Rengkirina şaneyên gûçikê bi şîna metîlenê: çi divê were dîtin

Xwendekarek dilopeke suspansiyona şaneyên gûçikê dixe ser lamekê, di mîkroskopê re dinêre û hema tiştekî nabîne. Çend şikilên wek siyên rengpûç di qada ronahî de diherikin. Ew fokusê sererast dike, paşê ronahiyê zêde dike û di dawiyê de digihîje wê encamê ku lam vala ye. Lam ne vala ye. Şane li wir in. Ew hema şeffaf in, û şeffafî hemû ew pirsgirêk e ku ev rengker ji bo çareserkirina wê heye.

Berî ku protokol dest pê bike, hêja ye ku ev cudahiya di navbera hêvî û wêneyê de were ravekirin. Destpêker hêvî dikin ku mîkroskop hûrguliyan wisa eşkere bike wek ku zûmkirina kamerayekê nivîseke dûr eşkere dike. Mîkroskopa qada ronahî karekî tengtir dike: ew cudahiyên di hilmişîna ronahiyê de nîşan dide. Şaneyeke gûçikê ya nerengkirî hema tu ronahiyê hilmijîne, ji ber vê yekê hema tu cudahiyê çênake. Şîna metîlenê vê cudahiyê zêde dike. Ew di hundirê şaneyê de bi awayekî neyekسان girê dibe û avahiyê vediguherîne kontrastê. Gava xwendekar vê têgehê fam dikin, her gava paşîn wek encamekê tê fêmkirin, ne wek rêçeteyekê.

Zanyariyên paşxaneyê li ser ku rengkerên sade di laboratuwara dibistanê de çawa kontrastê zêde dikin, li vir alîkar in; dubarekirina sazkirina mîkroskopa qada ronahî berî rengkirinê jî pêşî li nîvê lamên têkçûyî digire. Kîmya li pişt rengê di destpêkekê li ser şîna metîlenê di mîkroskopiyê de tê ravekirin; ew behs dike ka çima ev rengkera taybet her tim li ser maseya laboratuwarê tê dîtin.

Protokola polê

Guhertoya preparata şil a li jêr ji bo polên giştî vebijarka bingehîn a hêsantir e. Ne pêdiviya wê bi agir heye, ne jî bi gaveke fîksasyonê. Guhertoya belavkirina fîkskirî ya ku di hin rêberên zanîngehê de tê bikaranîn, zuwakirina li hewayê û fîksasyoneke kurt bi germê jî lê zêde dike, wek di çalakîya belavkirina nimûneya gûçikê ya North Central Texas College ku bi rêya Biology LibreTexts hatiye weşandin de. Lê fîksasyona bi germê adeteke mîkrobiyolojiyê ye, ne pêdiviyek ji bo dîtina şaneyên epîtelyal.

Tiştên ku pêdivî ne: lam û lamelên paqij, swabên sterîl ên yekcarî (yên tercîhkirî) an diranpakkên nû yên da, şûşeyeke dilopker a şîna metîlenê ya di avê de bi rêjeya ji sedî 0.5 heta 1, ava distîlekirî an bêîyon, kaxeza hilmişîner, destik û mîkroskopeke pêkhateyî bi mezinkirina giştî ya 100x û 400x.

1. Devê bi ava sade bişon. Ev perçeyên xwarinê radike ku paşê bi tundî reng digirin û balê ji şaneyan dûr dixin.
2. Her xwendekar tenê ji gûçika xwe nimûneyê digire. Bi swabeke sterîl a nû hundirê gûçikê hêdî bisêwin. Bifetisînin, nexerişînin. Berî ku her cûre nerehetî an xwînrijandin çêbibe, rawestin.
3. Swabê li navenda lameke paqij bi awayekî nazik bigerînin. Qatek nazik girîngtirîn nîşaneya wê ye ku lam dê were xwendin. Komûneke stûr a spî piştî rengkirinê dibe girseyeke şîn a nexwendbar.
4. Dilopeke şîna metîlenê li ser nimûneya belavkirî zêde bikin. Ji bo 1 heta 3 deqeyan bihêlin. Di gelek protokolên zanîngehê de deqeyek têr dike; rêbera laboratuwara zanistê ya pola IX ya NCERT ji bo preparateke demkî nêzî 3 deqeyan bi kar tîne. Demeke dirêjtir ne çêtir e, û rengkirina zêde xeletiya herî gelemperî ya demê ye.
5. Li gorî protokola herêmî, bi ava distîlekirî hêdî bişon an bi kaxeza hilmişîner rengkera zêde bikişînin. Divê paşxane bibe şîna sivik, ne şîna pir tarî.
6. Lamelê bi goşeyekê daxînin da ku pêşî aliyekî wê bikeve têkilîyê, paşê bihêlin hêdî dakeve. Ev nahêle bilbilokên hewayê bikevin hundir.
7. Bi mezinkirina kêm dest pê bikin da ku şaneyan bibînin, fokus û navendkirinê piştrast bikin, paşê derbasî 100x û di dawiyê de 400x bibin. Di 400x de tenê fokusa hûr bi kar bînin.

Tîrbûna rengkerê hêjayî hevokeke rast û zelal e. Protokolên dibistanê bi gelemperî şîna metîlenê ya di avê de bi rêjeya nêzî ji sedî 1 bi kar tînin. Çareseriya stokê ya xurtir an mayîna dirêj paşxaneyê zûtir ji navokê tarî dike, û ev kontrasta ku ev xebat pê ve girêdayî ye berovajî dike.

Karîna ewle bi madeya gûçikê re

Nimûneyên gûçikê bi xwez û mîkroorganîzmayên asayî yên devê re tên, ji ber vê yekê bi her nimûneya nû ya belavkirî re wek madeyeke ku dibe sedema veguhastina enfeksiyonê kar bikin, her çend nimûnedêr hevalên polê yên tendurist bin. Rêberên ewlehiya biyolojîk ji bo laboratuwarên hînkirinê yên American Society for Microbiology prensîbên giştî diyar dikin: berî danişînê rîskê binirxînin, destikan li xwe bikin, li cihê ku rijandin gengaz e çavan biparêzin, piştî xebatê destan bişon, maseyên laboratuwarê dezenfekte bikin û tiştên yekcarî yên qirêjkirî bi rêya pejirandî ya bermahiyên biyolojîk bavêjin.

Çar rêzikên polê piraniya rîskê digirin nav xwe. Ji bo her swab û her lamê tenê nimûnedêrek, qet neyên parvekirin. Her kes tenê ji xwe nimûneyê bigire, qet ji yê li kêleka xwe negire. Swab û diranpakkên yekcarî rasterast diçin nav konteynera bermahiyê ya diyarkirî, qet venagerin ser maseya laboratuwarê. Şîna metîlenê bixwe çerm û cilan reng dike û çavan aciz dike, ji ber vê yekê destik û rêzikên asayî yên paqijiya kar bi rengkeran re pêwîst in. Vê xebatê bi çandina tiştekî ji nimûneya belavkirî berfireh nekin, û derveyî prosedûra ewlehiya dibistanê ji xwe re fîksasyona bi germê ya madeya nû ya mirovî neceribînin.

Çi divê were dîtin, û çima wisa xuya dike

Di 100x de li şaneyên fireh û da binêrin, bi rengê şîna sivik û xetên derve yên oval an pirgoşe yên nerêkûpêk. Ew bi tena serê xwe an di qatên li hev ketî yên şil de ne. Her şane bi gelemperî xalek şîntir û tarîtir dihewîne. Ew xal navok e. Li rêzkirina wan jî binêrin: şaneyên epîtelyal ên pûlî kerpîçikên nazik in, ne girover in; ji ber vê yekê qiraxên wan wek sırê çatkirî xuya dikin, ne wek balonên girover.

Di 400x de sê taybetmendî bi zelalî tên dîtin. Sînorê şaneyê wek xeteke nazik û tarîtir xuya dike ku şaneyê dorpêç dike. Sîtoplazma hundirê şaneyê bi şînek sivik û yekسان dagire. Navok tarîtir û kompaktir e, gelek caran oval e, bi gelemperî nêzî navendê ye lê ne her tim. Ji xwendekaran bixwazin ku her sêyan bi şikil û mezinkirinê re tomar bikin, ji ber ku pelê xebatê tam van dixwaze.

Xalek li ser rastbûnê li vir girîng e û gelek pelên xebatê wê şaş didin. Sînorê xuya bi herêma perdeya plazmayê re li hev tê, lê perde bixwe, ku duqateke lîpîdî ya bi stûrahiya nêzî 7 heta 10 nanometreyan e, gelek ji asta ku mîkroskopeke dibistanê dikare cuda bike biçûktir e. Ya ku xwendekar dibînin qiraxa optîkî ya şaneyê ye tevî rengkera ku li wir kom bûye. Heman hişyarî ji bo organelan jî derbasdar e. Mîtokondrî, retîkuluma endoplazmîk, laşên Golgi û rîbozom di vê preparatê de xuya nakin. Di şertên baş de mîkroskopeke ronahiyê ya asayî dikare heta nêzî 0.2 mîkrometreyan cuda bike, wek ku zanyariyên paşxaneyê yên biyolojiya şaneyê li ser amûrên mîkroskopiyê yên NCBI rave dikin, û piraniya avahiya ultra-hûr li bin an nêzî wê sînorê ye. Mezinkirina vala ya bilindtir wêneyê mezin dike bêyî ku hûrguliyan zêde bike.

Çima navok bi rengê herî tarî reng dibe? Şîna metîlenê rengkereke katyonî ye, di çareseriyê de barekî pozîtîf heye û bi madeya di şaneyê de ya bi barê negatîf re girê dibe, berî her tiştî bi asîdên nukleîk re. Kromatîn DNA di navokê de kom dike, ji ber vê yekê navok herî zêde rengkerê kom dike. Sîtoplazma RNA û molekulên din ên bi bar dihewîne, ji ber vê yekê ew jî reng dibe, lê bi awayekî belavtir û siviktir. Taybetmendiya sînordar a girîng ev e: şîna metîlenê ne rengkereke taybet a DNA ye. Xebata li ser belavbûna şîna metîlenê di wênegirtina navokê de girêdana katyonê bi herêmên dewlemend bi asîdên nukleîk re rave dike, û xebateke hejmarî ya kevintir li ser girêdana şîna metîlenê di preparatên şaneyî de dît ku piraniya rengkera girêdayî bi asîdên nukleîk re têkildar bû. Ji ber vê yekê navoka tarî bi sîtoplazmaya sivik re şêweyeke kontrastê ye, ne analîzeke molekulî.

Xeletiyên ku xwendekar dê bikin, û çawa wan fêm bikin

Hema her lama têkçûyî dikeve yek ji pênc şêweyan. Xwendekaran hîn bikin ku pirsgirêka lamê nas bikin, ne ku wê korane dubare bikin.

Rengkirina zêde şaneyan û paşxaneyê bi yekrengî tarî dike, da ku navok di qadê de winda dibe. Bi demeke rengkirinê ya kurttir an şûştineke baştir wê sererast bikin. Rengkirina kêm şikilên wek siyan dihêle ku gava ronahî zêde dibe winda dibin; demê bi gavên sî çirkeyî zêde bikin. Nimûneyên stûr ên belavkirî girseyên tîr û li hev ketî çêdikin ku tu xeta derve tê de nayê şopandin; sererastkirin mekanîkî ye, cara bê naziktir belav bikin, ji ber ku tu şûştin girseyeke şaneyan rizgar nake. Bilbilokên hewayê wek bazinên bêkêmasî bi qiraxên tûj û tarî xuya dikin û bala destpêkeran kişandine xwe, çimkî ew wan bi şaşî wek avahiyan dibînin; lamelê dîsa hêdî û bi goşeyekê danînin. Xalên tarî yên pir biçûk ên li ser an li dora şaneyan belavbûyî bi gelemperî bakteriyên asayî yên devê ne, wek ku protokolên dibistanê yên mîna prosedûra şaneyên gûçikê ya Ingrid Science diyar dikin. Ew piştrast dikin ku zindî di devê de dijîn, û dibe ku ev di bîra xwendekaran de bimîne; lê di vê xebatê de nikarin li gorî cureyê bên naskirin û divê wek parçeyên şaneyê neyên xêzkirin. Bermahiyên xwarinê û têlên mukusê bi awayekî nerêkûpêk û tund reng dibin; şûştina pêşîn ji bo kêmkirina wan e.

Tiştên ku ev xebat nikare bike

Ev çavdêriyeke perwerdehiyê ye, ne teste teşxîsê ye. Tu tişt di xuyabûna şaneyan a rengkirina polê de nikare enfeksiyon, penceşêr an tu nexweşiyê teşxîs bike, û divê ev gotar wek pêşniyara berevajî wê neyê xwendin. Preparat di du astên mezinkirinê de şikil, sînor, sîtoplazma û navokê nîşan dide. Ew avahiya ultra-hûr a perdeyê, hûrguliyên organelan an nasnameya molekulî nîşan nade. Diyarkirina eşkere ya vê sînorê hem zanistê hem jî xwendekaran diparêze: encameke baş nexşeyeke bi etîketên rast e ku mezinkirin û rengker lê hatine tomarkirin, ne encamek li ser tenduristiyê.

Pelê xebatê yê xwendekaran û wêneyên mîkroskopî yên etîketkirî

Du materyalên projeyê yên vê rûpelê wêneya mîkroskopî ya etîketkirî ya li jor û pelê xebatê yê li jêr in. Ji bo her xwendekarekê pelekî xebatê çap bikin an wê li ser ekranê nîşan bidin û ji xwendekaran bixwazin ku qutiyan di defterên xwe de kopî bikin.

Çawaniya bikaranîna wê di danişîneke 45 deqeyî de: deh deqe ji bo agahdariya ewlehiyê û nimûnegirtinê, deh deqe ji bo rengkirin û amadekirina preparatê, panzdeh deqe ji bo çavdêrî û xêzkirinê di her du astên mezinkirinê de, deh deqe ji bo lîsteya kontrolê û berawirdkirina bi wêneya mîkroskopî ya etîketkirî re. Xalên lîsteya kontrolê bi zanebûn mekanîkî ne. Nimûneya nazik a belavkirî, dema rast a rengkirinê, navoka ji sîtoplazmayê tarîtir, mezinkirina tomarkirî. Xwendekarek ku dikare her çar xalên kontrolê nîşan bike, têgeha ku armanca vê dersê ye fam kiriye: mîkroskop cudahiyan nîşan didin, û rengker wan cudahiyên ku hêjayî nîşandanê ne çêdikin.