Metilēnzilā redukcijas tests spurekļa šķidrumam

Absolvente zvana no saimniecības, rokā turot mēģeni ar zilu šķidrumu. Pirms desmit minūtēm viņa spurekļa šķidrumam pievienoja metilēnzilo, bet zilā krāsa joprojām nav pazudusi. Viņa jautā, vai govij vajadzētu dot vairāk krāsvielas.

Šis jautājums atklāj nepareizu priekšstatu. Metilēnzilā redukcijas testā spurekļa šķidrumam krāsvielu pievieno mēģenē, nekad neievada dzīvniekam. Visa pārbaude notiek mēģenē. Mērot, cik ātri pazūd zilā krāsa, iegūst informāciju par mikroorganismiem šajā paraugā, nevis par dzīvniekam nepieciešamo ārstēšanu.

Šī neskaidrība ir saprotama, jo metilēnzilo izmanto trīs atšķirīgos veterinārmedicīnas kontekstos. Šajā rakstā tie ir nošķirti un parādīts, kā redukcijas laiku interpretēt kopā ar pH, vienšūņu novērojumiem, parauga kvalitāti un klīniskajām pazīmēm.

Ko tests patiesībā mēra

Metilēnzilais oksidētā veidā ir zils, bet reducētā veidā — gandrīz bezkrāsains. Svaigam spurekļa šķidrumam no vesela dzīvnieka piemīt spēcīgas reducējošas īpašības, jo anaerobās baktērijas aktīvi fermentē barību. Ja šādā šķidrumā iemaisa nelielu daudzumu krāsvielas, baktēriju vielmaiņas rezultātā krāsa izzūd dažu minūšu laikā.

Tātad darbības princips ir vienkāršs: aktīva anaerobā mikroflora zilo krāsu likvidē ātri, bet neaktīva vai bojāta mikroflora — lēni. Īss laiks nozīmē lielāku reducēšanas spēju konkrētajā paraugā. Pagarināts laiks liecina par pazeminātu mikroorganismu aktivitāti, ja paraugs ir pareizi paņemts un apstrādāts.

Tests tieši nemēra spurekļa oksidēšanās–reducēšanās potenciālu. Liellopu izmeklēšanas metožu pētījumā, kurā redukcijas tests tika salīdzināts ar tiešiem mērījumiem milivoltos, netika konstatēta lineāra korelācija starp redukcijas laiku un izmērīto oksidēšanās–reducēšanās potenciālu. Pētnieki secināja, ka abus rādītājus nedrīkst uzskatīt par savstarpēji aizstājamiem viena un tā paša lieluma mērījumiem. Pilna salīdzinājuma kopsavilkums pieejams PubMed. Uztveriet redukcijas testu kā mikroorganismu populācijas funkcionālu pārbaudi, nevis lētu elektroda aizstājēju.

Merck/MSD aprakstā par vienkāršiem gremošanas traucējumiem atgremotājiem pagarināts redukcijas laiks aplūkots kopā ar patoloģisku spurekļa pH un samazinātu vienšūņu skaitu. Neviens atsevišķs rādītājs nenosaka diagnozi. To nosaka kopējā aina.

Standarta procedūra pie dzīvnieka

Dažādās mācību iestādēs protokoli nedaudz atšķiras, tāpēc pierakstiet precīzus izmantotos tilpumus un temperatūru un salīdziniet tikai pēc viena un tā paša protokola iegūtus rezultātus. Viena plaši mācīta procedūras versija ir šāda:

1. Paņemiet vismaz 10 līdz 20 mL svaiga spurekļa šķidruma, pēc iespējas samazinot siekalu piejaukumu, saskari ar gaisu un atdzišanu. Veiciet testu nekavējoties.
2. Sagatavojiet 0.03 procentu metilēnzilā šķīdumu, kas atbilst 0.3 mg uz mL.
3. Pievienojiet krāsvielu daudzumā, kas atbilst 5 procentiem no šķidruma tilpuma. Tas ir 1.0 mL krāsvielas uz 20 mL šķidruma vai 0.5 mL krāsvielas uz 10 mL šķidruma. Abos gadījumos šķidruma un krāsvielas attiecība ir 20 pret 1.
4. Otrā mēģenē atstājiet neapstrādātu šķidrumu no tā paša parauga kā krāsas kontroli.
5. Viegli samaisiet, uzreiz iedarbiniet taimeri un turiet mēģeni temperatūrā, kas tuva ķermeņa temperatūrai — aptuveni 37 līdz 39 Celsija grādos atkarībā no vietējā protokola.
6. Pierakstiet laiku, līdz testa mēģenes krāsa sakrīt ar kontroles mēģenes krāsu. Pie saskares virsmas ar gaisu var saglabāties plāns zils gredzens, jo skābeklis tur atkārtoti oksidē krāsvielu. Negaidiet, līdz šis gredzens izzūd.

Metilēnzilā oksidēšanās–reducēšanās ķīmija izskaidro, kāpēc skābeklis šeit ir svarīgs. Spēcīga kratīšana, plaši atvērta mēģene vai ilga kavēšanās ļauj piekļūt skābeklim, tāpēc krāsviela saglabājas zila ilgāk, nekā tas notiktu pašā spureklī. Tā paša iemesla dēļ ir svarīgas spurekļa šķidruma paņemšanas metodes detaļas, kas palīdz izvairīties no piesārņojuma. Siekalas atšķaida paraugu un paaugstina pH, tāpēc, izmantojot kuņģa zondi, daudzi klīnicisti pirmo porciju izmet, ja pieejamais tilpums to ļauj.

Ko mēra dažādi novērojumi

Redukcijas laiks atbild tikai uz vienu jautājumu. Tālāk sniegtais spurekļa novērtējums parāda, ko dod katrs pie dzīvnieka veiktais novērojums. Izmantojiet visu rindu, nevis vienu šūnu.

Tabula parāda galveno principu. Pagarināts redukcijas laiks kopā ar gausiem vienšūņiem, patoloģisku pH un vājām kontrakcijām liecina par patiesi nomāktu mikroorganismu aktivitāti. Atsevišķi konstatēts pagarināts laiks možam, atgremojošam dzīvniekam ar aktīviem vienšūņiem drīzāk norāda uz parauga, nevis spurekļa problēmu. Pirms rīkoties, paņemiet paraugu atkārtoti.

Laika interpretācija kopā ar pH un anamnēzi

Barība nosaka sākotnējo atskaites līmeni. Ar spēkbarību bagātas devas fermentējas ātri, un krāsviela var izzust aptuveni minūtes laikā, savukārt, barojot ar sienu, tas var prasīt vairākas minūtes pat veseliem dzīvniekiem. Tāpēc īss laiks pats par sevi nepierāda labāku veselību. Tas liecina, ka vairāk fermentējama substrāta ir nonācis saskarē ar aktīviem mikroorganismiem.

Smaga graudu pārbarošana izjauc šo vienkāršo sakarību. Sākumā ogļhidrātu fermentācija var būt intensīva, pēc tam skābju radītais bojājums nomāc normālo mikrofloru un vienšūņus, un redukcijas laiks pagarinās. Tāpēc viens no mācību noteikumiem paredz, ka tests nav derīgs, ja spurekļa pH ir zemāks par aptuveni 5.5. Šādā situācijā pārbaudāmā mikroflora ir mainījusies.

Praktisks atradņu kombināciju ceļvedis:

• Normāls pH un redukcija aptuveni 6 minūšu laikā liecina par funkcionāli aktīvu mikrofloru.
• Normāls pH un izteikti pagarināts redukcijas laiks liecina par neaktivitāti anoreksijas, pretmikrobu līdzekļu iedarbības vai neatbilstošas parauga kvalitātes dēļ.
• Augsts pH un pagarināts redukcijas laiks bieži novērojams pēc ilgstošas anoreksijas, kad ir maz substrāta, taču jāņem vērā iespējamais siekalu piejaukums, paraugu ņemot ar zondi.
• Zems pH un samazināta vienšūņu aktivitāte rada aizdomas par ar ogļhidrātiem saistītu disbiozi. Šeit palīdz norādes par spurekļa pH interpretāciju. Vērtības zem 5.5 kopā ar vispārējā stāvokļa nomākumu liecina drīzāk par graudu pārbarošanu un smagu acidozi, nevis vienkāršiem gremošanas traucējumiem.

Vienmēr pierakstiet nesenu tetraciklīnu lietošanu iekšķīgi, jonoforus barībā, ilgstošu sistēmisku pretmikrobu līdzekļu lietošanu, krasas barības devas izmaiņas, anoreksijas ilgumu un ūdens uzņemšanu. MSD rokasgrāmatā īpaši brīdināts, ka iekšķīgi lietoti tetraciklīni var būtiski nomākt spurekļa mikrofloru. Jonofori mērķtiecīgi maina baktēriju populāciju sastāvu. Bez šīs anamnēzes pagarinātu laiku nav iespējams interpretēt.

Parauga kvalitātei jāpiešķir tikpat liela nozīme. Kontrolētā pētījumā ar kuņģa zondi ņemtiem paraugiem konstatēja augstāku pH un zemāku gaistošo taukskābju līmeni nekā tiem pašiem dzīvniekiem caur kanulu ņemtos paraugos, galvenokārt siekalu piejaukuma dēļ. 60 minūtes pēc parauga paņemšanas redukcijas laiks bija būtiski pagarinājies visiem pārbaudītajiem tilpumiem, un mazie paraugi bija ietekmēti visvairāk. Paņemiet vismaz 10 mL, pārbaudiet 30 minūšu laikā, redukcijas testu veiciet izmeklēšanas sākumā, turiet paraugu siltu un pēc iespējas samaziniet saskari ar gaisu.

Trīs lietojumi, kurus nedrīkst sajaukt

Viena un tā pati krāsviela, trīs dažādas sistēmas.

Pirmais ir šeit aprakstītais spurekļa šķidruma tests. Paraugs ir paņemts spurekļa šķidrums. Krāsvielu pievieno in vitro 0.03 procentu koncentrācijā. Gala rādītājs ir laiks līdz atkrāsošanai. Mērķis ir novērtēt mikroorganismu reducējošo aktivitāti.

Otrais ir metilēnzilā ievadīšana dzīvam atgremotājam. Atzīts piemērs ir intravenoza terapija nitrātu vai nitrītu toksikozes gadījumā ar methemoglobinēmiju, kad zāles atjauno funkcionālu hemoglobīnu. Ir jāievēro noteikumi par devu, zāļu formu, atliekvielām un izdalīšanās periodu. Šim lēmumam nav nekādas saistības ar laika mērīšanu mēģenē. Ja konkrētā procedūrā krāsvielu izmanto kā in vivo marķieri, svarīgi ir tas, kur krāsviela pārvietojas, nevis cik ātri spurekļa mikroorganismi to reducē.

Trešais ir piena redukcijas tests. Paraugs ir piens. Krāsvielu pievieno piena paraugam. Strauja zilās krāsas izzušana parasti liecina par lielāku mikroorganismu aktivitāti un sliktāku uzglabāšanas kvalitāti, savukārt lēna redukcija norāda uz labāku kvalitāti. Šis tests pieder pārtikas mikrobioloģijai un piena kvalitātes pārbaudēm, nevis spurekļa medicīnai, un tas nenosaka baktēriju skaitu.

Precīzi nosaukumi palīdz novērst kļūdas: spurekļa šķidruma redukcijas laiks, sistēmiska metilēnzilā terapija vai lietošana marķēšanai un piena redukcijas tests. Drošības noteikums ietilpst vienā teikumā. Spurekļa testam paredzētā krāsviela paliek laboratorijas mēģenē, un šo mēģeni izmet. Lai veiktu testu, krāsvielu nekad neievada dzīvniekam.

Īss noteikums izsaukumam uz saimniecību

Standartizējiet krāsvielas koncentrāciju līdz 0.03 procentiem un attiecību līdz 1 daļai krāsvielas uz 20 daļām šķidruma, pārbaudiet svaigu šķidrumu temperatūrā, kas tuva ķermeņa temperatūrai, salīdzinot ar neapstrādātu kontroli, un interpretējiet minūtes kopā ar pH, vienšūņu kustīgumu, parauga paņemšanas kvalitāti, barību, zālēm, kontrakcijām, apetīti, fekālijām un hidratāciju. Atsevišķs skaitlis nekad nenosaka gremošanas traucējumu diagnozi. To nosaka savstarpēji saskanīga atradņu kopaina.