Manga metilena amin’ny fitsapana G6PD any amin’ny laboratoara: izay tena ataon’ilay loko

Mpianatra iray no mijery fantsona roa rehefa vita ny fampandriana azy ireo amin’ny hafanana voafaritra. Niova ho ilay loko nandrasana ny iray. Ny iray kosa tsy niova. Nanatsoaka hevitra ilay mpianatra fa tsy ampy glucose-6-phosphate dehydrogenase ilay marary faharoa. Mety ho marina izany fehin-kevitra izany, saingy dinganiny ilay foto-kevitra mampandeha ny fitsapana. Tsy misy zavatra ao anatin’ilay fantsona mandrefy mivantana ny anzima. Izay vokarin’ny anzima no refesin’ilay fantsona, ary ny manga metilena no mpanelanelana.

Rehefa mazava io fomba ankolaka io, dia tsy toa kisendrasendra intsony ny fomba fanao, ny santionany fanaraha-maso ary ilay lisitra lava misy ny vokatra diso.

Ny valiny fohy

Ny manga metilena amin’ny fitsapana G6PD dia famantarana redox. Mamokatra NADPH ny anzima G6PD, ary ny rafitra miankina amin’ny NADPH dia mampihena amin’ny alalan’ny reduksiôna ny manga metilena miloko manga ho amin’ny endriny leuco tsy misy loko, na mampiasa azy hamindrana elektrôna. Raha ara-dalàna ny asan’ny anzima, dia mahomby ny reduksiôna. Raha tsy ampy izany asa izany, dia miadana na tsy feno ny reduksiôna. Izany no famantarana manontolo.

Fomba roa nampiasaina hatry ny ela no samy mampiasa ilay loko, saingy tsy mitovy ny teboka farany jerena. Avaho izy ireo, dia ho afaka ny ankamaroan’ny fifangaroan-kevitra.

Fitsapana roa, loko iray, teboka farany samy hafa

Ny voalohany dia ny fitsapana reduksiôna mivantana ny manga metilena, izay nofaritan’i Sass sy ny mpiara-miasa taminy ary nodinihin’i Gibbs tatỳ aoriana. Eto, ilay loko mihitsy no teboka farany jerena: ny manga metilena voaoksida sy miloko manga dia ahena ho leucomethylene blue tsy misy loko, ary ny hafainganam-piovan’izany dia maneho ny fahafahana mamokatra NADPH. Voarakitra ao amin’ny PubMed, amin’ny anaran’i Sass sy ny mpiara-miasa taminy (1966) ilay lahatsoratra fototra momba ny fitiliana.

Ny faharoa dia ny fitsapana reduksiôna methemoglobina nataon’i Brewer. Oksidain’ny nitrita sôdiôma aloha ny hemoglobina ka lasa methemoglobina volontany. Avy eo ny manga metilena dia miasa ho mpanelanelana amin’ny famindrana elektrôna: ny manga metilena efa nandalo reduksiôna dia mamindra singa afaka manao reduksiôna amin’ny methemoglobina, ka mamadika azy indray ho hemoglobina mena. Noho izany, ny teboka farany hita maso dia volontany raha ampitahaina amin’ny mena, fa tsy manga raha ampitahaina amin’ny tsy misy loko. Navoaka tao amin’ny Bulletin of the World Health Organization (Brewer sy ny mpiara-miasa taminy, 1960) ilay fomba tany am-boalohany.

Tsy marina tsara ara-tsimia ny fiantsoana ny fitsapana Brewer hoe fitsapana fanalana ny lokon’ilay fandokoana. Mifandimby amin’ny endriny roa ilay loko; ny hemoglobina no miova loko. Asehon’ny kisary eto ambany ireo lalan’ny fihetsika roa.

Ny fihetsika fototra

Ny G6PD no manafaingana ny dingana voalohany misy oksidasiôna amin’ny lalan’ny pentose phosphate:

Glucose-6-phosphate + NADP+ lasa 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

Miankina betsaka amin’io lalana io ny sela mena matotra mba hahazoana NADPH, araka ny famintinana nataon’i Luzzatto sy ny mpiara-miasa taminy tao amin’ny Blood (2020). Mitazona ny glutathione amin’ny endriny efa nandalo reduksiôna ny NADPH ary miaro ny sela amin’ny fahasimbana vokatry ny oksidasiôna. Miditra ao amin’io rafitra io ny manga metilena amin’ny maha-mpandray elektrôna azy. Ny G6PD ampy dia manome NADPH ampy, izay ahafahan’ny reduksiôna mandeha tsara. Ny G6PD ambany dia manapaka ilay rojo eo amin’ny rohy voalohany.

Hevero ho toy ny fandrefesana ny haavon’ny solika ilay loko, fa tsy ho ilay motera. Milaza ny famatsiana NADPH izy. Izay zavatra hafa manova izany famatsiana izany, na ny famakiana ny vokatra, dia afaka mampiova ilay famantarana nefa tsy misy fiovana amin’ny fototarazo.

Ny fizotry ny fomba fitsapana karazana Brewer

Niova nandritra ny am-polony taona maro ny fangaron’ny réactif, ka tsy tokony horaisina ho torolalana klinika ny fanazavana ho an’ny fampianarana. Manaraka ny fomba fiasa manara-penitra efa nohamarininy ny laboratoara tsirairay. Miaraka amin’izany fitandremana izany, dia izao no fizotry ny fametrahana mahazatra ao anaty fantsona, amin’ny endrika voarakitra mampiasa fantsona telo sy fampandriana mandritra ny 3 ora ao amin’ity fampiharana navoaka ity:

1. Fantsonan’ny marary: ra manontolo ampiana gliokaozy, nitrita sôdiôma ary manga metilena. Mamorona methemoglobina ny nitrita, mamatsy ny metabolisman’ny sela mena ny gliokaozy, ary ilay loko no mpamindra elektrôna miankina amin’ny NADPH.
2. Santionany fanaraha-maso voaoksida: ra ampiana nitrita sy gliokaozy, fa tsy misy manga metilena. Mampiseho ny teboka farany methemoglobina volontany izy, izay endrika hita rehefa tsy ampy ny asan’ny anzima.
3. Santionany fanaraha-maso hemoglobina: ra ampiana rano. Mampiseho ny teboka farany hemoglobina mena izy, izay endrika ara-dalàna.
4. Ampandrio amin’ny hafanana voafaritra ny fantsona rehetra eo amin’ny 37 C, mazàna mandritra ny 3 ora, ary afangaroy moramora.
5. Afangaroy amin’ny rano voadio amin’ny distillation ny ampahany kely nalaina avy amin’ny fantsona tsirairay mba handravana ny sela sy hahafahana mampitaha mazava ny loko.
6. Ampitahao amin’ireo santionany fanaraha-maso roa ny fantsonan’ny marary. Ny fiverenana mankany amin’ny mena dia manondro fahafahana lehibe manao reduksiôna. Ny fijanonana mankany amin’ny volontany dia manondro fa mety ho tsy ampy be ny asan’ny anzima.

Nisy fangaro iray nampiasaina taloha izay nahitana ra tokony ho 1 mL niaraka tamin’ny réactif manodidina ny 180 mM nitrita sôdiôma, 280 mM dextrose ary 0.4 mM manga metilena. Raiso ho ohatra avy amin’ny literatiora ireo isa ireo, fa tsy ho fepetra ampiharina amin’ny fitsapana rehetra.

Famakiana ny vokatra

Ny fitiliana ara-kalitao dia mahavaka tsara indrindra eo amin’ny 30 ka hatramin’ny 40 isan-jaton’ny asa ara-dalàna, araka ny resahina ao amin’ity famintinana ao amin’ny Malaria Journal momba ny banga amin’ny fitiliana G6PD ity. Noho izany, ny vokatra ara-dalàna amin’ny fitiliana dia midika fa tsy nahita tsy fahampiana mafy ilay fitsapana. Tsy manamarina izy fa ara-dalàna tanteraka ny asan’ny anzima.

Nahoana no mety hamitaka ny fitiliana

Ny fitomboan’ny retikilosita aorian’ny hemôlizy no tranga mahazatra ahitana vokatra ara-dalàna diso. Ny sela mena tanora sy ny retikilosita dia manana G6PD betsaka kokoa noho ny sela efa antitra. Mandritra ny hemôlizy tampoka, dia mety ho efa potika ireo sela tranainy indrindra sy tena tsy ampy anzima, ka ny sela tanora sisa no tavela ary toa ara-dalàna ny asan’ny anzima rehefa refesina. Mamitaka ny fitsapana ara-habetsahana koa io fizotry ny biôlôjia io, fa tsy ny fitiliana mampiasa loko ihany.

Ny fampidiran-dra vao haingana dia manafina ny tsy fahampiana satria manampy ny anzimany ao amin’ilay santionany ny sela mena avy amin’ny mpanome ra. Tanisain’ny Mayo Clinic Laboratories ny fampidiran-dra ho anisan’ny antony mahatonga vokatra tsy azo itokisana amin’ny fandrefesana anzima, miaraka amin’ny fitomboan’ny retikilosita sy ny fanelingelenana avy amin’ny sela fotsy.

Ny vehivavy heterôzigôta no tranga sarotra indrindra. Ny fampanginana kisendrasendra ny krômôzôma X dia miteraka fifangaroan’ny sela mena ara-dalàna sy ireo tsy ampy anzima, ka ny asa ankapoben’ny anzima dia mety ho eo anelanelan’ny tena tsy ampy sy ny toa ara-dalàna. Matetika no tsy hitan’ny fitiliana ara-kalitao ny fenôtipa antonony. Hazavain’ny antontan-taratasin’ny WHO momba ny fitsapana G6PD amin’ny antsipiriany izany fetra izany.

Ny faharetan’ny santionany, ny hafanana itehirizana azy, ny fiankinan’ny fanombanana ny loko farany amin’ny mpijery, ny hematôkrita ary ny kalitaon’ny réactif dia manampy fiovaovana amin’ny fandrefesana, ankoatra ireo vokatry ny biôlôjia ireo.

Tsy famaritana aretina ny fitiliana

Ny vokatra fitiliana manondro tsy fahampiana, antonony, na tsy mifanaraka amin’ny toe-pahasalaman’ny marary dia mitaky fitsapana ara-habetsahana ny anzima G6PD. Raisin’ny WHO ho fomba fanovozan-kevitra ny spektrofotômetria ara-habetsahana atao amin’ny hafanana voafehy. Amin’io fitsapana io, dia ampiana glucose-6-phosphate sy NADP+ ny ranon’ny sela mena voarava, ary arahina amin’ny fitomboan’ny fandraisana hazavana amin’ny 340 nm ny NADPH miforona. Mifandanja amin’ny asan’ny anzima ny hafainganam-piovana, ary mazàna ahitsy araka ny hemoglobina ka aseho amin’ny singa isaky ny grama. Voafintina ao amin’ny famaritana ny fitsapana asan’ny G6PD ao amin’ny katalaogin’i Mayo ny fomba fanao ankehitriny any amin’ny laboratoara klinika.

Ampiasaina amin’ny fandikana ny vokatra ny elanelana fanovozan-kevitra nohamarinin’ny laboratoara, izay matetika apetraka raha oharina amin’ny asa ara-dalàna eo amin’ny mponina. Mazàna no resahina eo akaikin’ny tokonam-baravarana 30 isan-jato ny tsy fahampiana, ary ambonin’izany ny asa antonony. Voalazan’ny mombamomba ny vokatra kendren’ny WHO ho an’ny fitsapana G6PD (2022) io rafitra famaritana io. Raha mahatonga ny famaritana fenôtipa tsy azo itokisana ny hemôlizy na ny fampidiran-dra vao haingana, dia averina ny fitsapana rehefa miverina amin’ny fifandanjana ny fitambaran’ny sela mena. Afaka manampy vaovao ny fitsapana molekiolara, saingy tsy manolo ny fandrefesana ny anzima.

Fetra tokony hotazonina

Ny manga metilena amin’ireo fitsapana ireo dia réactif ampiasaina any amin’ny laboratoara ivelan’ny vatana, na ex vivo. Hafa izany lohahevitra izany noho ny fiarovana amin’ny fanomezana manga metilena ny marary, izay resahina ao amin’ny torolalana momba ny toe-javatra tsy azo ampiasana manga metilena. Mampifandray azy ireo ny biôsimia, satria miankina amin’ny reduksiôna mampiasa NADPH koa ilay fanafody. Saingy ny loko ao anaty fantsona fitsapana dia tsy fatra ao anatin’ny lalan-dra. Raha mila fanazavana momba ny fiasan’ilay loko ho fandokoana amin’ny sehatra hafa, dia jereo ny foto-kevitry ny fandokoana amin’ny manga metilena. Ho an’ny fianakaviana simika misy azy kosa, dia ny loko redox any amin’ny laboratoara.

Ny fitiliana dia manontany raha toa ka mbola feno ny fahafahana manao reduksiôna. Ny fanamafisana kosa dia manontany hoe ohatrinona marina ny anzima misy. Mahavaly tsara ny fanontaniana voalohany ilay loko, raha tsy angatahin’ny olona hamaly ny faharoa.