ତାହା କହନ୍ତୁ: ଅନ୍ତର୍ଜାତ ସଂଶ୍ଳେଷଣ, ମୂଳ ଅବସ୍ଥାର ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ ମୁକ୍ତି, କିମ୍ବା CYSNO, ନାଇଟ୍ରୋପ୍ରୁସାଇଡ୍ ବା MPANO ପରି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଦାତା। କାରଣ ସ୍ଥିର ଦାତା ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁର ପ୍ରଭାବକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିଥିଲା, କିନ୍ତୁ ଅସ୍ଥିର ଦାତାଗୁଡ଼ିକ କରିନଥିଲେ। ତୃତୀୟରେ, ସାନ୍ଦ୍ରତା ଏବଂ ପ୍ରଭାବକୁ ପ୍ରତିହତ କରୁଥିବା ପରୀକ୍ଷାର ନାମ କହନ୍ତୁ: ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଡିସ୍ମ୍ୟୁଟେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବ ପ୍ରତିହତ ହେବା ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ର ଭୂମିକା ସୂଚାଏ, କାଟାଲେଜ୍ର ବିଫଳତା ସେହି ପ୍ରସ୍ତୁତିରେ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରଅକ୍ସାଇଡ୍ର ଭୂମିକା ବିରୋଧରେ ପ୍ରମାଣ ଦିଏ, ଜାନ୍ଥିନ୍ ଅକ୍ସିଡେଜ୍ର ସମାନ ପ୍ରଭାବ ସେହି ପ୍ରକ୍ରିୟା ଯଥେଷ୍ଟ ବୋଲି ଦେଖାଏ, ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧୀକୃତ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ପରୀକ୍ଷାଗୁଡ଼ିକ ସିଧାସଳଖ ଉତ୍ପ୍ରେରଣ ଉପରେ ପ୍ରଭାବକୁ ପଥ ମଝିରେ ହେଉଥିବା କ୍ଷୟଠାରୁ ପୃଥକ କରନ୍ତି।
ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ସାରକଥା ହେଉଛି ଏହିପରି। ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁକୁ ଚୟନାତ୍ମକ ସାଇକ୍ଲେଜ୍ ଅବରୋଧକ ଭାବେ ଦେଖିବା ଅପେକ୍ଷା, ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ରୁ ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP ସଙ୍କେତନର ଏକାଧିକ ସ୍ଥାନରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଘଟାଉଥିବା ପଦାର୍ଥ ଭାବେ ଦେଖିବା ଅଧିକ ଉଚିତ। ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରସ୍ତୁତି ଓ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଅନୁସାରେ, ଏହା iNOS ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସନ୍ କାରକର ବନ୍ଧନ କମାଇପାରେ, NOS ଏନ୍ଜାଇମ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ସିଧାସଳଖ ନିରୋଧ କରିପାରେ, ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଉତ୍ପାଦନ ମାଧ୍ୟମରେ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ର ଉପଲବ୍ଧତା କମାଇପାରେ ଏବଂ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ଦ୍ୱାରା ସକ୍ରିୟ ସାଇକ୍ଲେଜ୍ର କାର୍ଯ୍ୟକୁ ବାଧା ଦେଇପାରେ। ରକ୍ତବାହିନୀ ଅଧ୍ୟୟନରେ ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMP ସଙ୍କେତନର ଭୂମିକା ଏବଂ କୋଷ ପରୀକ୍ଷାରେ ବ୍ୟବହୃତ ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ ଦାତାଗୁଡ଼ିକର ତୁଳନା ପ୍ରତ୍ୟେକ ସେହି ଶାଖାଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏକୁ ଅଧିକ ବିସ୍ତାରରେ ଆଲୋଚନା କରନ୍ତି। ଏବଂ ରେଡକ୍ସ ପ୍ରଭାବକୁ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ପ୍ରଭାବଠାରୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ବୁଝାଏ କାହିଁକି ଏହି ଗବେଷଣା ସାହିତ୍ୟରେ ସୁପରଅକ୍ସାଇଡ୍ ଡିସ୍ମ୍ୟୁଟେଜ୍ ସହ କାଟାଲେଜ୍ ଏବଂ ଏକ ସ୍ଥିର ଦାତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏତେ ବାର ଦେଖାଯାଏ।
ମେଥିଲିନ୍ ବ୍ଲୁ ପରେ ସାଇକ୍ଲିକ୍ GMPର କମ୍ ମୂଲ୍ୟ ଏକ ଭଙ୍ଗା ଶୃଙ୍ଖଳକୁ ଚିହ୍ନଟ କରେ। କେଉଁ କଡ଼ି ଭାଙ୍ଗିଲା, ତାହା କେବଳ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପରୀକ୍ଷାଗୁଡ଼ିକ କହନ୍ତି।