Çima şîna metîlenê di rengkirina asîd-berxwedêr de wekî renga beramber tê bikaranîn

Teknîsyenek piştî temamkirina rêza rengkirinê preparateke balxemê ya belavkirî dinirxîne. Şivikên sor li ser qadeke şîn diyar dibin, û rapor bi gotina ku basîlên asîd-berxwedêr hatine dîtin tê şandin. Roja din slaydeke din qadeke yekreng a şîn nîşan dide ku tu şivikên sor lê tune ne, û ew wekî ji bo tuberkulozê neyînî tê raporkirin. Yek ji van raporan tiştekî ji ya ku slayd piştgirî lê dike zêdetir îdia dike, û ew ne ya yekem e.

Tevlihevî di têgihîştinê de ye. Teknîsyen bi rengdêra şîn re wekî beşek ji kîmyaya tesbîtkirinê tevgeriya, mîna ku şîna metîlenê alîkariya dîtina mîkobakteriyan kiribe. Lê wê ev yek nekir. Dema şîna metîlenê digihîje slaydê, ceribandin jixwe qediya ye. Rengdêr tenê paşzemînê reng dike da ku encam were xwendin. Ev gotar armanca şîna metîlenê di rengkirina asîd-berxwedêr de, sedema şînbûna wê li şûna rengekî din, û encamên ku hûn dikarin ji sor li ser şîn derxin, rave dike.

Bersiva kurt

Rengkirina asîd-berxwedêr ceribandineke cudaker e ku li ser sê ramanan hatiye avakirin. Karbol fuksîn, renga sereke, bi zorê tê xistin nav her şaneyê, tevî mîkobakteriyên bi qalikê mûmî. Asîd-alkol, madeya rengrakirinê, rengdêra sor ji şaneyên asayî derdixe, lê nikare wê ji şaneyên asîd-berxwedêr derxe. Piştre şîna metîlenê, renga beramber, her tiştê ku madeya rengrakirinê ji rengê vala kiriye reng dike; bi vî awayî şaneyên ne-asîd-berxwedêr, şaneyên mêvandar û bermahî şîn xuya dikin, lê basîlên asîd-berxwedêr sor dimînin. Renga beramber kontrastê peyda dike. Ew di kîmyaya ku şaneyekê asîd-berxwedêr dike de tu rolê nalîze.

Her gav çi dike

Diyagrama li jêr dabeşkirina karan nîşan dide. Wê ji çepê ber bi rastê ve wekî pêvajoyekê bixwînin, û şerîta binê wê wekî bîranînekê bixwînin ku her malbata rengkirinê pirseke cuda dipirse.

Têketin gava yekem e. Mîkobakterî li hember rengdêrên avî yên asayî berxwedêr in, ji ber ku qalikê wan bi awayekî neasayî hîdrofob e; ji ber vê yekê protokol têketinê bi zorê pêk tîne. Di rêbaza Ziehl-Neelsen de, germkirina ku buhar çêdike karbol fuksîna fenolhilgir di dîwarê mûmî re derbas dike. Di rêbaza sar a Kinyoun de, formûlasyoneke pir xurtir a renga sereke li şûna germê tê bikaranîn, û hin guhertoyên guhertî yên bê germ madeyên çalak ên rûyê jî lê zêde dikin. Protokolên rengkirina asîd-berxwedêr ên Komeleya Amerîkî ya Mîkrobiyolojiyê her du formûlasyonan li kêleka hev belge dikin, û cudahiya çavdêriyê pir berbiçav e: nêzîkî 0.3 g fuksîna bazî ji bo her 100 mL di rêbaza germkirî de, li hember nêzîkî 4 g di rêbaza sar de.

Cudakirin gava duyem e. Asîd-alkol, ku bi gelemperî ji 3 mL asîda hîdroklorîk a çavdêr di 97 mL etanola ji sed 95 de pêk tê, rengdêra sor ji her şaneyê ku dîwarê wê berxwedaneke taybet peyda nake dişo û derdixe. Şaneyên xwedî qalikê lîpîdî yê mîkobakteriyî yê saxlem rengdêrê digirin. Tevahiya rêbazê li ser vê gavê radiweste, û ew gava herî hestiyar li hember şêwaza pêkanînê ye, wekî li jêr tê nîqaşkirin.

Kontrast gava dawî ye. Niha li ser slaydê şaneyên sor ên asîd-berxwedêr li ser paşzemîneke hema bê reng a şaneyên ji rengê valakirî hene. Şîna metîlenê ya ji sed 0.3 w/v dîtinbarbûnê ji nû ve dide wê paşzemînê, bi rengekî ku bi qasî herî zêde ji sor dûr e. Rengkirina beramber kurt e, bi gelemperî di rêbaza germkirî de 20 heta 30 çirke û di hin guhertoyên rêbaza sar de heta çend deqeyan; dem bi protokolê ve girêdayî ye, ne bi taybetiyeke rengdêrê bixwe.

Çima ev rengdêr, û çima şîn

Şîna metîlenê rengdêreke bazî ya katyonî ye; yanî îyona wê ya rengîn barekî erênî hilgire û bi rûyên bi barê neyînî yên bakteriyên ji rengê valakirî, şaneyên mêvandar û bermahiyan ve girê dibe. Mîkrobiyolojiya OpenStax vê mantîqa barê elektrîkî wekî prensîba giştî ya rengdêrên bazî rave dike. Lê şîna metîlenê li vir ji aliyê kîmyayî ve ne yekta ye. Morê krîstalî û safranîn jî rengdêrên bazî ne. Hilbijartin optîkî ye, ne kîmyayî.

Şivikên sor hewceyî paşzemîneke bi rengekî dijber in, û şîn di mîkroskopiya qada ronî de bi awayê herî bikêr li hember sor radiweste. Safranîn dê renga beramber a nebaş be, ji ber ku rengê wê yê dawî yê pembe-sor pir nêzîkî karbol fuksîna mayî ye û wê cudahiya ku pêvajo afirandiye ji holê radike. Morê krîstalî dê paşzemîneke mora tarî çêbike ku ji bo kişandina balê bi basîlên sor ên zirav re pêşbaziyê bike. Delîla herî xurt ku karê wê kontrast e, ne kîmya, guherandina rengdêrê ye: rengên beramber ên kesk, wekî keskê malakîtê û keskê biriqok, di hin protokolên veterînerî û guhertî de tên bikaranîn û ceribandin dîsa dixebite, ji ber ku her rengekî bi zelalî cuda heman karî dike.

Ji vê yekê du encamên pratîkî derdikevin. Ya yekem, reçeteya standard tu sererastkirina pH destnîşan nake; vê çareseriya sade ya avî ya ji sed 0.3 bi formûlasyonên alkalîn, wekî şîna metîlenê ya Loeffler, tevlihev nekin, ji ber ku ew bi têgeheke din a rengkirinê ve girêdayî ne. Ya duyem, bikaranîna zêde zirar dide. Wêjeya hîstolojiyê bi taybetî hişyar dike ku paşzemîneke şîn a zêde tîr dikare basîlên kêm veşêre; ji ber vê yekê, hiştina slaydê di nav rengdêrê de ji dema ku protokol destûr dide dirêjtir, xwendinbarbûnê bê tu qazancê kêm dike.

Kîmyaya dîwarê ku ceribandinê gengaz dike

Sedema ku asîd-alkol dikare cudakirinê bike di qalikê mîkobakteriyî de ye. Navika avahiyî ya wê kompleksa mîkolîl-arabînogalaktan-peptîdoglîkan e: peptîdoglîkan bi arabînogalaktan ve girêdayî ye, û serên derveyî yên arabînogalaktanê asîdên mîkolîk ên bi zincîrên pir dirêj hilgirin; ev yek mîkomembraneke derveyî ya dewlemend bi lîpîdan û bi derbasbariya neasayî kêm çêdike. Lêkolîna pêdaçûnê li ser membrana derveyî ya mîkobakteriyan vê avahiyê bi hûrgulî rave dike. Ev asteng di her du aliyan de dixebite. Ew li hember têketina rengdêrê berxwedan dike, ji ber vê yekê têketin hewceyî germê an rengdêreke sereke ya bihêzkirî ye; herwiha li hember derxistina rengdêrê berxwedan dike, ji ber vê yekê asîd-alkol nikare karbol fuksînê piştî têketina wê derxe. Bakteriyên asayî ev qalik tune ne û rengdêrê winda dikin. Ji ber vê yekê, berxwedêriya li hember asîdê herî baş wekî diyardeyeke astenga lîpîdî tê fêmkirin, ne wekî girêdana kîmyayî ya fuksînê bi asîda mîkolîk ve.

Ev kîmya herwiha girêkeke hevpar rave dike: mîkobakterî bi rêbaza Gram bi awayekî nebaş û nepêşbînbar reng dibin, carinan wekî formên kêmreng ên morîşekl an wekî sûretên bê reng xuya dikin. Dîwarê wan ê hîdrofob têketina morê krîstalî sînordar dike. Rengkirina asîd-berxwedêr ne rengkirineke Gram a guhertî ye. Ew prensîbeke cudaker a din e ku li dora taybetiyeke din a dîwarê hatiye avakirin, wekî berawirdkirina rengkirina sade û rengkirina Gram ji bo her du rêbazên din nîşan dide.

Sê rêbaz, sê pirs

Ji bo malbata berfirehtir a rêbazên bakteriyî yên bi yek rengdêrê, li atlasa rengkirina mîkroskopî binêrin.

Sor li hember şîn çi nikare îspat bike

Şivikên sor tê wê wateyê ku zîndeweran di dema bikaranîna asîd-alkolê de karbol fuksîn ragirtiye. Ev dîtin bi Mycobacterium tuberculosis re li hev tê, lê rêberiya CDC ya teşxîsa tuberkulozê bi eşkereyî destnîşan dike ku mîkobakteriyên din jî asîd-berxwedêr in; ji ber vê yekê nasîna cureyê hewceyî çandina mîkrobî û ceribandina asîda nukleîk e, ne reng.

Çewtiyên pêkanînê bi piranî li dora her du şûştinan kom dibin. Rengrakirina kêm materyala paşzemînê sor dihêle û rê li xwendinên erênî yên şaş vedike. Rengrakirina zêde renga sereke ya bi qelsî ragirtî derdixe û beşdarî encamên neyînî yên şaş dibe. Renga beramber a zêde basîlên kêm di şînê de vedişêre. Preparatên belavkirî yên stûr, reaktîvên rûniştî û ava şûştinê ya qirêjkirî jî nîşaneyên çêkirî yên xwe zêde dikin.

Hestiyarî bi hejmara zîndeweran ve sînordar e, pêkanîn çiqas bêkêmasî be jî. Mîkroskopiya kevneşopî ya preparatên belavkirî hewceyî nêzîkî 5,000 heta 10,000 basîlan di her mîlîlîtreya balxemê de ye, û pêdaçûnên kevintir ên delîlên CDC hestiyariya vê rêbazê di nav rewşên tuberkuloza pişikê yên bi çandinê piştrastkirî de nêzîkî ji sed 45 heta 80 destnîşan kiribûn. Ji ber vê yekê preparateke neyînî qet tuberkulozê ji ihtîmalan dernaxe. Rêberiya niha ya CDC çandinê li kêleka her preparata belavkirî dihêle û, dema tuberkuloza pişikê tê fikirîn û encam dê rêvebirina rewşa nexweş biguherîne, ceribandina pirrkirina asîda nukleîk li ser herî kêm yek nimûneya rêyên nefesê pêşniyar dike.

Karê pratîkî girêdayî protokolên destûrdayî ye

Ravekirinên perwerdehiyê, tevî vê gotarê, destûrê nadin karê klînîkî. Ji bo xebata li laboratuwarê, pêvajoya standard a xebatê ya laboratuwarê ya piştrastkirî û lihevhatî bi belgeyên niha yên CDC, APHL an CLSI bişopînin; çavkaniya CDC ya rengkirina asîd-berxwedêr ku di arşîva wê ya Stacks de tê parastin nîşan dide ku pêvajoyên wisa reaktîv û awayê xwendina encaman çawa destnîşan dikin. Xebat bi nimûneyên tuberkulozê hewceyî vegirtina ewlehiyê ye: preparatên belavkirî di kabîneke ewlehiya biyolojîk de tên amadekirin, ji ber ku amadekirin aerosol û rijandinên dilopan çêdike; rêberiya ewlehiya laboratuwarê ya CDC diyar dike ku heta preparatên bi germê sabîtkirî jî dikarin basîlên tuberkulozê yên zindî dihewînin û divê hîn jî wekî qirêjkirî bên destgirtin. Tomara Pirtûkxaneya Wêneyên Tenduristiya Gel a CDC ji bo preparateke bi karbol fuksîn û şîna metîlenê rengkirî ku ji bo M. leprae hatiye vekolîn bîranîneke bikêr a qada bikaranîna rêbazê li derveyî tuberkulozê ye: heman kontrasta sor li ser şîn li her derê ku zîndewerên asîd-berxwedêr tên lêgerîn kar dike, û xwendineke neyînî ya baldar bixwe encamek e ku hêjayî tomarkirinê ye.

Xwendina slayda temamkirî

Renga beramber di dema lêgerîna mîkroskopî de girîngiya xwe nîşan dide. Mîkroskopîstek ku bi mezinkirina kêm lêgerînê dike, pêşî paşzemîna şîn bi kar tîne da ku kalîteya preparata belavkirî binirxîne: belavbûna wekhev a şaneyan, şaneyên mêvandar ên saxlem ji bo fokusê, û nebûna rûniştinên giran. Piştre formên sor ên gumanbar balê dikêşin, bi taybetî ji ber ku tu tiştê din li ser slaydê sor nîne. Piştrastkirin di bin îmersiyona bi rûn de pêk tê; li wir basîlên rastîn şivikên zirav ên têne hêvîkirin, carinan hinekî xwar an morîşekl, nîşan didin, ne bermahiyên yekreng ên rengdêrê.

Rengkirina paşzemînê herwiha peyvên raporê diyar dike. Slaydeke ku basîlên sor lê hene wekî «basîlên asîd-berxwedêr hatin dîtin» tê raporkirin, gelek caran bi pilekirineke nîv-çendî li gorî pîvana laboratuwarê. Slaydeke ku tu zîndewerên sor lê tune ne wekî «tu basîlên asîd-berxwedêr nehatin dîtin» tê raporkirin, qet ne wekî «ji bo tuberkulozê neyînî». Ev cudahî girîng e, ji ber ku qada şîn îspat dike ku rengkirin xebitiye, şaneyan renga beramber girtine û şertên optîkî têrker bûne, lê derbarê zîndewerên li bin sînorê tesbîtkirinê tu tiştî nabêje. Qadeke şîn a bê formên sor encameke derbasdar derbarê slaydê ye, ne biryarek derbarê nexweş.

Dabeşkirina karan bi bîr bînin û rapor bi xwe zelal dibin. Karbol fuksîn formên gumanbar tesbît dike. Asîd-alkol ceribandinê dimeşîne. Şîna metîlenê tenê bersivê xwendinbar dike: sor li hember asîdê rengdêrê ragirt, şîn wê winda kir. Her tiştê din, cure, hejmara zîndeweran û wateya klînîkî, ji xebata li derveyî slaydê tê.