Метилен көгү жана Bartonella: лабораториялык жыйынтыктар менен клиникалык далилдер

Өстүрүү идишине да, бейтапка да «инфекция» деген сөз колдонулат, бирок анын мааниси бирдей эмес. Идиште инфекция — агардагы колониялардын саны. Бейтапта болсо бул — клеткалардын жана кан тамырлардын ичиндеги бактериялар, кан жана ткандар аркылуу тараган дарылар, ошондой эле иштин бир бөлүгүн аткарган иммундук система. Бул экөөнү чаташтырсаңыз, таасирдүү лабораториялык сан дарылоо ыкмасындай көрүнүп калат. Аларды өз-өзүнчө карасаңыз, ошол эле сан өзүнүн чыныгы маанисин сактайт: кийинки экспериментти жүргүзүүгө негиз болот.

Метилен көгү жана Bartonella тууралуу бул серептин негизги милдети — ушул айырманы сактоо. Бир изилдөө тобунун эки лабораториялык изилдөөсү метилен көгүн өспөй турган абалдагы Bartonella henselae бактерияларына каршы сынаган. Экөө тең айнек жана пластик идиштерде күчтүү активдүүлүк катталганын билдирген. Эч бири адамдарда сыналган эмес.

Эмне үчүн изилдөөчүлөр стационардык фазаны сынашат

Антибиотиктердин көпчүлүк сыноолорунда өсүп жаткан клеткалар колдонулат. Мындай модель кыйыныраак жагдайды камтыбайт: бөлүнүүнү токтоткон жана өсүп жаткан тектеш клеткаларын өлтүргөн дарыларга туруштук берген клеткаларды.

Bartonella организмде, анын ичинде эритроциттердин жана эндотелий клеткаларынын ичинде сакталып калышы мүмкүн. Ошондуктан топ колдонууга уруксат берилген кайсы дарылар стационардык фазага өткөн B. henselae бактерияларын өлтүрө аларын изилдеген. Өсүп жаткан клеткаларга карата төмөн MIC — минималдуу ингибирлөөчү концентрация — стационардык фазадагы клеткаларды өлтүрүүнү алдын ала көрсөткөн эмес. Рифампиндин MIC көрсөткүчү абдан төмөн болгону менен, ал стационардык клеткаларды начар өлтүргөн; ал эми MIC көрсөткүчтөрү жогору болгон кошулмалар аларды жакшы өлтүргөн. Мындай макалаларды талдоонун жалпы ыкмасын издеген окурмандар аны метилен көгү боюнча изилдөөлөрдү окуу колдонмосунан таба алышат.

Алгачкы скрининг: Li жана кесиптештери, 2019

Antibiotics журналындагы 2019-жылкы стационардык фазаны скринингдөө изилдөөсүндө бир гана штамм — B. henselae JK53 — колдонулган. Ал 10 пайыз түйүлдүк музоо сывороткасы кошулган Schneider чөйрөсүндө, 37 C температурада жана 5 пайыз CO2 шартында өстүрүлгөн. Бир күндүк культуралар негизинен өз-өзүнчө жайгашкан, бөлүнүп жаткан клеткалардан турган. Беш күндүк культуралар стационардык фаза катары кабыл алынган; алардын тыгыздыгы болжол менен mL үчүн 10дун 8-даражасындагы колония түзүүчү бирдик болгон жана көзгө көрүнгөн агрегаттарды камтыган.

Сыноодо пропидий йодиди менен бирге SYBR Green I колдонулуп, тирүү жана изопропанол менен өлтүрүлгөн клеткалардын аралашмаларына карата калибрленген. Метилен көгүнүн түсү күчтүү болгондуктан, активдүү деп табылган заттар микроскопия менен, андан соң кандуу агардагы колонияларды саноо аркылуу текшерилген. Акыркысы кыйла катуу жыйынтык критерийи болгон.

50 микромолярдык концентрацияда сыналган, колдонууга уруксат берилген 1,581 дарынын ичинен метилен көгү планшеттик окугуч боюнча 16 пайыз, микроскопия боюнча 25 пайыз жашоого жөндөмдүү клетка калтырган. Даптомициндин көрсөткүчү 21 пайыз, бир нече азолдуку 22ден 27 пайызга чейин, гентамициндики 32 пайыз, эритромициндики 66 пайыз, ципрофлоксациндики 74 пайыз болгон. Пирвиний памоаты окугучта күчтүүрөөк көрүнгөн, бирок өзүнүн флуоресценциясынан улам аны микроскопия менен баалоо мүмкүн болгон эмес.

Өсүп жаткан B. henselae үчүн метилен көгүнүн MIC көрсөткүчү mL үчүн 0.08ден 0.16 микрограммга чейин болгон. Беш күндүк стационардык клеткаларга mL үчүн 5 микрограмм концентрацияда таасир эткенде, бир күндөн кийин аныктала турган колониялар калган эмес. Бул сыналган концентрацияларындагы даптомициндин жана пирвиний памоатынын жыйынтыгына дал келген. Убакытка жараша өлтүрүү динамикасын текшерген өзүнчө сыноодо mL үчүн 10 микрограмм колдонулган. Булар дозалар эмес, лабораториялык таасир этүү деңгээлдери; макалада да алар ушундай көрсөтүлгөн. Адамдын плазмасындагы эң жогорку концентрациянын mL үчүн болжол менен 3.9 микрограмм болгон мааниси макалада кошумча контекст катары гана келтирилген. Метилен көгүнүн фармакокинетикасы тууралуу сереп плазмадагы санды эмне үчүн ткандардагы сан катары түшүнүүгө болбой турганын түшүндүрөт.

Макалада эки чектөө ачык көрсөтүлгөн. Биоплёнка модели да, метилен көгүнүн айкалыштарын сыноо да болгон эмес. Беш күндүк агрегаттар стационардык суюк культурадагы клетка топтору болгон; алар биоплёнка боюнча текшерилген эксперимент эмес. Авторлор жаныбарларда, айкалыштар менен, биоплёнкаларда жана Bartonella тукумунун башка түрлөрүндө изилдөө жүргүзүүгө чакырышкан.

Айкалыштар жана биоплёнкадан алынган клеткалар: Zheng жана кесиптештери, 2020

BMC Microbiology журналындагы 2020-жылкы улантуу изилдөөсүндө ошол эле штамм жана чөйрө колдонулган, бирок алты күндүк стационардык культураларга өтүлүп, биринчи макалада жок эки нерсе кошулган: эки препараттуу айкалыштар жана биоплёнкадан алынган клеткалардын модели.

Жеке препараттар бирдей, mL үчүн 5 микрограмм концентрацияда 24 саат сыналганда, метилен көгү mL үчүн 3.2 көбөйтүлгөн 10дун 4-даражасындагы колония түзүүчү бирдик калтырган; контролдук үлгүдө бул көрсөткүч болжол менен 2.8 көбөйтүлгөн 10дун 10-даражасында болгон. Ошол эле учурда ципрофлоксацин, гентамицин жана нитрофурантоин азыраак колония калтырган. Бул 2019-жылкы жыйынтыктан айырмаланат: анда ошол эле номиналдык деңгээлде бир күндөн кийин аныктала турган колониялар калган эмес. Культуранын жашы, тыгыздыгы жана аны иштетүү жолдору айырмалангандыктан, өлтүрүү таасиринин багыты кайталанган, бирок көлөмү бирдей болгон эмес. Сыноодон сыноого мындай өзгөрүү лабораториялык активдүүлүк эмне үчүн стандарттуу коопсуздук жана өз ара аракеттенүү текшерүүлөрүндө клиникалык таасирден өзүнчө караларын түшүндүргөн себептердин бири.

Айкалыштарды скринингдөө — эң көп цитаталанган бөлүк. Ар бир компоненттин концентрациясы mL үчүн 5 микрограмм деп белгиленген. Азитромицин менен метилен көгүнүн жана рифампин менен метилен көгүнүн айкалыштарында 24 сааттан кийин стационардык фазада аныктала турган колониялар калган эмес. Ципрофлоксацин камтылган эки жуп да ушундай жыйынтык берген. Сыналган 25 жуптун ичинен ушул төртөө гана мындай натыйжага жеткен. Синергияга формалдуу талдоо жүргүзүлгөн эмес, ошондуктан туура аталыш — далилденген синергия эмес, ушул шарттарда активдүү болгон айкалыш.

Биоплёнка экспериментинде бузулган жаш биоплёнкадан алынган клеткалар сыналган; жетилген бүтүн биоплёнкага кирүү сыналган эмес. Культуралар беш күн өстүрүлүп, андан соң суюлтулуп, уячалуу планшеттерде дагы беш күн өстүрүлгөн. Биоплёнканын бар экени кристаллдык кызгылт көк боёк менен ырасталган, андан кийин дарыларды колдонордон мурун ал кырылып алынган. mL үчүн 5 микрограмм концентрациядагы метилен көгү жалгыз колдонулганда, 6-күнгө карата көрсөткүч 2.3 көбөйтүлгөн 10дун 2-даражасына чейин түшкөн. Бул жеке препараттардын ичиндеги эң жакшы жыйынтыктардын бири болгон, бирок нөлгө жеткен эмес. Метилен көгү камтылган эки айкалыш тең 6-күнгө карата нөлгө жеткен; ципрофлоксацин камтылган эки айкалыш да ушундай болгон.

Авторлор кунт коюп окуган адам байкай турган чектөөлөрдү белгилешкен: эски бүтүн биоплёнканын ордуна кырылып алынган жаш биоплёнка; ар бир дарынын өзүнө мүнөздүү реалдуу эң жогорку концентрациясынын ордуна бардык дарылар үчүн бир ыңгайлуу концентрация; азитромицин же рифампинге негизделген тандалган жуптар гана; бир штамм; жаныбарлар да, бейтаптар да жок. Кийинчерээк үч препарат менен иштөө сунушталган, бирок анын жыйынтыктары берилген эмес.

Изилдөө түзүлүштөрүн салыштыруу

Изилдөөнүн өзгөчөлүгү	Li 2019	Zheng 2020	Клиникалык далил катары эмне эсептелет
Организм	B. henselae JK53 гана	B. henselae JK53 гана	Бартонеллёз ырасталган бейтаптар, аныкталган жыйынтык критерийлери
Өсүп жаткан клеткалар үчүн метилен көгүнүн MIC көрсөткүчү	mL үчүн 0.08ден 0.16 микрограммга чейин	Ошол эле, 0.08ден 0.16га чейин	Колдонулбайт
Стационардык модель	5 күндүк культура, жеке препараттар	6 күндүк культура, жеке препараттар жана 25 жуп	Ткандардагы жана клетка ичиндеги активдүүлүк, фармакокинетика
Биоплёнка модели	Жок, агрегаттар биоплёнка эмес	Кырылып алынган 5 күндүк биоплёнкадан алынган клеткалар	Бүтүн биоплёнка же in vivo сакталып калуу жөнүндө маалыматтар
Метилен көгүнүн негизги жыйынтыгы	mL үчүн 5 микрограмм, 1-күнү колониялар жок	Ошол эле деңгээлде, 24 сааттан кийин 3.2 көбөйтүлгөн 10дун 4-даражасы; азитромицин же рифампин менен жуптарда нөл	Жооп берүү көрсөткүчү, кайталануу көрсөткүчү, жагымсыз окуялар
Синергияны формалдуу текшерүү	Жүргүзүлгөн эмес	Жүргүзүлгөн эмес	Дозаны аныктоо жана көзөмөлдөнгөн салыштыруу

Таблица бул макаланын негизги оюн кыскача берет. Акыркы тилкенин сол жагындагы маалыматтардын баары культуралар менен жүргүзүлгөн иштерге таандык. Эки макаланын биринде да акыркы тилкеге туура келе турган маалымат жок.

Bartonella — Borrelia эмес

Эки макалада тең Лайм оорусун пайда кылган спирохета Borrelia burgdorferi айтылат. Себеби боёкко негизделген сыноо ошол эле лабораторияда мурда Borreliaнын стационардык фазасы боюнча жүргүзүлгөн иштерден алынган; анда метилен көгү жана даптомицин да активдүү заттар катары аныкталган. Бул тарых пайдалуу контекст берет, бирок көп кездешкен жаңылыштыктын да булагы болуп саналат.

Bartonella тууралуу бул эки макаланын эч бир экспериментинде Borrelia менен Bartonella катарлаш сыналган эмес. Организмдер, чөйрөлөр жана концентрациялар айырмаланат. Ал эми метилен көгүнүн Bartonella мембранасына болжолдуу таасири кошумча изилдөөнү талап кылган божомол катары берилген. Жыйынтыктарды бир түрдөн башка түргө көчүрүүгө болбойт жана эки макаланын эч бири мителер тууралуу кеңири билдирүүлөрдү негиздебейт. Borrelia менен Bartonellaнын персистер клеткаларын салыштырган сереп дал ушул себептен эки багыттагы адабияттарды өзүнчө карайт.

Эмне үчүн культуралардын жыйынтыктары протоколго айланбайт

Bartonella үчүн метилен көгүн колдонуу протоколун издөөгө болгон кызыгуу түшүнүктүү. Бирок бул макалалар мындай сөз айкашын сатып алуу тизмеси катары эмес, эскертүү белгиси катары кабыл алуу керектигин көрсөтөт.

Биринчиден, уячадагы mL үчүн 5 микрограмм — дары жазып берүү эмес. Бул көрсөткүчкө сиңүү, таралуу, белоктор менен байланышуу, клетканын ичине өтүү же көтөрүмдүүлүк тууралуу маалымат кошулган эмес. Авторлор аны антибиотиктердин эң жогорку концентрацияларынын болжолдуу орточо мааниси катары тандашкан жана кийинки иштерде ар бир дарынын өзүнө мүнөздүү реалдуу деңгээлин колдонуу керектигин айтышкан.

Экинчиден, нөл колония — ошол себүү шарттарында колония табылган жок дегенди билдирет; бул ткандын стерилдүү экенин билдирбейт. Персистер клеткалар, клетка ичиндеги бактериялар жана үлгү алуунун чектөөлөрү агар пластинасынын чегинен тышкары калат.

Үчүнчүдөн, уячаны стерилдеген айкалыштар организмде натыйжа бербей же зыян келтириши мүмкүн. Азитромицин менен метилен көгү жана рифампин менен метилен көгү — лабораториялык таасир этүү деңгээлдеринде сыналган лабораториялык жуптар. Жаныбарлардагы фармакокинетика жана адамдардагы көзөмөлдөнгөн маалыматтар жок болсо, дозасы да, узактыгы да, пайда менен тобокелдиктин катышы да аныкталган эмес. Варианттарды карап жаткан ар бир адам аларды клиницист менен талкуулап, идиштеги маалыматтардан кандайдыр бир тыянак чыгаруунун алдында метилен көгүн колдонуу качан медициналык көзөмөлдү талап кыларын карап чыгышы керек.

Бул макалалар негиздеген тар тыянак төмөнкүдөй: метилен көгү in vitro шартында өспөй турган B. henselae JK53 бактерияларына каршы, анын ичинде эки препараттуу лабораториялык айкалыштарда, кайталануучу активдүүлүккө ээ. Айкалыштар жана биоплёнкадан алынган клеткалар боюнча эң күчтүү жыйынтыктар 2020-жылкы изилдөөдөн алынган. Калганынын баары, анын ичинде бул активдүүлүктүн адамдардагы бартонеллёз үчүн мааниси бар-жогу, сынала элек.