Fananganana tsipika kalibrasiona ho an'ny manga metilena: santionany banga, elanelana ary fahitsiana

Mpandinika roa no mampiasa tavoahangy iray misy vahaolana fototra amin'ny manga metilena, ary samy manangana tsipika kalibrasiona. Ny voalohany mahazo tsipika mahitsy mandalo amin'ny fiandohan'ny famaky ary mandrefy amim-pahatokisana ireo santionany tsy fantatra fifantohana. Ny faharoa mahazo tsipika miondrika any amin'ny farany ambony, teboka fanapahana ny famaky izay tsy manakaiky ny aotra, ary valin'ny santionany miova arakaraka ny fanalefahana. Fandokoana iray ihany, fitaovana iray ihany, halavan'ny onja iray ihany. Tsy ny fahaiza-manao no maha samy hafa azy ireo. Ny famolavolana no antony: izay nampidirina tao amin'ny santionany banga, ireo fifantohana nofidina, ary raha nijanona tao anatin'ny faritra mbola ahafahan'ny modely tsotra iray miasa ny elanelana nohamarinina.

Ny tsipika kalibrasiona dia fifandraisana nifanarahana eo amin'ny valin'ny fitaovana sy ny fifantohana, izay manan-kery amin'ireo fepetra nananganana azy ihany. Ho an'ny manga metilena, misy fahalemena fantatra io fifandraisana io. Mitambatra ho vondrona ny molekiolan'ilay fandokoana ao anaty rano, ka miova arakaraka ny fifantohana ny endrika molekiola mitroka hazavana. Tsy ho mahitsy ny tsipika aorina manerana izany fiovana izany, ary tsy misy fomba statistika afaka manitsy azy. Ity lahatsoratra ity dia mampiseho ny fomba famolavolana ny tsipika mba hananany heviny: mifidiana santionany banga mety, ferana ao anatin'ny faritra anjakan'ny monomera ny elanelana, ataovy marina ny fandrefesana miverimberina, ary raiso ho fampahalalana fa tsy tabataban'ny fandrefesana ny fiondrika.

Atombohy amin'ny santionany banga, fa tsy amin'ny vahaolana fenitra

Ny santionany banga no mamaritra ny aotra, ary ho an'ny manga metilena dia tsy maintsy ahitana ny zavatra rehetra afa-tsy ilay fandokoana izy. Mitovy ny sokajin'ny kalitaon'ny rano, ny vahaolana mpandrindra pH sy ny pH, ny sira, ny tahan'ny solvent fanampiny, ary ny maripana. Omano ao anatin'io matriks mitovy io ireo vahaolana ampiasaina amin'ny kalibrasiona. Antony simika izany, fa tsy fitakiana ara-pitantanana. Ny sira sy ny solvent dia manova ny fifandanjana eo amin'ny monomera, ny dimera ary ny fitambarana lehibe kokoa, ka manova ny spektra amin'ny halavan'ny onja ampiasaina amin'ny fandrefesana. Ny santionany banga misy rano ihany dia tsy afaka manitsy ny fiovan'ny endrika molekiola ateraky ny matriks. Ny fanadihadiana ankapoben'ny spektran'ny manga metilena ao anaty rano, izay azo vakina amin'ny alalan'ny rakitra misokatra ho an'ny rehetra, dia nanova ny klôro sodium nanomboka tamin'ny 0 ka hatramin'ny 0.15 M, satria ny tanjaka ionika no manova ny fifandanjana, ary nitombo ny fitambaran'ny molekiola rehefa nitombo ny sira.

Izao no vokany amin'ny fampiharana: aza manao kalibrasiona amin'ny rano nesorina ion mihitsy, dia avy eo mandrefy santionany ao anaty vahaolana mpandrindra pH misy fosfata na ranon-drano maloto voasivana. Raha tsy misy matriks tsy ahitana ilay akora hodinihina, dia tsara kokoa ny manampy akora fenitra ao amin'ilay santionany mihitsy noho ny mampiasa tsipika ivelany tsy mifanaraka aminy. Ny torolalana mifandraika amin'ny fitazonana ny fahamarinan'ny fitiliana amin'ny rano dia ao amin'ny fifanakalozan-kevitra momba ny matriks sy ny fanelingelenana, ary ny fitsipika ankapoben'ny fitiliana fandokoana hamaritana habetsahana dia voaresaka ao amin'ny topimaso momba ny famolavolana fitiliana.

Mifidiana elanelana anjakan'ny endrika molekiola iray

Ny famaritana habetsahana amin'ny faritra misy halavan'ny onja lava manodidina ny 664 nm dia mihevitra fa monomera ny ankamaroan'ilay fandokoana. Ao anaty rano tsotra, tsy marina izany fiheverana izany raha tsy mbola malefaka ireo vahaolana, eo amin'ny faritra ambany amin'ny micromolar eo ho eo. Ireo fironan'ny tsipika azo tamin'ny fanandramana sy navoaka dia mampiseho ny fetra: ny kalibrasiona tazonina ambanin'ny 7 micromolar eo ho eo ao anaty sela 1 cm dia manome fironana manodidina ny 82,000 M-1 cm-1, fa ny kalibrasiona itarina hatramin'ny 37 micromolar eo ho eo kosa dia midina ho manodidina ny 67,100 satria efa misy dimera betsaka ireo vahaolana fenitra ambony. Voamarika miaraka amin'ny fepetra nanaovana azy ny koefisienta rehetra voatanisa eto ao amin'ny tahirin-kevitra momba ny spektran'ny manga metilena, izay toerana tokony hampitahana ireo isa; eto amin'ity lahatsoratra ity dia ampiasaina hamaritana ny elanelana ihany izy ireo.

Avy amin'izany mivantana ireo fitsipika famolavolana:

1. Ataovy malefaka tsara ny vahaolana fenitra ambony indrindra mba tsy hiova ny endriky ny spektra. Mandritra ny famolavolana, diniho ny elanelana manontolo amin'ny hazavana hita maso (manodidina ny 550 ka hatramin'ny 750 nm) isaky ny ambaratonga, fa aza mandrefy amin'ny halavan'ny onja iray fotsiny. Raha miova endrika arakaraka ny fifantohana ireo spektra nampitovina maridrefy, dia miova ny simia ary malalaka loatra ny elanelana.
2. Araho amin'ny ambaratonga rehetra ny tahan'ny absorbansa manodidina ny 610 nm amin'ny absorbansa manodidina ny 665 nm. Ny taha miakatra miaraka amin'ny fifantohana dia midika fa mitombo ilay fisondrotana eo anilan'ny tendron'ny spektra vokatry ny dimera, ary tsy mihatra intsony ny modelin'ny monomera. Hazavaina bebe kokoa ao amin'ny torolalana momba ny fitambaran'ny molekiola sy ny vokatry ny fifantohana io fomba famantarana io.
3. Mampiasà sela 1 cm amin'ny asa amin'ny fifantohana ambany amin'ny micromolar. Raha manodidina ny 82,000 ny fironana, ny 5 micromolar dia manome absorbansa manodidina ny 0.41 ary ny 10 micromolar dia manome manodidina ny 0.82; samy mety tsara amin'ny ankamaroan'ny fitaovana ireo.
4. Ho an'ny vahaolana fototra mifantoka be, hafohy ny lalan'ny hazavana fa aza manaiky absorbansa mihoatra lavitra ny 1. Tadidio anefa fa ny lalana fohy dia manitsy ny fandrefesana hazavana, fa tsy ny simia. Miankina amin'ny fifantohana ny fitambaran'ny molekiola, fa tsy amin'ny halavan'ny lalana, ka ny vahaolana fototra mifantoka be dia mbola mila fomba manokana mandinika ireo endrika molekiola ao aminy, fa tsy tsipika ho an'ny monomera ao anaty vahaolana malefaka.

Ny fampifanarahana ankapobeny izay iorenan'ny ankamaroan'ity fanazavana ity dia nahitana spektra 224, nanomboka tamin'ny 1.1 micromolar ka hatramin'ny 3.4 millimolar, ary nahita fa efa azo tsikaritra ambanin'ny 34 micromolar ny famantaran'ny tetramera. Mampahatsiahy ny tokony hitandremana izany: tery kokoa noho izay eritreretina ny elanelana ahitana tsipika mahitsy, ka hamarino fa aza heverina ho marina fotsiny.

Ambaratonga, fandrefesana miverimberina ary filaharana

Ny tsipika misy teboka telo dia tsy manaporofo na inona na inona. Ny torolalana fanamarinana ao amin'ny ICH Q2(R2) dia mangataka fifantohana dimy farafahakeliny hanombanana ny fahitsiana, ary ambaratonga enina ka hatramin'ny valo tsy aotra no manome tsipika azo ampiasaina maharesy lahatra kokoa, indrindra eny akaikin'ny farany ambony izay manomboka ny fitambaran'ny molekiola. Zarao ireo ambaratonga mba handrakotra ny elanelan'ny santionany kasaina horefesina, ary ataovy mifamp akaiky kokoa izay mety hisy fiondrika, fa aza mampiasa filaharana jeometrika nofidina noho ny fahamoran'ny asa fotsiny.

Refeso indroa na intelo ny ambaratonga tsirairay, avy amin'ny fanomanana mahaleo tena fa tsy famakiana intelo avy amin'ny tavoahangy iray. Mampiseho ny lesoka amin'ny fanomanana ny famerimberenana mahaleo tena; ny famakiana miverimberina avy amin'ny tavoahangy iray kosa dia mampiseho ny tabataban'ny fitaovana ihany. Ny fanadihadiana ankapobeny tamin'ny 2020 dia nandrefy ny vahaolana tsirairay intelo, ary mbola safidy fototra tsara izany. Ataovy kisendrasendra ny filaharan'ny famakiana mba tsy hiseho ho toy ny fiondrika ny fiovan'ny fitaovana tsikelikely, ny firaiketana amin'ny velaran'ny fitaratra, na ny fiovan'ny maripana. Nisy fanadihadiana momba ny kivety quartz nahita fa manodidina ny 3 isan-jaton'ilay fandokoana ao anaty vahaolana 34 micromolar no niraikitra tamin'ny velarana tao anatin'ny 10 minitra. Noho izany, ataovy mitovy mandritra ny andiana fandrefesana ny fotoana ifampikasohana, ny kivety, ny fanadiovana ary ny filaharana.

Ohatra misy kajy ho fanazavana (tsy angona norefesina)

Noforonina ireo isa etsy ambany mba hampisehoana ny kajy. Tsy fandrefesana tao amin'ny laboratoara izy ireo ary tsy tokony hotanisaina ho angona momba ny manga metilena. Ny zava-dehibe dia ny firafitry ny fanamarinana atao manodidina azy ireo.

Aoka hatao hoe misy vahaolana fenitra enina ao anaty vahaolana mpandrindra pH mifanaraka, lalana 1 cm, refesina amin'ny 665 nm raha ampitahaina amin'ny santionany banga mifanaraka:

Ny fampifanarahana tsipika mahitsy amin'ny salan'isan'ny absorbansa sy ny fifantohana dia manome fironana manodidina ny 0.0805 singan'ny absorbansa isaky ny micromolar, ary teboka fanapahana ny famaky tsy mihoatra ny milliabsorbansa vitsivitsy miala amin'ny aotra. Ny fizarana ny fironana amin'ny halavan'ny lalana dia mamadika azy ho koefisientan'ny fitrohana hazavana hita amin'ny fandrefesana: ny 0.0805 isaky ny micromolar dia mitovy amin'ny 80,500 M-1 cm-1 eo ho eo, izay mifanaraka amin'ny elanelana anjakan'ny monomera ao anaty rano. Tsy ny R efamira, izay ho tsara be na ahoana na ahoana, no fanamarinana manan-danja. Fa ny teboka fanapahana manakaiky ny aotra, ny tahan'ny A610/A665 tsy miova manomboka amin'ny S2 ka hatramin'ny S5, ary ny sisa tavela amin'ny fampifanarahana miparitaka tsy misy fironana. Ny fiakarana kely amin'ny taha eo amin'ny S6 no famantarana marina fa tokony hesorina io ambaratonga io, na homarihina fa ny 7 micromolar no fetra ambony vonjimaika ho an'ity fitambaran'ny matriks sy fitaovana ity.

Ny santionany tsy fantatra fifantohana izay manome vakiteny 0.245 amin'ireo fepetra mitovy ireo dia azo avadika mivantana: ny 0.245 zaraina amin'ny 0.0805 isaky ny micromolar dia manome 3.0 micromolar eo ho eo, alohan'ny hampiharana izay anton'ny fanalefahana ny santionany. Ampiaraho amin'ireo fepetra nampiasaina ny tatitry ny vokatra: halavan'ny onja, lalana, matriks an'ny santionany banga, elanelan'ny kalibrasiona ary daty.

Taratasy kalibrasiona azo fenoina

Adikao ao amin'ny bokin'ny laboratoara ity môdely ity isaky ny misy matriks vaovao. Matriks iray, taratasy iray, tsipika iray.

Manana ny antony tokony hisiany ilay andalana momba ny endriky ny reaktifa. Ny manga metilena amidy dia mety ho sira tsy misy rano na hidrata toy ny trihidrata, ary ny lanja molara diso dia mampivilana mangingina ny fifantohana voatondro rehetra. Ny fanamarinana ny fahadiovana sy ny fepetra ara-teknika amin'ny akora fanombohana dia voaresaka ao amin'ny torolalana momba ny kalitao sy ny sokajy.

Hamarino amin'ny vahaolana fenitra fanamarinana mahaleo tena

Tsy tokony hanamarina ny tenany mihitsy ny tsipika kalibrasiona. Rehefa vita ny fampifanarahana, manomàna vahaolana fenitra fanamarinana iray avy amin'ny vahaolana fototra nanaovana fandanjana misaraka, amin'ny fifantohana akaikin'ny afovoan'ny elanelana nekena, ary refeso toy ny santionany tsy fantatra izy. Ny fifanarahana ao anatin'ny isan-jato vitsivitsy dia manamarina ny dingana nifanesy tamin'ny fanomanana; ny tsy fifanarahana kosa dia manondro ny vahaolana fototra na ny fanalefahana fa tsy ny fitaovana. Avereno ny fandrefesana ilay vahaolana fenitra fanamarinana isaky ny andiana santionany. Raha miova tsikelikely ny valiny nefa tsy miova ny tsipika, dia ahiahio aloha ireo vahaolana ampiasaina na ny kivety vao ireo santionany. Ity fahazarana tokana ity dia mahita ny ankamaroan'ny lesoka miafina: lanja molaran'ny hidrata nampiasaina tamin'ny tavoahangy misy akora tsy misy rano, mikropipety tsy voakalibra tsara, na vahaolana mpandrindra pH nomanina tamin'ny tanjaka ionika diso. Soraty ao amin'ny taratasy eo akaikin'ny fironana ny tahan'ny fahitana indray ny habetsahana andrasana amin'ilay vahaolana fanamarinana, mba hahitan'ny mpamaky aty aoriana fa notsapaina ilay tsipika fa tsy nosoritana fotsiny.

Fandikana ny tsy fahitsiana ho famantarana ny antony

Rehefa miondrika ny tsipika, ny endriky ny tsy fahombiazana no manondro ny antony. Ny fiondrika midina amin'ny absorbansa avo nefa tsy miova ny endriky ny spektra dia manondro ny fitaovana, matetika noho ny hazavana mirenireny izay mampidina ny absorbansa avo voarefy. Ny fiondrika miaraka amin'ny fitomboan'ilay fisondrotana eo anilan'ny tendron'ny spektra amin'ny 610 nm kosa dia manondro ny simia: ny dimera sy ny fitambarana lehibe kokoa dia mitroka hazavana amin'ny fomba hafa noho ny monomera. Ny santionany banga tsy tonga amin'ny aotra, na ny vahaolana fenitra izay mihena ny vakiteniny rehefa mandeha ny fotoana, dia manondro ny fitoerana: firaiketana amin'ny velaran'ny fitaratra na kivety, indrindra raha niova ny fotoana ifampikasohana nandritra ny andiana fandrefesana. Ary ny tsipika mahitsy tsara mandalo amin'ny teboka nefa mbola manome valin'ny santionany diso dia manondro ny matriks: tsy mitovy amin'ireo vahaolana kalibrasiona ny santionany, ka avereno aorina ao anatin'ny matriks an'ny santionany ny tsipika na mifindrà amin'ny fanampiana akora fenitra. Ataovy amin'ny kisary ampitahaina amin'ny fifantohana ny sisa tavela amin'ny fampifanarahana amin'ny toe-javatra rehetra. Ny fiparitahana kisendrasendra dia manohana ny modelin'ny tsipika mahitsy; ny endrika toy ny tsiky na ny mifanohitra aminy kosa dia mandà azy amin'ny fomba azo itokisana kokoa noho ny fetra R efamira rehetra, ary manamafy mazava izany ny torolalana fanamarinana.

Mahazo vokatra tsara amin'ny manga metilena ny fanarahana izany fomba hentitra izany. Mahery ny faritra fitrohan'ny monomera, fantatra tsara ny simiany, ary miseho ao amin'ny spektra ireo endrika tsy fahombiazany alohan'ny hanimbany ny isa. Aoreno amin'ny elanelana tery ny tsipika, ampiasao araka ny tokony ho izy ny santionany banga, avereno amin'ny fanomanana mahaleo tena ny fandrefesana, ary avelao ny endriky ny spektra hamaritra ny elanelana. Fohy ny tsipika azo, saingy marina ny teboka rehetra eo aminy.

Mampiasa isa noforonina ireo kajy fanazavana ao amin'ity lahatsoratra ity mba hampisehoana ny fomba. Ireo koefisienta fanovozan-kevitra norefesina sy ny fepetra feno nanaovana azy dia hita ao amin'ny tahirin-kevitra momba ny spektra mifandray amin'ny rohy, ary ny fanadihadiana momba ny fitambaran'ny molekiola izay iorenan'izany dia voarakitra ao amin'ny PMID 33251415.