मिथिलिन ब्लुले गालका कोशिका रङ्गाउँदा: के अवलोकन गर्ने

एक विद्यार्थीले गालका कोशिकाको निलम्बनको एक थोपा स्लाइडमा राख्छिन्, सूक्ष्मदर्शकबाट हेर्छिन् र लगभग केही पनि देख्दिनन्। उज्यालो दृश्य क्षेत्रमा केही फिका छायाजस्ता आकृति तैरिरहेका हुन्छन्। उनी फोकस मिलाउँछिन्, त्यसपछि प्रकाश बढाउँछिन् र अन्ततः स्लाइड खाली छ भन्ने निष्कर्ष निकाल्छिन्। स्लाइड खाली छैन। कोशिकाहरू त्यहीँ छन्। ती लगभग पारदर्शी छन्, र यही पारदर्शिताको समस्या समाधान गर्न यो रङ्गाइ प्रयोग गरिन्छ।

अपेक्षा र देखिने चित्रबीचको यो भिन्नतालाई कार्यविधि सुरु हुनुअघि स्पष्ट पार्नु उपयोगी हुन्छ। सुरुवाती विद्यार्थीहरू सूक्ष्मदर्शकले क्यामेराको जुमले टाढाको सङ्केतपाटी देखाएझैँ विवरण देखाउँछ भन्ने अपेक्षा गर्छन्। उज्यालो क्षेत्र सूक्ष्मदर्शकको काम त्यसभन्दा सीमित हुन्छ: यसले प्रकाश अवशोषणमा हुने भिन्नता देखाउँछ। नरङ्गाइएको गालको कोशिकाले लगभग कुनै प्रकाश अवशोषण गर्दैन, त्यसैले यसले लगभग कुनै भिन्नता पनि देखाउँदैन। मिथिलिन ब्लुले त्यो भिन्नता थप्छ। यो कोशिकाभित्र असमान रूपमा बाँधिन्छ र संरचनालाई दृश्य भिन्नतामा बदल्छ। विद्यार्थीले यो अवधारणा बुझेपछि त्यसपछिका हरेक चरण केवल निर्देशन नभई त्यसैको परिणामका रूपमा बुझिन्छन्।

विद्यालयको प्रयोगशालामा साधारण रङ्गाइले दृश्य भिन्नता कसरी बढाउँछ भन्ने पृष्ठभूमि यहाँ उपयोगी हुन्छ, र रङ्गाउनुअघि उज्यालो क्षेत्र सूक्ष्मदर्शक तयार गर्ने तरिका दोहोर्‍याउँदा असफल हुने स्लाइडमध्ये आधाजति रोक्न सकिन्छ। रङको पछाडिको रसायन सूक्ष्मदर्शिकीमा मिथिलिन ब्लुको परिचय मा समेटिएको छ, जसले प्रयोगशालाको कार्यमेजमा यही रङ बारम्बार किन प्रयोग हुन्छ भन्ने बताउँछ।

कक्षाकोठाको कार्यविधि

तलको भिजेको माउन्ट विधि सामान्य कक्षाका लागि सरल मानक विकल्प हो। यसमा ज्वाला वा स्थिरीकरणको चरण चाहिँदैन। केही कलेजका निर्देशिकामा प्रयोग हुने स्थिरीकृत स्मियर विधिमा हावामा सुकाउने र त्यसपछि छोटो समय तापद्वारा स्थिरीकरण गर्ने चरण थपिन्छन्, जस्तै Biology LibreTexts मार्फत प्रकाशित North Central Texas College को गालको स्मियर गतिविधि मा छ। तर तापद्वारा स्थिरीकरण सूक्ष्मजीवविज्ञानमा प्रचलित अभ्यास हो, उपकला कोशिका हेर्नका लागि अनिवार्य होइन।

आवश्यक सामग्री: सफा स्लाइड र कभरस्लिप, जीवाणुरहित एकपटक मात्र प्रयोग गरिने स्वाब (प्राथमिकता दिइने) वा नयाँ चेप्टा दन्तकोट्याउने सिन्का, 0.5 देखि 1 प्रतिशत जलीय मिथिलिन ब्लुको ड्रपर बोतल, आसुत वा विआयनीकृत पानी, सोस्ने कागज, पञ्जा र 100x तथा 400x कुल आवर्धन भएको संयुक्त सूक्ष्मदर्शक।

1. सादा पानीले मुख कुल्ला गर्नुहोस्। यसले पछि गाढा रङ्गिएर कोशिकाबाट ध्यान हटाउने खानेकुराका कण हटाउँछ।
2. प्रत्येक विद्यार्थीले आफ्नै गालको मात्र नमुना लिनुपर्छ। नयाँ जीवाणुरहित स्वाबले गालको भित्री भाग हल्का रगड्नुहोस्। थिच्नुहोस्, नखुर्कनुहोस्। कुनै असहजता वा रगत आउनुअघि नै रोक्नुहोस्।
3. सफा स्लाइडको बीचमा स्वाब घुमाउँदै पातलो तह फैलाउनुहोस्। स्पष्टसँग अवलोकन गर्न मिल्ने स्लाइड बन्ने सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण आधार पातलो तह हो। बाक्लो सेतो जमावट रङ्गिएपछि छुट्याउन नसकिने नीलो थुप्रो बन्छ।
4. स्मियरमाथि मिथिलिन ब्लुको एक थोपा थप्नुहोस्। 1 देखि 3 मिनेटसम्म छोड्नुहोस्। धेरै कलेजका कार्यविधिमा एक मिनेट पर्याप्त हुन्छ; NCERT कक्षा IX को विज्ञान प्रयोगशाला निर्देशिका मा अस्थायी माउन्टका लागि करिब 3 मिनेट प्रयोग गरिन्छ। बढी समय राख्नु राम्रो होइन, र समयसम्बन्धी सबैभन्दा सामान्य गल्ती अत्यधिक रङ्गाउनु हो।
5. स्थानीय कार्यविधिअनुसार आसुत पानीले बिस्तारै पखाल्नुहोस् वा सोस्ने कागजले अतिरिक्त रङ सोस्नुहोस्। पृष्ठभूमि फिका नीलो हुनुपर्छ, गाढा नौसेना नीलो होइन।
6. कभरस्लिपलाई ढल्काएर राख्नुहोस् ताकि पहिले एउटा किनाराले छोओस्, त्यसपछि बिस्तारै तल झर्न दिनुहोस्। यसले हावाका फोका पस्नबाट रोक्छ।
7. कोशिका खोज्न कम आवर्धनबाट सुरु गर्नुहोस्, फोकस र केन्द्रमा रहेको अवस्था सुनिश्चित गर्नुहोस्, त्यसपछि 100x र अन्ततः 400x मा जानुहोस्। 400x मा सूक्ष्म फोकस समायोजन मात्र प्रयोग गर्नुहोस्।

रङको सान्द्रताबारे एक वाक्यमा स्पष्टता आवश्यक छ। विद्यालयका कार्यविधिमा प्रायः 1 प्रतिशत जलीय मिथिलिन ब्लु प्रयोग गरिन्छ। बढी सान्द्र मूल घोल वा लामो सम्पर्कले केन्द्रकभन्दा पृष्ठभूमिलाई छिटो गाढा बनाउँछ, जसले अभ्यासका लागि आवश्यक दृश्य भिन्नतालाई उल्ट्याउँछ।

गालको नमुना सुरक्षित रूपमा व्यवस्थापन गर्ने

गालका नमुनासँग लार र मुखमा सामान्य रूपमा हुने सूक्ष्मजीव पनि आउँछन्। त्यसैले नमुना दिने सहपाठी स्वस्थ भए पनि प्रत्येक ताजा स्मियरलाई सम्भावित सङ्क्रामक सामग्रीका रूपमा लिनुहोस्। शिक्षण प्रयोगशालाका लागि American Society for Microbiology का जैविक सुरक्षा निर्देशिका ले सामान्य सिद्धान्त बताउँछन्: सत्रअघि जोखिम मूल्याङ्कन गर्ने, पञ्जा लगाउने, छिटा पर्ने सम्भावना भएका ठाउँमा आँखाको सुरक्षा गर्ने, पछि हात धुने, कार्यमेज निःसङ्क्रमण गर्ने र दूषित एकपटक प्रयोग गरिने सामग्रीलाई स्वीकृत जैविक फोहोर व्यवस्थापन प्रक्रियाबाट विसर्जन गर्ने।

कक्षाकोठाका चार नियमले अधिकांश जोखिम समेट्छन्। प्रत्येक स्वाब र स्लाइड एउटै नमुना दाताका लागि मात्र हो, कहिल्यै साझा नगर्नुहोस्। आफ्नै नमुना मात्र लिनुहोस्, छेउको साथीको नमुना कहिल्यै नलिनुहोस्। एकपटक प्रयोग गरिने स्वाब र दन्तकोट्याउने सिन्का सिधै तोकिएको फोहोर भाँडामा जानुपर्छ, फेरि कार्यमेजमा होइन। मिथिलिन ब्लुले छाला र कपडामा दाग लगाउँछ र आँखामा जलन गराउँछ, त्यसैले पञ्जा र रङ प्रयोग गर्दा अपनाइने सामान्य सरसफाइका नियम लागू हुन्छन्। यो अभ्यासलाई स्मियरबाट कुनै पनि जीव संवर्धन गर्ने कामसम्म विस्तार नगर्नुहोस्, र विद्यालयको सुरक्षा प्रक्रियाबाहिर ताजा मानव सामग्रीलाई आफूखुसी तापद्वारा स्थिरीकरण नगर्नुहोस्।

के अवलोकन गर्ने र त्यस्तो किन देखिन्छ

100x मा अनियमित अण्डाकार वा बहुभुजाकार बाहिरी रूप भएका चौडा, चेप्टा र फिका नीलो कोशिका खोज्नुहोस्। ती एक्लाएक्लै वा खुकुलो रूपमा एकअर्कामाथि खप्टिएका तहमा हुन्छन्। प्रत्येक कोशिकामा सामान्यतया एउटा गाढा नीलो थोप्लो हुन्छ। त्यो थोप्लो केन्द्रक हो। तिनको बनावटमा पनि ध्यान दिनुहोस्: शल्कीय उपकला कोशिका पातला टाइलजस्ता हुन्, गोलाकार होइनन्। त्यसैले तिनका किनारा गोलो बेलुनभन्दा चर्किएको चम्किलो लेपजस्ता देखिन्छन्।

400x मा तीन विशेषता स्पष्ट देखिन्छन्। कोशिकाको सिमाना कोशिकालाई घेर्ने पातलो गाढा रेखाका रूपमा देखिन्छ। कोशिकाद्रव्यले भित्री भागलाई हल्का र समान नीलो रङले भर्छ। केन्द्रक गाढा र बढी सघन देखिन्छ, प्रायः अण्डाकार हुन्छ र सामान्यतया बीचतिर हुन्छ, तर सधैँ होइन। विद्यार्थीलाई यी तीनै विशेषतासँगै आकार र आवर्धन पनि टिप्न लगाउनुहोस्, किनकि कार्यपत्रले ठीक यही माग्छ।

यहाँ शुद्धतासम्बन्धी एउटा कुरा महत्त्वपूर्ण छ, र धेरै कार्यपत्रले यसलाई गलत प्रस्तुत गर्छन्। देखिने सिमाना प्लाज्मा झिल्ली रहेको क्षेत्रसँग मेल खान्छ, तर झिल्ली आफैँ करिब 7 देखि 10 न्यानोमिटर बाक्लो लिपिडको दोहोरो तह हो, जुन विद्यालयको सूक्ष्मदर्शकले छुट्याउन सक्ने सीमाभन्दा धेरै तल पर्छ। विद्यार्थीले देख्ने भनेको कोशिकाको प्रकाशीय किनारा र त्यहाँ जम्मा भएको रङ हो। कोशिकाङ्गका हकमा पनि यही सावधानी लागू हुन्छ। यस तयारीमा माइटोकन्ड्रिया, अन्तःप्रद्रव्य जालिका, गोल्जी काय र राइबोसोम देखिँदैनन्। राम्रो अवस्थामा परम्परागत प्रकाश सूक्ष्मदर्शकले करिब 0.2 माइक्रोमिटरसम्मका विवरण छुट्याउन सक्छ, जसबारे सूक्ष्मदर्शिकीका उपकरणसम्बन्धी NCBI को कोशिका जीवविज्ञान पृष्ठभूमि ले व्याख्या गर्छ। अधिकांश अतिसूक्ष्म संरचना त्यो सीमाभन्दा तल वा त्यसकै आसपास पर्छन्। विवरण नथप्ने उच्च आवर्धनले चित्र ठूलो मात्र बनाउँछ।

केन्द्रक किन सबैभन्दा गाढा रङ्गिन्छ? मिथिलिन ब्लु धनायनिक रङ हो, घोलमा यसमा धनात्मक आवेश हुन्छ, र यो कोशिकामा ऋणात्मक आवेश भएका पदार्थसँग, विशेष गरी न्यूक्लिक अम्लसँग, आबद्ध हुन्छ। क्रोमाटिनले केन्द्रकमा DNA सघन बनाउँछ, त्यसैले केन्द्रकमा सबैभन्दा धेरै रङ जम्मा हुन्छ। कोशिकाद्रव्यमा RNA र अन्य आवेशयुक्त अणु हुन्छन्, त्यसैले यो पनि रङ्गिन्छ, तर बढी छरिएर र हल्का रूपमा। मुख्य सीमा: मिथिलिन ब्लु DNA का लागि मात्र विशिष्ट रङ होइन। केन्द्रकको चित्रणमा मिथिलिन ब्लुको वितरण सम्बन्धी अध्ययनले धनायन न्यूक्लिक अम्ल प्रशस्त भएका क्षेत्रसँग आबद्ध हुने वर्णन गर्छ, र कोशिका तयारीमा मिथिलिन ब्लुको बन्धन सम्बन्धी पुरानो परिमाणात्मक अध्ययनले बाँधिएको अधिकांश रङ न्यूक्लिक अम्लसँग आबद्ध भएको पाएको थियो। त्यसैले गाढा केन्द्रक र हल्का कोशिकाद्रव्य दृश्य भिन्नताको ढाँचा हुन्, आणविक परीक्षण होइनन्।

विद्यार्थीले गर्ने गल्ती र तिनलाई कसरी बुझ्ने

लगभग हरेक असफल स्लाइड पाँचमध्ये कुनै एक ढाँचामा पर्छ। विद्यार्थीलाई नबुझी दोहोर्‍याउनुको सट्टा स्लाइडको समस्या पहिचान गर्न सिकाउनुहोस्।

अत्यधिक रङ्गाउँदा कोशिका र पृष्ठभूमि समान रूपमा गाढा हुन्छन्, जसले गर्दा केन्द्रक दृश्य क्षेत्रमा हराउँछ। रङ्गाउने समय घटाएर वा अझ राम्ररी पखालेर यसलाई सुधार्नुहोस्। कम रङ्गाउँदा प्रकाश बढाएपछि हराउने फिका छायाजस्ता आकृति मात्र रहन्छन्; तीस सेकेन्डका चरणमा समय थप्नुहोस्। बाक्लो स्मियरले एकअर्कामाथि खप्टिएका सघन थुप्रा बनाउँछ, जहाँ कुनै बाहिरी रूप पहिल्याउन सकिँदैन। यसको सुधार फैलाउने तरिकामा छ: अर्को पटक पातलो फैलाउनुहोस्, किनकि पखालेर कोशिकाको थुप्रो सुधार्न सकिँदैन। हावाका फोका तीखो गाढा घेरा भएका पूर्ण वृत्तजस्ता देखिन्छन् र तिनलाई संरचना ठान्ने सुरुवाती विद्यार्थीको ध्यान भड्काउँछन्; कभरस्लिपलाई फेरि ढल्काएर बिस्तारै राख्नुहोस्। कोशिकामाथि वा वरिपरि छरिएका साना गाढा थोप्ला सामान्यतया मुखका सामान्य जीवाणु हुन्, जसबारे Ingrid Science को गालका कोशिकासम्बन्धी कार्यविधि जस्ता विद्यालयका कार्यविधिले उल्लेख गर्छन्। तिनले मुखमा जीवहरू बस्छन् भन्ने पुष्टि गर्छन्, जुन विद्यार्थीका लागि सम्झनलायक हुन सक्छ। तर यस अभ्यासमा तिनको प्रजाति पहिचान गर्न सकिँदैन र तिनलाई कोशिकाका अङ्गका रूपमा चित्रमा देखाउनु हुँदैन। खानेकुराका अवशेष र श्लेष्माका तन्तु अनियमित र गाढा रङ्गिन्छन्; सुरुमा कुल्ला गर्नुको उद्देश्य तिनलाई कम गर्नु हो।

यो अभ्यासले के गर्न सक्दैन

यो शैक्षिक अवलोकन हो, निदानात्मक परीक्षण होइन। कक्षाकोठामा रङ्गाइएको कोशिकाको रूपबाट सङ्क्रमण, क्यान्सर वा कुनै पनि रोगको निदान गर्न सकिँदैन, र यस लेखले त्यस्तो सुझाव दिएको भनेर बुझ्नु हुँदैन। यस तयारीले दुई आवर्धनमा आकार, सिमाना, कोशिकाद्रव्य र केन्द्रक देखाउँछ। यसले झिल्लीको अतिसूक्ष्म संरचना, कोशिकाङ्गको विवरण वा आणविक पहिचान देखाउँदैन। सीमा स्पष्ट बताउँदा विज्ञान र विद्यार्थी दुवैको सुरक्षा हुन्छ: राम्रो परिणाम भनेको आवर्धन र प्रयोग गरिएको रङ उल्लेख गरिएको सही नामाङ्कित चित्र हो, स्वास्थ्यसम्बन्धी निष्कर्ष होइन।

विद्यार्थी कार्यपत्र र नामाङ्कित सूक्ष्मचित्रहरू

यस पृष्ठका लागि तयार गरिएका दुई सामग्री माथिको नामाङ्कित सूक्ष्मचित्र र तलको कार्यपत्र हुन्। प्रत्येक विद्यार्थीका लागि एउटा कार्यपत्र छाप्नुहोस् वा यसलाई प्रक्षेपण गरेर विद्यार्थीलाई कोठाहरू आफ्नो कापीमा सार्न लगाउनुहोस्।

45 मिनेटको सत्रमा यसलाई कसरी प्रयोग गर्ने: सुरक्षा निर्देशन र नमुना सङ्कलनका लागि दस मिनेट, रङ्गाउने र माउन्ट तयार गर्ने कामका लागि दस मिनेट, दुवै आवर्धनमा अवलोकन र रेखाचित्रका लागि पन्ध्र मिनेट, अनि जाँचसूची र नामाङ्कित सूक्ष्मचित्रसँग तुलना गर्न दस मिनेट। जाँचसूचीका बुँदाहरू जानाजानी प्रक्रियामा केन्द्रित छन्। पातलो स्मियर, रङ्गाउने सही समय, कोशिकाद्रव्यभन्दा गाढा केन्द्रक, उल्लेख गरिएको आवर्धन। यी चारै बुँदा पूरा भएको पुष्टि गर्न सक्ने विद्यार्थीले यस पाठले सिकाउन खोजेको अवधारणा बुझेको हुन्छ: सूक्ष्मदर्शकले भिन्नता देखाउँछन्, र रङ्गाइले देखाउन योग्य भिन्नता सिर्जना गर्छ।