Нийтлэл
Леффлерийн шүлтлэг болон полихром метилен хөх будгийн тайлбар
Будалт хийх ширээн дээр метилен хөхийн өөр өөр хувилбарын шошготой гурван лонх зэрэгцэн байж болно. Нэг дээр нь усан метилен хөх 1% гэж бичсэн байна. Нөгөө дээр нь Леффлерийн шүлтлэг метилен хөх, гурав дахь дээр нь полихром метилен хөх гэжээ. Ажил ихтэй үед ажилтан хамгийн ойр байгаа лонхыг авна. Дараа нь түрхэц хэт бүдэг, эсвэл бүхэлдээ жигд хөх, эсвэл санаандгүй нил ягаан туяатай будагдаж, үүний бурууг сорьцод тохно.
Энэ нь сорьцын биш, найрлагын асуудал юм. Гурван уусмал хоорондоо холбоотой будагч бодис агуулдаг ч будах зарчим нь өөр. Нэг нь саармагт ойр pH-тэй энгийн катион будаг. Нөгөө нь шүлтийн нөлөөгөөр будах чадварыг нь эрчимжүүлсэн мөнөөх будаг. Гурав дахь нь дан будаг байхаа больж, зориудаар исэлдүүлсэн холимог болсон байдаг. Буруу уусмал хэрэглэвэл будах зарчим нь өөрчлөгдөнө.
Товч хариулт
Энгийн усан метилен хөх нь суурь хувилбар: усанд ойролцоогоор 1% будаг агуулсан, бактерийн хэлбэр бүтцийг харах болон ерөнхий микроскопийн шинжилгээнд зориулсан энгийн катион будаг юм. Леффлерийн шүлтлэг метилен хөхийг усанд шингэлсэн спиртэн эх уусмалд хэмжиж авсан бага хэмжээний шингэрүүлсэн шүлт нэмэн бэлтгэдэг. Ингэснээр pH өсөж, катион будаг бактерийн хүчиллэг бүтцүүдэд илүү хүчтэй холбогдоно. Полихром метилен хөх нь шүлтлэг орчинд исэлдүүлж зориудаар боловсруулсан метилен хөх тул лонхонд үлдэгдэл метилен хөхөөс гадна метил бүлгээ алдсан гомологууд (azure A, azure B, azure C), тионин болон метилен нил ягааны холимог агуулагдана. Энэ холимог өөр өөр бүтцийг өөр өөр өнгийн туяагаар буддаг.
Ганц өгүүлбэр санах бол: шүлтжүүлэх нь будалтын эрчмийг өөрчилдөг бол полихромжуулах нь будалтын өнгийг өөрчилдөг.
Энгийн усан метилен хөх: харьцуулах суурь
Хамгийн энгийн найрлага нь шүлт нэмээгүй, исэлдүүлээгүй, усанд уусгасан метилен хөх бөгөөд түгээмэл концентраци нь 1% w/v байдаг. Өнгө үүсгэгч химийн хэлбэр нь хлорид эсрэг ионтой метилтионинийн катион юм. Энэ жижиг, хавтгай фенотиазины будгийг PubChem-ийн метилен хөхийн мэдээлэлд метилтионинийн хлорид гэж тодорхойлсон байдаг. Катион учраас нуклейн хүчлийн фосфат араг яс болон бактерийн эсийн ханан дахь хүчиллэг бүлгүүдэд холбогдож, цайвар дэвсгэр дээр эсүүдийг хөхөөр будна.
Давуу тал нь үр дүнг урьдчилан таамаглах боломжтойд оршино. Бөөм болон бактери хөх харагдана. Ялгарал нь дунд зэрэг. Бүдэг харагддаг бичил биетүүд сул будагдаж болох бөгөөд Леффлер чухам энэ хязгаарлалтыг арилгахыг зорьсон юм. Энэ уусмалын хамаарах бактерийг энгийн аргаар будах аргуудын өргөн хүрээний талаар бактерийн энгийн будалтын тоймоос үзнэ үү. Энд ч бодисын нэршлийг зөв ялгах нь чухал: метил хөх бол огт өөр молекул гэдгийг метил хөх ба метилен хөхийн ялгаа тайлбарладаг. Тиймээс каталогт зөвхөн өнгөний нэрээр хайвал буруу ангиллын будаг авч болзошгүй.
Леффлерийн шүлтлэг метилен хөх: ижил будаг, илүү хүчтэй үйлчлэл
Леффлерийн сонгодог жор нь метилен хөхийн спиртэн эх уусмалыг усан дахь шингэрүүлсэн шүлттэй хольдог. Сурах бичгийн хувилбаруудад 30 mL 95% этанолд 0.3 g будаг уусгаад 100 mL 0.01% калийн гидроксидын усан уусмал нэмэхээр заасан байдаг. Үүнтэй дүйцэх өөр хувилбар нь 30 mL метилен хөхийн ханасан спиртэн уусмал, 100 mL нэрмэл ус, 1 mL 1% KOH юм. Ингэснээр илэрхий шүлтлэг pH-тэй, ойролцоогоор 0.3% будаг агуулсан ажлын уусмал гарна. Худалдааны хувилбарууд мөн энэ зарчмыг дагадаг бөгөөд Thermo Fisher-ийн микробиологийн будгийн каталогт Леффлерийн шүлтлэг метилен хөхийг полихром болон усан хувилбаруудын хамт өөр өөр зориулалттай тусдаа бүтээгдэхүүн болгон жагсаасан байдаг.
Үндсэн зарчим нь шүлтэд оршино. pH-ийг өсгөхөд сорьцын карбоксил болон фосфат бүлгүүд протоноо алдаж, сөрөг цэнэгтэй байрлалуудын нягт нэмэгдэнэ. Харин спиртэн эх уусмал нь будгийг бүрэн ууссан байлгаж, эдгээр байрлалд мономер хэлбэрээр хүрэх нөхцөлийг хангана. Үүний үр дүнд бактери саармаг усан будагтай харьцуулахад хурдан, илүү эрчимтэй будагдаж, ердийн бактериологийн түрхэцэд танил болсон гүн хөх савханцар болон коккууд харагдана. Будалтын хугацаа ихэвчлэн нэгээс гурван минут бөгөөд дараа нь усаар зайлна.
Сонгодог хэрэглээ нь Леффлерийн ийлдэст тэжээлт орчинд ургуулсан Corynebacterium diphtheriae юм. Эдгээр нь нарийхан, ихэвчлэн үзүүр хэсгээрээ бүдүүрсэн савханцар бөгөөд нөөцлөгдсөн полифосфатаас тогтсон метахроматик Бабеш–Эрнстийн мөхлөгүүд нь тод будагдана. Тэжээлт орчин, будгийг хослуулсан нь түүхэн уламжлалтай бөгөөд хоёуланг нь нэг бактериологичийн бүтээл гэж үздэг. Мөхлөгийн тод ялгарал нь оношилгооны хувьд гол давуу тал болдог. Сахуугийн шинжилгээнээс гадна энэ будгийг өсгөврийн түрхэцэд ерөнхий бактериологийн будаг болгон, эмнэлзүйн түрхэцэд Neisseria-ийн хэлбэр бүтцийг харахад, мөн Грамын будалт шаардлагагүй боловч энгийн усан хөх будаг хэт бүдэг үр дүн өгдөг үед хэрэглэдэг. Энэ нь нэг өнгийн будаг юм. Хүчиллэг бүх бүтэц хөхийн аль нэг туяагаар будагдана. Протоколд өнгөөр ялган будах шаардлагатай бол дан шүлт үүнийг хангаж чадахгүй.
Практикт анхаарах нэг зүйл: шүлтлэг будгийн уусмал хадгалалтын явцад болон нүүрсхүчлийн хий шингээхэд муудаж, тунадас үүсгэдэг. Лабораториуд бага хэмжээгээр бэлтгэх, эсвэл каталогийн бэлэн уусмал худалдан авч хадгалах хугацааг нь мөрдөх ёстой. Слайд бүр дээр тунадас үлдээдэг болсон хуучин лонхыг аргацаан хэрэглэх нь зохимжгүй.
Полихром метилен хөх: нэг нэр, хэд хэдэн будаг
Полихром метилен хөхийг мөнөөх будгаас эхлэн бэлтгэдэг боловч шүлтлэг орчинд хяналттай исэлдүүлдэг. Үүнийг түүхэнд боловсруулалт буюу полихромжуулалт гэж нэрлэж ирсэн. Шүлтлэг орчинд удаан байлгах, карбонаттай халаах, эсвэл дихромат зэрэг бодисоор исэлдүүлэхэд диметиламино орлуулагчдаас метил бүлгүүд шат дараалан сална. Үр дүнд нь холимог үүснэ: үлдэгдэл метилен хөх, azure B (нэг метил бүлгээ алдсан), azure A болон azure C (цааш метил бүлгүүдээ алдсан), тионин (бүх метил бүлгээ алдсан), мөн метилен нил ягааны бүлгийн исэлдэлтийн дагалдах бүтээгдэхүүнүүд. Бүрэлдэхүүн бүр өөрийн өнгийн туяа, эдтэй холбогдох хандлагатай тул холимог нь метахроматик байдлаар будна: бөөм, мөхлөг, муцин болон мөгөөрс тус бүр хөхөөс улаан-нил ягаан хүртэлх ялгаатай туяатай болно.
Энэ химийн үйл явц нь алдартай цусны будгуудын үндэс мөн. Анхны судлаачид шүлтжүүлсэн метилен хөх хумхаагийн шимэгчийн бөөмийг нил ягаан туяагаар буддагийг олж тогтоосон боловч боловсруулсан усан уусмалууд нь тогтворгүй, хэдхэн хоногийн дотор тунадасждаг байв. Нил ягаан цусны будгийг хэрхэн зохион бүтээсэн тухай тоймд Малаховский, Романовский нар 1891 онд энэ нөлөөг бие биеэсээ үл хамааран хэрхэн ашигласан, будгийн тунадасыг тогтворжуулж, түрхцийг халаахгүйгээр бэхжүүлэхийн тулд метанолыг хэрхэн нэвтрүүлсэн, улмаар Гимза хэмжиж авсан azure B болон эозинд суурилсан холимгийг глицеринээр тогтворжуулан хэрхэн стандартчилсныг өгүүлдэг. Орчин үеийн Гимза төрлийн будгууд нь Романовскийн нөлөөг үүсгэдэг полихром метилен хөх ба эозины хослолоос шууд үүсэлтэй. Эозинтой хослуулах болон azure B бүрэлдэхүүний талаар дэлгэрэнгүйг Романовскийн төрлийн будгууд ба azure B–эозины харилцан үйлчлэл-ээс үзнэ үү.
Холимог учраас полихром метилен хөх нь мөн чанараараа энэ гурвын дундаас хамгийн бага стандартчилагдсан нь юм. Өнгийн туяаны яг тэнцвэр нь исэлдүүлэх арга болон исэлдэлтийн зэргээс хамаардаг. Иймээс гистологийн ханган нийлүүлэгчид үүнийг удаан хадгалсан Леффлерийн будаг гэж бус, гүйцэтгэлийн өөрийн шалгалттай тусдаа бүтээгдэхүүн болгон борлуулдаг. Түгээмэл хэрэглээнд шигүү мөхлөгт эсийн мөхлөг, муцин, мөгөөрсийг метахроматик байдлаар харуулах, сийвэнт эсийн нарийн бүтцийг харах, мөн Гудпасчер төрлийн полихром аргаар эдийн зүслэг дэх Helicobacter pylori-г илрүүлэх зэрэг орно. Өнгөөр ялгах шаардлагатай үед энэ нь зөв сонголт, харин протоколд бактерийн цэвэр, нэг өнгийн дүрсийг шаардсан үед буруу сонголт юм.
Найрлага ба зориулалтын харьцуулалт
| Найрлага | Лонхонд юу агуулагдах вэ | pH-ийн шинж | Будах зарчим | Хэрэглэх нөхцөл |
|---|---|---|---|---|
| Усан метилен хөх (~1%) | Усанд уусгасан метилен хөх | Саармагт ойр | Дан катион будаг нуклейн хүчил болон ханын хүчиллэг бүлгүүдэд холбогдоно; нэг өнгийн хөх будалт | Ердийн хэлбэр бүтцийн шинжилгээ, сургалтын түрхэц, ялгарлын өндөр шаардлагагүй ерөнхий микроскопийн шинжилгээ |
| Леффлерийн шүлтлэг метилен хөх (~0.3% будаг, шингэрүүлсэн KOH нэмсэн) | Спиртэн эх уусмалаас шингэлсэн метилен хөх, дээр нь ~0.01% шүлт | Шүлтлэг | Ижил катион протоноо алдсан хүчиллэг байрлалуудад илүү хүчтэй холбогдоно; хурдан, эрчимтэй нэг өнгийн будалт | Ерөнхий бактериологи, мөхлөгийн ялгарлыг харуулах сахуугийн түрхэц, саармаг будгаар хангалттай тод будагддаггүй бичил биетүүд |
| Полихром метилен хөх | Исэлдэлтийн явцад метил бүлгээ алдсан холимог: azure A, azure B, azure C, тионин, метилен нил ягаан, үлдэгдэл метилен хөх | Бэлтгэх үед шүлтлэг; холимог хэлбэрээр нийлүүлдэг | Холбогдох хандлага нь ялгаатай олон гомолог метахроматик, олон өнгийн туяа үүсгэнэ; эозинтой хамт Романовскийн будгийн үндэс болдог | Шигүү мөхлөгт эс, муцин, эдийн метахромази, Гимза төрлийн уламжлагдсан будгаар хийх цус болон шимэгчийн шинжилгээ |
Хүснэгтийг сонголт хийх дараалал гэж уншаарай. Сорьц хэт бүдэг будагдвал pH-ийн зарчмыг өөрчилж, Леффлерийн будгийг сонгоно. Бүх бүтэц будагдсан ч хоорондоо ялгарахгүй байвал будгийн зарчмыг өөрчилж, полихромыг сонгоно. Леффлерийн будгаар будсан түрхэцэд мөхлөгүүд маш тод харагдаж байхад удирдагч бөөм, цитоплазм яагаад ижил хөх өнгөтэй байгааг асуувал ямар ч шүлтлэг, нэг өнгийн будаг тэдгээрийг өнгөөр ялгах боломжгүй гэж хариулна. Энэ шаардлага нь полихром будгийн бүлэг болон түүнээс уламжлагдсан цусны будгууд-д хамаарна.
Түгээмэл андуурлуудаас зайлсхийх нь
Ихэнх төөрөгдөл хоёр алдаанаас үүсдэг. Эхнийх нь лонхондоо хоёулаа хөх харагддаг тул Леффлерийн будгийг энгийн метилен хөхтэй орлуулан хэрэглэж болно гэж үзэх явдал. Тэд pH болон будалтын эрчмээрээ ялгаатай. Леффлерийн будаг заасан үед саармаг будаг орлуулбал протоколын гол зорилго болсон мөхлөгийн ялгарал алдагдана. Хоёр дахь нь хуучирсан эсвэл санамсаргүй удаан хадгалагдсан ямар ч шүлтлэг хөх будгийг полихром гэж үзэх явдал. Хяналтгүй удаан хадгалалт нь найрлага, концентраци нь тодорхойгүй холимог үүсгэдэг. Харин жинхэнэ полихром уусмалыг тогтоосон исэлдүүлэх аргаар бэлтгэж, цусны будгийн уламжлалд хэмжиж авсан эозинтой хослуулдаг. Түүх энд сургамжтай: 1890-ээд оны боловсруулсан тогтворгүй усан уусмалуудыг метанолоор тогтворжуулсан найрлагууд орлосон нь чухам хяналтгүй холимгийн үр дүнг давтан гаргах боломжгүй байсантай холбоотой. Хэзээнийх нь тодорхойгүй лонхоос оношилгооны слайд будахдаа энэ сургамжийг санах нь зүйтэй.
Нэршлийг зөв ялгаснаар энэ асуудлыг бүрэн шийдэж болно. Өнгөнөөс нь таамаглахын оронд шошго дээрх каталогийн бүтээгдэхүүн (усан, Леффлерийн эсвэл полихром), будгийн агууламж, зориулалтыг баталгаажуулаарай. Гурван найрлага нэг хромофорын гарал үүсэлтэй. Гэхдээ зориулалт нь ижил биш.