EMB агар жана MacConkey агар: чөйрөнү тандоо жана натыйжаларды чечмелөө

Студент бир эле суу үлгүсүн эки табакчага штрихтеп себет. Биринде жашыл металлдай жалтыраган кара колониялар пайда болот. Экинчисинде бүдөмүк гало менен ачык кызгылт колониялар өсөт. Эки табакчага тең бир эле түтүкчөдөн инокулят себилип, катар коюлуп инкубацияланган жана бир эле убакта окулган. Студент кайсы табакча туура экенин сурайт.

Экөө тең туура. Алар ар башка суроолорго жооп берет. Башаламандык бул эки чөйрөнү ичеги бактерияларын текшерүү үчүн бири-бирин толук алмаштыра алган чөйрөлөр катары кароодон келип чыгат. Алардын жалпы максаты — Грам-терс ичеги микроорганизмдерин тандап өстүрүү жана лактозаны ферменттегендерди ферменттебегендерден ажыратуу, бирок бул максатка ар башка химия жана ар башка визуалдык логика аркылуу жетишет. Ушул эки негизги принципти түшүнгөндөн кийин чөйрө тандоо жана колонияларды окуу кадимки ишке айланат.

Кыска жооп

EMB агарында эки боёк — eosin Y жана methylene blue — эки милдетти бир убакта аткарат: алар Грам-оң микроорганизмдердин өсүшүн басат жана көп кислота түзгөндөрдүн айланасында чөгүп, кара колонияларды пайда кылат; Escherichia coli үчүн классикалык көрүнүш — металлдай жашыл жалтырак. MacConkey агары бул милдеттерди бөлүп аткарат: өт туздары менен crystal violet Грам-оң микроорганизмдерди басат, лактоза ферментация үчүн субстрат берет, ал эми neutral red кислотанын пайда болушун кызгылт же кызыл колониялар аркылуу көрсөтөт. Эгер максат E. coliни алдын ала таанууга ыңгайлуу, ачык көрүнгөн демонстрация болсо, EMB пайдалуу. Эгер максат, айрыкча заң же заара менен иштөөдө, лактозаны ферменттегендерди кызгылт, ферменттебегендерди түссүз кылып так ажыратуу болсо, MacConkey адатта оңойураак окулат. Колониянын түсү гана менен микроорганизмдин түрүн аныктоого болбойт.

EMB: бир эле учурда тандап да, көрсөткүч болуп да иштеген боёктор

EMB концепциясында селекция жана көрсөткүч функциясы ошол эле молекулаларга жүктөлгөн. ASM eosin methylene blue агар протоколунда EMB селективдүү да, дифференциалдык да чөйрө катары сүрөттөлөт: боёктордун жуптары көптөгөн Грам-оң микроорганизмдерди басат, ал эми лактозанын ферментациясы боёктордун сиңишин жана чөгүшүн күчөтөт. Levine стандарттык формуласынын курамында пептон, лактоза, фосфат, eosin Y, methylene blue жана агар бар; бул курам Levine EMB агары боюнча FDA BAM ыкмасында көрсөтүлгөн. Эски EMB рецепттеринин айрымдарында лактозага кошумча сахароза да колдонулганын, ал эми Levine EMB курамында лактоза болуп, сахароза жок экенин эске алыңыз; ошондуктан лабораторияңызда кайсы формула колдонуларын каттап коюңуз.

EMBни окуу — боёктордун жүрүм-турумун окуу дегенди билдирет. Лактозанын күчтүү ферментациясы көп өлчөмдө кислота түзүп, боёктордун интенсивдүү чөгүшүнө алып келет. Натыйжада E. coli колонияларынын борбору кочкул көк-кара болуп, классикалык учурда чагылган жарыкта металлдай жашыл жалтырак көрүнөт. Enterobacter жана Klebsiella сыяктуу начарыраак ферментаторлор адатта мындай жалтырагы жок кызгылттан кызгылт көккө чейинки былжырлуу колониялар болуп өсөт. Salmonella, Shigella жана Proteus сыяктуу ферменттебегендер адатта түссүз же тунук колонияларды түзөт, анткени алар боёкторду чөктүрө тургандай тез кислота пайда кылбайт. Грам-оң микроорганизмдердин өсүшү көбүнчө басылат, бирок басуунун деңгээли штаммга жана продуктуга жараша өзгөрөт. Боёкторду даярдоонун толук химиясы, анын ичинде эмне үчүн methylene blue башынан эле катиондук боёк катары жүрөрү, боёк формулалары боюнча өзүнчө талкууга кирет, ал эми жалпы микроскопиялык контекст боёо ыкмаларынын атласында берилген. Бул макала табакчаны тандоого жана натыйжаларды окууга гана арналат.

Жогорудагы сүрөт иллюстрациялык мүнөздө. Ал күтүлүүчү визуалдык логиканы көрсөтөт: EMBде кара жалтырак колониялар, кызгылт былжырлуу типтер жана агыш типтер; MacConkeyде болсо кызгылт жана агыш типтер бири-бирине карама-каршы көрүнөт. Үлгүнү үйрөнүү үчүн колдонуңуз, андан кийин ар бир чечимди сүрөткө тартылган контролдор жана иш үстөлүңүздөгү так чөйрөнүн продукт нускамасы менен ырастагыла.

MacConkey: бөлүнгөн милдеттер, жөнөкөй визуалдык эреже

MacConkey концепциясында ар бир милдет өзүнчө компонентке берилет. ASM MacConkey агар протоколу да аны селективдүү жана дифференциалдык чөйрө катары сүрөттөйт, ал эми MacConkey агары боюнча FDA BAM ыкмасы анын негизги компоненттерин тизмектейт: пептондор, лактоза, өт туздары, туз, neutral red, crystal violet жана агар. Өт туздары менен crystal violet Грам-оң микроорганизмдерге каршы селекция жүргүзөт. Лактоза ферментация үчүн субстрат берет. Neutral red pH көрсөткүчү катары иштеп, кислота пайда болгон жерлерде кызгылттан кызылга чейин түс берет; күчтүү ферментаторлордун айланасында кээде өт чөкмөсү да пайда болот.

Окуу эрежеси атайын жөнөкөй: кызгылт түс лактозаны ферменттеген организмди, түссүз же агыш түс ферменттебеген организмди билдирет. E. coli кызгылттан кызылга чейин көрүнөт жана көбүнчө анын айланасында өт чөкмөсүнүн галосу болот. Klebsiella жана Enterobacter кызгылт болуп көрүнүп, капсулаларына байланыштуу көп учурда былжырлуу болот. Salmonella, Shigella, Proteus жана башка көптөгөн Грам-терс таякчалар түссүз көрүнөт. Окутуу лабораторияларында дагы бир пайдалуу өзгөчөлүк бар: өт туздары адатта Proteusтун жайылып өсүшүн азайтат, ошондуктан MacConkeyде селективдүү эмес чөйрөлөргө караганда обочолонгон колонияларды алуу оңой болот. Бирок басуу толук эмес, ал эми жайылууну көзөмөлдөө негизги максат болгон учурларда тузсуз альтернативалар бар.

Боёктордун мындай жүрүшүнүн молекулалык себеби заряд жана түзүлүш менен байланыштуу. Methylene blue — катиондук phenothiazine боёгу; анын түзүлүшү жана касиеттери кычкыл бактериялык беттерге тартылуусун түшүндүрөт. Ошол эле тартылуу EMBдеги кислоталуу аймактарда анын чөгүшүнө да катышат.

Кыскача салыштыруу

Таблицаны чечим кабыл алуу алгоритми катары окуңуз. Эгер тапшырма студенттерге ферментациянын күчүндөгү градацияны жана анын бир ачык көрүнгөн акыркы чекитин көрсөтүшү керек болсо, EMB муну жакшы көрсөтөт. Эгер тапшырма биохимиялык ырастоого чейин тез бинардык бөлүүнү талап кылса, MacConkey муну көрсөтөт.

Кайсы үлгү үчүн кайсы чөйрө

Фекалдык колиформаларды же E. coliни алдын ала таанууга багытталган суу боюнча көнүгүүлөрдө EMB жагымдуу вариант, анткени анын жалтырагы визуалдык жактан оңой айырмаланат. MacConkey да ичеги тектүү Грам-терс микроорганизмдер менен иштейт жана тарыхый жактан суу анализинде колдонулган, бирок бул чөйрөлөрдүн эч бири нормативдик суу анализинин ыкмасын алмаштырбайт. Тестке жараша мындай ыкма modified mTEC же MI сыяктуу башка чөйрөлөрдү талап кылышы мүмкүн. Лабораторияңыз аткарууга милдеттүү болгон ыкманы текшериңиз.

Заң үлгүлөрүндө ферментаторлорду ферменттебегендерден ажыратуу үчүн бул экөөнүн ичинен MacConkey көбүнчө пайдалуураак. Salmonella же Shigella үчүн практикалык заң анализинде адатта MacConkeyге гана таянбастан, XLD же Hektoen enteric сыяктуу көбүрөөк селективдүү ичеги чөйрөлөрү кошулат.

Клиникалык иш агымын окшоштурган заара боюнча окутууда MacConkeyди кан агары менен жупташтырыңыз. MacConkey Грам-терс микроорганизмдерди эрте ажыратууга жардам берет, ал эми кан агары MacConkey баскан организмдердин өсүшүнө мүмкүнчүлүк берет. Мындай жупташтыруу заара культураларын жүргүзүүнүн клиникалык сүрөттөмөлөрүндө стандарттуу ыкма болуп саналат.

Таза концепцияны үйрөтүү үчүн экөөнү тең колдонуңуз. EMB ферментациянын күчү маанилүү экенин жана бир молекула эки ролду аткара аларын көрсөтөт. MacConkey модулдук түзүлүштү үйрөтөт: селектор, субстрат жана көрсөткүч өзүнчө кармалат. Белгилүү E. coli, белгилүү Klebsiella aerogenes жана белгилүү Salmonella штаммдарын эки чөйрөгө тең жанаша штрихтеп сепкен студенттер бул эки логиканы кийин сейрек чаташтырат.

Ар бир семестрде кайталанган окуу каталары

Эң кеңири тараган ката — организмди түсү боюнча гана аныктоо. MacConkeyдеги кызгылт колония E. coli, Klebsiella, Enterobacter же башка ферментатор болушу мүмкүн. Түссүз колония Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas же башка ферменттебеген организм болушу мүмкүн. Түс — түрдүн аталышы эмес, Грам боюнча боёо, oxidase тести, биохимиялык панелдер же прибордук идентификация сыяктуу ырастоочу иштерди багыттаган скринингдик фенотип.

Экинчи ката — жалтырактын жоктугуна ашыкча маани берүү. Чыныгы E. coli колонияларынын айрымдары, өзгөчө обочолонгон колониялар, EMBде металлдай жалтыракты аз берет же такыр бербейт. Жалтырактын жоктугу E. coliни четтетпейт, ал эми жалтырактын болушу анын E. coli экенин далилдебейт. Жалтыракты алдын ала багыт берүүчү белги катары кабыл алыңыз.

Үчүнчү ката — ар башка убакытта жетилген табакчаларды салыштыруу. Лактозаны кеч ферменттеген организмдер узак инкубациядан кийин MacConkeyде кызгылт болуп калышы мүмкүн, бул ферментатор менен ферменттебегендин ортосундагы так айырманы бүдөмүктөтөт. Лаборатория көрсөткөн убакытта окуп, натыйжа менен кошо инкубация убактысын каттаңыз.

Төртүнчү ката — аралаш өсүштү бир организм катары кабыл алуу. Түссүз колониянын жанындагы кызгылт колония аралык бир фенотипти эмес, эки фенотипти көрсөтөт. Жакшы обочолонгон колонияларды тандап, ар бир морфотипти өзүнчө иштетиңиз. Былжырлуу текстура да ушундай тузак жаратат: Klebsiella да, Enterobacter да былжырлуу көрүнүшү мүмкүн, ошондуктан капсула жалгыз өзү аталышты аныктай албайт. Мурда Enterobacter aerogenes деп окутулган организм азыр Klebsiella aerogenes деп классификацияланат; эски схемалар менен жаңы белгилердин айырмаланып көрүнүшүнүн себеби ушул.

Контролдор жана жыйынтыктоочу эреже

Ар бир сессияда сүрөткө тартылган же жаңы контролдорду жүргүзүңүз: күчтүү ферментация реакциясы үчүн E. coli, классикалык жалтырагы жок былжырлуу ферментация үчүн Klebsiella aerogenes, түссүз ферменттебөө реакциясы үчүн Salmonella штаммы жана так сиз колдонуп жаткан продуктта Грам-оң микроорганизмдердин басылышын ырастоо үчүн Staphylococcus aureus. Штамм номерлерин жана кабыл алуу критерийлерин өндүрүүчүнүн нускамасына шайкеш келтириңиз, анткени селективдүүлүк өт туздарынын, crystal violetтин жана боёктордун курамына жараша өзгөрөт.

Иш үстөлүндө бир сүйлөмдү эстеңиз. EMB тандап да, сигнал берип да иштеген боёкторду колдонот; мунун артыкчылыгы — E. coli үчүн ачык көрүнгөн сигнал, кемчилиги — натыйжаны окуу көбүрөөк нюансты талап кылат. MacConkey тандоо менен сигнал берүүнү бөлүп коёт; мунун артыкчылыгы — кызгылт жана агыш колонияларды жөнөкөй ажыратуу, кемчилиги — ферментациянын деталдары азыраак көрүнөт. Суроого ылайык келген концепциядагы чөйрөнү тандаңыз, түстү тиешелүү тесттер менен ырастап, ошондо эки табакча бири-бири менен атаандашпай, бири-бирин толуктай баштайт.