Şîna metîlenê ya nû û rengkirina retîkulosîtan: rengekî cuda û rêbazeke şaneyên zindî

Xwendekarek ji bo jimartina retîkulosîtan amadekarî dike, şîna metîlenê siparîş dike, wê bi xwînê re tevlihev dike û hema tiştekî nabîne. Hevalekî wî yê polê şûşeyekê bi etiketa şîna metîlenê ya nû bi kar tîne û di beşeke şaneyên sor de fîlamentên şîn ên zelal dibîne. Xwendekarê yekem difikire ku şûşeya duyemîn nûtir e an jî konsantrasyona wê bilindtir e. Ne yek e û ne ya din e. Ew molekuleke cuda dihewîne.

Ev xeletiya têgehî li pişt piraniya tevliheviyên vê qadê ye. Nav wisa nîşan dide ku şîna metîlenê ya nû partiyeke baştirkirî ya şîna metîlenê ye. Kîmya tiştekî din dibêje. Şîna metîlenê ya nû N rengekî fenotîazînê yê cuda ye, bi jimareya xwe ya Colour Index, şêwaza xwe ya cîgirtina komên kîmyayî û rola xwe ya standardkirî di hematolojiyê de. Dema ev cûdahî zelal bibe, beşên mayî yên rêbazê jî hêsan tên famkirin: çima divê şane di dema rengkirinê de zindî bin, çi wek retîkulosît tê jimartin, cismên Heinz li ku derê cih digirin û kengê şîna kresîlê ya biriqdar dikeve nav mijarê.

Bersiva kurt

Şîna metîlenê ya nû N, reaktîfa hematolojiyê, bi gelemperî wek Basic Blue 24 di qeyda PubChem a şîna metîlenê ya nû de tê nasîn: C.I. 52030, CAS 1934-16-3, formula C18H22ClN3S. Şîna metîlenê ya asayî klorîda metîltiyonînyûmê, Basic Blue 9, di qeyda wê ya PubChem de ye: C.I. 52015, CAS 61-73-4, formula C16H18ClN3S. Ji aliyê avahiyê ve, şîna metîlenê ya nû du komên metîlê li ser xelekê û zincîrên alî yên etîlamîno hildigire, li cihê ku şîna metîlenê komên dîmetîlamîno hildigire. Ev cûdahî tevgera rengkirinê diguherîne. Pirtûkên hematolojiyê şîna metîlenê ya asayî wek rengekî nisbeten lawaz ji bo retîkulosîtan, û şîna metîlenê ya nû wek rengekî kûrtir û yekrengtir rave dikin; ev berawird di mijara ScienceDirect ya şîna metîlenê ya nû de hatiye kurtkirin.

Erê, şîna metîlenê ya nû rengekî supravîtal e. Rengkirina supravîtal tê wateya rengkirina şaneyên zindî piştî derxistina wan ji laş û berî sabîtkirinê, wek ku di nirxandina NCBI ya prensîbên rengkirina supravîtal de hatiye pênasekirin. Hem şîna metîlenê ya nû hem jî şîna kresîlê ya biriqdar di vê kategoriyê de ne, û standarda CLSI ya retîkulosîtan şîna metîlenê ya nû bi eşkereyî wek rengekî supravîtal dihewîne. Xwendekar carinan vê bi rengkirina Romanowsky ya belavokên sabîtkirî re di heman kategoriyê de datînin. Ev têgihiştin li vir nayê sepandin. Heke pêşî sabît bikin, rêbaz êdî naxebite.

Ji bo xwînerên ku navên nêzîk ên rengan dişopînin, şîna metîlê li hember şîna metîlenê tevliheviyeke cuda û mezintir a di navbera rengekî trîarîlmetanê yê anîyonî û malbata fenotîazînê ya katîyonî de vedikole. Nêrîna giştî ya rengkirina laboratuwarî xebata supravîtal di nav rêbazên belavokên sabîtkirî de bi cih dike, û rêbera morfolojiya şaneyên xwînê nîşan dide ku nirxandina retîkulosîtan di jimartina cudaker a berfirehtir de li ku derê cih digire.

Hişyariyeke derbarê katalogê de: forma xwêya duqat a klorîda çînkê ya şîna metîlenê ya nû jî bi CAS 6586-05-6 heye. Ji ber vê yekê, divê beşa rêbazan forma xwêyê û dabînkerê bi nav bike, ne tenê navê hevpar.

Rengkirina supravîtal bi rastî çi dike

Retîkulosît şaneyeke sor a ciwan e ku navika xwe winda kiriye lê RNAya rîbozomî ya mayî hildigire. Di preparateke şil a nerengkirî de ev RNA nayê dîtin. Rengê supravîtal dikeve şaneya zindî û wê RNAyê wek granûl û fîlamentên şîn dirûxîne an kom dike; ev madeya retîkulofîlamentî ye ku di bin îmersiyona rûnê de tê dîtin. Ji ber vê yekê, tor encama rengkirinê ye, ne îskeletekî ji berê ve çêkirî ye ku li benda rengê ye. Ji ber vê ye ku guherbarên protokolê — konsantrasyona rengê, tampon, rêjeya xwînê li rengê, germahî û dem — bi qasî navê rengê girîng in.

Encama pratîkî rêzeke hişk a gavên xebatê ye: pêşî xwîna ku lê dijberê qerimandinê hatiye zêdekirin bi rengê re tevlihev bikin, înkûbe bikin, paşê belavokan çêkin û bê sabîtkirin û bê rengkirina dijber lê binêrin. Sabîtkirina berî rengkirinê, an rengekî dijber ku fîlamentên kêmreng veşêre, agahiyên ku jimartin pê ve girêdayî ye ji holê radike.

Protokoleke pratîkî ya retîkulosîtan bi şîna metîlenê ya nû

Formulasyoneke gerdûnî ya yekane tune ye, ji ber vê yekê ya ku hatiye bikaranîn rapor bikin. Sê guhertoyên belgekirî berfirehiya vebijarkan nîşan didin.

Pêvajoya klasîk a cureya Brecher nêzîkî 0.5 percent şîna metîlenê ya nû bi oksalata potasyûmê re bi kar tîne; ew bi heman hecmê xwîna EDTA ya baş tevlihevkirî re tê tevlihevkirin û nêzîkî 10 heta 15 deqîqe di germahiya odeyê de tê înkûbekirin. Piştî tevlihevkirina nerm a ji nû ve, belavokên zirav ên qamaşekî tên amadekirin, di hewayê de tên ziwakirin û bê sabîtkirin di bin objektîfa rûnê ya 100x de tên nirxandin. Pêvajoya NCBI ji bo jimartina retîkulosîtan vê rêza xebatê û çarçoveya jimartinê ya ku pê re tê bikaranîn rave dike.

Guhertoya Dacie û Lewis 1.0 percent şîna metîlenê ya nû di çareseriya xwêyî ya sîtratê de bi kar tîne; ew bi 2 heta 4 hecmên xwînê re tê tevlihevkirin û berî çêkirina belavokan li 37 C ji bo 15 heta 20 deqîqe tê ragirtin. Sepandineke nû ya harmonîzekirinê ji bo pêvajoya CLSI H44 çareseriyeke kêmtir konsantre, 0.1 percent, di çareseriya xwêyî ya bi fosfatê tamponkirî de li pH 7.4 bi kar anî, bi înkûbekirina li 20 C ji bo 10 deqîqe û bê sabîtkirin, wek ku di lêkolîna harmonîzekirina NMB ya 2026 de hatiye raporkirin.

Qaîdeyên jimartinê di hemû guhertoyan de hevpar in. Şaneyekê wek retîkulosît bijmêrin dema ku herî kêm du granûlên şîn ên ji hev cuda an perçeyên fîlamentê dihewîne; ev yek bermahiyên tenê yên rengê ji jimartinê derdixe. Di xebata rojane de herî kêm 1,000 şaneyên sor bijmêrin û retîkulosîtan wek rêjeya sedî rapor bikin. Di rêjeyên sedî yên nizm de, îstatîstîk jimartina bêtir şaneyan pêwîst dike. Nirxandineke rêbaznasiya CLSI H44 destnîşan dike ku li nêzîkî 1 percent retîkulosîtan, nêzîkî 4,400 şane pêwîst in da ku guherîna jimartinê bigihîje 5 percent; ev di nirxandina CLSI H44 li De Gruyter de hatiye diyarkirin. Dîska okuler a Miller jimartinên mezin pratîk dike. Rengê fîltre bikin an nû amade bikin, ji ber ku rûxandî dikare wek têxistinên granûlî xuya bike.

Cismên Heinz di heman preparatê de

Heman belavoka supravîtal dikare cismên Heinz jî nîşan bide; ew komên hemoglobîna oksîdkirî û denaturekirî ne, ne RNAya mayî. Di preparatên şîna metîlenê ya nû de ew wek cismên gilover xuya dikin, pir caran tenê ne û nêzîkî membranê ne, û bi şînekî vekirîtir ji madeya retîkulofîlamentî tên rengkirin. Di sabîtkirin û rengkirina dijber de baş nayên parastin, ji ber vê yekê belavoka nesabîtkirî binirxînin. Protokoleke nû ku 20 microliters xwîna EDTA bi 20 microliters şîna metîlenê ya nû ya 1 percent û 15 deqîqe înkûbekirinê bi kar anî, şaneyên erênî ji bo cismên Heinz di nav 250 erîtrosîtan de jimart; ev di lêkolîna PMC ya ku wê pêvajoyê rapor dike de hatiye diyarkirin.

Du cûdahî rê li ber şîrovekirina xelet digirin. Yekem, binefşiya metîlê û binefşiya krîstalê cismên Heinz ji şîna metîlenê ya nû bihêztir reng dikin, wek ku di mijara ScienceDirect ya cismên Heinz de hatiye destnîşankirin. Şîna metîlenê ya nû vebijarka guncaw e dema ku retîkulosît û cismên Heinz bi hev re tên nirxandin, lê ne rengê herî bihêz ê taybet ji bo cismên Heinz e. Duyem, têxistinên HbH di hilgirtiya alfa talasemiyê de piştî rengkirina supravîtal gelek xalên hûr li seranserê şaneyê çêdikin, lê cismên Heinz ên klasîk kêmtir, mezintir û pir caran bi membranê ve girêdayî ne. Bermahiyên rengê tiştê sêyem ê wek wan xuya dike ye: ew li derveyî asta fokusê ya şaneyan in û ji qadekê heta ya din diguherin.

Şîna kresîlê ya biriqdar li hember şîna metîlenê ya nû

Her du reng ji bo retîkulosîtan rengên supravîtal in, lê standardkirin yek ji wan tercîh dike. Rêbaza retîkulosîtan a CLSI H44-A2, ku bi hevkariya Encûmena Navneteweyî ya Standardkirinê di Hematolojiyê de hatiye pêşxistin û li rûpela standarda CLSI H44 hatiye lîstekirin, rengkirina xwîna EDTA bi şîna metîlenê ya nû wek rêbaza destî ya berawirdkirinê diyar dike. Hînkirina klasîk a hematolojiyê di derbarê xuyangê de bi vê re li hev e: şîna metîlenê ya nû fîlamentan kûrtir û yekrengtir reng dike, lê şîna kresîlê ya biriqdar di navbera partî û nimûneyan de bêtir diguhere.

Ev statû hewceyê ravekirineke sînordar e. Rêbera ICSH ya nirxandina analîzkeran mîkroskopiya destî bi şîna metîlenê ya nû wek nêzîkatiyeke berawirdkirina referansê dipejirîne, lê wê subjektîf û nisbeten kêm-hûr dibîne; li cihê ku berdest bin, pêvajoyên referansê yên sîtometriya herikînê tên tercîhkirin. Berawirdkirineke 2022 ya 100 nimûneyan li gorî analîzkera xwe bi şîna kresîlê ya biriqdar ji şîna metîlenê ya nû deviyasyoneke sîstematîk a kêmtir dît; ev di berawirdkirina PMC ya rêbazên rengkirinê de hatiye raporkirin. Kurteya ku ji bo xwendekaran dikare were parastin ev e: şîna metîlenê ya nû wek pîvana destî ya standardkirî ya berawirdkirinê bi kar bînin, her rêbaza herêmî ya şîna kresîlê ya biriqdar li gorî wê an li gorî otomasyonê piştrast bikin, û di her du rewşan de li bendê bin ku mîkroskopiya destî belavbûneke berfirehtir a encaman bide. Edebiyata kevntir a standardkirinê jî Azure B ya paqijkirî wek alternatîfeke ji aliyê kîmyayî ve paqijtir pêşniyar dikir, ji ber ku partiyên rengan ên bazirganiyê diguheriyan; ev di lêkolîna Marshall ya li ser Azure B de hatiye diyarkirin û rave dike ka çima asta kalîteya reaktîfê hîn jî di nîqaşên rêbazan de cih digire.

Dûrketina ji xeletiyên asayî

Çar xeletî sedema piraniya preparatên neserkeftî ne. Siparîşkirina şîna metîlenê ya asayî li şûna şîna metîlenê ya nû N ji ber kîmyayê rengkirineke lawaz çêdike, ne ji ber teknîkê. Sabîtkirin an rengkirina dijber berî xwendinê nîşana supravîtal ji holê radike. Jimartina rûxandiyên rengê wek granûl encamê bilind dike; qaîdeya du granûlan û rengê fîltrekirî rê li ber vê digirin. Jimartina pir hindik şaneyan di rêjeyên nizm ên retîkulosîtan de jimareyeke ku hûr xuya dike lê bi sînorên baweriyê yên berfireh çêdike. Hemû xeletî heman nîşanê hildigirin: mîkroskopîst sûcê li mîkroskopê dixe ji bo tiştekî ku di gava reaktîfê de hatiye diyarkirin.