Ravekirina rengkerên şîna metîlenê ya alkalîn û polîkrom a Loeffler

Sê şûşe dikarin li ser maseya rengkirinê li kêleka hev bin, û li ser etîketa her yekê cureyek ji şîna metîlenê hatibe nivîsandin. Li ser yekê şîna metîlenê ya avî 1% nivîsandiye. Li ser yekê şîna metîlenê ya alkalîn a Loeffler nivîsandiye. Li ser yekê jî şîna metîlenê ya polîkrom nivîsandiye. Xebatkarekî mijûl destê xwe dirêjî ya herî nêzîk dike. Paşê preparata belavkirî an pir sivik, an bi şînê pir yekreng, an jî bi tonên mor ên neçaverêkirî tê rengkirin, û sûcê encamê li nimûneyê tê danîn.

Ev pirsgirêkeke formulasyonê ye, ne pirsgirêkeke nimûneyê. Di van sê çareseriyan de rengkerên têkildar hene, lê her yek li ser têgeheke cuda ya rengkirinê hatiye avakirin. Yek rengkereke katyonî ya sade ye ku pH-ya wê nêzî bêalî ye. Yek heman rengker e ku bi alkalî xurtir hatiye kirin. Yek jî êdî ne rengkereke tenê ye, lê tevliheviyeke bi qest bi oksîdasyonê hatiye çêkirin e. Ya şaş bi kar bînin û prensîba rengkirinê di bin destên we de diguhere.

Bersiva kurt

Şîna metîlenê ya sade ya avî bingeha berawirdê ye: nêzî 1% rengker di avê de, rengkereke katyonî ya sade ji bo morfolojiya bakteriyan û mîkroskopiya giştî. Di şîna metîlenê ya alkalîn a Loeffler de, hejmareke biçûk û pîvandî ya alkalîya sivikkirî li çareseriyeke stok a alkolî ku di avê de hatiye sivikkirin tê zêdekirin. Ev pH bilind dike û girêdana rengkera katyonî bi pêkhateyên asîdî yên bakteriyan xurtir dike. Şîna metîlenê ya polîkrom şîna metîlenê ye ku bi qest, bi oksîdasyonê di alkalî de, hatiye gihandin. Ji ber vê yekê, di şûşeyê de ligel şîna metîlenê ya mayî, tevliheviyek ji homologên demetîlkirî (azure A, azure B, azure C), thionin û mora metîlenê heye, û ev tevlihevî pêkhateyên cuda bi tonên cuda reng dike.

Heke tenê hevokek di bîra we de bimîne: alkalînkirin xurtiya rengkirinê diguherîne, lê polîkromkirin rengên rengkirinê diguherîne.

Şîna metîlenê ya avî ya asayî: xala berawirdê

Formulasyona herî sade şîna metîlenê ya di avê de helandî ye, bi gelemperî bi rêjeya 1% w/v, bê alkalî û bê oksîdasyon. Cureya kîmyayî ya rengîn katyona methylthioninium bi îyona dijber a klorîdê ye; rengkereke phenothiazine ya biçûk û pehn e ku di tomara şîna metîlenê ya PubChem de wek methylthioninium chloride tê vegotin. Wek katyon, ew bi zincîrên fosfatê yên asîdên nukleîk û komên asîdî yên li ser dîwarên şaneyên bakteriyan ve girê dide, û şaneyan li hember paşxaneyeke ron şîn dike.

Xala wê ya baş ew e ku encama wê tê pêşbînîkirin. Navok û bakterî şîn xuya dibin. Kontrast sînordar e. Organîzmayên ku bi zor xuya dibin dikarin sivik reng bibin; ev tam ew sînor e ku Loeffler xwestibû çareser bike. Ji bo malbata firehtir a rengkerên sade yên bakteriyan ku ev çareserî jê ye, li nêrîneke giştî ya rengkirina sade ya bakteriyan binêrin. Li vir jî baldarî li nasnameya madeyê girîng e: şîna metîlê bi tevahî molekuleke cuda ye, wek ku şîna metîlê li hember şîna metîlenê rave dike. Ji ber vê yekê, lêgerîna di katalogê de tenê li gor navê rengê dikare koma şaş a rengkerê bîne.

Şîna metîlenê ya alkalîn a Loeffler: heman rengker, bi bandoreke xurtir

Formulasyona klasîk a Loeffler çareseriyeke stok a alkolî ya şîna metîlenê bi alkalîya sivikkirî ya di avê de tevlihev dike. Guhertoyên di pirtûkên dersê de 0.3 g rengker di 30 mL etanola 95% de, ligel 100 mL çareseriya avî ya hîdroksîda potasyûmê ya 0.01%, diyar dikin (an jî wek hevnirx, 30 mL şîna metîlenê ya alkolî ya têrkirî, 100 mL ava distîlekirî û 1 mL KOH ya 1%). Ev çareseriyeke ji bo bikaranînê dide ku rêjeya rengkerê tê de nêzî 0.3% e û pH-ya wê bi eşkere alkalîn e. Guhertoyên bazirganî jî heman prensîbê dişopînin, û kataloga rengkerên mîkrobiyolojiyê ya Thermo Fisher şîna metîlenê ya alkalîn a Loeffler ligel guhertoyên polîkrom û avî wek berhemên cuda yên katalogê, bi armancên cuda yên bikaranînê, rêz dike.

Bingeha çalak alkalî ye. Bilindkirina pH protonan ji komên karboksîl û fosfatê yên li ser nimûneyê radike û bi vî awayî tîrbûna cihên bi barê negatîf zêde dike. Di heman demê de, çareseriya stok a etanolî rengkerê bi tevahî di rewşa helandî de dihêle, da ku ew bi awayê monomerî bigihîje wan cihan. Encama vê, li gor rengkera avî ya bêalî, rengkirina bakteriyan a zûtir û xurtir e, bi bakteriyên şivikî û kokî yên şîna tarî yên nasdar di preparateke belavkirî ya bakteriyolojîk a rojane de. Dema rengkirinê bi gelemperî yek heta sê deqeyan e, û piştî wê preparat bi avê tê şûştin.

Bikaranîna klasîk ji bo Corynebacterium diphtheriae ye ku li ser navîna serumê ya Loeffler hatiye mezin kirin: şivikên zirav, gelek caran bi şêweyê gurzan, bi granulên metakromatîk ên Babes-Ernst ên polîfosfata depokirî ku bi xurtî reng dibin. Hevgirtina navîn û rengkerê dîrokî ye; her du jî bi heman bakteriyologî ve têne girêdan, û kontrasta granulan sûda wan a teşxîsî ye. Ji bilî xebata li ser dîfteriyê, ev rengker ji bo preparatên belavkirî yên çandinan wek rengkereke bakteriyolojîk a giştî, ji bo morfolojiya Neisseria di preparatên belavkirî yên klînîkî de, û li her cihê ku rengkirina Gram ne pêwîst be lê şîna sade ya avî pir sivik be, tê bikaranîn. Ev rengkereke yekreng e. Her tiştê asîdî tonek ji şînê werdigire. Dema protokolek rengên cudaker bixwaze, alkalî bi tena serê xwe nikare wan peyda bike.

Hişyariyeke pratîkî: çareseriyên rengker ên alkalîn bi depokirinê û kişandina karbondîoksîdê xirab dibin û rûniştinê çêdikin. Laboratorî yan hejmên kêm amade dikin, yan jî çareseriya katalogê dikirin û li gor dema wê ya mayînê tevdigerin, li şûna ku şûşeyeke kevn biparêzin ku êdî li ser her lamê rûniştinan dihêle.

Şîna metîlenê ya polîkrom: navek, çend rengker

Şîna metîlenê ya polîkrom ji heman rengkerê dest pê dike, lê wê di alkalî de dixe bin oksîdasyoneke kontrolkirî ku di dîrokê de jê re gihandin an polîkromkirin hatiye gotin. Pîrbûna di şertên alkalîn de, germkirina bi karbonatê, an oksîdasyona bi madeyên wek dîkromatê, komên metîlê gav bi gav ji komên cîgir ên dimethylamino radike. Berhem tevliheviyek e: şîna metîlenê ya mayî ligel azure B (yek koma metîlê kêm bûye), azure A û azure C (demetîlkirina pirtir), thionin (bi tevahî demetîlkirî), û berhemên kêlekî yên oksîdasyonê ji malbata mora metîlenê. Her pêkhate toneke rengê û meyla xwe ya girêdana bi tevnan heye, ji ber vê yekê tevlihevî bi awayekî metakromatîk reng dike: navok, granul, mûsîn û kartîlaj her yek tonên cuda ji şîn heta sor-mor werdigirin.

Ev kîmya heman kîmyaya li pişt rengkerên navdar ên xwînê ye. Lêkolînerên destpêkê dîtin ku şîna metîlenê ya alkalînkirî navokên parazîtên malaryayê bi tonên mor reng dikir, lê çareseriyên wan ên avî yên gihandî ne aram bûn û di nav çend rojan de rûniştin çêdikirin. Nirxandina çawa rengkera mor a xwînê hat dahênan dişopîne ka Malachowski û Romanowsky di 1891 de çawa serbixwe ji vê bandorê sûd wergirtin, çawa metanol hat bikaranîn da rûniştina rengkerê aram bike û tebeqeyên preparatê bê germê sabît bike, û çawa Giemsa paşê tevlihevî li ser bingeha hejmarên pîvandî yên azure B û eozînê, bi aramkirina bi glîserolê, standard kir. Rengkerên nûjen ên cureya Giemsa rasterast ji şîna metîlenê ya polîkrom ligel eozînê hatine; ev hevgirtin bandora Romanowsky çêdike. Ji bo hûrgiliyên hevgirtina bi eozînê û pêkhateya azure B, li rengkerên cureya Romanowsky û danûstandina azure B û eozînê binêrin.

Ji ber ku tevliheviyek e, şîna metîlenê ya polîkrom bi xwezaya xwe di nav van sêyan de ya herî kêm standardkirî ye. Hevsengiya rast a tonên wê bi rêya oksîdasyonê û asta wê ve girêdayî ye. Ji ber vê yekê, dabînkerên hîstolojiyê wê wek berhemeke cuda bi ceribandina xwe ya performansê difiroşin, ne wek rengkera Loeffler a pîrbûyî. Bikaranînên tîpîk nîşandana metakromatîk a granulên şaneyên mastê, mûsînan û kartîlajê, hûrgiliyên şaneyên plazmayê, û nîşandana Helicobacter pylori di birînên tevnan de bi rêbazên polîkrom ên cureya Goodpasture ne. Dema pirs cudakirina bi rengê be, ev hilbijartina rast e; lê dema protokol şiklê bakteriyan a zelal û yekreng bixwaze, hilbijartina şaş e.

Berawirdkirina formulasyon û armancê

Tabloyê wek rêbazeke biryardanê bixwînin. Heke nimûne pir sivik reng bibe, têgeha pH biguherînin û rengkera Loeffler hilbijêrin. Heke her tişt reng bibe lê tiştek ji yên din neyê cudakirin, têgeha rengkerê biguherînin û ya polîkrom hilbijêrin. Heke preparateke belavkirî ya bi Loeffler granulan pir baş nîşan bide, lê berpirs bipirse çima navok û sîtoplazma heman şînê parve dikin, bersiv ev e ku tu rengkereke alkalîn a yekreng nikare wê karê bike. Ew pirs bi malbata polîkrom û rengkerên xwînê yên jêhatî ve girêdayî ye.

Dûrketina ji tevlihevkirinên asayî

Du xeletî sedema piraniya tevliheviyê ne. Ya yekem ew e ku mirov rengkera Loeffler bi şîna metîlenê ya sade re guherbar bihesibîne, ji ber ku her du di şûşeyê de şîn xuya dibin. Ew di pH û xurtiyê de cuda ne, û li cihê ku Loeffler hatiye diyar kirin, bikaranîna rengkera bêalî tam wê kontrasta granulan winda dike ku protokol li ser bingeha wê hatiye nivîsandin. Ya duyem ew e ku mirov her şîna alkalîn a kevn an bi tesaduf pîrbûyî wek polîkrom bihesibîne. Pîrbûna bêkontrol tevliheviyeke nenas bi xurtiyeke nenas çêdike, lê çareseriyên polîkrom ên rast bi rêyên oksîdasyonê yên diyarkirî têne amadekirin û, di zincîra rengkerên xwînê de, bi hejmareke pîvandî ya eozînê re têne hevgirtin. Dîrok li vir dersdar e: çareseriyên avî yên gihandî û ne aram ên salên 1890an cihê xwe dan formulasyonên metanolî yên aramkirî, tam ji ber ku tevliheviyên bêkontrol bi heman awayî nedihatin dubarekirin. Ev dersek e ku hêjayî bîranînê ye berî ku lamê teşxîsê bi şûşeyeke ku temenê wê nediyar e reng bikin.

Baldarî li navan vê mijarê temam dike. Li şûna ku ji rengê texmîn bikin, berhema katalogê (avî, Loeffler an polîkrom), rêjeya rengkerê û bikaranîna armancdar li ser etîketê piştrast bikin. Her sê formulasyon bav û kalekî kromofor ên hevpar hene. Armanca wan ne hevpar e.