မက်သလင်းဘလူးကို တိုင်းတာသည့် စမ်းသပ်မှုအား မက်သလင်းဘလူးကိုယ်တိုင် အနှောင့်အယှက်ပေးသည့်အခါ

ဓာတ်ခွဲခန်းတစ်ခုတွင် ဇီဘရာငါးသန္ဓေသားများကို စံမွေးမြူရေးပြင်းအားရှိ မက်သလင်းဘလူးဖြင့် မွေးမြူပြီး ဇီဝဖြစ်ပျက်မှုကို နည်းလမ်းနှစ်မျိုးဖြင့် တိုင်းတာသည်။ ပထမနေ့တွင် Seahorse ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာစက်က အောက်ဆီဂျင်သုံးစွဲမှု မြင့်တက်ကြောင်း ဖော်ပြသည်။ စတုတ္ထနေ့နှင့် ပဉ္စမနေ့တွင် Alamar Blue စမ်းသပ်ပြားက စွမ်းအင်သုံးစွဲမှု လျော့ကျကြောင်း ဖော်ပြသည်။ ဆိုးဆေးတူသည်၊ ငါးမျိုးလိုင်းတူသည်၊ သို့သော် ကောက်ချက်များက ဆန့်ကျင်ဘက်ဖြစ်နေသည်။ ထို့နောက် သိပ်မထင်ရှားသည့် ထိန်းချုပ်စမ်းသပ်မှုတစ်ခု ထွက်ပေါ်လာသည်။ မက်သလင်းဘလူးနှင့် Alamar Blue ဓာတ်ကူပစ္စည်းသာပါပြီး ငါးလုံးဝမပါသော စမ်းသပ်တွင်းများကလည်း ဓာတ်ကူပစ္စည်းသီးသန့်ထက် အလင်းအားနည်းသည့် ရလဒ်ကို ပြသည်။ ရလဒ်၏ တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းမှာ ဇီဝဖြစ်စဉ်ကြောင့်ဖြစ်သည်။ နောက်တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းမှာ ဆိုးဆေးက မိမိဖြေထားသော စာမေးပွဲကို မိမိဘာသာ အမှတ်ပေးနေသကဲ့သို့ ဖြစ်သည်။ ဖွံ့ဖြိုးဆဲ ဇီဘရာငါးများတွင် မက်သလင်းဘလူးကို လေ့လာထားသည့် 2025 ခုနှစ် Communications Biology သုတေသန တွင် မှတ်တမ်းတင်ထားသော ဤခွဲခြားမှုသည် မက်သလင်းဘလူးကြောင့် စမ်းသပ်တိုင်းတာမှု အနှောင့်အယှက်ဖြစ်သည့် ပုံမှန်ပုံစံဖြစ်သည်။ ထို့ကြောင့် ဓာတ်တိုး-ဓာတ်လျော့တုံ့ပြန်မှုတွင် ပါဝင်နိုင်သော ဆိုးဆေးများအတွက် သာမန်စမ်းသပ်ဒြပ်ပေါင်းများ၌ မလိုအပ်သည့် ထိန်းချုပ်စမ်းသပ်မှုများ လိုအပ်သည်။

resazurin စမ်းသပ်တိုင်းတာမှုက အမှန်တကယ် ဖော်ပြသည့်အရာ

Alamar Blue သည် resazurin ပျော်ရည်၏ ကုန်အမှတ်တံဆိပ်အမည်ဖြစ်သည်။ ထို့ကြောင့် မက်သလင်းဘလူးကြောင့် Alamar Blue အနှောင့်အယှက်ဖြစ်ခြင်းနှင့် မက်သလင်းဘလူးကြောင့် resazurin စမ်းသပ်တိုင်းတာမှု အနှောင့်အယှက်ဖြစ်ခြင်းတို့သည် တူညီသော ပြဿနာကို ရည်ညွှန်းသည်။ ဓာတ်တိုးထားသော resazurin သည် အပြာရောင်ဖြစ်ပြီး ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်း ထုတ်လွှတ်မှု အလွန်နည်းသည်။ ဇီဝဖြစ်ပျက်မှုရှိသော ဆဲလ်များက ၎င်းကို resorufin အဖြစ် ဓာတ်လျော့ပေးသည်။ resorufin သည် ပန်းရောင်ဖြစ်ပြီး လှုံ့ဆော်အလင်းလှိုင်းအလျား 560 nm နှင့် ထုတ်လွှတ်အလင်းလှိုင်းအလျား 590 nm အနီးတွင် ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်း အားကောင်းစွာ ထုတ်လွှတ်သည်။ ထုတ်လုပ်သူ၏ မိုက်ခရိုပလိတ် လုပ်ထုံးလုပ်နည်း အရ အသုံးပြုနိုင်သည့် အကွာအဝေးမှာ လှုံ့ဆော်အလင်းအတွက် 530 မှ 570 nm ဝန်းကျင်နှင့် ထုတ်လွှတ်အလင်းအတွက် 580 မှ 610 nm ဝန်းကျင်ဖြစ်သည်။ ဓာတ်လျော့မှု ဆက်လက်ဖြစ်ပေါ်လျှင် resorufin သည် ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်း အားနည်းသော dihydroresorufin အဖြစ် ပြောင်းလဲသွားသည်။ ထို့ကြောင့် စမ်းသပ်တွင်းထဲတွင် ဆဲလ်များလွန်းခြင်း သို့မဟုတ် တုံ့ပြန်ချိန် ကြာလွန်းခြင်းက ချိန်ညှိစံမျဉ်း၏ အထက်ပိုင်းကို အောက်ဘက်သို့ ကွေးကျစေသည်။

အီလက်ထရွန်များသည် အဓိကအားဖြင့် NADH နှင့် NADPH မှ ရရှိပြီး ဆိုင်တိုဆောလ်၊ မိုက်ခရိုဆိုမ်းများနှင့် မိုက်တိုကွန်ဒရီးယားများရှိ ဆဲလ်တွင်း reductase နှင့် diaphorase အင်ဇိုင်းများမှတစ်ဆင့် လွှဲပြောင်းလာသည်။ ထို့ကြောင့် တိုင်းတာရလဒ်သည် စုစုပေါင်း ဓာတ်လျော့နိုင်စွမ်းကို ဖော်ပြခြင်းဖြစ်ပြီး အသက်ရှင်သောဆဲလ် အရေအတွက်လည်း မဟုတ်၊ မိုက်တိုကွန်ဒရီးယားကို တိုင်းတာခြင်းလည်း မဟုတ်ပါ။ အချက်ပြအား မြင့်လာခြင်းသည် ဆဲလ်အရေအတွက် ပိုများလာခြင်း၊ ဆဲလ်တစ်ခုချင်းစီ၏ ဓာတ်လျော့ အီလက်ထရွန်စီးဆင်းမှု ပိုများလာခြင်း သို့မဟုတ် နှစ်မျိုးစလုံးကို ဆိုလိုနိုင်သည်။ NADH ၏ လမ်းကြောင်းကို ပြောင်းပေးသော ဒြပ်ပေါင်းတစ်ခုသည် ဆဲလ်တစ်ခုမျှ မသေစေဘဲ အချက်ပြအားကို ပြောင်းလဲနိုင်သည်။ ထိုအချက်ကို မှတ်ထားပါ။ အကြောင်းမှာ NADH ၏ လမ်းကြောင်းကို ပြောင်းပေးခြင်းသည် မက်သလင်းဘလူး၏ ပုံမှန်လုပ်ဆောင်ချက်ဖြစ်သောကြောင့် ဖြစ်သည်။

အနှောင့်အယှက်လမ်းကြောင်း နှစ်ခု၊ လျော့ကျသွားသော အချက်ပြတစ်ခု

မက်သလင်းဘလူးသည် တစ်ခုနှင့်တစ်ခု သီးခြားဖြစ်သော လမ်းကြောင်းနှစ်ခုမှတစ်ဆင့် resazurin တိုင်းတာရလဒ်ကို ပုံပျက်စေသည်။ မည်သည့်လမ်းကြောင်းတစ်ခုတည်းကမဆို တိုင်းတာတွေ့ရှိရသော ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်းကို လျော့ကျစေသည်။

လမ်းကြောင်း 1 သည် အလင်းဆိုင်ရာဖြစ်သည်။ မက်သလင်းဘလူးသည် အနီရောင်အလင်းကို အားကောင်းစွာ စုပ်ယူသည်။ ၎င်း၏ မိုနိုမာ စုပ်ယူလှိုင်းအပိုင်းသည် 660 မှ 665 nm အနီးတွင် ရှိပြီး ဒိုင်မာ စုပ်ယူလှိုင်းပခုံးသည် 607 မှ 610 nm အနီးတွင် ရှိသည်။ ထိုလှိုင်းပခုံး၏ အစွန်းပိုင်းက 590 nm ဝန်းကျင်ရှိ resorufin ထုတ်လွှတ်အလင်းဘက်အထိ ရောက်ရှိသည်။ အလင်းသွားရာလမ်းကြောင်းရှိ ဆိုးဆေးသည် လှုံ့ဆော်အလင်းအချို့ကို စုပ်ယူပြီး ထုတ်လွှတ်လာသော ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်းအချို့ကိုလည်း ပြန်လည်စုပ်ယူသည်။ ဤအတွင်းစစ်ထုတ်အကျိုးသက်ရောက်မှုကြောင့် resorufin ထုတ်လုပ်မှု မပြောင်းလဲသည့်တိုင် စမ်းသပ်တွင်း၏ အလင်းအား လျော့ကျသည်။ ဆိုးဆေး၏ အခြေအနေအလိုက် အလင်းရောင်စဉ်လည်း ပြောင်းလဲသည်။ ရေနှင့် cyclodextrin ပျော်ရည်များတွင် မက်သလင်းဘလူး၏ အလင်းရောင်စဉ်များကို အချက်ကိန်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော လေ့လာမှု က မိုနိုမာ၊ ဒိုင်မာနှင့် လက်ခံမော်လီကျူး-ဧည့်မော်လီကျူး ပေါင်းစည်းဖွဲ့စည်းမှုတို့ကို 500 မှ 700 nm အတွင်း မတူညီသော အလင်းစုပ်ယူကိန်းများရှိသည့် ပုံစံသုံးမျိုးအဖြစ် ခွဲထုတ်ဖော်ပြထားသည်။ ထို့ကြောင့် အလင်းဆိုင်ရာ အမှားပမာဏသည် ပြင်းအား၊ အစုဖွဲ့မှုနှင့် ချိတ်ဆက်မှုတို့အလိုက် ပြောင်းလဲသည်။ ပြုပြင်ဖြေရှင်းနည်း မတူသောကြောင့် စမ်းသပ်ရာတွင် ရိုးရိုးအလင်းအားလျော့ခြင်းနှင့် မော်လီကျူးအဆင့် အလင်းငြိမ်းသတ်ခြင်းကို အောက်တွင်ဖော်ပြထားသော ထည့်ဖြည့်ပစ္စည်း ပြန်လည်တိုင်းတာရရှိမှု စမ်းသပ်ချက်ဖြင့် ခွဲခြားပါ။

လမ်းကြောင်း 2 သည် ဓာတ်တိုး-ဓာတ်လျော့ဆိုင်ရာ ယှဉ်ပြိုင်မှုဖြစ်သည်။ ဓာတ်တိုးထားသော မက်သလင်းဘလူးသည် NAD(P)H မှ အီလက်ထရွန်များကို လက်ခံပြီး အရောင်မဲ့ leuco methylene blue အဖြစ် ပြောင်းလဲသည်။ မော်လီကျူးအောက်ဆီဂျင်က ၎င်းကို အပြာရောင်ပုံစံသို့ ပြန်လည်ဓာတ်တိုးစေပြီး ဟိုက်ဒရိုဂျင်ပါအောက်ဆိုဒ်အပါအဝင် ဓာတ်လျော့ထားသော အောက်ဆီဂျင်ထွက်ပစ္စည်းများကို ထုတ်လုပ်သည်။ ထိုစက်ဝန်း တစ်ပတ်လည်တိုင်းတွင် မူလက resazurin ကို ဓာတ်လျော့ပေးမည့် ဓာတ်လျော့စွမ်းအားကို သုံးစွဲသွားပြီး အောက်ဆီဂျင်ကိုလည်း သုံးစွဲကာ ဘေးထွက်ပစ္စည်းအဖြစ် ပါအောက်ဆိုဒ်ကို ထုတ်ပေးသည်။ ထို့ကြောင့် Alamar Blue အချက်ပြအား လျော့ကျခြင်းသည် အီလက်ထရွန်များက resorufin ထဲသို့ မဝင်ဘဲ မက်သလင်းဘလူးစက်ဝန်းမှတစ်ဆင့် စီးဆင်းသွားခြင်းကို ဆိုလိုနိုင်သည်။ ဆဲလ်များ အမှန်တကယ် ဘာလုပ်ခဲ့သည်ဖြစ်စေ စမ်းသပ်ပြားပေါ်တွင် ဇီဝဖြစ်ပျက်မှု ကျဆင်းသကဲ့သို့ ဖတ်ရသည်။ ထိုဓာတုဖြစ်စဉ်ကပင် အောက်ဆီဂျင်တိုင်းတာစက်များတွင် ဆန့်ကျင်ဘက်ပုံစံ အမှားထောင်ချောက်တစ်ခုကို ရှင်းပြသည်။ ဓာတ်လျော့ထားသော ဆိုးဆေးကို အောက်ဆီဂျင်က ပြန်လည်ဓာတ်တိုးပေးခြင်းကြောင့် ဇီဝအစိတ်အပိုင်း လုံးဝမရှိသည့်တိုင် ဓာတုနည်းဖြင့် အောက်ဆီဂျင်သုံးစွဲမှု ဖြစ်ပေါ်သည်။ ထို့ကြောင့် အသက်ရှူဖြစ်စဉ်တိုင်းတာမှုတွင်လည်း ဆိုးဆေးပါသော အလွတ်ထိန်းချုပ်နမူနာများ ထည့်ရမည်။ မိုက်တိုကွန်ဒရီးယားအတွက် ဤအချက်ကို အောက်ဆီဂျင်၊ ATP နှင့် အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာ တိုင်းတာရလဒ်များ နှိုင်းယှဉ်ချက် တွင် ရှင်းလင်းထားသည်။

အချက်ပြပြောင်းလဲမှုနှင့် ဇီဝဖြစ်စဉ်ပြောင်းလဲမှု နှစ်မျိုးစလုံး မှန်နိုင်သည်

ဇီဘရာငါးလေ့လာမှု၏ တန်ဖိုးမှာ အလွယ်တကူ တစ်ခုမှန်လျှင် တစ်ခုမှားဟု မသတ်မှတ်ခြင်းဖြစ်သည်။ ဇီဝဖြစ်စဉ်အပြောင်းအလဲက တကယ်ရှိခဲ့သည်။ မွေးမြူရေးပြင်းအား နှစ်မျိုးစလုံးတွင် အသက် 1 ရက်ရှိ သန္ဓေသားများ၏ အခြေခံအောက်ဆီဂျင်သုံးစွဲမှု မြင့်တက်ခဲ့သည်။ နိမ့်သောပြင်းအားတွင် ATP နှင့် ဆက်နွှယ်သော အသက်ရှူဖြစ်စဉ် မြင့်တက်ခဲ့သည်။ JC-10 စမ်းသပ်ပစ္စည်းဖြင့် တိုင်းတာသော အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာသည် ဒုတိယနေ့တွင် မြင့်တက်ခဲ့ပြီး မိုက်တိုကွန်ဒရီးယား ကွန်ပလက်စ်များဆိုင်ရာ RNA ကူးရေးထုတ်ကုန်များသည် ပထမနေ့နှင့် စတုတ္ထနေ့တွင် လျော့ကျခဲ့သည်။ စမ်းသပ်မှုကြောင့်ဖြစ်သော လွဲမှားချက်လည်း တကယ်ရှိခဲ့သည်။ Alamar Blue အဆင့်မတိုင်မီ သုံးကြိမ်ဆေးထားသော ငါးများ၏ ဦးခေါင်း၊ ပါးစပ်နှင့် အနံ့ခံဒေသတွင် မြင်နိုင်သော အပြာရောင်အစွန်းအထင်းများ ကျန်ရှိနေသေးသည်။ ဆဲလ်မပါဘဲ ဆိုးဆေးနှင့် ဓာတ်ကူပစ္စည်းသာ ပါသော စမ်းသပ်တွင်းများတွင်လည်း ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်းသည် အနည်းငယ်ဖြစ်သော်လည်း စာရင်းကိန်းအရ သိသာစွာ လျော့ကျသွားသည်။ စတုတ္ထနေ့နှင့် ပဉ္စမနေ့ရှိ ငါးများ၏ Alamar Blue အချက်ပြအား လျော့ကျမှုသည် ဆဲလ်မပါသည့် သက်ရောက်မှုထက် ပိုကြီးသောကြောင့် စာရေးသူများက ရလဒ်ကို အနည်းငယ်ပုံပျက်နေသော မှန်ဘီလူးမှတစ်ဆင့် မြင်ရသည့် တကယ့်ဇီဝဖြစ်ပျက်မှုပြောင်းလဲမှုဟု အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ခဲ့ကြသည်။ ဤသဘောထားက မှန်ကန်သည်။ ဓာတ်တိုး-ဓာတ်လျော့စက်ဝန်းတွင် ပါဝင်သလို အပြာရောင်အလင်းစုပ်ယူပစ္စည်းလည်း ဖြစ်သော ဆိုးဆေးတစ်ခုသည် လေ့လာနေသည့် လမ်းကြောင်းနှင့် အချက်ပြပစ္စည်း၏ ဓာတုဖြစ်စဉ်ကို တစ်ပြိုင်နက် အနှောင့်အယှက်ပေးလေ့ရှိသည်။ ထိန်းချုပ်စမ်းသပ်မှုများ၏ တာဝန်မှာ တစ်ခုခုကို မရှိဟု ကြေညာရန်မဟုတ်ဘဲ တစ်ခုချင်းစီ၏ ပါဝင်သက်ရောက်မှုပမာဏကို တိုင်းတာရန်ဖြစ်သည်။ cyclodextrin ချိတ်ဆက်မှုလေ့လာချက်မှလည်း ဆက်စပ်သင်ခန်းစာတစ်ခု ရရှိသည်။ လက်ခံမော်လီကျူးက ဆိုးဆေးကို ဖမ်းချုပ်ထားသောအခါ အရောင်စွန်းထင်းမှုနှင့် ဂလူးကို့စ်စုပ်ယူမှု တိုးမြင့်စေခြင်းတို့ အတူတကွ လျော့ပါးသွားသည်။ ဤအချက်က ဇီဝဖြစ်ပျက်မှုအပေါ် သက်ရောက်ရန် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်ဖြစ်ပေါ်သော ဓာတ်တိုး-ဓာတ်လျော့ အနှောင့်အယှက်မျှသာမဟုတ်ဘဲ ဆိုးဆေးနှင့် တိုက်ရိုက်အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှု လိုအပ်ကြောင်း ညွှန်ပြသည်။ ဆိုးဆေး၏ ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ တိုင်းတာရလဒ်နှင့် လုပ်ဆောင်ချက်ဆိုင်ရာ တိုင်းတာရလဒ်တို့ကို ဆက်စပ်စစ်ဆေးခြင်းသည် ယန္တရားနှင့် စမ်းသပ်မှုလွဲမှားချက်ကို ခွဲခြားပေးသည့် နည်းလမ်းဖြစ်သည်။ ဆိုးဆေးအခြေပြု ဇီဝဖြစ်ပျက်မှုဆိုင်ရာ အဆိုများကို ဖတ်ရှုသုံးသပ်ရန် လမ်းညွှန်တွင် ထိုအလေ့အထကို ထပ်မံရှင်းလင်းထားသည်။

၎င်းတို့ကို ခွဲခြားပေးသော ထိန်းချုပ်စမ်းသပ်မှုများ

resazurin စမ်းသပ်ပြားမှ မက်သလင်းဘလူးရလဒ်တစ်ခုခုကို အဓိပ္ပာယ်မဖွင့်မီ ဤစမ်းသပ်မှုများကို လုပ်ဆောင်ပါ။ အထက်ပါ လမ်းကြောင်းအားလုံးသည် ပြင်းအား၊ အာဟာရကြားခံ၊ ထားရှိတုံ့ပြန်ချိန်နှင့် အလင်းပေးမှုတို့အပေါ် မူတည်သောကြောင့် ၎င်းတို့သည် ဆဲလ်ပါသော စမ်းသပ်မှုနှင့် အတိအကျ ကိုက်ညီရမည်။

ထိန်းချုပ်စမ်းသပ်မှု 3 နှင့် 4 သည် စာတမ်းအများစုတွင် ချန်လှပ်ထားသော်လည်း မက်သလင်းဘလူးဆိုင်ရာ စာတမ်းအများစုအတွက် လိုအပ်သည့် အတွဲဖြစ်သည်။ ထိန်းချုပ်စမ်းသပ်မှု 3 က ဓာတုဖြစ်စဉ်ကို ဖော်ထုတ်ပြီး ထိန်းချုပ်စမ်းသပ်မှု 4 က အလင်းဆိုင်ရာဖြစ်စဉ်ကို ဖော်ထုတ်သည်။ ၎င်းတို့နှစ်ခုတွဲက ဇီဝဖြစ်စဉ်ဆိုင်ရာ အဆိုတစ်ခုခု မပြုမီ စမ်းသပ်မှုလွဲမှားချက်၏ အတိုင်းအတာကို သတ်မှတ်ပေးသည်။

သီးခြားအခြေခံသဘောတရားသုံး တိုင်းတာမှုများနှင့် ၎င်းတို့၏ ကန့်သတ်ချက်များ

ဒုတိယစမ်းသပ်တိုင်းတာမှု တစ်ခုတည်းက ပထမရလဒ် မှန်ကန်ကြောင်း အာမခံမပေးနိုင်ပါ။ သီးခြားအခြေခံသဘောတရားသုံး တိုင်းတာမှုတစ်ခုစီသည် လမ်းကြောင်းတစ်ခုမှ လွတ်ကင်းသော်လည်း အခြားတစ်ခု၏ သက်ရောက်မှုကို ခံရနိုင်သေးသည်။ ထို့ကြောင့် မသိမြင်နိုင်သော အားနည်းချက်များ ထပ်တူမကျသည့် နည်းလမ်းအတွဲကို ရွေးပါ။ ဓာတ်တိုး-ဓာတ်လျော့တုံ့ပြန်နိုင်သော ဒြပ်ပေါင်းများအတွက် စမ်းသပ်တိုင်းတာနည်း ရွေးချယ်ရေးဇယား တွင် နည်းလမ်းတွဲဖက်ရွေးချယ်မှု၏ အကြောင်းရင်းကို အဆင့်ဆင့်ရှင်းပြထားပြီး အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာ စမ်းသပ်ပစ္စည်းလမ်းညွှန်တွင် ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်းဆိုင်ရာ သတိပြုရန်အချက်များကို အသေးစိတ် ဖော်ပြထားသည်။

Seahorse အောက်ဆီဂျင်သုံးစွဲမှုတိုင်းတာနည်းသည် အီလက်ထရွန်များ resorufin ထဲသို့ ဝင်ခြင်းအစား အောက်ဆီဂျင်သို့ သွားခြင်းကို တိုင်းတာသဖြင့် အချက်ပြပစ္စည်း၏ ဓာတုဖြစ်စဉ်ကို လုံးဝရှောင်နိုင်သည်။ သို့သော် ဆိုးဆေးကလည်း ဓာတုနည်းဖြင့် အောက်ဆီဂျင်ကို သုံးစွဲသောကြောင့် ပြည့်စုံသော အာဟာရကြားခံတွင် မိုက်တိုကွန်ဒရီးယားမပါသော ဆိုးဆေးအလွတ်နမူနာများ မဖြစ်မနေ လိုအပ်သည်။ ATP luciferase စမ်းသပ်တိုင်းတာမှုများသည် resorufin ၏ ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်းအစား ဇီဝဓာတုအလင်းထုတ်မှုကို သုံးသောကြောင့် အလင်းလှိုင်းထပ်မှုနှင့် reductase ယှဉ်ပြိုင်မှု နှစ်မျိုးလုံးကို ရှောင်နိုင်သည်။ သို့သော် ATP ပေါင်းစပ်ထုတ်လုပ်မှုစီးဆင်းနှုန်းအစား ရှိနေသော ATP ပမာဏ၏ ဟန်ချက်ကိုသာ ဖော်ပြပေးသည်။ TMRM သို့မဟုတ် JC-10 ကဲ့သို့ အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာ စမ်းသပ်ပစ္စည်းများသည် လျှပ်စစ်ဓာတ်ကွာဟမှုကို ထိန်းထားနိုင်ခြင်းရှိမရှိကို ဖြေဆိုပေးသည်။ သို့သော် ၎င်းတို့ထုတ်လွှတ်သော ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်းသည် ဆိုးဆေးစုပ်ယူသော မြင်နိုင်သည့်အလင်းအကွာအဝေးထဲတွင် ရှိနေသည်။ ထို့ကြောင့် ကျန်ရှိသည့် အပြာရောင်အစွန်းအထင်းက ၎င်းတို့ကိုလည်း ရှုပ်ထွေးစေပြီး ဆိုးဆေးပမာဏတစ်ခုချင်းစီအတွက် ဆိုးဆေးသီးသန့် အလွတ်နမူနာများ လိုအပ်သည်။ အသက်ရှူဖြစ်စဉ် ကွန်ပလက်စ်အစိတ်အပိုင်းများ၏ RNA ကူးရေးထုတ်ကုန် တိုင်းတာမှုများသည် အလင်းဆိုင်ရာပြဿနာများကို လုံးဝရှောင်နိုင်ပြီး နာရီများအတွင်းရှိ ပြောင်းလဲမှုကို စုစည်းဖော်ပြပေးသဖြင့် မိနစ်အတိုင်းအတာဖြင့် တိုင်းတာသော စမ်းသပ်ပြားရလဒ်များကို ဖြည့်စွက်ပေးနိုင်သည်။

ထို့ကြောင့် မက်သလင်းဘလူး၏ ဇီဝဖြစ်ပျက်မှုဆိုင်ရာ အဆိုတစ်ခုအတွက် အနည်းဆုံး ယုံကြည်လက်ခံနိုင်သည့် အထောက်အထားအစုမှာ ထိန်းချုပ်စမ်းသပ်မှု 1 မှ 4 ပါဝင်သော resazurin ရလဒ်၊ မတူညီသော ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာအခြေခံသဘောတရားကို သုံးသည့် resazurin မဟုတ်သော အဆုံးမှတ်တိုင်းတာမှုတစ်ခုနှင့် အပြောင်းအလဲသည် ဆဲလ်အရေအတွက်ကြောင့်လား၊ ဆဲလ်တစ်ခုချင်းစီ၏ ဓာတ်လျော့ အီလက်ထရွန်စီးဆင်းမှုကြောင့်လား၊ နှစ်မျိုးစလုံးကြောင့်လားဟု ရှင်းလင်းဖော်ပြချက်တို့ ဖြစ်သည်။ ထို့ထက်နည်းလျှင် စာဖတ်သူသည် ဇီဝဖြစ်ပျက်မှု လျော့နည်းခြင်းနှင့် စမ်းသပ်တွင်းအလင်းအား လျော့နည်းခြင်းကို ခွဲခြားနိုင်မည် မဟုတ်ပါ။

အနှောင့်အယှက် ထိန်းချုပ်ရေးမှတ်တမ်းပုံစံ

ဆိုးဆေးနှင့် ဓာတ်တိုး-ဓာတ်လျော့ အချက်ပြပစ္စည်းကို တွဲဖက်သုံးသော စမ်းသပ်မှုတိုင်းအတွက် ဤမှတ်တမ်းပုံစံကို ဓာတ်ခွဲခန်းမှတ်စုထဲ ကူးယူပါ။ ဤပုံစံသည် ဤဆောင်းပါးအတွက် မူရင်းဖန်တီးထားသော အသုံးချပစ္စည်းဖြစ်သည်။ ဆိုးဆေးပြင်းအားတစ်ခုလျှင် အတန်းတစ်တန်း ဖြည့်ပါ။

A. အချက်ပြလမ်းကြောင်းများ။ ပြင်းအားတစ်ခုချင်းစီအတွက် အောက်ပါတို့ကို မှတ်တမ်းတင်ပါ။ မိုနိုမာနှင့် ဒိုင်မာတို့အနက် မည်သည့်ပုံစံ လွှမ်းမိုးမည်ဟု မျှော်လင့်ထားကြောင်း၊ မိုက်ခရိုမိုလာပြင်းအား နိမ့်သည့်အခြေအနေနှင့် မိုက်ခရိုမိုလာ ဆယ်ဂဏန်းနှင့်အထက် အခြေအနေတို့ကို ခွဲခြားခြင်း၊ ဆဲလ်မပါသော စမ်းသပ်တွင်း၌ နောက်ဆုံးပါဝင်ပစ္စည်းများ၏ 590 nm အလင်းစုပ်ယူမှုနှင့် ထည့်ဖြည့်ထားသော resorufin ကို ပြန်လည်တိုင်းတာရရှိသည့် ရာခိုင်နှုန်းတို့ဖြစ်သည်။ ပြန်လည်တိုင်းတာရရှိမှုသည် 90 ရာခိုင်နှုန်းခန့်အောက် ကျသွားလျှင် ထိုဆိုးဆေးပမာဏရှိ ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်းတန်ဖိုးအားလုံးကို ဇီဝဖြစ်စဉ်အရ တိကျသောတန်ဖိုးဟု မယူဆဘဲ အလင်းဆိုင်ရာဆုံးရှုံးမှုကြောင့် လျော့နေသောတန်ဖိုးဟု သဘောထားပါ။

B. ဓာတုဖြစ်စဉ် စစ်ဆေးချက်။ တိုင်းတာချိန်တစ်ခုချင်းစီတွင် ဆဲလ်မပါဘဲ ဆိုးဆေးနှင့် ဓာတ်ကူပစ္စည်းပါသော ဖလူအိုရက်ဆင့်အလင်းကို ဓာတ်ကူပစ္စည်းသီးသန့် အခြေခံတန်ဖိုး၏ ရာခိုင်နှုန်းအဖြစ် မှတ်တမ်းတင်ပါ။ အချိန်ကြာလာသည်နှင့် ကွာဟပမာဏ ကြီးလာလျှင် စမ်းသပ်တိုင်းတာနေစဉ် ဆိုးဆေးက အချက်ပြစနစ်နှင့် တုံ့ပြန်နေခြင်းဖြစ်ပြီး အဆုံးမှတ်တစ်ခုတည်းကိုသာ တိုင်းတာခြင်းက အဓိပ္ပာယ်လွဲစေနိုင်သည်။ အချိန်နှင့်အမျှ တုံ့ပြန်မှုပြောင်းလဲမှုကို တိုင်းတာခြင်း သို့မဟုတ် အခြားအချက်ပြပစ္စည်းကို သုံးခြင်းတို့ကို စဉ်းစားပါ။

C. ဇီဝဖြစ်စဉ် အပြန်အလှန်စစ်ဆေးချက်။ ဤစမ်းသပ်မှုအတွက် ရွေးချယ်ထားသော သီးခြားအခြေခံသဘောတရားသုံး တိုင်းတာနည်း၊ ၎င်းအတွက် ဆိုးဆေးအလွတ်နမူနာနှင့် resazurin ရလဒ်က တကယ့်ပြောင်းလဲမှုဖြစ်လျှင် မျှော်လင့်ထားသည့် ရလဒ်တို့ကို အမည်ဖော်ပြပါ။ တကယ့်ဇီဝဖြစ်ပျက်မှုကျဆင်းခြင်းသည် သီးခြားအဆုံးမှတ်တစ်ခုကိုလည်း ကိုက်ညီသော ဦးတည်ချက်သို့ ပြောင်းလဲစေသင့်သည်။ သီးခြားအခြေခံသဘောတရားသုံး အဆုံးမှတ်က မကိုက်ညီလျှင် ရလဒ်နှစ်ခုစလုံးကို ယာယီမယုံကြည်သေးဘဲ နှစ်ခု၏ ပျမ်းမျှကို ယူမည့်အစား စမ်းသပ်ပုံစံကို ပြန်လည်ရေးဆွဲပါ။

D. ကောက်ချက်ဝါကျ။ အောက်ပါပုံစံဖြင့် ဝါကျတစ်ကြောင်း ရေးပါ။ ဖော်ပြထားသော ဆိုးဆေးပမာဏနှင့် အဆင့်တွင် resazurin အချက်ပြသည် ဖော်ပြထားသော ပမာဏအတိုင်း ပြောင်းလဲခဲ့ပြီး၊ ထိုအထဲမှ ဖော်ပြထားသော ပမာဏသည် ဆဲလ်မပါသည့် စမ်းသပ်မှုလွဲမှားချက်ကြောင့်ဖြစ်ကာ၊ သီးခြားအခြေခံသဘောတရားသုံး အဆုံးမှတ်က (ကိုက်ညီသည် သို့မဟုတ် မကိုက်ညီပါ)။ ဖြည့်စွက်ရန်အချက် တစ်ခုခု ကျန်နေပါက စမ်းသပ်မှု မပြီးဆုံးသေးပါ။

မက်သလင်းဘလူးသည် အသုံးဝင်သော ဇီဝဖြစ်ပျက်မှု စမ်းသပ်ပစ္စည်းအဖြစ် ဆက်လက်ရှိနေသည်။ ဇီဘရာငါးလေ့လာမှုကလည်း ဓာတ်ခွဲခန်းများစွာ နေ့စဉ်ရေဆင်းပေါက်ထဲ လောင်းစွန့်နေကြသည့် ဆိုးဆေးပမာဏများတွင် တကယ့်မိုက်တိုကွန်ဒရီးယား သက်ရောက်မှုများရှိကြောင်း ပြသထားသည်။ ဆိုးဆေးက မိမိအနှောင့်အယှက် မပေးနိုင်သော တိုင်းတာကိရိယာများဖြင့်သာ တိုင်းတာရန် တောင်းဆိုနေခြင်းဖြစ်သည်။ ဆိုးဆေးသီးသန့် စမ်းသပ်တွင်းများ၊ ထည့်ဖြည့်ပစ္စည်း ပြန်လည်တိုင်းတာရရှိမှု စမ်းသပ်ချက်နှင့် မတူညီသော ရူပဗေဒသဘောတရားအပေါ် အခြေခံသည့် တိုင်းတာနည်းတစ်ခုကို ထည့်ပေးလိုက်ပါ။ ထိုအခါ အနှောင့်အယှက်သည် ထောင်ချောက်မဟုတ်တော့ဘဲ ကိန်းဂဏန်းဖြင့် သတ်မှတ်နိုင်သော ပမာဏတစ်ခု ဖြစ်လာမည်။