Rengkirina sade bi şîna metîlenê li hember rengkirina Gram: her rêbaz çi dikare îspat bike

Xwendekarek ji kultureke bi navê E. coli nimûneyeke tenik li ser lamê belav dike, wê ji bo yek deqeyê bi şîna metîlenê dinuxumîne, dişûşt û bi objektîfa bi rûn lê dinêre. Çûbikên şîn tevahiya qada dîtinê digirin. Di rapora laboratuwarê de tê nivîsandin: "Çûbikên Gram-negatîf wekî E. coli hatin nasîn." Çavdêrî rast e. Lê ew lam vê encamê piştrast nake.

Xeletî têgehî ye, ne teknîkî. Xwendekar bi rengkirineke sade re wekî ceribandineke cudaker tevgeriya. Rengkirina sade û rengkirina Gram bersiva pirsên cuda didin, ji ber ku li ser têgehên cuda yên rengkirinê ava bûne. Yek dipirse: çi şikl heye. Ya din dipirse: dema dîwarê şaneyê tê ceribandin, ew çawa tevdi gere. Heke hûn van her duyan tevlihev bikin, lameke ku rast hatiye rengkirin dibe bingeha raporeke bêbelge.

Ev berawird her du rêbazan ji hev cuda dike, nîşan dide ku her encam destûrê dide hûn çi îdia bikin, û bersiva her du pirsên ku xwendekar herî pir dipirsin dide: gelo şîna metîlenê dikare di rengkirina Gram de were bikaranîn, û rengkirina E. coli bi şîna metîlenê bi rastî çi nîşan dide.

Bersiva kurt

Rengkirina sade bi şîna metîlenê her şaneya ku dikare reng bigire bi heman rengê şîn reng dike; ji ber vê yekê morfolojî (çûbik, gog, spiral) û rêzbûnê (yekane, cot, zincîr) eşkere dike, lê derbarê kategoriya Gram de tiştek nîşan nade. Rengkirina Gram îyodê, gaveke rengrakirinê û rengekî dijber lê zêde dike; bi vî awayî bakteriyan li gorî ka pêçeyên wan rengê çawa digirin, dike du kom: Gram-pozîtîf (binefş) û Gram-negatîf (pembe an sor). Çûbikên şîn piştî şîna metîlenê tê wateya "şaneyên çûbikşekl hene." Çûbikên pembe piştî pêvajoya tam a Gram tê wateya "çûbikên Gram-negatîf hene." Daxuyaniya duyem bihêztir e, ji ber ku pêvajoyê ceribandineke din jî pêk aniye.

Ji bo koma berfirehtir a rêbazên bakteriyan ên bi yek rengî ku ev gotar jî tê de ye, li atlasa rengkirinê di mîkroskopiyê de binêrin.

Rengkirina sade: yek reng, yek pirs

Şîna metîlenê rengdêreke bazî (katyonî) ye. Îyona wê ya rengîn barekî pozîtîf hildigire û bi strukturên bi barê negatîf ên di şaneyê de, di nav de asîdên nukleîk û komên asîdî yên rûyê şaneyê, ve girê dibe; ji ber vê yekê şane li hember paşxaneyeke vekirî şîn xuya dibin. OpenStax vê prensîba rengkirina pozîtîf di beşa xwe ya rengkirinê de rave dike. Kat yona rengdêrê bi xwe îyona fenotîyazînê ya biçûk û teht e ku di çavkaniya kîmyaya şîna metîlenê de bi hûrgulî tê ravekirin; îyona klorîdê ya bi barê dijber rengkirinê pêk nayîne.

Protokoleke standard a hînkirinê bi mebest sade ye: nimûneyeke tenik li ser lamê belav bikin, bihêlin bi hewayê hişk bibe, bi germê sabît bikin, bi şîna metîlenê ya di avê de bi rêjeya nêzî 1% ji bo nêzî yek deqeyê binuxumînin, bi avê hêdî bişon, bi kaxezê bê kişandin hişk bikin, û bi objektîfa di rûn de lêkolîn bikin. Protokoleke hînkirinê ya LibreTexts tam vê forma 1% û yek-deqeyî dide, û di heman demê de destnîşan dike ku hin laboratuwar demê dirêjtir dikin. Ne sabîtkereke rengê heye, ne rengrakerek, ne jî rengdêreke duyem. Xala sereke ev nebûn e. Bi tenê yek rengdêrê û bê rakirina bijartî, her şaneya ku rengê girê dide di dawiyê de heman rengî digire.

Bi E. coli, qada ku tê hêvîkirin çûbikên şîn (basîl) e, yekane an bi cotan an jî di komên biçûk de. Şînahî ji rengdêrê tê. Şiklê çûbikî ji organîzmayê tê. Lê ev her du taybetmendî bi hev re organîzmayê nas nakin, ji ber ku gelek cure çûbik in û gelek çûbik di rengkirina sade de şîn dibin. ATCC di rêbernameya xwe ya kulturên mîkrobiolojiyê de bi eşkere destnîşan dike ku ev rêbaz bi morfolojiyê tenê sînordar e. Rapora rast wiha ye: "basîlên şîn hatin dîtin." Her tiştê ji şikl û rêzbûnê wêdetir hewceyê belgeyên zêdetir e.

Rengkirina Gram: çar reaktîf, yek ceribandina tevgerê

Rengkirina Gram rengkirineke cudaker e. Hemû şaneyan dixe heman pêvajoyê û dinêre ka kîjan şane rengdêra yekem digirin û kîjan wê ji dest didin. Protokolên rengkirina Gram ên Komeleya Amerîkî ya Mîkrobiolojiyê rêza standard a çar gavan diyar dikin: krîstal vîyolet (rengê bingehîn), îyoda Gram (sabîtkera rengê), alkohol an acetona bi alkoholê (rengraker), paşê safranîn (rengê dijber).

Modela standard a hînkirinê vê cudabûnê bi struktura pêçeya şaneyê rave dike. Şaneyên Gram-pozîtîf dîwarekî peptîdoglîkanê yê stûr hene ku di dema şûştina bi alkoholê de avê ji dest dide û kompleksa krîstal vîyolet-îyodê digire. Şaneyên Gram-negatîf qateke peptîdoglîkanê ya tenik û perdeyeke derveyî ya dewlemend bi lîpîdan hene ku rengraker wê têk dibe; bi vî awayî kompleks bi şûştinê derdikeve û şane paşê safranînê digirin. Nirxandina rengkirina Gram li NCBI Bookshelf vê ravekirina dîwarê şaneyê dide. Pispor lê zêde dikin ku fizîkokîmyaya tevahî ji stûrbûna dîwarê tenê aloztir e, lê ji bo şîrovekirina li ser maseya laboratuwarê ev rêgeza tevgerê derbasdar e: binefş tê wateya reng hatiye girtin, pembe tê wateya reng ji dest çûye û paşê bi rengê dijber hatiye rengkirin.

Panelên temsîlî. Nexşeyên şêwazkirî ji bo berawirdkirina rêbazan in, ne wêneyên mîkroskopî yên bi kamerayê ne. Reng ji bo hînkirina mentiqê hatine sadekirin: yek reng di rengkirina sade de, du reng piştî rengrakirina Gram.

Gelo şîna metîlenê dikare di rengkirina Gram de were bikaranîn

Ev pirs du wateyan dide, û her yek hewceyê bersiveke cuda ye.

Wateya yekem: gelo tenê carekê nixumandina bi şîna metîlenê dikare şûna tevahiya pêvajoya Gram bigire. Na. Bê îyod, rengraker û rengê dijber, gaveke cudaker tune ye; ji ber vê yekê tu kategoriya Gram nayê ceribandin. Qadeke şîn piştî bikaranîna şîna metîlenê bi tenê, encama rengkirineke sade ye, heta heke şûşe li kêleka reaktîfên Gram be jî. Wê wekî encama Gram tomar nekin.

Wateya duyem: gelo şîna metîlenê dikare di gava 4 de wekî rengê dijber şûna safranînê bigire. Ji aliyê erkê ve ew dikare şaneyên ku rengê wan hatiye rakirin reng bike, û rahênaneke pirtûka dersê pêşbînî dike ku piştî guhertineke wiha şaneyên Gram-pozîtîf binefş û şaneyên Gram-negatîf şîn bin. Ev mentiq rast e, ji ber ku şaneyên Gram-negatîf ên ku rengê wan bi rastî hatiye rakirin hema bêje bêreng in û dê rengdêreke katyonî ya din bigirin. Lê ev protokola standard nîne. Protokolên ASM safranînê diyar dikin, bi alternatîfên naskirî yên wekî fûksîna bazî di hin guhertoyan de, ne şîna metîlenê. Kêmasiyeke pratîkî jî heye: cihêkirina şînê ji binefşê ji cihêkirina pembeyê ji binefşê dijwartir e, bi taybetî ji bo destpêkeran û bi taybetî di bin ronahiya lawaz a çirayên mîkroskopê de. Ji bo karê dersê û her encama ku girîng e, rengê dijber ê ku protokola we nav dike, bi gelemperî safranîn, bi kar bînin, û rengê dijber ê şîna metîlenê wekî guhertoyeke ji bo nîşandanê binirxînin, ne wekî standardeke hevnirx.

Pirsa têkildar a ka şîna metîlenê li gorî vebijarkên din ên bi yek rengdêrê çawa ye, di berawirdkirina rengkirinên sade yên bakteriyan de tê vekolîn.

Rengkirina E. coli bi şîna metîlenê çi îspat dike û çi îspat nake

E. coli çûbikeke Gram-negatîf e, lê ev hevok rastiyên ji çend rêbazan li hev dicivîne: morfolojî ji mîkroskopiyê, reaksiyona Gram ji rengkirina Gram, nasname ji kulturê ligel ceribandinên biyokîmyayî an molekulî. Nimûneyeke li ser lamê bi şîna metîlenê tenê beşa yekem pêşkêş dike. Ew piştrast dike ku di nimûneya rengkirî de şaneyên çûbikşekl hene û nîşan dide ka ew çawa rêz bûne. Ew reaksiyona Gram piştrast nake, ji ber ku ceribandina rengrakirinê nehatiye kirin. Ew cureyê nas nake, ji ber ku çûbikên gelek cureyan di vê asta veqetandina dîtinê de wek hev xuya dibin.

Li vir rapor bi awayekî ku dikare were pêşbînîkirin şaş dibin. Nivîskar zanîna paşxaneyê ("divê ev kultur E. coli be, û E. coli Gram-negatîf e") dixe rêza çavdêriyê; bi vî awayî lam dixuye ku tiştê ku bi rastî hatibû texmînkirin piştrast dike. Rapora zelaltir astan ji hev cuda dike: "Rengkirina sade bi şîna metîlenê: basîlên şîn hatin dîtin; tenê morfolojî, tu kategoriya Gram nehat ceribandin." Paşê, heke rengkirina Gram bi kontrolan bi rastî hatibe kirin: "Rengkirina Gram: çûbikên pembe, bi Gram-negatîf re li hev tên." Nasnameya cureyê paşê ji pêvajoya naskirinê tê, ne ji rengê tenê.

Rêbernameyeke pratîkî ya şîrovekirinê

Li ser maseya laboratuwarê vê rêgeza biryardanê bi kar bînin. Heke hemû şane bi yek rengî ne û protokolê yek rengdêr bê rengraker bi kar anîbe, we rengkirineke sade kiriye. Şikl, texmîna mezinahiyê û rêzbûnê rapor bikin. Li wir bisekinin. Heke protokolê krîstal vîyolet, îyod, rengraker û rengê dijber bi kontrolên pozîtîf û negatîf ên naskirî bi kar anîbe, we rengkirina Gram kiriye. Reng û morfolojiyê bi hev re rapor bikin: kokên binefş di zincîran de, çûbikên pembe, û hwd.

Sê xeletî sedema piraniya tevliheviyê ne. Ya yekem, dîtina çûbikên şîn ji sînorê wê wêdetir şîrovekirin û wekî piştrastkirina E. coli hesibandin e. Ya duyem, tomarkirina lameke şîna metîlenê di defterê de li bin sernavê "rengkirina Gram" e, ku xwendevanên paşerojê dê wê şaş şîrove bikin. Ya sêyem, bê baldarî guhertina rengên dijber û paşê berawirdkirina rengan di navbera laboratuwaran de ye, wekî ku komên rengên wan yek bin. Çareseriya her xeletiyê heman e: navê rêbaza ku bi rastî hatiye pêkanîn binivîsin û tenê tiştê ku ew rêbaz diceribîne îdia bikin.

Rengkirina sade tam ji ber ku îdiayên wê kêm in, cihê xwe heq dike. Ew bilez e, li hember kêmasiyên biçûk hestiyar nîne, û dema pirs li ser morfolojiyê be têrê dike: gelo tiştek heye, û şiklê wê çi ye. Dema pirs li ser dabeşkirinê be, ceribandina cudaker bikin. Lama şîn ji we re dibêje ka şane çawa xuya dibin. Lama binefş an pembe ji we re dibêje ka dîwarên wan çawa tevdi gerin. Tu lam bi tenê cureyê ji we re diyar nake.