Artikel
Methylenblo a Bartonella: Laborresultater a Grenze vun der klinescher Evidenz
Eng Kulturschuel an e Patient deelen ee Wuert, Infektioun, awer net dat selwecht Konzept. An der Schuel ass eng Infektioun eng Zuel vu Kolonien op Agar. Beim Patient geet et ëm Bakterien an Zellen a Gefässer, Medikamenter, déi sech duerch Blutt a Geweebe beweegen, an en Immunsystem, deen en Deel vun der Aarbecht mécht. Wann een déi zwee verwiesselt, fänkt eng opfälleg Laborzuel un, wéi eng Behandlung auszegesinn. Wann een se getrennt hält, gëtt déi selwecht Zuel zu deem, wat se ass: e Grond, dat nächst Experiment ze maachen.
Dës Trennung ass déi ganz Aufgab vun dësem Iwwerbléck iwwer Methylenblo a Bartonella. Zwou Laborstudie vun enger eenzeger Fuerschungsgrupp hunn Methylenblo géint Bartonella henselae an net wuessenden Zoustänn getest. Béid hunn eng staark Aktivitéit a Glas a Plastik gemellt. Keng vun deenen zwou huet e Mënsch getest.
Firwat Fuerscher déi stationär Phas testen
Déi meescht Antibiotikatester benotze wuessend Zellen. Dëse Modell léisst e méi schwierege Fall ausser Uecht: Zellen, déi opgehalen hunn, sech ze deelen, a Medikamenter toleréieren, déi hir wuessend Schwësterzellen dout maachen.
Bartonella kann am Kierper bestoe bleiwen, och an Erythrozyten an Endothelzellen. Dofir huet d'Grupp ënnersicht, wéi eng zougeloossen Medikamenter B. henselae dout maache kënnen, nodeems d'Bakterie an déi stationär Phas agetrueden ass. Eng niddreg MIC géint wuessend Zellen huet net virausgesot, ob Zellen an der stationärer Phas ofgedout géife ginn. Rifampin hat eng ganz niddreg MIC, huet stationär Zellen awer nëmme schlecht ofgedout, wärend Substanze mat méi héije MIC-Wäerter se gutt ofgedout hunn. Lieser, déi eng allgemeng Method fir dës Zort Publikatioun sichen, fannen se am Guide fir d'Liese vu Fuerschung iwwer Methylenblo.
Éischt Screening: Li a Kolleegen, 2019
De Screening vun der stationärer Phas vun 2019 an Antibiotics huet een eenzege Stamm benotzt, B. henselae JK53, deen am Schneider-Medium mat 10 Prozent fetalem Rannerserum bei 37 C a mat 5 Prozent CO2 kultivéiert gouf. Een Dag al Kulturen hunn haaptsächlech aus verdeelten Zellen bestanen, déi sech gedeelt hunn. Fënnef Deeg al Kulturen, mat ronn 10 héich 8 koloniebildenden Eenheeten pro mL, goufen als stationär Phas ugesinn an hu siichtbar Aggregater enthalen.
Den Test huet SYBR Green I mat Propidiumiodid benotzt, kalibréiert u Mëschunge vu liewegen Zellen an Zellen, déi mat Isopropanol ofgedout gi waren. Well Methylenblo staark gefierft ass, goufe positiv Resultater duerch Mikroskopie an duerno duerch d'Ziele vu Kolonien op Bluttagar bestätegt, wat dee méi strengen Endpunkt war.
Vun 1,581 zougeloossene Medikamenter bei 50 micromolar huet Methylenblo eng verbleiwend Viabilitéit vu 16 Prozent am Plackeliesapparat a vu 25 Prozent ënner dem Mikroskop gewisen. Daptomycin koum op 21 Prozent, verschidden Azolen op 22 bis 27 Prozent, Gentamicin op 32 Prozent, Erythromycin op 66 Prozent a Ciprofloxacin op 74 Prozent. Pyrviniumpamoat huet am Liesapparat méi staark ausgesinn, konnt awer wéinst senger eegener Fluoreszenz net duerch Mikroskopie bewäert ginn.
Géint wuessend B. henselae louch d'MIC vu Methylenblo bei 0.08 bis 0.16 micrograms per mL. Bei fënnef Deeg ale stationären Zellen an enger Konzentratioun vu 5 micrograms per mL ware no engem Dag Expositioun keng Kolonië méi noweisbar, genee wéi bei Daptomycin a Pyrviniumpamoat an hire geteste Konzentratiounen. En eegene Versuch fir d'Ofdoudung iwwer d'Zäit ze moossen huet 10 micrograms per mL benotzt. Dat si Labor-Expositiounsniveauen, keng Dosen, an d'Publikatioun bezeechent se och esou. E zitéierte mënschleche Plasma-Spëtzewäert vu ronn 3.9 micrograms per mL steet an der Publikatioun nëmmen als Hannergrondinformatioun. Den Iwwerbléck iwwer d'Pharmakokinetik vu Methylenblo erkläert, firwat e Plasmawäert net als Geweebewäert gelies ka ginn.
Zwou Grenze ginn an der Publikatioun ausdrécklech genannt. Et gouf kee Biofilmmodell a keng Tester vu Kombinatioune mat Methylenblo. Déi fënnef Deeg al Aggregater ware Zellgruppen an enger stationärer Flëssegkultur, kee validéiert Biofilmexperiment. D'Auteuren hu fir Déiereversich, Kombinatiounstester, Biofilmversich an Tester mat anere Bartonella-Aarte plädéiert.
Kombinatiounen an Zellen aus Biofilmer: Zheng a Kolleegen, 2020
D'Nofollgestudie vun 2020 an BMC Microbiology huet dee selwechte Stamm an dat selwecht Medium bäibehalen, ass awer op sechs Deeg al stationär Kulturen iwwergaangen an huet zwou Saachen dobäigesat, déi an der éischter Publikatioun gefeelt hunn: Kombinatioune vun zwee Wierkstoffer an e Modell mat Zellen aus engem Biofilm.
Bei eenzele Wierkstoffer, all mat 5 micrograms per mL fir 24 Stonnen, huet Methylenblo 3.2 mol 10 héich 4 koloniebildend Eenheeten pro mL iwwreg gelooss, géintiwwer enger Kontroll mat ongeféier 2.8 mol 10 héich 10. Ciprofloxacin, Gentamicin an Nitrofurantoin hu beim selwechten Zäitpunkt manner Kolonien iwwreg gelooss. Dat ënnerscheet sech vum Resultat vun 2019, wou bei der selwechter nomineller Konzentratioun no engem Dag keng Kolonië méi noweisbar waren. Den Alter, d'Dicht an d'Handhabung vun de Kulturen hu sech ënnerscheet. D'Ofdoudung war also an hirer Tendenz reproduzéierbar, awer net identesch an hirem Ausmooss. Dës Variatioun tëscht Versich ass ee Grond, firwat déi üblech Sécherheets- an Interaktiounskontrollen d'Wierkstäerkt am Labor getrennt vum klineschen Effekt behandelen.
De Kombinatiounsscreening ass deen Deel, deen am heefegsten zitéiert gëtt. All Komponent war op 5 micrograms per mL festgeluecht. Souwuel Azithromycin plus Methylenblo wéi och Rifampin plus Methylenblo hunn no 24 Stonne keng noweisbar Kolonien aus der stationärer Phas hannerlooss, genee wéi déi zwou Kombinatioune mat Ciprofloxacin. Nëmmen dës véier vun de 25 geteste Kombinatiounen hunn dat Resultat erreecht. Et gouf keng formell Synergieanalys gemaach. Dee richtege Begrëff ass also eng aktiv Kombinatioun ënner dëse Bedéngungen, net eng bewisen Synergie.
D'Biofilmexperiment huet Zellen getest, déi aus engem jonken, zerstéierte Biofilm gewonnen goufen, net d'Andrénge vun de Wierkstoffer an en intakten, ausgeräifte Biofilm. D'Kulture goufe fënnef Deeg ugezunn, duerno verdënnt an a Placke mat Vertiefunge fir fënnef weider Deeg kultivéiert. De Biofilm gouf duerch Kristallviolettfierwung bestätegt an duerno virun der Medikamentenexpositioun ofgeschraapt. Bei 5 micrograms per mL huet Methylenblo eleng d'Zuel bis zum Dag 6 op 2.3 mol 10 héich 2 reduzéiert. Domat huet et zu de beschten eenzele Wierkstoffer gehéiert, awer d'Zuel war net null. Béid Kombinatioune mat Methylenblo hunn um Dag 6 null erreecht, genee wéi béid Kombinatioune mat Ciprofloxacin.
D'Auteuren hunn op déi selwecht Grenzen higewisen, déi och engem virsiichtege Lieser opfale géifen: e jonken, ofgeschraapte Biofilm amplaz vun engem alen, intakte Biofilm; eng eenheetlech, praktesch Konzentratioun fir all Medikamenter amplaz vun all Medikament bei sengem eegene realistesche Spëtzewäert; nëmmen ausgewielte Kombinatioune mat Azithromycin oder Rifampin; een eenzege Stamm; keng Déieren; keng Patienten. Spéider Aarbechte mat dräi Wierkstoffer goufe proposéiert, net bericht.
Verglach vun de Studiendesignen
| Designaspekt | Li 2019 | Zheng 2020 | Wat als klinesch Evidenz gëllt |
|---|---|---|---|
| Organismus | Nëmme B. henselae JK53 | Nëmme B. henselae JK53 | Patiente mat bestätegter Bartonellose, definéiert Endpunkten |
| MIC vu Methylenblo fir wuessend Zellen | 0.08 bis 0.16 micrograms per mL | Datselwecht, 0.08 bis 0.16 | Net uwendbar |
| Stationäre Modell | 5 Deeg al Kultur, eenzel Wierkstoffer | 6 Deeg al Kultur, eenzel Wierkstoffer plus 25 Kombinatiounen | Aktivitéit am Geweebe an an den Zellen, Pharmakokinetik |
| Biofilmmodell | Keen, Aggregater si kee Biofilm | Ofgeschraapt Zellen aus engem 5 Deeg ale Biofilm | Intakte Biofilm oder Donnéeën iwwer Persistenz in vivo |
| Haaptresultat fir Methylenblo | 5 micrograms per mL, keng Kolonien um Dag 1 | Selwechten Niveau, 3.2 mol 10 héich 4 no 24 Stonnen; Kombinatioune mat Azithromycin oder Rifampin bei null | Taux vum Uspriechen, Réckfalltaux, onerwënscht Evenementer |
| Formelle Synergietest | Net gemaach | Net gemaach | Dosisbestëmmung a kontrolléierte Verglach |
D'Tabell weist de Kär vun dësem Artikel a kompakter Form. Alles lénks vun der leschter Kolonn ass Aarbecht mat Kulturen. Näischt an enger vun deenen zwou Publikatioune gehéiert an déi lescht Kolonn.
Bartonella ass net Borrelia
Béid Publikatiounen ernimmen Borrelia burgdorferi, d'Spirocheet, déi d'Lyme-Krankheet verursaacht, well de Faarfstofftest aus fréieren Aarbechten iwwer d'stationär Phas vu Borrelia am selwechte Labor koum. Do hate Methylenblo an Daptomycin och positiv Resultater gewisen. Dës Virgeschicht ass en nëtzleche Kontext an eng heefeg Feelerquell.
Keen Experiment an enger vun deenen zwou Bartonella-Publikatiounen test Borrelia direkt niewent Bartonella. D'Organismen ënnerscheede sech, d'Medien ënnerscheede sech, d'Konzentratiounen ënnerscheede sech, an de vermuttlechen Effekt vu Methylenblo op d'Membran vu Bartonella gouf als Spekulatioun beschriwwen, déi weider Fuerschung brauch. Resultater sollten net vun enger Aart op eng aner iwwerdroe ginn, a keng vun deenen zwou Publikatioune stëtzt allgemeng Aussoen iwwer Parasitten. De Verglach vu Borrelia- a Bartonella-Persisterzellen hält déi zwou Fuerschungsliteraturen aus dësem Grond getrennt.
Firwat aus Kulturen net einfach e Protokoll gëtt
D'Sichinteressi un engem Methylenblo-Bartonella-Protokoll ass verständlech. Dës Publikatioune weisen, firwat deen Ausdrock éischter als Warnsignal wéi als Akafslëscht behandelt soll ginn.
Éischtens sinn 5 micrograms per mL an enger Vertiefung keng Verschreiwung. Domat si keng Informatiounen iwwer Absorptioun, Verdeelung, Proteinbindung, intrazelluläert Andrénge oder Verdréiglechkeet verbonnen. D'Auteuren hunn dëse Wäert als graffen Duerchschnëtt vun den Antibiotika-Spëtzewäerter gewielt an erkläert, datt zukünfteg Aarbechte fir all Medikament säin eegene realisteschen Niveau benotze sollten.
Zweetens bedeiten null Kolonien, datt ënner deene Bedéngunge vun der Kultivatioun op Agar keng Kolonien entstane sinn, net datt d'Geweebe steril ass. Persisterzellen, intrazellulär Bakterien an d'Grenze vun der Proufhuelung leien all ausserhalb vun der Agarplack.
Drëttens kënne Kombinatiounen, déi eng Vertiefung steril maachen, am Kierper versoe oder schueden. Azithromycin plus Methylenblo a Rifampin plus Methylenblo si Laborkombinatioune bei Labor-Expositiounen. Ouni pharmakokinetesch Donnéeën aus Déiereversich a kontrolléiert Donnéeë vu Mënsche gëtt et keng Dosis, keng Dauer a kee Virdeel-Risiko-Verhältnis. Wien Optiounen ofweit, soll se mat engem Dokter diskutéieren a sech domat befaassen, wéini d'Benotzung vu Methylenblo medezinesch Iwwerwaachung erfuerdert, éier en aus Donnéeë vu Kulturschuelen eng Schlussfolgerung zitt.
Déi enk begrenzte Schlussfolgerung, déi dës Publikatiounen tatsächlech stëtzen, ass dës: Methylenblo huet eng reproduzéierbar Aktivitéit géint net wuessend B. henselae JK53 in vitro, och a Laborkombinatioune vun zwee Wierkstoffer. Déi stäerkst Resultater fir Kombinatiounen an Zellen aus Biofilmer kommen aus der Studie vun 2020. Alles anescht, och ob dës Aktivitéit fir Bartonellose beim Mënsch relevant ass, bleift ongetest.