ലോഫ്ലറിന്റെ ക്ഷാരീയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ, പോളിക്രോം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ സ്റ്റെയിനുകൾ: ഒരു വിശദീകരണം

സ്റ്റെയിനിംഗ് മേശയിൽ മൂന്ന് കുപ്പികൾ അടുത്തടുത്ത് ഇരിക്കുന്നുണ്ടാകാം; ഓരോന്നിന്റെയും ലേബലിൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന്റെ ഏതെങ്കിലും വകഭേദത്തിന്റെ പേരുണ്ടാകും. ഒന്നിൽ ജലീയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ 1% എന്ന് എഴുതിയിരിക്കും. മറ്റൊന്നിൽ ലോഫ്ലറിന്റെ ക്ഷാരീയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ എന്നും, മൂന്നാമത്തേതിൽ പോളിക്രോം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ എന്നും. തിരക്കിലുള്ള ജീവനക്കാരൻ ഏറ്റവും അടുത്തുള്ള കുപ്പി എടുത്തുപയോഗിക്കുന്നു. തുടർന്ന് സ്മിയറിന് വളരെ മങ്ങിയ നിറമോ, എല്ലായിടത്തും ഒരേ നീലനിറമോ, അപ്രതീക്ഷിതമായ പർപ്പിൾ നിറഭേദങ്ങളോ ലഭിക്കുന്നു. ഫലത്തിലെ പ്രശ്നത്തിന് സാമ്പിളിനെ കുറ്റപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.

ഇത് ഫോർമുലേഷന്റെ പ്രശ്നമാണ്, സാമ്പിളിന്റേതല്ല. ഈ മൂന്ന് ദ്രാവകങ്ങളിലും പരസ്പരം ബന്ധപ്പെട്ട വർണകങ്ങളാണുള്ളത്; എന്നാൽ അവയുടെ സ്റ്റെയിനിംഗ് ആശയങ്ങൾ വ്യത്യസ്തമാണ്. ഒന്ന് ഏതാണ്ട് ന്യൂട്രൽ pH-യിലുള്ള സാധാരണ കാറ്റയോണിക് വർണകമാണ്. മറ്റൊന്ന് ക്ഷാരം ചേർത്ത് കൂടുതൽ ശക്തമായി പ്രവർത്തിക്കുന്നതാക്കിയ അതേ വർണകമാണ്. മൂന്നാമത്തേത് ഒരൊറ്റ വർണകമല്ല; ബോധപൂർവം ഓക്സീകരിച്ച ഒരു മിശ്രിതമാണ്. തെറ്റായ ദ്രാവകം ഉപയോഗിച്ചാൽ, നിങ്ങൾ പ്രയോഗിക്കുന്ന സ്റ്റെയിനിംഗ് തത്ത്വംതന്നെ മാറിപ്പോകും.

ചുരുക്കത്തിലുള്ള ഉത്തരം

സാധാരണ ജലീയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവാണ് അടിസ്ഥാന മാനദണ്ഡം: വെള്ളത്തിൽ ഏകദേശം 1% വർണകം അടങ്ങിയ, ബാക്ടീരിയയുടെ രൂപഘടന പരിശോധിക്കാനും പൊതുവായ മൈക്രോസ്കോപ്പിക്കുമായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ലളിതമായ കാറ്റയോണിക് സ്റ്റെയിൻ. ലോഫ്ലറിന്റെ ക്ഷാരീയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിൽ, വെള്ളം ചേർത്ത് നേർപ്പിച്ച ആൽക്കഹോളിക് സ്റ്റോക്ക് ദ്രാവകത്തിലേക്ക് അളന്നെടുത്ത ചെറിയ അളവിലുള്ള നേർപ്പിച്ച ക്ഷാരം ചേർക്കുന്നു. ഇത് pH ഉയർത്തുകയും കാറ്റയോണിക് വർണകം ബാക്ടീരിയയിലെ അമ്ലീയ ഘടനകളുമായി കൂടുതൽ ശക്തമായി ബന്ധിക്കാൻ സഹായിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. പോളിക്രോം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ, ക്ഷാരത്തിൽ ഓക്സീകരിച്ച് ബോധപൂർവം പരിപാകപ്പെടുത്തിയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവാണ്. അതിനാൽ ആ കുപ്പിയിൽ ശേഷിക്കുന്ന മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനൊപ്പം ഡീമെഥിലേറ്റഡ് ഹോമോലോഗുകൾ (azure A, azure B, azure C), തയോണിൻ, മെത്തിലീൻ വയലറ്റ് എന്നിവയുടെ മിശ്രിതവുമുണ്ടാകും. ഈ മിശ്രിതം വ്യത്യസ്ത ഘടനകൾക്ക് വ്യത്യസ്ത നിറഭേദങ്ങൾ നൽകുന്നു.

ഒരൊറ്റ വാക്യം മാത്രം ഓർക്കുന്നുവെങ്കിൽ: ക്ഷാരവൽക്കരണം സ്റ്റെയിനിംഗിന്റെ തീവ്രത മാറ്റുന്നു; പോളിക്രോമിംഗ് സ്റ്റെയിനിംഗിലെ നിറങ്ങൾ മാറ്റുന്നു.

സാധാരണ ജലീയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ: താരതമ്യത്തിനുള്ള അടിസ്ഥാനം

ക്ഷാരമോ ഓക്സീകരണമോ ഇല്ലാതെ, സാധാരണയായി 1% w/v സാന്ദ്രതയിൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ വെള്ളത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുന്നതാണ് ഏറ്റവും ലളിതമായ ഫോർമുലേഷൻ. നിറമുള്ള രാസരൂപം ക്ലോറൈഡ് കൗണ്ടർ അയോണോടുകൂടിയ മെഥിൽത്തയോണിനിയം കാറ്റയോണാണ്. ചെറുതും പരന്നതുമായ ഈ ഫീനോത്തയാസിൻ വർണകത്തെ PubChem-ലെ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ രേഖ മെഥിൽത്തയോണിനിയം ക്ലോറൈഡ് എന്ന് വിവരിക്കുന്നു. ഒരു കാറ്റയോൺ എന്ന നിലയിൽ, ഇത് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളുടെ ഫോസ്ഫേറ്റ് ശൃംഖലകളുമായും ബാക്ടീരിയയുടെ കോശഭിത്തികളിലെ അമ്ലീയ ഗ്രൂപ്പുകളുമായും ബന്ധിക്കുന്നു. ഇളം പശ്ചാത്തലത്തിൽ കോശങ്ങൾക്ക് നീലനിറം നൽകുന്നു.

പ്രവചനീയമായ ഫലമാണ് ഇതിന്റെ നേട്ടം. കേന്ദ്രകങ്ങളും ബാക്ടീരിയകളും നീലനിറത്തിൽ കാണപ്പെടുന്നു. കോൺട്രാസ്റ്റ് മിതമാണ്. മങ്ങിയതായി കാണപ്പെടുന്ന ജീവികൾക്ക് ദുർബലമായ നിറമേ ലഭിക്കൂ; ഈ പരിമിതി പരിഹരിക്കാനാണ് ലോഫ്ലർ ശ്രമിച്ചത്. ഈ ദ്രാവകം ഉൾപ്പെടുന്ന ലളിതമായ ബാക്ടീരിയൽ സ്റ്റെയിനുകളുടെ വിപുലമായ വിഭാഗത്തെക്കുറിച്ച് അറിയാൻ, ബാക്ടീരിയയുടെ ലളിത സ്റ്റെയിനിംഗിനെക്കുറിച്ചുള്ള ഒരു അവലോകനം കാണുക. വർണകത്തിന്റെ കൃത്യമായ രാസതിരിച്ചറിയൽ ഇവിടെയും പ്രധാനമാണ്: മെഥിൽ ബ്ലൂവും മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവും തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസം വിശദീകരിക്കുന്നതുപോലെ, മെഥിൽ ബ്ലൂ പൂർണമായും വ്യത്യസ്തമായ ഒരു തന്മാത്രയാണ്. അതിനാൽ നിറത്തിന്റെ പേര് മാത്രം അടിസ്ഥാനമാക്കി കാറ്റലോഗിൽ തിരഞ്ഞാൽ തെറ്റായ വർണകവിഭാഗം ലഭിക്കാം.

ലോഫ്ലറിന്റെ ക്ഷാരീയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ: അതേ വർണകം, കൂടുതൽ ശക്തമായ പ്രവർത്തനം

ലോഫ്ലറിന്റെ പരമ്പരാഗത തയ്യാറാക്കൽ രീതിയിൽ, ആൽക്കഹോളിലുള്ള മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ സ്റ്റോക്ക് ദ്രാവകം വെള്ളത്തിലുള്ള നേർപ്പിച്ച ക്ഷാരവുമായി ചേർക്കുന്നു. പാഠപുസ്തകങ്ങളിലെ രീതികളിൽ 30 mL 95% എഥനോളിൽ 0.3 g വർണകം ലയിപ്പിച്ച്, അതിനൊപ്പം 100 mL 0.01% ജലീയ പൊട്ടാസ്യം ഹൈഡ്രോക്സൈഡ് ചേർക്കാൻ നിർദേശിക്കുന്നു. ഇതിന് തുല്യമായി, 30 mL പൂരിത ആൽക്കഹോളിക് മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ, 100 mL വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം, 1 mL 1% KOH എന്നിവയും ഉപയോഗിക്കാം. ഇതിലൂടെ വ്യക്തമായി ക്ഷാരീയമായ pH-യിലും ഏകദേശം 0.3% വർണകസാന്ദ്രതയിലുമുള്ള ഉപയോഗദ്രാവകം ലഭിക്കുന്നു. വാണിജ്യ പതിപ്പുകളും ഇതേ തത്ത്വമാണ് പിന്തുടരുന്നത്. Thermo Fisher-ന്റെ മൈക്രോബയോളജി സ്റ്റെയിനുകളുടെ കാറ്റലോഗ്, ലോഫ്ലറിന്റെ ക്ഷാരീയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ, പോളിക്രോം, ജലീയ വകഭേദങ്ങൾ എന്നിവയെ വ്യത്യസ്ത ഉപയോഗലക്ഷ്യങ്ങളുള്ള വ്യത്യസ്ത കാറ്റലോഗ് ഇനങ്ങളായി പട്ടികപ്പെടുത്തുന്നു.

ക്ഷാരമാണ് ഇവിടെ പ്രവർത്തനത്തിന്റെ കാതൽ. pH ഉയർത്തുന്നത് സാമ്പിളിലെ കാർബോക്സിൽ, ഫോസ്ഫേറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളിൽനിന്ന് പ്രോട്ടോണുകൾ നീക്കുകയും നെഗറ്റീവ് ചാർജുള്ള സ്ഥാനങ്ങളുടെ സാന്ദ്രത വർധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. അതേസമയം, ആൽക്കഹോളിക് സ്റ്റോക്ക് വർണകത്തെ പൂർണമായി ലയിച്ച നിലയിൽ നിലനിർത്തുന്നതിനാൽ, അത് ഈ സ്ഥാനങ്ങളിലേക്ക് മോണോമർ രൂപത്തിൽ എത്തുന്നു. ഫലമായി, ന്യൂട്രൽ ജലീയ വർണകം നൽകുന്നതിനെക്കാൾ വേഗത്തിലും തീവ്രമായും ബാക്ടീരിയകൾക്ക് നിറം ലഭിക്കുന്നു. സാധാരണ ബാക്ടീരിയോളജിക്കൽ സ്മിയറിൽ പരിചിതമായ കടുംനീല ദണ്ഡാകൃതിയിലുള്ള ബാക്ടീരിയകളും കോക്കസുകളും കാണാം. സ്റ്റെയിനിംഗ് സമയം സാധാരണയായി ഒന്ന് മുതൽ മൂന്ന് മിനിറ്റ് വരെയാണ്; തുടർന്ന് വെള്ളത്തിൽ കഴുകുന്നു.

ലോഫ്ലർ സീറം മീഡിയത്തിൽ വളർത്തിയ Corynebacterium diphtheriae ആണ് ഇതിന്റെ പരമ്പരാഗത പ്രയോഗം: നേർത്തതും പലപ്പോഴും ഗദാകൃതിയിലുള്ളതുമായ ദണ്ഡുകളിൽ, സംഭരിച്ച പോളിഫോസ്ഫേറ്റിന്റെ മെറ്റാക്രോമാറ്റിക് ബേബ്സ്-എർൻസ്റ്റ് ഗ്രാന്യൂളുകൾ ശക്തമായ നിറത്തിൽ കാണപ്പെടുന്നു. മീഡിയത്തിന്റെയും സ്റ്റെയിനിന്റെയും ഈ കൂട്ടുകെട്ട് ചരിത്രപരമാണ്; രണ്ടിന്റെയും വികസനത്തിന് ഒരേ ബാക്ടീരിയോളജിസ്റ്റിനാണ് അംഗീകാരം ലഭിക്കുന്നത്. ഗ്രാന്യൂളുകളുടെ കോൺട്രാസ്റ്റാണ് രോഗനിർണയപരമായ നേട്ടം. ഡിഫ്തീരിയയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പ്രവർത്തനങ്ങൾക്ക് പുറമേ, കൾച്ചറുകളിൽനിന്നുള്ള സ്മിയറുകൾക്ക് പൊതുവായ ബാക്ടീരിയോളജിക്കൽ സ്റ്റെയിനായും ക്ലിനിക്കൽ സ്മിയറുകളിൽ Neisseria-യുടെ രൂപഘടന പരിശോധിക്കാനും ഇത് ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഗ്രാം സ്റ്റെയിൻ ആവശ്യമില്ലെങ്കിലും സാധാരണ ജലീയ ബ്ലൂ വളരെ മങ്ങിയ ഫലം നൽകുന്ന സാഹചര്യങ്ങളിലും ഇത് ഉപയോഗപ്രദമാണ്. ഇത് ഒരു ഏകവർണ സ്റ്റെയിനാണ്. അമ്ലീയമായ എല്ലാത്തിനും നീലയുടെ ഏതെങ്കിലും നിറഭേദം ലഭിക്കുന്നു. ഒരു പ്രോട്ടോക്കോൾ വ്യത്യസ്ത നിറങ്ങളിലൂടെ വേർതിരിച്ചറിയാൻ ആവശ്യപ്പെടുമ്പോൾ, ക്ഷാരം മാത്രം മതിയാകില്ല.

പ്രായോഗികമായ ഒരു മുൻകരുതൽ: സംഭരണത്തിനിടയിലും കാർബൺ ഡൈഓക്സൈഡ് ആഗിരണം ചെയ്യുമ്പോഴും ക്ഷാരീയ വർണകദ്രാവകങ്ങൾ ക്ഷയിക്കുകയും അവക്ഷേപം ഉണ്ടാകുകയും ചെയ്യുന്നു. ഓരോ സ്ലൈഡിലും അടിഞ്ഞുകൂടിയ പദാർഥം വീഴ്ത്തുന്ന പഴയ കുപ്പി തുടർന്നുപയോഗിക്കുന്നതിനുപകരം, ലബോറട്ടറികൾ ചെറിയ അളവിൽ ദ്രാവകം തയ്യാറാക്കുകയോ കാറ്റലോഗ് ദ്രാവകം വാങ്ങി അതിന്റെ സംഭരണകാലപരിധി പാലിക്കുകയോ ചെയ്യുന്നു.

പോളിക്രോം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ: ഒരു പേര്, പല വർണകങ്ങൾ

പോളിക്രോം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ അതേ വർണകത്തിൽനിന്നാണ് തുടങ്ങുന്നത്. എന്നാൽ അതിനെ ക്ഷാരത്തിൽ നിയന്ത്രിത ഓക്സീകരണത്തിന് വിധേയമാക്കുന്നു; ചരിത്രപരമായി ഇതിനെ പരിപാകപ്പെടുത്തൽ അഥവാ പോളിക്രോമിംഗ് എന്നു വിളിക്കുന്നു. ക്ഷാരീയ സാഹചര്യത്തിൽ പഴക്കമാകാൻ വിടുന്നതിലൂടെയോ കാർബണേറ്റിനൊപ്പം ചൂടാക്കുന്നതിലൂടെയോ ഡൈക്രോമേറ്റ് പോലുള്ള ഏജന്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ഓക്സീകരിക്കുന്നതിലൂടെയോ ഡൈമെഥിലാമിനോ ഉപഗ്രൂപ്പുകളിൽനിന്ന് മെഥിൽ ഗ്രൂപ്പുകൾ ഘട്ടംഘട്ടമായി നീക്കം ചെയ്യപ്പെടുന്നു. ഉൽപ്പന്നം ഒരു മിശ്രിതമാണ്: ശേഷിക്കുന്ന മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ, azure B (ഒരു മെഥിൽ നഷ്ടപ്പെട്ടത്), azure A, azure C (കൂടുതൽ ഡീമെഥിലേഷൻ നടന്നവ), തയോണിൻ (പൂർണമായി ഡീമെഥിലേറ്റ് ചെയ്തത്), മെത്തിലീൻ വയലറ്റ് വിഭാഗത്തിലെ ഓക്സീകരണ ഉപോൽപ്പന്നങ്ങൾ എന്നിവ. ഓരോ ഘടകത്തിനും സ്വന്തം നിറഭേദവും കലകളോടുള്ള ബന്ധനപ്രവണതയുമുണ്ട്. അതിനാൽ മിശ്രിതം മെറ്റാക്രോമാറ്റിക് രീതിയിൽ നിറം നൽകുന്നു: കേന്ദ്രകങ്ങൾ, ഗ്രാന്യൂളുകൾ, മ്യൂസിനുകൾ, തരുണാസ്ഥി എന്നിവയ്ക്ക് നീല മുതൽ ചുവപ്പ് കലർന്ന പർപ്പിൾ വരെയുള്ള വ്യത്യസ്ത നിറഭേദങ്ങൾ ലഭിക്കുന്നു.

പ്രസിദ്ധമായ രക്ത സ്റ്റെയിനുകൾക്ക് പിന്നിലുള്ളതും ഇതേ രസതന്ത്രമാണ്. ക്ഷാരവൽക്കരിച്ച മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ മലേറിയ പരാന്നജീവികളുടെ കേന്ദ്രകങ്ങൾക്ക് പർപ്പിൾ നിറഭേദങ്ങൾ നൽകുന്നതായി ആദ്യകാല ഗവേഷകർ കണ്ടെത്തി. എന്നാൽ അവർ ഉപയോഗിച്ച ജലീയ പരിപാകപ്പെടുത്തിയ ദ്രാവകങ്ങൾ അസ്ഥിരമായിരുന്നു; ദിവസങ്ങൾക്കുള്ളിൽ അവക്ഷേപം രൂപപ്പെട്ടു. പർപ്പിൾ രക്ത സ്റ്റെയിൻ എങ്ങനെ കണ്ടുപിടിച്ചു എന്നതിനെക്കുറിച്ചുള്ള അവലോകനം, 1891-ൽ മലഖോവ്സ്കിയും റൊമാനോവ്സ്കിയും സ്വതന്ത്രമായി ഈ പ്രതിഭാസം എങ്ങനെ പ്രയോജനപ്പെടുത്തി എന്ന് വിവരിക്കുന്നു. വർണക അവക്ഷേപത്തെ സ്ഥിരപ്പെടുത്താനും ചൂടാക്കാതെ സ്മിയർ ഫിലിമുകൾ ഫിക്സ് ചെയ്യാനും മെഥനോൾ അവതരിപ്പിച്ചതും, പിന്നീട് ഗീംസ അളന്നെടുത്ത azure B-യും ഇയോസിനും ചേർത്ത് ഗ്ലിസറോൾ ഉപയോഗിച്ച് സ്ഥിരപ്പെടുത്തിയ മിശ്രിതത്തെ മാനദണ്ഡപ്പെടുത്തിയതും അതിൽ വിവരിക്കുന്നു. ആധുനിക ഗീംസ-തരം സ്റ്റെയിനുകൾ പോളിക്രോം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവും ഇയോസിനും ചേർന്ന മിശ്രിതത്തിൽനിന്ന് നേരിട്ട് വികസിച്ചവയാണ്; ഈ കൂട്ടുകെട്ടാണ് റൊമാനോവ്സ്കി ഇഫക്റ്റ് സൃഷ്ടിക്കുന്നത്. ഇയോസിനുമായുള്ള കൂട്ടുകെട്ടിനെയും azure B ഘടകത്തെയും കുറിച്ച് വിശദമായി അറിയാൻ, റൊമാനോവ്സ്കി-തരം സ്റ്റെയിനുകളും azure B–ഇയോസിൻ പരസ്പരപ്രവർത്തനവും കാണുക.

ഒരു മിശ്രിതമായതിനാൽ, ഈ മൂന്നിൽ സ്വഭാവപരമായി ഏറ്റവും കുറച്ച് മാനദണ്ഡീകരിക്കപ്പെട്ടത് പോളിക്രോം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവാണ്. അതിന്റെ കൃത്യമായ നിറസന്തുലനം ഓക്സീകരണരീതിയെയും അതിന്റെ വ്യാപ്തിയെയും ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു. അതുകൊണ്ടാണ് ഹിസ്റ്റോളജി വിതരണക്കാർ ഇതിനെ പഴകിയ ലോഫ്ലർ ദ്രാവകമായി വിൽക്കാതെ, പ്രത്യേകം പ്രവർത്തനപരിശോധന നടത്തിയ വ്യത്യസ്ത ഉൽപ്പന്നമായി വിൽക്കുന്നത്. മാസ്റ്റ് കോശങ്ങളിലെ ഗ്രാന്യൂളുകൾ, മ്യൂസിനുകൾ, തരുണാസ്ഥി എന്നിവയെ മെറ്റാക്രോമാറ്റിക് രീതിയിൽ ദൃശ്യമാക്കൽ, പ്ലാസ്മ കോശങ്ങളുടെ സൂക്ഷ്മവിവരങ്ങൾ കാണിക്കൽ, ഗുഡ്പാസ്ചർ-തരം പോളിക്രോം രീതികളിലൂടെ കലകളുടെ നേർത്ത ഖണ്ഡങ്ങളിൽ Helicobacter pylori കാണിക്കൽ എന്നിവ സാധാരണ ഉപയോഗങ്ങളിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു. നിറത്തിലൂടെ വേർതിരിച്ചറിയലാണ് ലക്ഷ്യമെങ്കിൽ ഇത് ശരിയായ തിരഞ്ഞെടുപ്പാണ്. എന്നാൽ പ്രോട്ടോക്കോൾ വ്യക്തമായ ഏകവർണ ബാക്ടീരിയൽ രൂപരേഖ പ്രതീക്ഷിക്കുന്നുവെങ്കിൽ ഇത് തെറ്റായ തിരഞ്ഞെടുപ്പാണ്.

ഫോർമുലേഷനും ഉപയോഗലക്ഷ്യവും: താരതമ്യം

ഈ പട്ടികയെ തീരുമാനമെടുക്കാനുള്ള ഒരു മാർഗമായി വായിക്കുക. സാമ്പിളിന് വളരെ മങ്ങിയ നിറമാണ് ലഭിക്കുന്നതെങ്കിൽ, pH-അധിഷ്ഠിത സമീപനം മാറ്റി ലോഫ്ലർ സ്റ്റെയിൻ തിരഞ്ഞെടുക്കുക. എല്ലാത്തിനും നിറം ലഭിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിലും ഒന്നിനെയും വേർതിരിച്ചറിയാൻ കഴിയുന്നില്ലെങ്കിൽ, വർണകത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള സമീപനം മാറ്റി പോളിക്രോം തിരഞ്ഞെടുക്കുക. ലോഫ്ലർ സ്മിയറിൽ ഗ്രാന്യൂളുകൾ മനോഹരമായി കാണുന്നുണ്ടെങ്കിലും കേന്ദ്രകത്തിനും സൈറ്റോപ്ലാസത്തിനും ഒരേ നീലനിറം ലഭിക്കുന്നത് എന്തുകൊണ്ടാണെന്ന് മേൽനോട്ടക്കാരൻ ചോദിച്ചാൽ, ഒരു ക്ഷാരീയ ഏകവർണ സ്റ്റെയിനിനും അവയെ വ്യത്യസ്ത നിറങ്ങളിൽ കാണിക്കാൻ കഴിയില്ല എന്നതാണ് ഉത്തരം. ആ ആവശ്യം പോളിക്രോം വിഭാഗത്തിന്റെയും അതിൽനിന്ന് വികസിച്ച രക്ത സ്റ്റെയിനുകളുടെയും പരിധിയിൽ വരുന്നതാണ്.

പതിവ് ആശയക്കുഴപ്പങ്ങൾ ഒഴിവാക്കൽ

ആശയക്കുഴപ്പത്തിന്റെ ഭൂരിഭാഗത്തിനും കാരണം രണ്ട് പിഴവുകളാണ്. കുപ്പിയിൽ രണ്ടും നീലയായി കാണപ്പെടുന്നതിനാൽ, ലോഫ്ലറിന്റെ സ്റ്റെയിനും സാധാരണ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവും പരസ്പരം പകരം ഉപയോഗിക്കാമെന്ന് കരുതുന്നതാണ് ആദ്യത്തേത്. ഇവയുടെ pH-യും തീവ്രതയും വ്യത്യസ്തമാണ്. ലോഫ്ലർ നിർദേശിച്ചിരിക്കുന്നിടത്ത് ന്യൂട്രൽ വർണകം പകരം ഉപയോഗിച്ചാൽ, പ്രോട്ടോക്കോൾ ലക്ഷ്യമിട്ട ഗ്രാന്യൂൾ കോൺട്രാസ്റ്റ് തന്നെയാണ് നഷ്ടമാകുന്നത്. പഴയതോ അബദ്ധത്തിൽ പഴക്കമാകാൻ വിട്ടതോ ആയ ഏത് ക്ഷാരീയ ബ്ലൂവിനെയും പോളിക്രോം ആയി കണക്കാക്കുന്നതാണ് രണ്ടാമത്തേത്. നിയന്ത്രണമില്ലാത്ത പഴക്കമാകൽ, അറിയാത്ത സാന്ദ്രതയിലുള്ള അറിയാത്ത മിശ്രിതമാണ് സൃഷ്ടിക്കുന്നത്. യഥാർഥ പോളിക്രോം ദ്രാവകങ്ങൾ നിർവചിച്ച ഓക്സീകരണരീതികളിലൂടെ തയ്യാറാക്കുന്നു; രക്ത സ്റ്റെയിനുകളുടെ പരമ്പരയിൽ അവ അളന്നെടുത്ത ഇയോസിനുമായി ചേർക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. ചരിത്രം ഇവിടെ ഒരു പാഠം നൽകുന്നു: നിയന്ത്രണമില്ലാത്ത മിശ്രിതങ്ങൾ അതേപടി പുനരുത്പാദിപ്പിക്കാൻ കഴിയാതിരുന്നതിനാലാണ് 1890-കളിലെ അസ്ഥിരമായ ജലീയ പരിപാകപ്പെടുത്തിയ ദ്രാവകങ്ങൾക്ക് പകരം മെഥനോൾ ഉപയോഗിച്ച് സ്ഥിരപ്പെടുത്തിയ ഫോർമുലേഷനുകൾ വന്നത്. എത്ര പഴക്കമുള്ളതെന്ന് ഉറപ്പില്ലാത്ത ഒരു കുപ്പിയിൽനിന്ന് രോഗനിർണയത്തിനുള്ള സ്ലൈഡ് സ്റ്റെയിൻ ചെയ്യുന്നതിനുമുമ്പ് ഓർക്കേണ്ട പാഠമാണിത്.

പേരുകൾ കൃത്യമായി തിരിച്ചറിയുന്നതിലൂടെ ഈ ആശയക്കുഴപ്പം പൂർണമായി ഒഴിവാക്കാം. നിറത്തിൽനിന്ന് അനുമാനിക്കുന്നതിനുപകരം, കാറ്റലോഗ് ഇനം (ജലീയമോ ലോഫ്ലറോ പോളിക്രോമോ), വർണകത്തിന്റെ അളവ്, നിർദിഷ്ട ഉപയോഗം എന്നിവ ലേബലിൽ പരിശോധിച്ച് ഉറപ്പാക്കുക. ഈ മൂന്ന് ഫോർമുലേഷനുകൾക്കും ഒരേ പൂർവിക ക്രോമോഫോറാണുള്ളത്. എന്നാൽ അവയുടെ ഉപയോഗലക്ഷ്യം ഒന്നല്ല.