മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഉപയോഗിച്ച് കവിളിലെ കോശങ്ങൾക്ക് നിറം നൽകൽ: എന്താണ് നിരീക്ഷിക്കേണ്ടത്

ഒരു വിദ്യാർഥിനി കവിളിലെ കോശങ്ങൾ അടങ്ങിയ സസ്പെൻഷന്റെ ഒരു തുള്ളി സ്ലൈഡിൽ വച്ച് മൈക്രോസ്കോപ്പിലൂടെ നോക്കുന്നു; ഏതാണ്ട് ഒന്നും കാണുന്നില്ല. തെളിച്ചമുള്ള ദൃശ്യവലയം കടന്ന് വിളറിയ പ്രേതരൂപങ്ങൾപോലെ ചിലത് ഒഴുകിനീങ്ങുന്നു. അവൾ ഫോക്കസ് ക്രമീകരിക്കുന്നു, തുടർന്ന് വെളിച്ചം കൂട്ടുന്നു, ഒടുവിൽ സ്ലൈഡ് ശൂന്യമാണെന്ന നിഗമനത്തിലെത്തുന്നു. സ്ലൈഡ് ശൂന്യമല്ല. കോശങ്ങൾ അവിടെയുണ്ട്. അവ ഏതാണ്ട് സുതാര്യമാണ്; ഈ സുതാര്യതയാണ് ഈ സ്റ്റെയിൻ പരിഹരിക്കേണ്ട അടിസ്ഥാന പ്രശ്നം.

പ്രതീക്ഷയും കാണുന്ന ചിത്രവും തമ്മിലുള്ള ഈ പൊരുത്തക്കേട് നടപടിക്രമം തുടങ്ങുന്നതിന് മുമ്പ് വ്യക്തമാക്കുന്നത് പ്രയോജനകരമാണ്. ക്യാമറയിൽ സൂം ചെയ്യുമ്പോൾ അകലെയുള്ള ഒരു ബോർഡ് വ്യക്തമാകുന്നതുപോലെ മൈക്രോസ്കോപ്പ് വിശദാംശങ്ങൾ വെളിപ്പെടുത്തുമെന്ന് തുടക്കക്കാർ പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു. ബ്രൈറ്റ് ഫീൽഡ് മൈക്രോസ്കോപ്പ് ചെയ്യുന്നത് അതിലും പരിമിതമായ ഒരു കാര്യമാണ്: പ്രകാശം ആഗിരണം ചെയ്യുന്നതിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു. നിറം നൽകാത്ത കവിളിലെ കോശം പ്രകാശം ഏതാണ്ട് ആഗിരണം ചെയ്യുന്നില്ല; അതിനാൽ അത് ഏതാണ്ട് ഒരു വ്യത്യാസവും സൃഷ്ടിക്കുന്നില്ല. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഈ വ്യത്യാസം കൂട്ടിച്ചേർക്കുന്നു. അത് കോശത്തിനുള്ളിൽ അസമമായി ബന്ധിക്കുകയും ഘടനയെ കോൺട്രാസ്റ്റാക്കി മാറ്റുകയും ചെയ്യുന്നു. വിദ്യാർഥികൾ ഈ ആശയം മനസ്സിലാക്കിയാൽ, പിന്നീടുള്ള ഓരോ ഘട്ടവും വെറും നിർദേശങ്ങളുടെ പട്ടികയായല്ല, ആ ആശയത്തിന്റെ സ്വാഭാവിക തുടർച്ചയായി വായിക്കാനാകും.

സ്കൂൾ ലാബിൽ ലളിതമായ സ്റ്റെയിനുകൾ കോൺട്രാസ്റ്റ് കൂട്ടുന്നത് എങ്ങനെയെന്ന പശ്ചാത്തലവിവരം ഇവിടെ സഹായിക്കും. നിറം നൽകുന്നതിന് മുമ്പ് ബ്രൈറ്റ് ഫീൽഡ് മൈക്രോസ്കോപ്പ് സജ്ജമാക്കുന്നതിനെക്കുറിച്ചുള്ള ഒരു ഓർമപ്പെടുത്തൽ പരാജയപ്പെടുന്ന സ്ലൈഡുകളിൽ പകുതിയും ഒഴിവാക്കാൻ സഹായിക്കുന്നു. നിറത്തിനു പിന്നിലെ രസതന്ത്രം മൈക്രോസ്കോപ്പിയിൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനെക്കുറിച്ചുള്ള ഒരു ആമുഖത്തിൽ വിശദീകരിക്കുന്നു; ഈ പ്രത്യേക ചായം ലാബ് ബെഞ്ചിൽ ആവർത്തിച്ച് ഉപയോഗിക്കപ്പെടുന്നത് എന്തുകൊണ്ടാണെന്നും അതിൽ പ്രതിപാദിക്കുന്നു.

ക്ലാസ്‌മുറിയിലെ നടപടിക്രമം

പൊതുവായ ക്ലാസുകൾക്കായി താഴെ കൊടുത്തിരിക്കുന്ന വെറ്റ് മൗണ്ട് രീതിയാണ് ലളിതമായ പതിവ് തിരഞ്ഞെടുപ്പ്. ഇതിന് ജ്വാലയോ ഫിക്സേഷൻ ഘട്ടമോ ആവശ്യമില്ല. ചില കോളേജ് മാനുവലുകളിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഫിക്സ് ചെയ്ത സ്മിയർ രീതിയിൽ വായുവിൽ ഉണക്കലും ഹ്രസ്വമായ താപ ഫിക്സേഷനും അധികമായി ഉൾപ്പെടുന്നു. Biology LibreTexts വഴി പ്രസിദ്ധീകരിച്ച North Central Texas College-ന്റെ കവിളിലെ കോശങ്ങളുടെ സ്മിയർ പ്രവർത്തനത്തിൽ ഈ രീതി കാണാം. എന്നാൽ താപ ഫിക്സേഷൻ മൈക്രോബയോളജിയിലെ ഒരു പതിവാണ്; എപ്പിത്തീലിയൽ കോശങ്ങൾ കാണാനുള്ള നിർബന്ധ ഘട്ടമല്ല.

ആവശ്യമായവ: വൃത്തിയുള്ള സ്ലൈഡുകളും കവർസ്ലിപ്പുകളും, അണുവിമുക്തമായ ഒറ്റത്തവണ ഉപയോഗിക്കാവുന്ന സ്വാബുകൾ (ഇവയാണ് അഭികാമ്യം) അല്ലെങ്കിൽ പുതിയ പരന്ന ടൂത്ത്പിക്കുകൾ, 0.5 മുതൽ 1 ശതമാനം വരെ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ജലലായനി നിറച്ച ഡ്രോപ്പർ കുപ്പി, ഡിസ്റ്റിൽ ചെയ്തതോ അയണുകൾ നീക്കം ചെയ്തതോ ആയ വെള്ളം, ബ്ലോട്ടിങ് പേപ്പർ, കയ്യുറകൾ, 100x, 400x ആകെ ആവർധനം നൽകുന്ന ഒരു കോമ്പൗണ്ട് മൈക്രോസ്കോപ്പ്.

1. സാധാരണ വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് വായ കഴുകുക. പിന്നീട് തീവ്രമായി നിറം പിടിച്ച് കോശങ്ങളിൽനിന്ന് ശ്രദ്ധ തിരിക്കുന്ന ഭക്ഷണകണങ്ങൾ ഇതിലൂടെ നീക്കം ചെയ്യാം.
2. ഓരോ വിദ്യാർഥിയും സ്വന്തം കവിളിൽനിന്നു മാത്രം സാമ്പിൾ എടുക്കണം. പുതിയ അണുവിമുക്ത സ്വാബ് ഉപയോഗിച്ച് കവിളിന്റെ ഉൾവശം മെല്ലെ ഉരസുക. അമർത്തുക; ചുരണ്ടരുത്. അസ്വസ്ഥതയോ രക്തസ്രാവമോ ഉണ്ടാകുന്നതിനും വളരെ മുമ്പ് നിർത്തുക.
3. വൃത്തിയുള്ള സ്ലൈഡിന്റെ നടുവിലൂടെ സ്വാബ് ഉരുട്ടി നേർത്ത പാളിയായി പരത്തുക. സ്ലൈഡ് വ്യക്തമായി നിരീക്ഷിക്കാനാകുമോ എന്ന് നിർണയിക്കുന്ന ഏറ്റവും പ്രധാന ഘടകം നേർത്ത പാളിയാണ്. കട്ടിയുള്ള വെളുത്ത അടിവ് നിറം നൽകിയാൽ തിരിച്ചറിയാനാകാത്ത നീലക്കൂട്ടമായി മാറും.
4. സ്മിയറിനു മുകളിൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന്റെ ഒരു തുള്ളി ചേർക്കുക. 1 മുതൽ 3 മിനിറ്റ് വരെ വയ്ക്കുക. പല കോളേജ് നടപടിക്രമങ്ങളിലും ഒരു മിനിറ്റ് മതിയാകും; NCERT ഒൻപതാം ക്ലാസ് സയൻസ് ലബോറട്ടറി മാനുവൽ താൽക്കാലിക മൗണ്ടിനായി ഏകദേശം 3 മിനിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നു. കൂടുതൽ സമയം വയ്ക്കുന്നത് കൂടുതൽ നല്ലതല്ല; അമിതമായി നിറം നൽകുന്നതാണ് സമയക്രമത്തിലെ ഏറ്റവും സാധാരണ പിഴവ്.
5. പ്രാദേശിക നടപടിക്രമം അനുസരിച്ച് ഡിസ്റ്റിൽ ചെയ്ത വെള്ളത്തിൽ മെല്ലെ കഴുകുക, അല്ലെങ്കിൽ ബ്ലോട്ടിങ് പേപ്പർ ഉപയോഗിച്ച് അധിക സ്റ്റെയിൻ വലിച്ചെടുക്കുക. പശ്ചാത്തലം ഇളം നീലയാകണം, കടും നീലയാകരുത്.
6. കവർസ്ലിപ്പ് ഒരു കോണിൽ താഴ്ത്തി ആദ്യം ഒരു അരിക് തൊടാൻ അനുവദിക്കുക; തുടർന്ന് പതുക്കെ താഴെയെത്തിക്കുക. ഇത് വായുകുമിളകൾ ഒഴിവാക്കും.
7. കോശങ്ങൾ കണ്ടെത്താൻ കുറഞ്ഞ ആവർധനത്തിൽ തുടങ്ങുക; ഫോക്കസും മധ്യസ്ഥാനവും ഉറപ്പാക്കിയശേഷം 100x-ലേക്കും ഒടുവിൽ 400x-ലേക്കും മാറുക. 400x-ൽ ഫൈൻ ഫോക്കസ് മാത്രം ഉപയോഗിക്കുക.

സ്റ്റെയിനിന്റെ സാന്ദ്രതയെക്കുറിച്ച് ഒരു കാര്യം കൃത്യമായി പറയേണ്ടതുണ്ട്. സ്കൂൾ നടപടിക്രമങ്ങൾ പൊതുവേ ഏകദേശം 1 ശതമാനം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ജലലായനിയാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്. കൂടുതൽ സാന്ദ്രമായ സ്റ്റോക്ക് ലായനിയോ ദീർഘനേരത്തെ സമ്പർക്കമോ ന്യൂക്ലിയസിനെക്കാൾ വേഗത്തിൽ പശ്ചാത്തലത്തെ ഇരുണ്ടതാക്കും; ഇതോടെ ഈ പ്രവർത്തനം ആശ്രയിക്കുന്ന കോൺട്രാസ്റ്റ് വിപരീതമാകും.

കവിളിൽനിന്നുള്ള സാമ്പിളുകൾ സുരക്ഷിതമായി കൈകാര്യം ചെയ്യൽ

കവിളിലെ സാമ്പിളുകൾക്കൊപ്പം ഉമിനീരും വായിൽ സാധാരണയായി കാണപ്പെടുന്ന സൂക്ഷ്മജീവികളും എത്തുന്നു. അതിനാൽ സാമ്പിൾ നൽകുന്നവർ ആരോഗ്യമുള്ള സഹപാഠികളാണെങ്കിലും, ഓരോ പുതിയ സ്മിയറും രോഗാണുസമ്പർക്കത്തിന് സാധ്യതയുള്ള വസ്തുവായി പരിഗണിക്കുക. അധ്യാപന ലബോറട്ടറികൾക്കായുള്ള American Society for Microbiology-യുടെ ജൈവസുരക്ഷാ മാർഗനിർദേശങ്ങൾ പൊതുതത്ത്വങ്ങൾ വ്യക്തമാക്കുന്നു: സെഷന് മുമ്പ് അപകടസാധ്യത വിലയിരുത്തുക, കയ്യുറകൾ ധരിക്കുക, ദ്രാവകം തെറിക്കാൻ സാധ്യതയുള്ളിടത്ത് കണ്ണുകൾ സംരക്ഷിക്കുക, ശേഷം കൈകൾ കഴുകുക, ബെഞ്ചുകൾ അണുനശീകരിക്കുക, മലിനമായ ഒറ്റത്തവണ ഉപയോഗിക്കുന്ന വസ്തുക്കൾ അംഗീകൃത ജൈവമാലിന്യ സംവിധാനത്തിലൂടെ സംസ്കരിക്കുക.

ക്ലാസ്‌മുറിയിലെ നാല് നിയമങ്ങൾ അപകടസാധ്യതയുടെ ഭൂരിഭാഗവും നിയന്ത്രിക്കും. ഓരോ സ്വാബിനും ഓരോ സ്ലൈഡിനും ഒരൊറ്റ സാമ്പിൾ ദാതാവ് മാത്രം; ഒരിക്കലും പങ്കിടരുത്. സ്വന്തം സാമ്പിൾ മാത്രം എടുക്കുക; അടുത്തിരിക്കുന്നയാളിൽനിന്ന് ഒരിക്കലും എടുക്കരുത്. ഒറ്റത്തവണ ഉപയോഗിക്കുന്ന സ്വാബുകളും ടൂത്ത്പിക്കുകളും നേരിട്ട് നിശ്ചിത മാലിന്യപാത്രത്തിലിടണം; ബെഞ്ചിൽ തിരികെ വയ്ക്കരുത്. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ചർമത്തിലും വസ്ത്രങ്ങളിലും കറയുണ്ടാക്കുകയും കണ്ണുകളിൽ അസ്വസ്ഥതയുണ്ടാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു; അതിനാൽ കയ്യുറകളും ചായങ്ങൾ കൈകാര്യം ചെയ്യുമ്പോഴുള്ള പതിവ് ശുചിത്വ മുൻകരുതലുകളും പാലിക്കണം. സ്മിയറിൽനിന്നുള്ള എന്തിനെയെങ്കിലും കൾച്ചർ ചെയ്യുന്നതിലേക്ക് ഈ പ്രവർത്തനം നീട്ടരുത്. സ്കൂളിന്റെ സുരക്ഷാ നടപടിക്രമത്തിന് പുറത്ത് പുതിയ മനുഷ്യസാമ്പിളുകളിൽ താപ ഫിക്സേഷൻ സ്വമേധയാ പരീക്ഷിക്കരുത്.

എന്താണ് നിരീക്ഷിക്കേണ്ടത്, എന്തുകൊണ്ടാണ് അങ്ങനെ കാണപ്പെടുന്നത്

100x-ൽ, ക്രമരഹിതമായ അണ്ഡാകാരമോ ബഹുഭുജാകാരമോ ആയ രൂപരേഖകളുള്ള, ഇളം നീല നിറത്തിലുള്ള, വീതിയേറിയ പരന്ന കോശങ്ങൾ കണ്ടെത്തുക. അവ ഒറ്റയ്ക്കോ അയഞ്ഞ രീതിയിൽ പരസ്പരം മൂടിക്കിടക്കുന്ന പാളികളായോ കാണപ്പെടും. ഓരോ കോശത്തിലും സാധാരണയായി ഒരു കടും നീല പുള്ളിയുണ്ടാകും. ആ പുള്ളിയാണ് ന്യൂക്ലിയസ്. അവയുടെ ക്രമീകരണവും ശ്രദ്ധിക്കുക: സ്ക്വാമസ് എപ്പിത്തീലിയൽ കോശങ്ങൾ നേർത്ത ടൈലുകൾപോലെയാണ്, ഗോളങ്ങളല്ല. അതുകൊണ്ടാണ് അവയുടെ അരികുകൾ വൃത്താകൃതിയിലുള്ള ബലൂണുകൾക്കുപകരം പൊട്ടലുകളുള്ള ഗ്ലേസ് പാളിപോലെ കാണപ്പെടുന്നത്.

400x-ൽ, മൂന്ന് സവിശേഷതകൾ വ്യക്തമായി തിരിച്ചറിയാം. കോശത്തെ ചുറ്റിയുള്ള നേർത്ത ഇരുണ്ട രേഖയായി കോശാതിർത്തി കാണപ്പെടുന്നു. ഉള്ളിലെ ഭാഗം സൈറ്റോപ്ലാസം നിറയ്ക്കുന്നു; അതിന് നേരിയതും ഒരേപോലുള്ളതുമായ നീല നിറമാണ്. ന്യൂക്ലിയസ് കൂടുതൽ ഇരുണ്ടതും ഒതുങ്ങിയതുമായി കാണപ്പെടുന്നു; പലപ്പോഴും അണ്ഡാകാരമായിരിക്കും. സാധാരണയായി മധ്യത്തിന് അടുത്തായിരിക്കും, എന്നാൽ എല്ലായ്പ്പോഴും അങ്ങനെയല്ല. ഈ മൂന്നിനൊപ്പം കോശത്തിന്റെ ആകൃതിയും ആവർധനവും രേഖപ്പെടുത്താൻ വിദ്യാർഥികളോട് ആവശ്യപ്പെടുക; പ്രവർത്തനപത്രം ചോദിക്കുന്നതും ഇതുതന്നെയാണ്.

കൃത്യതയെ സംബന്ധിച്ച ഒരു കാര്യം ഇവിടെ പ്രധാനമാണ്; പല പ്രവർത്തനപത്രങ്ങളും ഇത് തെറ്റായി അവതരിപ്പിക്കുന്നു. കാണാവുന്ന അതിർത്തി പ്ലാസ്മ മെംബ്രേൻ സ്ഥിതിചെയ്യുന്ന മേഖലയോട് യോജിക്കുന്നു. എന്നാൽ ഏകദേശം 7 മുതൽ 10 നാനോമീറ്റർ വരെ കനമുള്ള ലിപിഡ് ഇരട്ടപ്പാളിയായ മെംബ്രേൻ തന്നെ ഒരു സ്കൂൾ മൈക്രോസ്കോപ്പിന് വേർതിരിച്ചറിയാനാകുന്ന പരിധിയേക്കാൾ വളരെ താഴെയാണ്. വിദ്യാർഥികൾ കാണുന്നത് കോശത്തിന്റെ പ്രകാശീയ അരികും അവിടെ അടിഞ്ഞുകൂടിയ സ്റ്റെയിനുമാണ്. ഇതേ ജാഗ്രത കോശാംഗങ്ങൾക്കും ബാധകമാണ്. മൈറ്റോകോൺഡ്രിയ, എൻഡോപ്ലാസ്മിക് റെറ്റിക്കുലം, ഗോൾജി ബോഡികൾ, റൈബോസോമുകൾ എന്നിവ ഈ തയ്യാറാക്കലിൽ ദൃശ്യമാകുന്നില്ല. മൈക്രോസ്കോപ്പി ഉപകരണങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള NCBI-യുടെ കോശജീവശാസ്ത്ര പശ്ചാത്തലവിവരണം വിശദീകരിക്കുന്നതുപോലെ, നല്ല സാഹചര്യങ്ങളിൽ ഒരു സാധാരണ പ്രകാശ മൈക്രോസ്കോപ്പിന് ഏകദേശം 0.2 മൈക്രോമീറ്റർ വരെയുള്ള വിശദാംശങ്ങൾ വേർതിരിച്ചറിയാനാകും. അതിസൂക്ഷ്മ ഘടനകളിൽ ഭൂരിഭാഗവും ആ പരിധിക്കു താഴെയോ അതിനടുത്തോ ആണ്. കൂടുതൽ വിശദാംശങ്ങൾ നൽകാത്ത ഉയർന്ന ആവർധനം ചിത്രം വലുതാക്കുക മാത്രമാണ് ചെയ്യുന്നത്.

എന്തുകൊണ്ടാണ് ന്യൂക്ലിയസിന് ഏറ്റവും ഇരുണ്ട നിറം ലഭിക്കുന്നത്? മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഒരു കാറ്റയോണിക് ചായമാണ്; ലായനിയിൽ അതിന് ധന ചാർജുണ്ട്. കോശത്തിലെ ഋണ ചാർജുള്ള വസ്തുക്കളുമായി, പ്രത്യേകിച്ച് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളുമായി, അത് ബന്ധപ്പെടുന്നു. ക്രോമാറ്റിൻ ന്യൂക്ലിയസിൽ DNA കേന്ദ്രീകരിക്കുന്നതിനാൽ ന്യൂക്ലിയസാണ് ഏറ്റവും കൂടുതൽ ചായം ശേഖരിക്കുന്നത്. സൈറ്റോപ്ലാസത്തിൽ RNA-യും ചാർജുള്ള മറ്റ് തന്മാത്രകളും അടങ്ങിയതിനാൽ അതിനും നിറം ലഭിക്കുന്നു; പക്ഷേ കൂടുതൽ പരന്ന രീതിയിലും കുറഞ്ഞ തീവ്രതയിലുമാണ്. പ്രധാനമായ പരിമിതി ഇതാണ്: മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ DNA-യ്ക്ക് മാത്രം പ്രത്യേകമായ ഒരു സ്റ്റെയിൻ അല്ല. ന്യൂക്ലിയർ ഇമേജിങ്ങിലെ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ വിതരണത്തെക്കുറിച്ചുള്ള പഠനം ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ കൂടുതലുള്ള മേഖലകളുമായി കാറ്റയോൺ ബന്ധപ്പെടുന്നതിനെ വിവരിക്കുന്നു. കോശ തയ്യാറാക്കലുകളിൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ബന്ധിക്കുന്നതിനെക്കുറിച്ചുള്ള പഴയ അളവുപരമായ പഠനത്തിൽ, ബന്ധിത ചായത്തിന്റെ ഭൂരിഭാഗവും ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടതായി കണ്ടെത്തി. അതിനാൽ ഇരുണ്ട ന്യൂക്ലിയസും ഇളം സൈറ്റോപ്ലാസവും ചേർന്നത് ഒരു കോൺട്രാസ്റ്റ് മാതൃകയാണ്, തന്മാത്രാതല പരിശോധനയല്ല.

വിദ്യാർഥികൾ വരുത്തുന്ന പിഴവുകളും അവ തിരിച്ചറിയുന്ന വിധവും

പരാജയപ്പെടുന്ന മിക്കവാറും എല്ലാ സ്ലൈഡുകളും അഞ്ച് മാതൃകകളിലൊന്നിൽപ്പെടുന്നു. കാരണം അറിയാതെ വീണ്ടും ചെയ്യുന്നതിനുപകരം സ്ലൈഡിലെ പ്രശ്നം തിരിച്ചറിയാൻ വിദ്യാർഥികളെ പഠിപ്പിക്കുക.

അമിതമായി നിറം നൽകുന്നത് കോശങ്ങളെയും പശ്ചാത്തലത്തെയും ഒരേപോലെ ഇരുണ്ടതാക്കും; അതിനാൽ ന്യൂക്ലിയസ് ദൃശ്യവലയത്തിൽ ലയിച്ചുപോകും. നിറം നൽകുന്ന സമയം കുറച്ചോ കൂടുതൽ നന്നായി കഴുകിയോ ഇത് പരിഹരിക്കുക. ആവശ്യത്തിന് നിറം നൽകാത്തപ്പോൾ വെളിച്ചം കൂട്ടിയാൽ അപ്രത്യക്ഷമാകുന്ന പ്രേതരൂപങ്ങൾപോലെ കോശങ്ങൾ കാണപ്പെടും; മുപ്പത് സെക്കൻഡ് വീതം സമയം കൂട്ടുക. കട്ടിയുള്ള സ്മിയറുകൾ ഒരു രൂപരേഖയും പിന്തുടരാനാകാത്തവിധം തിങ്ങിയ, പരസ്പരം മൂടിക്കിടക്കുന്ന കൂട്ടങ്ങൾ സൃഷ്ടിക്കും. ഇതിന്റെ പരിഹാരം പരത്തുന്ന രീതിയിലാണ്: അടുത്ത തവണ കൂടുതൽ നേർത്തതായി പരത്തുക, കാരണം കോശങ്ങളുടെ ഒരു കൂമ്പാരത്തെ എത്ര കഴുകിയാലും ശരിയാക്കാനാവില്ല. വായുകുമിളകൾ വ്യക്തമായ ഇരുണ്ട അരികുകളുള്ള പൂർണ വൃത്തങ്ങളായി കാണപ്പെടും; അവയെ കോശഘടനകളായി തെറ്റിദ്ധരിക്കുന്ന തുടക്കക്കാരുടെ ശ്രദ്ധ അവ തിരിക്കും. കവർസ്ലിപ്പ് വീണ്ടും ഒരു കോണിൽ പതുക്കെ വയ്ക്കുക. കോശങ്ങളുടെ മുകളിലോ ചുറ്റുമോ ചിതറിക്കിടക്കുന്ന ചെറിയ ഇരുണ്ട പുള്ളികൾ സാധാരണയായി വായിലെ സ്വാഭാവിക ബാക്ടീരിയകളാണ്; Ingrid Science-ന്റെ കവിളിലെ കോശങ്ങൾ നിരീക്ഷിക്കുന്നതിനുള്ള നടപടിക്രമം പോലുള്ള സ്കൂൾ നടപടിക്രമങ്ങൾ ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. വായിൽ സൂക്ഷ്മജീവികൾ വസിക്കുന്നുണ്ടെന്ന് അവ സ്ഥിരീകരിക്കുന്നു; വിദ്യാർഥികൾക്ക് ഇത് ഓർമയിൽ നിൽക്കാം. എന്നാൽ ഈ പ്രവർത്തനത്തിൽ അവയുടെ സ്പീഷീസ് തിരിച്ചറിയാനാവില്ല, അവയെ കോശഭാഗങ്ങളായി വരയ്ക്കുകയും അരുത്. ഭക്ഷണാവശിഷ്ടങ്ങളും ശ്ലേഷ്മത്തിന്റെ നൂൽരൂപങ്ങളും ക്രമരഹിതമായും തീവ്രമായും നിറം പിടിക്കും; അവ കുറയ്ക്കാനാണ് മുമ്പ് വായ കഴുകുന്നത്.

ഈ പ്രവർത്തനത്തിന് ചെയ്യാനാവാത്തത്

ഇത് പഠനത്തിനായുള്ള നിരീക്ഷണമാണ്, രോഗനിർണയ പരിശോധനയല്ല. ക്ലാസ്‌മുറിയിൽ നിറം നൽകിയ കോശങ്ങളുടെ രൂപത്തിൽനിന്ന് അണുബാധയോ കാൻസറോ മറ്റേതെങ്കിലും രോഗമോ നിർണയിക്കാനാവില്ല; ഈ ലേഖനം മറിച്ചൊരു സൂചന നൽകുന്നതായി വായിക്കരുത്. ഈ തയ്യാറാക്കൽ രണ്ട് ആവർധനങ്ങളിൽ ആകൃതി, അതിർത്തി, സൈറ്റോപ്ലാസം, ന്യൂക്ലിയസ് എന്നിവ കാണിക്കുന്നു. മെംബ്രേന്റെ അതിസൂക്ഷ്മ ഘടനയോ കോശാംഗങ്ങളുടെ വിശദാംശങ്ങളോ തന്മാത്രാതലത്തിലുള്ള തിരിച്ചറിയലോ ഇത് കാണിക്കുന്നില്ല. ഈ പരിമിതി വ്യക്തമായി പറയുന്നത് ശാസ്ത്രത്തെയും വിദ്യാർഥികളെയും ഒരുപോലെ സംരക്ഷിക്കുന്നു: ആവർധനവും ഉപയോഗിച്ച സ്റ്റെയിനും രേഖപ്പെടുത്തിയ, ഭാഗങ്ങൾ ശരിയായി അടയാളപ്പെടുത്തിയ ഒരു ചിത്രമാണ് നല്ല ഫലം; ആരോഗ്യത്തെക്കുറിച്ചുള്ള നിഗമനമല്ല.

വിദ്യാർഥികളുടെ പ്രവർത്തനപത്രവും ഭാഗങ്ങൾ അടയാളപ്പെടുത്തിയ മൈക്രോഗ്രാഫുകളും

ഈ പേജിനായി തയ്യാറാക്കിയ രണ്ട് സഹായസാമഗ്രികൾ മുകളിലെ ഭാഗങ്ങൾ അടയാളപ്പെടുത്തിയ മൈക്രോഗ്രാഫും താഴെയുള്ള പ്രവർത്തനപത്രവുമാണ്. ഓരോ വിദ്യാർഥിക്കും ഒരെണ്ണം വീതം പ്രവർത്തനപത്രം അച്ചടിച്ചു നൽകുക, അല്ലെങ്കിൽ അത് പ്രൊജക്ടറിൽ പ്രദർശിപ്പിച്ച് അതിലെ ബോക്സുകൾ നോട്ടുബുക്കിലേക്ക് പകർത്താൻ ആവശ്യപ്പെടുക.

45 മിനിറ്റ് സെഷനിൽ ഇത് ഉപയോഗിക്കുന്ന വിധം: സുരക്ഷാ വിശദീകരണത്തിനും സാമ്പിൾ ശേഖരണത്തിനും പത്ത് മിനിറ്റ്, നിറം നൽകുന്നതിനും മൗണ്ട് ചെയ്യുന്നതിനും പത്ത് മിനിറ്റ്, രണ്ട് ആവർധനങ്ങളിലുമുള്ള നിരീക്ഷണത്തിനും ചിത്രം വരയ്ക്കുന്നതിനും പതിനഞ്ച് മിനിറ്റ്, പരിശോധനപ്പട്ടിക പൂർത്തിയാക്കുന്നതിനും ഭാഗങ്ങൾ അടയാളപ്പെടുത്തിയ മൈക്രോഗ്രാഫുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുന്നതിനും പത്ത് മിനിറ്റ്. പരിശോധനപ്പട്ടികയിലെ ഇനങ്ങൾ മനഃപൂർവം നടപടിക്രമവുമായി നേരിട്ട് ബന്ധപ്പെട്ടവയാണ്. നേർത്ത സ്മിയർ, ശരിയായ നിറം നൽകൽ സമയം, സൈറ്റോപ്ലാസത്തേക്കാൾ ഇരുണ്ട ന്യൂക്ലിയസ്, രേഖപ്പെടുത്തിയ ആവർധനം. ഈ നാലും ശരിയാണെന്ന് അടയാളപ്പെടുത്താൻ കഴിയുന്ന വിദ്യാർഥി ഈ പാഠം പഠിപ്പിക്കാൻ ഉദ്ദേശിക്കുന്ന ആശയം മനസ്സിലാക്കിയിട്ടുണ്ട്: മൈക്രോസ്കോപ്പുകൾ വ്യത്യാസങ്ങൾ പ്രദർശിപ്പിക്കുന്നു; സ്റ്റെയിനുകൾ പ്രദർശിപ്പിക്കേണ്ട വ്യത്യാസങ്ങൾ സൃഷ്ടിക്കുന്നു.