Fanandramana amin'ny leviora mampiasa manga metilena: fanisana sela velona sy fandrefesana ny fotoanan'ny fisefoana

Misy fantsona roa eo amin'ny latabatra fiasana. Samy manga izy ireo. Ao amin'ny iray, ny sela manga hita amin'ny mikrôskôpy dia manondro leviora maty. Ao amin'ny iray kosa, ny fantsona miova avy amin'ny manga ho tsy misy loko dia manondro fa velona sy misefo ny leviora. Loko iray ihany, nefa mifanohitra ny fandikana ny vokatra. Raha afangaro ireo fanandramana roa ireo, dia mivadika avokoa ny fehin-kevitra rehetra.

Io fanavahana io no votoatin'ity lahatsoratra ity. Loko redôksy ny manga metilena: manga izy rehefa voaoksida, ary lasa manga metilena leokô tsy misy loko rehefa mandalo reduksiôna. Ny fanisana ny fahavelomana dia mampiasa io toetra simika io amin'ny fijerena fohy amin'ny mikrôskôpy. Ny fanandramana ny fisefoana kosa dia mampiasa azy amin'ny fihetsika simika refesina arakaraka ny fotoana ao amin'ny fangaro iray manontolo. Samy mila fomba fiasa sy fanaraha-maso manokana ary fandinihana amim-pitandremana izy ireo.

Fanisana ny fahavelomana: fandokoana fohy, vakina haingana

Ny fomba fiasa ampiasaina amin'ny fanamboarana labiera no manana fenitra voafaritra indrindra. Manomàna manga metilena 0.01% w/v ao anaty sitrata sôdiôma 2%, afangaroy amin'ny ranoka misy leviora amin'ny tahan'ny 1:1, ary diniho ilay fangaro rehefa tapitra ny elanelam-potoana fohy voafaritra. Miovaova ny elanelam-potoana voalaza amin'ny loharano: 1 ka hatramin'ny 2 minitra ao amin'ny boky torolalan'ny Brewing Science Institute, hatramin'ny 5 minitra eo ho eo amin'ny fomba fiasa fikarohana, ary ny fomba OIV momba ny mikrôbiôlôjian'ny divay dia mitaky fandinihana ao anatin'ny 10 minitra. Manodidina ny 0.005% ny fatran'ny loko ao amin'ny fangaro fanisana. Fenoy ny efitra fanisana Neubauer nohatsaraina, ary amin'ny fanalehibiazana eo amin'ny 400x, sokajio ho tsy velona ny sela manga maizina ary ho velona ny sela tsy voaloko. Isaina ho velona ny sela manga mazava amin'ny fomba OIV, izay efa manondro ny olan'ny fanombanana miankina amin'ny mpandinika, horesahina etsy ambany.

Avy amin'ny refin'ny efitra fanisana no ahazoana ny isan'ny sela isaky ny habetsahan-drano. Rehefa isaina ny efamira afovoany 1 mm manontolo, ny isan'ny sela isaky ny mL dia mitovy amin'ny N ampitomboina amin'ny anton'ny fanalefahana, ampitomboina amin'ny 10^4, ka N no isan'ny sela ao amin'io faritra io, araka ny voalaza ao amin'ny fomba ASBC momba ny leviora. Tsotra kokoa ny kajy ny fahavelomana: ny isan'ny sela tsy voaloko zaraina amin'ny isan'ny sela rehetra, ampitomboina amin'ny 100. Manisà sela 400 eo ho eo mba hanombanana ny fahavelomana, araka ny fikarohana fampitahana FEMS momba ny fanamboarana labiera sy ny fomba OIV. Ampiasao tsy miova ny fitsipika iray momba ny sisin'ny efamira, ohatra, ampidiro ny sela eo amin'ny tsipika ambany sy ankavia, ary esory ireo eo amin'ny tsipika ambony sy ankavanana.

Mila fitsipika momba ny tsimoka alohan'ny hanombohana ny fanisana. Ny fanao iray mahazatra dia manisa ny tsimoka ho sela misaraka rehefa mahatratra ny antsasaky ny haben'ny sela reniny eo ho eo izy, ary miaraka amin'ny reniny raha mbola kely noho izany. Na inona na inona fitsipika nofidina, ampiharo amin'ny efamira rehetra izany ary soraty eo amin'ny taratasy fanisana mba hahafahan'ny olona manaraka mamerina azy.

Taratasy fanisana (ataovy pirinty)

Ity taratasy fanisana ity dia fitaovana noforonina manokana ho an'ity lahatsoratra ity. Adikao ao anaty kahie izy, na manaova pirinty iray isaky ny santionany.

Fahavelomana (%) = 100 x tsy voaloko / (tsy voaloko + manga maizina). Isan'ny sela rehetra isaky ny mL = N x anton'ny fanalefahana x 10^4, ka N dia avy amin'ny faritra voafaritra ao amin'ny efitra fanisana. Soraty eo akaikin'ny vokatra ny elanelam-potoana fandokoana, satria tsy azo averina amin'ny fomba mitovy ny tarehimarika momba ny fahavelomana raha tsy fantatra ny fotoana nampiasaina.

Antony mampiova ny tarehimarika momba ny fahavelomana

Ny fotoana no anton-javatra manelingelina voalohany, ary mety hampivilana ny vokatra amin'ny lafiny roa. Ny sela manana metabolisma miasa dia mampandalo ny loko amin'ny reduksiôna, ka ny famakiana aloha loatra dia mety hahita sela velona mbola tsy nahavita izany ka hanasokajy azy ho maty. Saingy misy poizina koa ny fifampikasohana maharitra amin'ilay loko, ka miteraka sela manga tena simba ary fandokoana diso manondro fahafatesana. Noho izany, ny fomba fampianarana ao amin'ny laboratoara iray dia mamaritra fa tokony hatao ao anatin'ny 5 minitra ny fanasokajiana, araka ny voarakitra ao amin'ny fomba fampianarana momba ny leviora any Wisconsin. Ny filazana azo antoka dia hoe miankina amin'ny fotoana ny fanasokajiana amin'ny manga metilena, ka mifidiana elanelam-potoana fohy iray ary tazomy tsy miova ho an'ny santionany rehetra ao amin'ny andiany iray.

Misy fitongilanana faharoa amin'ny santionany ambany fahavelomana. Mampitandrina ny fomba manara-penitra fa mety hanome tombana ambony noho ny tena fahavelomana ny manga metilena rehefa latsaky ny 80% eo ho eo izany, satria ny sela mbola afaka mampandalo ny loko amin'ny reduksiôna dia tsy voatery mbola afaka miteraka. Milaza tsy fahazoana antoka mitovy amin'izany koa ny literatiora momba ny fanamboarana labiera rehefa mihena be ny fahavelomana. Raiso ho tombana haingana sy manakaiky ny marina ny manga metilena, ary hamarino amin'ny fanisana amin'ny takelaka fambolena na loko fameno ny fanapahan-kevitra lehibe momba ny fahavelomana ambany, toy ny fampiasana indray ny leviora voakolokolo hanombohana fanamasinana vaovao.

Ny fiantraikan'ny tontolo misy ny santionany no fahatelo. Ny fomba OIV dia atao eo amin'ny pH 4.6 eo ho eo, ary mampitandrina fa ny santionany ambany pH manana fahafahana lehibe mitazona ny pH tsy hiova dia manakana ny fiasan'ny loko araka ny tokony ho izy. Manoro koa izy mba tsy hampiasana ilay fanandramana rehefa mihoatra ny 100 g/L ny siramamy, satria manjary manga mazava ny sela ka mety hamitaka ny famakiana. Ny fampitahana andrana momba ny pH amin'ny fandokoana dia nahitana fiovana lehibe teo amin'ny fahatsapan'ny fitsapana manerana ny elanelana nosedraina, mifanaraka amin'ny fikarohana momba ny fomba manga metilena miankina amin'ny pH. Fandrika hafa kosa ny potipoti-javatra: ny poti-javatra voaloko ao amin'ny fangaro fanamboarana labiera tsy madio dia mitovy endrika amin'ny sela maty ary mampitombo ny fahasamihafan'ny vokatra eo amin'ny mpanao fanisana.

Voarefy io fahasamihafana io, fa tsy tantara notantaraina fotsiny. Tamin'ny andrana naharitra enim-bolana tao amin'ny toeram-panamboarana labiera, voalaza ao amin'ny fampitahana FEMS momba ny leviora, ny fandrefesana manga metilena natao indroa dia nanana fiviliana manara-penitra 6.1% amin'ny salanisa, raha 0.2% kosa ho an'ny sitômetria mikoriana mampiasa oxonol. Nahatratra 13 teboka isan-jato ny fahasamihafan'ny mpanao fanisana roa tamin'ny santionany iray ihany. Ny fampitahana ara-kajy ny fomba fandrefesana fahavelomana tamin'ny 2023 dia nahita fa mazava kokoa ny vokatra azo amin'ny mikrôskôpy mampiasa floresansy sy ny sitômetria mikoriana, sady nampiseho fa miankina amin'ny karazana leviora sy ny tontolo misy ny santionany ny fahombiazan'ny fomba. Mbola fototra ianteherana ny famaritana mahazatra ny fomba nataon'i Painting sy Kirsop (PMID 24430080), ary ny famerenana malalaka kokoa ny fanandramana momba ny fahavelomana sy ny fahavitrihan'ny leviora (PMID 25154541) dia mametraka ny manga metilena ho anisan'ny fitsapana mifameno, fa tsy fitsapana manome valiny farany. Tsy fanatsarana mandeha ho azy eto ny manga trypan: izy io dia manondro ny fahaverezan'ny fahamendrehan'ny fonon'ny sela, fa ny manga metilena kosa dia manondro ny fidiran'ny loko sy ny asan'ny reduksiôna. Noho izany, mety ho samy hafa ny fanasokajiana ny sela iharan'ny tsindry amin'ireo loko roa ireo.

Fanandramana ny fisefoana: refeso ny fotoana ialan'ny loko manga

Tsy mijery amin'ny mikrôskôpy mihitsy ny fanandramana faharoa. Ampidirina ao anaty fantsona mihidy ny leviora, ny gliokôzy ary ny manga metilena voalevona, ary refesina ny fotoana ilain'ny loko manga hanjavonana. Rehefa manao metabolisma ny sela, dia mamokatra singa mitondra hery reduksiôna izay manova ny loko manga ho amin'ny endriny tsy misy loko, fa ny ôksizenina levona kosa dia mamerina azy amin'ny endrika voaoksida. Rehefa mampihena ny ôksizenina ny sela, dia manjaka ny reduksiôna ary very loko ilay fantsona. Noho izany, ny teboka fiafarana dia maneho ny fifandanjan'ny fisefoana, ny fatran'ny loko ary ny fisian'ny ôksizenina. Tokony hotaterina ho fotoanan'ny reduksiôna na fanjavonan'ny loko manga metilena izany, fa tsy ho tahan'ny fanjifana ôksizenina molekiolary refesina mivantana.

Mampiasà loko voalevona lavitra kokoa noho ny amin'ny fanisana fahavelomana, mba ho ao anatin'ny elanelam-potoana mora refesina ny vokatra. Manome fenitra mazava tsara momba izany ny boky torolalana AQA momba ny asa an-tselika tsy maintsy atao amin'ny A level: gliokôzy 1 g isaky ny rano 100 mL hafanaina ho eo amin'ny 30 C, leviora maina 5 g ampiana avy hatrany alohan'ny fampiasana, ary vahaolana loko ampiasaina eo amin'ny 0.001%, omanina amin'ny fanalefahana vahaolana fototra 1% mirefy 0.1 mL ho 100 mL. Afangaroy ny ranoka misy leviora sy gliokôzy 2 mL amin'ny vahaolana loko ampiasaina 2 mL, avelao hahatratra ny hafanan'ny fitsapana, ahozongozony indray mandeha mandritra ny 10 segondra, atombohy ny fandrefesana fotoana, ary aza ahozongozonina intsony. Ny fanozongozonana dia mampiditra ôksizenina indray ka mamerina ny fantsona ho manga; io no fanodinkodinana lehibe indrindra ateraky ny fomba fiasa. Milaza ny AQA fa amin'ny ankapobeny dia tokony ho very loko ao anatin'ny 5 minitra eo ho eo amin'ny 35 C ilay fangaro, ary ny salanisa tamin'ny andrana dia 275 s amin'ny 20 C, 128 s amin'ny 35 C, ary 145 s amin'ny 45 C. Ohatra avy amin'ny fandaminana iray ireo, fa tsy mari-pandrefesana mihatra amin'ny toe-javatra rehetra. Ny fifandraisana ara-kajy eo amin'ny tahan'ny reduksiôna sy ny leviora manana metabolisma miasa, amin'ny fepetra voafehy, dia tohanan'ny fikarohana manokana momba ny reduksiôna, anisan'izany ny asa voatanisa ho PMID 25773544 sy ny fikarohana momba ny fomba fiasan'izany ao amin'ny Yeast (2014).

Ohatra momba ny fiovana arakaraka ny fotoana (fitaovana noforonina manokana)

Ny tabilao etsy ambany dia ohatra noforonina manokana ho an'ity lahatsoratra ity, mampiasa ny fandaminana AQA voalaza etsy ambony: fangaro leviora sy gliokôzy 2 mL miaraka amin'ny vahaolana loko ampiasaina 2 mL eo amin'ny 0.001%, fanozongozonana iray mandritra ny 10 segondra, ary avy eo fitazonana amin'ny hafanana voafaritra tsy misy fanelingelenana. Ohatra amin'ny famakiana vokatra ireo firaketana ireo, amin'ny endrika tokony horaketin'ny vondron'ny mpianatra. Ny tondro hafainganam-piovana dia faritana ho 1 zaraina amin'ny fotoanan'ny fanjavonan'ny loko, amin'ny segondra. Ataovy amin'ireo fantsona mitovy ny fanandramana ary soloy sanda tena voarefy ireo firaketana ireo.

Ataovy kisary ny tondro hafainganam-piovana arakaraka ny hafanana ho an'ny fantsona A, B ary C. Miakatra ilay fiolahana, avy eo mihamalama na midina; izany no endrika andrasana amin'ny fizotry ny asa entin'ny anzima, fa tsy tsipika mahitsy. Tsy teboka angona eo amin'io fiolahana io ny fantsona D, E ary F. Izy ireo no fanaraha-maso ahafahana mandika ilay fiolahana.

Fanaraha-maso manome hevitra mazava ny fanandramana tsirairay

Mila fantsona fanaraha-maso telo miaraka aminy ny andrana fisefoana tsirairay. Ny leviora nampampangotrahina na novonoina miaraka amin'ny gliokôzy sy loko dia tokony hijanona ho manga, ka manaporofo fa miankina amin'ny metabolisma velona ny reduksiôna haingana. Ny leviora velona miaraka amin'ny loko, tsy misy gliokôzy nampiana, dia fanaraha-maso ny akora iasan'ny metabolisma, saingy andrasana ihany ny fanjavonan'ny loko miadana satria mampiasa ny tahiry ao anatiny ny leviora. Ny gliokôzy miaraka amin'ny loko, tsy misy leviora, no vahaolana fanaraha-maso simika. Tena ilaina izany satria ny gliokôzy ao anaty tontolo alkalina dia afaka mampandalo ny manga metilena amin'ny reduksiôna na dia tsy misy sela aza.

Mila karazana fanaraha-maso hafa ny fanisana fahavelomana: ny fitazonana ny fomba fiasa tsy hiova. Vahaolana fototry ny loko iray ihany, tahan'ny fangaro iray ihany, elanelam-potoana fandokoana iray ihany, faritra iray ihany ao amin'ny efitra fanisana, fitsipika iray ihany momba ny tsimoka sy ny sisiny, ary fanisana tsy ahafantarana ny mombamomba ny santionany raha azo atao. Rehefa misy fahasamihafana folo teboka eo amin'ny mpanao fanisana roa, dia mazàna ny taratasy fanisana no mampiseho ny antony: fotoana tsy mitovy, fetra hafa hamaritana ny manga, na fitsipika hafa momba ny tsimoka. Ny teknika fanomanana sy fijerena sela voaloko dia mifandray amin'ny fomba fandokoana tsotra ny bakteria, ary ny topimaso malalaka kokoa momba izay asongadin'ilay loko amin'ny santionany samihafa dia hita ao amin'ny atlasy momba ny fandokoana amin'ny mikrôskôpy. Ho an'ny fizika ao ambadiky ny fandrefesana ara-kajy ny hamafin'ny loko manga, ny loharano momba ny fitrohana misy marika momba ny fepetra nampiasaina dia manazava ny antony tsy maintsy hampiarahana ny koefisienta tsirairay amin'ny fepetra momba ny mpandevona, ny pH ary ny fifantohana.

Fidio arakaraka ny fanontaniana ny fanandramana. Fanontaniana momba ny fanisana ny hoe firy ny sela velona amin'izao fotoana izao, ary valiana amin'ny mikrôskôpy sy taratasy fanisana izany. Fanontaniana momba ny hafainganam-pizotran'ny fihetsika kosa ny hoe hatraiza ny fahavitrihan'ny fisefoan'ity leviora voakolokolo ity, ary valiana amin'ny famantaranandro fandrefesam-potoana sy fantsona voafehy izany. Mahavita ireo asa roa ireo ny manga metilena, saingy tsy ao anaty fantsona iray amin'ny fotoana iray mihitsy.