Manga metilena amin'ny fikarohana momba ny zebrafish: akora fanampiny amin'ny fikarakarana sy antony manakorontana ny andrana

Matetika manga hatsatra ny rano itehirizana ny atodin'ny zebrafish, ary saika tsy misy manoratra ny anton'izany. Manga metilena ilay loko, ampiana hiadiana amin'ny holatra, ary heverin'ny ankamaroan'ny protokola ho singa tsy ilaina dinihina manokana izy io. Tsy mety anefa izany fiheverana izany eto. Tsara kokoa ny mihevitra azy ho anton-javatra amin'ny andrana izay tsy voatanisa: zavatra misy ao amin'ny lovia nahazo fitsaboana nefa tsy misy ao amin'ny vondrona fanaraha-maso, miasa ara-panafody amin'ny tahan-kafatiny ampiasaina, ary afaka manova ireo mari-pamantarana izay refesin'ny andrana mihitsy.

Io fanavahana io no fototry ny zavatra rehetra eto ambany. Resaka iray ny fikarakarana mahazatra hiadiana amin'ny holatra. Resaka hafa ny hoe tsy misy fiantraikany amin'ny fitsapana ataonao ve ilay akora fanampiny. Mampahazo aina ny valin'ny voalohany ao amin'ny literatiora vao haingana momba ny zebrafish, fa mampiahiahy kosa ny an'ny faharoa.

Izay tena voalazan'ny torolalana

Tsy misy fenitra tokana, ary anisan'ny olana izany. Ny torolalan'ny Canadian Council on Animal Care dia mamela ny fampiasana 0.5 mg/L, na 0.00005%, ao amin'ny ranoka fitaterana atody sy olitra mba hampihenana ny fitomboan'ny holatra. Ny torolalana eoropeana momba ny biby ampiasaina any amin'ny laboratoara dia milaza embryon tehirizina ao amin'ny ranoka izay matetika ahitana io 0.00005% io ihany. Ny fomba fanamboarana E3 an'ny Cold Spring Harbor kosa dia mamaritra avo roa heny amin'izany, 1 mg/L na 0.0001%, ho akora ao amin'ilay fangaro. Mifanohitra amin'izany ny tsy fisiana iray misongadina: ny torolalan'ny OECD momba ny fitsapana ny poizina amin'ny embryon'ny trondro dia mamaritra rano fanalefahana namboarina indray sy akora simika hotsapaina, nefa tsy misy tolo-kevitra momba ny manga metilena na amin'ny dikan-teny 2013 na amin'ny fanitsiana tatỳ aoriana. Noho izany, ny laboratoara iray dia miompy embryon'ny zebrafish ao anaty rano manga misy manga metilena hatramin'ny ora voalohany iainany, ny iray hafa kosa manao ny fitsapana embryon araka ny fepetra ara-dalàna ao anaty rano tsy miloko, ary samy miantso ny ranoka ampiasainy ho ara-dalàna. Izay rehetra mampitaha vokatra avy amin'ny laboratoara samihafa, na manambatra angona fanaraha-maso taloha, dia mandova izany tsy fitoviana izany.

Mba hahazoana ny haben'ireo tahan-kafaty ireo, ny 0.00005% dia manodidina ny 1.56 micromolar ary ny 0.0001% dia manodidina ny 3.13 micromolar. Isa kely ireo, ka mora ny mihevitra azy ho ambany loatra ka tsy misy fiantraikany. Io fiheverana io mihitsy no sedrain'ireo fandinihana eto ambany, amin'ireo tahan-kafaty ireo mihitsy.

Ireo mpamaky avy amin'ny fiompiana trondro fa tsy avy amin'ny laboratoara dia mihaona amin'io molekiola io ihany amin'ny toe-javatra hafa, izay resahina ao amin'ny torolalana momba ny manga metilena ho an'ny akwarioma. Mitovy ny simia; ny fanazavana momba ny fomba itondran'ilay loko elektrôna manerana ny sela dia manazava ny antony isehoan'ny akora miasa amin'ny redox hatrany ao amin'ny lahatsoratra momba ny metabolisma. Ny manaraka eto dia mahakasika manokana ny rano itehirizana atodin'ny zebrafish misy manga metilena.

Metabolisma: miova arakaraka ny dingana ny lalan'ny fiantraikany

Ny fandinihana manome fanazavana betsaka indrindra dia nampiharihary zebrafish mivoatra ara-dalàna amin'ilay akora nanomboka tamin'ny andro voalohany iainany ka hatramin'ny 5 andro taorian'ny fampiraisana, ary nandrefy ny metabolisma oksidativa isaky ny dingana, araka ny voalazan'ny tatitra navoaka momba ny andrana amin'ny metabolisman'ny embryon. Mendrika hofaritana tsara ilay lamina satria mivadika ny lalany.

Tamin'ny 1 andro taorian'ny fampiraisana, nitombo ny fanjifana oksizena fototra tamin'ireo embryon tratran'ilay akora tamin'ireo tahan-kafaty roa ampiasaina amin'ny fikarakarana. Tamin'ny 2 andro, niakatra ny potensialy elektrikan'ny fonon'ny mitokondria tao amin'ny sosona ivelan'ny olitra rehefa nampiharihary azy tamin'ny 0.00005%, 0.0001%, ary 0.0003%. Tamin'ny 4 hatramin'ny 5 andro, rehefa avy foy, dia nivadika ny lalana: nihena ny fandaniana angovo oksidativa, na nitohy hatramin'ny fampiraisana ny fiharan'ny akora, na voafetra tamin'ny andro 3 ka hatramin'ny andro 4 ihany. Niaraka tamin'izany, nihena ny transkripta ho an'ny singa madinika ao amin'ny kompleksa respiratoaran'ny mitokondria tamin'ny andro 1 sy 4, niaraka tamin'ireo transkripta mifandray amin'ny famokarana steroida sy ny famoronana gliokaozy vaovao.

Fanamarihana roa hafa no manazava bebe kokoa ny sary. Nialoha kely ny fotoana famoizana tamin'ny tahan-kafaty ambony kokoa ampiasaina amin'ny fikarakarana: nialoha ireo embryon tratran'ilay akora tamin'ny 2 andro, ary nahatratra azy ireo ny vondrona fanaraha-maso tamin'ny andro 3. Ary toa tsy voakitika ny rafi-pamaliana ny adin-tsaina: rehefa nampiharina tamin'ny olitra 5 andro ny fampihodinana rano mampisy adin-tsaina, dia niakatra ara-dalàna ny kortizola tao amin'ny vatana manontolo tamin'ireo vondrona roa. Noho izany, amin'ireo habetsahana ireo dia tsy poizina manimba ny fivoarana amin'ny ankapobeny ilay loko, ary tsy manafoana ny valin-kafatra ara-batana rehetra. Manova ny metabolisman'ny angovo arakaraka ny dingana izy: mampiakatra azy alohan'ny famoizana ary mampidina azy aorian'izany.

Fitondran-tena: nahoana no tsy mitovy ny valin'ny fandinihana roa, ary nahoana no mety samy ho marina izy ireo

Toa mifanohitra ny literatiora momba ny fitondran-tena raha tsy ampitahaina mifanila ny fomba nampiharana ilay akora. Nisy fandinihana ny fiarovana amin'ny fivoarana sy ny fitondran-tena nampiharihary embryon tamin'ny tahan-kafaty hatramin'ny 10 micromolar nanomboka teo amin'ny 6 ora taorian'ny fampiraisana, nanolo ny ranoka isan'andro hatramin'ny andro 4, avy eo namindra ny olitra ho ao amin'ny ranoka tsy misy loko tamin'ny andro 5 sy 6, ary nanandrana ny fivezivezeny tamin'ny fitsapana mifandimby hazavana sy haizina tamin'ny andro 6. Ny vokatra: tsy nisy fiantraikany manan-danja tamin'ny fahafatesana, ny famoizana, na ny endriky ny vatana, ary tsy nisy fiantraikan'ny fampiharana ilay akora tamin'ny fivezivezena. Ara-drariny raha nanoro ny 10 micromolar ho fetra ambony indrindra teo ambanin'ny fepetra nampiasainy ireo mpanoratra.

Nisy vondrona faharoa, izay nanana mpanoratra sasany niombonana tamin'ilay fandinihana momba ny metabolisma, nampihatra ilay akora araka ny fomba tena fanaovana fikarakarana: teo ilay loko nanomboka tamin'ny 2 hatramin'ny 3 ora taorian'ny fampiraisana, nosoloina isan'andro ny ampahany tamin'ny ranoka, ary norefesina ny fitondran-tena raha mbola nitohy na vao nifarana ny fiharan'ny akora. Tamin'ireo tahan-kafaty mahazatra ireo ihany, dia nihena ny fivezivezen'ny olitra tamin'ny fitsapana naharitra 24 ora, vokatra azo naverina tamin'ny karazana taranaka sy laboratoara samihafa. Ny fandinihana ny fanakorontanana ny fitondran-tena dia nampifandray ilay fiantraikany tamin'ny haavon'ny asan'ny rafitra serotoninergika, izay mifanaraka amin'ny fanakanana ny monoamine oxidase efa fantatra momba ilay loko. Ny tena manan-danja dia ny nanafenan'ny ranoka ho an'ny embryon misy manga metilena ny valin'ny fivezivezena nampoizina tamin'ny fluoxetine, izay SSRI. Noho izany, ny fitsapana sivana atao ao anaty rano manga dia mety tsy hahita fiantraikan'ny fanafody izay ho hita ao anaty rano tsy miloko.

Tsy misy fifanoherana tena izy. Mety tsy hamela fiantraikany sisa azo tsikaritra ao amin'ny fitsapana iray ny akora iray rehefa roa andro taorian'ny fanesorana azy, nefa mbola hiasa raha mbola eo ao amin'ny fitsapana hafa. Ny hevitra azo ampiharina dia izao: ny vokatra tsy nahitana fiantraikany dia manohana fetra ambony momba ny tahan-kafaty, fa tsy filazana hoe tsy misy fiantraikany ilay akora. Ny vokatra nahitana fiantraikany kosa dia mamaritra ny loza tena ilaina dinihina: ny fiharan'ny akora miasa mandritra ny fotoana fandrefesana, amin'ilay fomba ampiasain'ny ankamaroan'ny laboratoara mihitsy.

Loko redox ao anatin'ny fitsapana redox

Misy fandrika iray hafa mendrika fehintsoratra manokana satria manakorontana ny fitaovana fandrefesana fa tsy ny biby. Simia redox mihitsy ny fitsapana fandaniana angovo Alamar Blue: ahena amin'ny alalan'ny redox ny resazurin ka lasa resorufin mamoaka fluorescence. Simia redox koa ny manga metilena. Tao amin'ny fanaraha-maso tsy nisy sela, dia nampihena kely nefa tamin'ny fomba manan-danja ny fluorescence Alamar Blue ireo tahan-kafaty roa ampiasaina amin'ny fikarakarana rehefa afaka 24 ora. Tamin'ny andrana tamin'ny biby, nosasana in-telo farafahakeliny tamin'ny ranoka tsy misy loko ireo embryon tratran'ilay akora talohan'ny fitsapana, ary nihoatra ny fanakorontanana hita tamin'ny fanaraha-maso tsy nisy sela ny fiantraikany biolojika tamin'ny olitra efa foy. Koa samy marina ireo zavatra roa ireo: mitondra fiantraikany tena izy amin'ny metabolisma ny biby efa voasasa, ary manampy fanovana simika mivantana amin'ny fandrefesana ny loko tsy nesorina tamin'ny fanasana. Tsy maintsy manavaka ireo roa ireo ny fanaraha-maso, raha tsy izany dia tsy misy dikany ireo isa roa. Mihatra eto amin'ny fomba tena lehibe ny torolalana ankapobeny momba ny famakiana ny valin'ny fitsapana mifototra amin'ny loko.

Filaharan'ny dingana amin'ny fivoarana

Fitaovana noforonina manokana ho an'ity lahatsoratra ity. Ireo tahan-kafaty roa mahazatra amin'ny fikarakarana, 0.00005% sy 0.0001%, no ampiasaina raha tsy misy fanamarihana hafa.

Ny lamina tokony hotadidina dia fiakarana aloha sy fidinana tatỳ aoriana amin'ireo mari-pamantarana momba ny metabolisma, miaraka amin'ny fiantraikany amin'ny fitondran-tena mandritra ny fiharan'ny akora izay tsy hita intsony taorian'ny fanalana azy tao amin'ny fitsapana tokana nandinihana izany.

Lisitra fanamarinana amin'ny fandrafetana fanaraha-maso

Ny fitaovana faharoa noforonina manokana. Ampiasao rehefa misy protokola fikarakarana zebrafish amin'ny manga metilena mifandray amin'ny andrana.

1. Tanisao ho reaktifa ilay loko, fa tsy ho rano. Lazao ny tahan-kafaty amin'ny isan-jato sy micromolar, ny fiandohana sy fiafarana amin'ny ora na andro taorian'ny fampiraisana, ny fandaharam-potoana fanoloana ny ranoka, ary ny fotoana fanesorana ilay akora alohan'ny fandrefesana tsirairay.
2. Ampifanaraho amin'ny fanontaniana ny fanaraha-maso. Mila vondrona fanaraha-maso tsy misy loko ny fandinihana akora simika hotsapaina; ny fandinihana ny fikarakarana kosa mila vondrona tsy misy loko ampitahaina amin'ny vondrona misy loko, miaraka amin'ny firaketana ny vokatra amin'ny ady amin'ny holatra, satria tsy nandrefy ny fahombiazan'ny ady amin'ny holatra ireo fandinihana roa voatonona.
3. Sasao alohan'ny fitsapana redox, dia hamarino. Kobanina in-telo farafahakeliny amin'ny ranoka tsy misy loko, ary manaova fanaraha-maso misy loko sy reaktifa nefa tsy misy sela miaraka amin'izany, satria mampihena mivantana ny famantarana Alamar Blue ilay loko.
4. Hevero ho mora voakorontana ny mari-pamantarana momba ny fitondran-tena sy ny monoamine. Tokony tsy hampiasa ilay loko mandritra ny fandrefesana, na hanaporofo fa tsy misy fiantraikany amin'ny mari-pamantarana tsirairay izy, ny fandinihana ny fivezivezena, ny fihetsika tampoka rehefa taitra, ny fitondran-tena mitovitovy amin'ny fanahiana, ny akora miady amin'ny fahaketrahana, ary ny akora manakana MAO; nanala fiantraikany iray tamin'ny fivezivezena ny fanesorana ilay akora nandritra ny iray hatramin'ny roa andro, nefa tsy mbola voaporofo izany amin'ny fomba fitsapana hafa.
5. Hevero ho mora voakorontana amin'ny dingana rehetra ny mari-pamantarana momba ny metabolisma sy ny mitokondria. Miova amin'ireo tahan-kafaty ampiasaina amin'ny fikarakarana ny fanjifana oksizena, ny fandaniana angovo, ny potensialin'ny fonontselan'ny mitokondria, ary ny transkripta ho an'ny rojo respiratoara, ary mifanohitra ny lalany alohan'ny famoizana sy aorian'izany.
6. Aza afindra amin'ny fomba andrana hafa ny fanatsoahan-kevitra hoe tsy misy fiantraikany. Tsy mihatra amin'ny fiharan'ny akora mbola mitohy ny vokatra tsy nahitana fiantraikany taorian'ny fanesorana azy; tsy mihatra amin'ny metabolisma na ny fifandraisana amin'ny fanafody ny vokatra tsy nahitana fiovana amin'ny endriky ny vatana; tsy mihatra amin'ny hafa ny vokatra azo tamin'ny karazana taranaka, hafanana, na faharetan'ny fitsapana iray.
7. Lazao ny torolalana narahinao sy ny safidy hafa. Tanisao mazava ny tahan-kafaty ao amin'ny CCAC, ny torolalana eoropeana, na ny Cold Spring Harbor, ary mariho fa tsy mampiditra ilay loko ny fitsapana embryon an'ny OECD, mba hahafahan'ny mpamaky mamantatra ny toe-javatra nisy ny bibinao.

Tsy misy amin'izany milaza fa tsy tokony hampiasaina ilay loko mba hitazonana ny atody ho velona. Ny toheriny dia ny famelana safidy amin'ny fikarakarana hisy fiantraikany amin'ny angona nefa tsy nodinihina. Molekiola manana fiasa ara-panafody ilay manga ao anaty lovia, ary ireo andrana mety ho voakorontana indrindra dia ireo fitsapana sivana metabolisma sy fitondran-tena mifandray amin'ny rafi-pitatitra mahazaka santionany maro, izay tena antony isafidianana zebrafish mbola tanora ankehitriny. Raketo izy io, asio fanaraha-maso, esory alohan'ny handrefesana, ary hamarino ilay fitsapana izay mety handraisany anjara mangina.